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CONVENZIONE
per la realizzazione del “Progetto di ricerca su cellule CAR-T per patologie ematologiche maligne e per tumori solidi”
TRA
ALLEANZA CONTRO IL CANCRO (di seguito per brevità “ACC”) con sede in Roma, via Ribotta 5 CAP 00144 e CF 97262520584, legalmente rappresentata dal Direttore Generale, dott. Paolo De Paoli, nato a Udine il 18/11/1955 e CF DPLPLA55S18L483A
E
IRCCS CROB (Centro di Riferimento Oncologico della Basilicata, (di seguito per brevità “CROB
”) con sede in Rionero in Vulture,Via Padre Pio n°1 CAP 85028 C.F. 93002460769 e P.IVA 01323150761 legalmente rappresentato dal Direttore Generale, Dott.ssa Cristiana Mecca, Legale Rappresentante pro tempore nato a Potenza il 12-12-1969 C.F. MCCCST69T52G942M
(ACC e CROB di seguito congiuntamente denominate “Parti”)
Premesso che
- Il combinato disposto normativo di cui all’art. 1, comma 523 della legge 30 dicembre 2018, n.145, all’art. 23-quater, comma 4, del decreto legge 23 ottobre 2018, n.119, convertito, con modificazioni dalla legge 17 dicembre 2018, n.136., nell’ambito di Alleanza Contro il Cancro, CUP E84119003590001, ha previsto finanziamenti, pari ad € 10.000.000,00 (Euro diecimilioni/00) ripartiti negli anni 2019 e 2020, in favore degli IRCCS afferenti alla Rete Alleanza contro il cancro per le nuove tecnologie CAR-T per la cura dei tumori;
- Il 15/04/2019 l’impianto progettuale è stato condiviso con gli IRCCS partecipanti alla riunione tenutasi presso il Ministero della Salute;
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- Il Ministero della Salute con Messaggio WF ID2019013651 del 27/11/2019 ha comunicato ad Alleanza Contro il Cancro, in adempimento alle disposizioni di legge di cui sopra, l’erogazione di un importo pari ad € 5.000.000,00 (Euro cinquemilioni/00) comunicando inoltre le tempistiche e le modalità per la rendicontazione, la relazione scientifica e gli adempimenti conseguenti;
- In data 5 luglio 2019 sono stati raccolti i contributi al progetto dei singoli IRCCS e il medesimo è stato assemblato a cura del Coordinatore Scientifico, Prof. Franco Locatelli dell’Ospedale Pediatrico Bambino Gesù, inviato nella sua versione finale al Ministero della Salute in data 25/11/2019 e presentato a tutti gli IRCCS partecipanti nella riunione del 20/12/2019 presso il Ministero della Salute;
- Alla realizzazione del progetto di cui sopra partecipano, oltre ad ACC, i seguenti IRCCS:
Ospedale Pediatrico Bambino Gesù IRCCS - Roma, Fondazione Policlinico Universitario Agostino Gemelli IRCCS - Roma, Istituto Europeo di Oncologia S.r.l. - Milano, Fondazione Piemonte per l’Oncologia - Candiolo, Istituto Scientifico Romagnolo per lo Studio e la Cura dei Tumori, IRST IRCCS - Meldola, Ospedale San Raffaele S.r.l. - Milano, Fondazione IRCCS Istituto Nazionale Tumori - Milano, Istituti Fisioterapici Ospitalieri - IRCCS - Istituto Nazionale Tumori Regina Elena - Roma, Istituto Nazionale Tumori IRCCS "Fondazione G. Pascale" - Napoli, IRCCS Centro di Riferimento Oncologico della Basilicata - Rionero in Vulture, Istituto Tumori "Giovanni Paolo II", IRCCS - Bari, Istituto Clinico Humanitas - Humanitas Mirasole S.p.A. - Rozzano, Istituto Oncologico Veneto IRCCS - Padova, Centro di Riferimento Oncologico di Aviano IRCCS - Aviano, Fondazione di Religione e di Culto “Casa Sollievo della Sofferenza” Opera di San Pio da Pietrelcina – San Giovanni Rotondo e, come indicato nell’allegato 1 (Atti parlamentari), l’Ospedale S. Gerardo – Fondazione Tettamanti di Monza, la società MolMed S.p.a. e l’Istituto di Biostrutture e Bioimmagini del CNR di Napoli (di seguito per brevità definiti “Partner”).
TANTO PREMESSO SI STIPULA E SI CONVIENE QUANTO SEGUE Art. 1
Premesse
Le Premesse e gli Allegati sono parte integrante e sostanziale della presente Convenzione Art. 2
Oggetto della Convenzione
La presente Convenzione regola la realizzazione del “Progetto di ricerca su cellule CAR-T per patologie ematologiche maligne e per tumori solidi” richiamato in premessa (di seguito per brevità
“Progetto”) che, allegato alla presente Convenzione, ne costituisce parte integrante (allegato 2).
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Art. 3 Durata
La presente Convenzione entrerà in vigore dalla data di avvio del Progetto identificata nel 27 novembre 2019 e terminerà i suoi effetti il 26 novembre 2021 alla conclusione del secondo anno di attività, salvo eventuali proroghe concesse dal Ministero della Salute.
Art. 4
Responsabili scientifici ed amministrativi 1. Per le finalità di cui alla presente Convenzione, le Parti designano:
il Prof. Franco Locatelli quale Coordinatore Scientifico del Progetto (di seguito per brevità
“Coordinatore Scientifico”);
il Dott. Giuseppe Pietrantuono quale Responsabile Scientifico per le attività di ricerca previste per IRCCS CROB nell’ambito del Progetto;
il Dott. Paolo De Paoli quale Coordinatore Amministrativo del Progetto (di seguito per brevità “Coordinatore Amministrativo”);
la dr.ssa Angela Francesca Pucillo quale Responsabile Amministrativo per l’IRCCS CROB.
Art. 5
Coordinatore Scientifico, Responsabile Scientifico e Comitato Tecnico Scientifico
1. Il Coordinatore Scientifico del Progetto, il Coordinatore Ammnistrativo di ACC ed i Responsabili Scientifici dei Partner leader di WP progettuali costituiscono il Comitato Tecnico Scientifico (di seguito per brevità il “CTS”) del Progetto, di durata pari a quella del Progetto medesimo.
2. Il CTS è presieduto dal Coordinatore Scientifico del Progetto e dal Coordinatore Amministrativo di ACC.
3. Il CTS del Progetto potrà essere convocato, a cura del Coordinatore Scientifico in relazione ad opportune verifiche sullo stato di avanzamento delle attività svolte dai Partner, sull’attinenza delle stesse agli obiettivi del Progetto, ovvero dal e/o dal Coordinatore Amministrativo in relazione ad opportune verifiche sullo stato dei rendiconti economici.
4. Il CTS si occuperà, nell’interesse comune, delle problematiche connesse all’eventuale mancato o ritardato invio al Coordinatore Scientifico delle relazioni scientifiche o al Coordinatore Amministrativo delle rendicontazioni economiche intermedie e finali, che rallenti, impedisca, o comunque incida negativamente sulla predisposizione dei rendiconti scientifici per il Ministero della Salute, comportando potenziali ripercussioni sull’erogazione dei relativi fondi.
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Art. 6
Modalità di erogazione del contributo
1. Il finanziamento assegnato al Progetto dal Ministero della Salute è di € 10.000.000,00 (Euro diecimilioni/00) diviso in due annualità di pari valore, € 5.000.000,00 (Euro cinquemilioni/00) ciascuna.
2. Successivamente alla erogazione da parte del Ministero della Salute di ciascuna quota annuale ad ACC, questa provvederà al trasferimento all’ IRCCS CROB della quota spettante come da tabella Budget a pag. 98 del progetto allegato e limitatamente alla quota di spettanza approvata dal Ministero della Salute.
3. Il trasferimento degli importi avverrà, in presenza di attestazione di credito inviata da CROB ad ACC, mediante bonifico bancario sul c/c intestato a IRCCS CROB Centro di Riferimento Oncologico della Basilicata presso Banca Popolare di Bari – Filiale di Potenza - Viale Marconi n°194 85100 Potenza IBAN IT09D0542404297000000000208:
Causale di versamento “Progetto CAR-T”.
4. Il CROB si impegna a trasmettere alla Direzione Generale di ACC nota di rendicontazione con tutti gli estremi dei costi sostenuti, con le istruzioni e la modulistica che saranno comunicati dal Ministero della Salute.
5. In ogni spesa dovrà essere indicato il Codice Unico di Progetto.
6. Il trasferimento avverrà in regime di esclusione dal campo IVA, ai sensi del DPR 622/1972 e successive modificazioni, in quanto ricade nella gestione dei fondi stanziati per attività di ricerca e sperimentazione. Questa specifica destinazione ne esclude l’utilizzo per fini diversi da quelli stabiliti nel piano economico del progetto.
Art. 7
Relazione scientifica e rendicontazione economica
1. Per la realizzazione del Progetto, ACC e CROB sottoscrivono la presente convenzione che disciplina tutti gli aspetti di gestione del Progetto.
2. Il CROB provvederà all’invio delle relazioni scientifiche, redatte secondo il Template che sarà fornito dal Coordinatore del Progetto, e delle rendicontazioni economiche secondo il seguente schema:
a. Invio da parte di ogni Partner della relazione intermedia e finale al rispettivo Responsabile di Work Package come riportato nel Progetto entro le seguenti scadenze:
i. Relazione scientifica intermedia: 31 luglio 2020
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ii. Relazione scientifica finale: 16 dicembre 2021 (20 giorni dalla conclusione del Progetto)
b. Invio da parte di ogni Responsabile di Work Package come riportato nel Progetto della relazione intermedia e finale al Coordinatore del Progetto entro le seguenti scadenze:
i. Relazione scientifica intermedia: 10 settembre 2020
ii. Relazione scientifica finale: 26 dicembre 2021 (30 giorni dalla conclusione del Progetto)
c. Invio da parte del Coordinatore del Progetto della approvazione della relazione intermedia e finale ad ACC entro le seguenti scadenze:
i. Relazione scientifica intermedia: 18 settembre 2020
ii. Relazione scientifica finale: 10 gennaio 2022 (45 giorni dalla conclusione del Progetto)
d. Invio da parte di ogni Partner del Rendiconto economico intermedio e finale al Coordinatore Amministrativo entro le seguenti scadenze:
i. Rendiconto economico intermedio: 10 settembre 2020
ii. Rendiconto economico finale: 10 gennaio 2022 (45 giorni dalla conclusione del Progetto)
e. Invio da parte di ACC della relazione intermedia e finale al Ministero della Salute entro le seguenti scadenze:
i. Relazione scientifica e rendiconto economico intermedi: 20 settembre 2020
ii. Relazione scientifica e rendiconto economico finali: 25 gennaio 2022 (60 giorni dalla conclusione del Progetto).
3. Per gli aspetti relativi alla rendicontazione economica intermedia e finale verranno forniti da ACC i modelli ministeriali che ciascuna Parte dovrà utilizzare e trasmettere via PEC alla Direzione Generale di ACC al seguente indirizzo: alleanzacontroilcancro@pec.it.
Art. 8 Tracciabilità Il Codice Unico di Progetto (CUP) è E84119003590001
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Art. 9
Norme applicabili alla ricerca e autorizzazioni allo svolgimento delle attività
1. Il Progetto dovrà essere condotto secondo le vigenti disposizioni in materia e nel più scrupoloso rispetto del protocollo, dei principi etici e deontologici che ispirano le attività mediche.
2. Nel caso in cui per lo svolgimento delle attività previste dalla presente convenzione siano necessarie autorizzazioni/pareri da parte del Comitato Etico competente o di altro organismo di sorveglianza o controllo, ciascun partner, per le attività di propria competenza, si farà carico di ottenere tali autorizzazioni che saranno formalmente comunicate ad ACC e al Coordinatore Scientifico del Progetto.
Art. 10 Recesso
1. Ad ognuna delle Parti, ai sensi dell’art. 1373 c.c., è attribuita la facoltà di recedere dalla presente convenzione. Il recesso dovrà essere esercitato mediante comunicazione scritta da notificare con raccomandata A.R. e effetto decorsi trenta giorni dalla data di notifica dello stesso. Il recesso ha effetto per l’avvenire e non incide sulle attività già espletate in relazione alla Convenzione e al Progetto.
2. In caso di recesso, le Parti concordano fin d’ora di portare a conclusione le singole intese operative e gli impegni singolarmente assunti alla data di estinzione e perdita di efficacia della Convenzione.
Art. 11 Risoluzione
La presente Convenzione potrà essere risolta qualora una delle Parti dichiari e dimostri l’impossibilità, per causa a quest’ultimo non imputabile, di proseguire la collaborazione.
Nell’ipotesi in cui una Parte si renda inadempiente, la Parte creditrice della prestazione inadempiuta dovrà intimare per iscritto all’altra Parte, mediante lettera raccomandata A.R., di adempiere entro e non oltre 7 giorni dal ricevimento della diffida, decorso il quale, la presente Convenzione si intenderà risolta.
Sono fatte salve le prestazioni rese fino alla data di notifica della diffida ad adempiere e l’eventuale richiesta di risarcimento per i danni derivanti dall’inadempimento.
Art. 12 Modifiche
1. Le disposizioni di cui alla presente Convenzione potranno essere successivamente modificate solo in forma scritta dalle Parti, da persone munite di poteri di rappresentanza in nome e per conto delle Parti. Il presente atto viene firmato dalle Parti contraenti e sottoscritto per presa visione dal Coordinatore Scientifico del Progetto Prof. Franco Locatelli.
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Art.13
Proprietà intellettuale, utilizzazione e pubblicazione dei risultati
1. Ciascuna Parte resterà unica titolare dei diritti di proprietà intellettuale e industriale relativi:
- alle proprie conoscenze pregresse;
- alle proprie conoscenze parallele.
2. La titolarità di tutte le informazioni, invenzioni, cognizioni, ancorché non brevettabili, nonché dei brevetti e di ogni altro diritto di privativa industriale risultanti dal progetto sarà quella della comproprietà tra i partner in pari quota, salvo che si possa stabilire una diversa ripartizione della titolarità sulla base di una accertata diversità dell’importanza del contributo prestato da ciascuna Parte al conseguimento del risultato inventivo. Le Parti possono concordare con accordi successivi alla presente convenzione clausole specifiche relative a proprie situazioni particolari relative a proprietà intellettuale ed industriale.
3. Nel corso dello svolgimento delle attività, i responsabili scientifici dovranno comunicare reciprocamente i trovati suscettibili di protezione derivati dal Progetto.
4. Utilizzazione e pubblicazione dei risultati: trattandosi di progetto multicentrico, nell’ipotesi di risultati realizzati congiuntamente, le Parti si impegnano ad effettuare congiuntamente le pubblicazioni, purché tali pubblicazioni non compromettano la protezione dei risultati. Le pubblicazioni ottenute dai singoli IRCCS o ottenute congiuntamente dovranno riportare il nominativo di autori, la loro affiliazione e citare nel testo il nominativo del progetto e l’ente erogatore dei fondi utilizzati.
5. Le Convenzioni con i Partner di cui all’Art. 7 dovranno prevedere l’impegno di tutti i Partner alla stipula, entro e non oltre 6 mesi dalla data di avvio del progetto, di un apposito Consortium Agreement che disciplini tutti gli aspetti relativi alla gestione della proprietà intellettuale.
Art. 14
Assicurazioni e sicurezza
1. Il progetto rientra nell’ambito della normale copertura assicurativa prevista per l’attività di ricerca in ciascuna Parte.
2. Ciascuna Parte provvede alla copertura assicurativa di legge del proprio personale che, in virtù della presente Convenzione, verrà chiamato a frequentare la sede di esecuzione delle attività.
3. Nel caso sia necessario richiedere l’approvazione di un protocollo di studio derivante dal Progetto da parte del comitato etico competente, la Parte provvederà a dotare la sperimentazione della specifica copertura assicurativa prevista.
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4. Laddove il personale di ciascuna Parte dovesse recarsi per le finalità Progettuali presso la sede dell’altra, sarà tenuto ad uniformarsi ai regolamenti disciplinari e di sicurezza in vigore nelle sedi di esecuzione delle attività attinenti alla presente convenzione. Le Parti, al tal fine, si impegnano al rispetto della normativa vigente in materia di igiene e sicurezza sul lavoro di cui al D.Lgs 81/2008 e s.m.i.. Le Parti dovranno fornire dettagliate informazioni sui rischi specifici esistenti negli ambienti in cui il personale ospitato è destinato ad operare, sulla propria organizzazione della sicurezza e sulle misure di prevenzione e di emergenza adottate in relazione all’attività che verrà svolta, anche sulla base del documento di sicurezza elaborato dall’Ospedale, custodito presso quest'ultimo in base al D.lgs. 81/2008 e successive modificazioni e integrazioni. La responsabilità della osservanza di tali prescrizioni è in capo alla struttura ospitante.
Art. 15 Anticorruzione
1. Le Parti dichiarano di aver adottato misure di vigilanza e controllo ai fini del rispetto e dell’attuazione delle previsioni del D. Lgs. 8 giugno 2001 n. 231.
L’IRCCS CROB dichiara di avere adottato il proprio Piano della Prevenzione della Corruzione 2020- 2022 e il Codice di condotta (Regolamento recante codice di comportamento dei dipendenti pubblici, a norma della art. 54 del decreto legislativo 30 marzo 2001, n, 165). Tali documenti sono consultabili sul sito internet dell’IRCCS CROB all’indirizzo http://www.crob.it nella sezione “Amministrazione Trasparente”.
Nel quadro di quanto sopra, ciascuna Parte s’impegna ad agire nell’esecuzione della presente Convenzione nel rispetto della normativa vigente con correttezza e trasparenza evitando comportamenti o azioni che possano configurarsi quale mala gestio con finalità corruttiva e più in generale che si pongano in contrasto con i principi, valori e regole di condotta etica tali da poter generare per l’altra Parte responsabilità da atto illecito. In tale contesto, inoltre, le Parti s’impegnano a collaborare in buona fede ai fini di facilitare la piena e corretta attuazione dei correlati reciproci obblighi.
Ciascuna parte s’impegna a segnalare all’altra Parte qualsiasi violazione alle regole di trasparenza e correttezza di cui venisse a conoscenza con riferimento ai soggetti operanti per conto di quest’ultima affinché sempre quest’ultima possa adottare i conseguenti provvedimenti nei confronti dei responsabili ove la segnalazione risultasse fondata.
2. Le Parti riconoscono ed accettano reciprocamente che il puntuale rispetto degli obblighi previsti in tema riveste carattere essenziale e che qualsiasi violazione delle disposizioni di cui al presente articolo autorizzerà la Parte adempiente a tali obblighi a risolvere unilateralmente la presente convenzione ai sensi dell’art 1453-del c.c.
Art. 16
Riservatezza e Trattamento dei dati personali
Nell’esecuzione del presente accordo, le Parti e il personale impegnato nell’espletamento delle attività afferenti il progetto di ricerca si impegnano ad osservare la massima riservatezza, a non divulgare, né
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utilizzare per alcun scopo diverso da quello necessario per lo svolgimento delle attività previste dalla presente convenzione le informazioni di carattere sanitario, scientifico, aziendale e, più in generale, le informazioni di volta in volta qualificate confidenziali e/o riservate che siano state prodotte dall'altra parte nell'ambito delle attività progettuali, a non divulgarle a terzi e a utilizzarle esclusivamente per il raggiungimento delle finalità oggetto della presente convenzione.
L’obbligo della riservatezza non si applica alle informazioni:
- che le parti divulgatrici già detengono al momento della definizione del presente protocollo;
- che sono di pubblico dominio;
- che le parti ricevono in modo legittimo da terze parti senza essere soggette all’obbligo di riservatezza;
- che le parti divulgatrici sviluppano o hanno sviluppato in modo autonomo al di fuori del presente contratto;
- che sono state esplicitamente esentate dall’obbligo di riservatezza dalla parte che le comunica.
Le Parti nell’esecuzione delle attività previste dalla presente Convenzione si impegnano a trattare i dati personali, di cui vengano per qualsiasi motivo a conoscenza, nel rispetto degli obiettivi di cui ai precedenti articoli e in conformità a quanto disposto dal Regolamento (UE) 2016/679 (di seguito
“RGPD”) del Parlamento Europeo e del Consiglio del 27 aprile 2016, nonché dalle correlate disposizioni legislative e amministrative nazionali vigenti, con le loro eventuali successive modifiche e/o integrazioni (di seguito, collettivamente, “Leggi in materia di Protezione dei dati”).
Le Parti si qualificano come autonomi titolari del trattamento ai sensi dell’art. 4 paragrafo 17) del RGPD.
Laddove, nel caso di accordo tra le parti o se ciò sia previsto dal Progetto, le parti siano contitolari del trattamento oppure titolari e responsabili del trattamento, si applicheranno rispettivamente, gli articoli 26 e 28 del RGPD, con conseguente necessità di stipulare gli accordi richiamati dalle predette disposizioni.
Per le finalità del Progetto saranno trattati dati personali riferiti alle seguenti categorie di interessati:
soggetti partecipanti al Progetto, loro rappresentanti e persone che operano per le Parti. Tali interessati sono informati sul trattamento che li riguarda a mezzo di idonea informativa. Per le finalità del Progetto saranno trattati le seguenti tipologie di dati personali: dati di cui all’art. 4 n.1 del RGPD; dati rientranti nelle categorie “particolari” di dati personali -e in particolare dati relativi alla salute e alla vita sessuale, dati genetici -di cui all’art. 9 del RGPD. Tali dati saranno trattati nel rispetto dei principi di liceità, correttezza, trasparenza, adeguatezza, pertinenza, necessità, minimizzazione e gli altri principi di cui all’art.5, paragrafo 1 del RGPD.
Il trattamento verrà effettuato, per lo svolgimento del Progetto, con la conseguente applicazione dell’art. 89 RGPD e tenendo conto di quanto stabilito, in particolare, nei “considerando” 33, 50, 112, 156, 159, 161 del preambolo del RGPD.
Tutti i dati di persone fisiche afferenti alle Parti, verranno reciprocamente trattati dai due titolari del trattamento in conformità al Regolamento 679/2016/UE, al D.lgs. 196/2003 come novellato dal D.lgs.
101/2018 e s.m.i. e per le seguenti finalità:
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a) adempimenti di specifici obblighi contabili e fiscali;
b) gestione ed esecuzione del rapporto e degli obblighi contrattuali;
c) attività di ricerca e sperimentazione;
d) finalità connesse ad obblighi previsti da leggi, da regolamenti o dalla normativa comunitaria nonché da disposizioni impartite da Autorità a ciò legittimate dalla legge;
e) gestione del contenzioso;
f) finalità statistiche;
g) servizi di controllo interno.
Le previsioni di cui al presente articolo assolvono i requisiti di informativa di cui all’articolo 13 del regolamento 679/2016/UE.
Le Parti dichiarano quindi espressamente di essere a conoscenza dei diritti a loro riconosciuti dagli articoli 15, 16, 17, 18, 20, 21, 22 del Regolamento 679/2016/UE in particolare del diritto di richiedere l’aggiornamento, la rettifica o la cancellazione dei loro dati personali.
Le obbligazioni e le previsioni del presente articolo continueranno ad essere valide ed efficaci anche successivamente al termine della convenzione dei suoi effetti, indipendentemente dalla causa per cui sia intervenuto.
11.11 Qualora una parte accerti una violazione dei dati personali, si impegna a comunicarlo all’altra entro 48 ore dall’accertamento della violazione, ferma restando l’autonomia della stessa nella valutazione della sussistenza delle condizioni e nell’adempimento degli obblighi previsti dagli artt.
33 e 34 del RGPD
Art. 17 Comunicazioni
per iscritto agli indirizzi e alle attenzioni di seguito riportati.
Gli indirizzi e le persone cui le comunicazioni devono essere indirizzate possono essere modificate da ciascuna delle parti previa comunicazione scritta all’altra parte secondo le modalità sopra riportate.
Riferimento Indirizzo
IRCCS CROB Dott. ssa Angela Francesca Pucillo
Via Padre Pio n°1 85028 Rionero in Vulture (PZ)
tel. + 39 0972-726539
email: angela.pucillo@crob.it
Alleanza Contro il Cancro
Dott.ssa Silvia Careccia
Viale Regina Elena, 299 – 00161 Roma Tel. +39 06 4990-6077
email: careccia@alleanzacontroilcancro.it
Alleanza Contro il Cancro Viale Regina Elena, 299 - 00161 Roma
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Art. 18
Legge applicabile e foro competente
Le Parti si impegnano a risolvere gli eventuali conflitti concernenti l’applicazione, interpretazione, esecuzione e risoluzione della presente convenzione, mediante bonario componimento.
In caso contrario, espressamente convengono di accettare la giurisdizione esclusiva del Tribunale di Potenza.
Art. 19
Registrazione e spese
1. La presente convenzione viene sottoscritta in forma digitale ai sensi dell’art.21 del decreto legislativo 7 marzo 2005 n. 82 e s.m.i.
2. Conformemente al DPR del 26.10.1972 n. 642 e s.m.i. è previsto l’assolvimento dell’imposta di bollo in modo virtuale a carico di ACC.
Art. 20 Disposizioni finali
1. Eventuali modifiche alla presente Convenzione potranno essere effettuate, previo accordo fra le Parti, solo tramite stesura di apposite modifiche scritte.
2. Le parti si danno reciprocamente atto che il contratto è stato negoziato in ogni sua parte e che non trovano pertanto applicazione le disposizioni di cui agli artt. 1341 e 1342, c.c.
Letto, confermato e sottoscritto con firma digitale, ai sensi dell’art.21 del decreto legislativo 7 marzo 2005, n. 82 e s.m.i.
Roma, (data della sottoscrizione come quella dell’ultima firma digitale apposta) per Alleanza Contro il Cancro
Il Direttore Generale Dott. Paolo De Paoli
per IRCCS CROB Centro di Riferimento Oncologico della Basilicata Il Rappresentante Legale pro tempore
Il Direttore Generale Dott.ssa Cristiana Mecca
Il presente atto è sottoscritto per presa visione Il Coordinatore Scientifico
Prof. Franco Locatelli
Allegato 1
Atti Parlamentari
Allegato 2
Progetto
Italian Health Ministry
Research project on CAR T cells for
hematological malignancies and solid tumors
Conducted under the aegis of Alliance Against Cancer (ACC) network Project coordinator: Prof. Franco Locatelli
Participating Institutions and their acronyms:
IRCCS, Ospedale Pediatrico Bambino Gesù, Roma (OPBG)
IRCCS, Fondazione Policlinico Gemelli, Roma (FPG)
IRCCS, Istituto Europeo di Oncologia, Milano (IEO)
IRCCS, Fondazione del Piemonte per l'Oncologia, Candiolo (TO) (FPO, Candiolo)
IRCCS, Istituto Scientifico Romagnolo per lo Studio e la Cura dei Tumori, Meldola (FO) (Meldola)
IRCCS, Ospedale San Raffaele, Milano (OSR)
IRCCS, Fondazione Istituto Nazionale dei Tumori, Milano (INT)
IRCCS, Istituto Regina Elena, Roma (IRE)
IRCCS Fondazione Casa Sollievo della Sofferenza, S. Giovanni Rotondo (CSS)
Alleanza Mediterranea Oncologia in Rete, Rete AMORe (IRCCS Fondazione G. Pascale Napoli, IRCCS Crob di Rionero in Vulture, IRCCS Istituto dei Tumori Bari)
• Istituto Clinico Humanitas, Milano (ICH)
• Istituto Oncologico del Veneto (IOV)
• Centro di Riferimento Oncologico, Aviano (CRO)
• MolMed Società per Azioni, Milano (MolMed)
• Ospedale San Gerardo, Monza
• CNR Istituto di Biostrutture e Bioimmagini, Napoli (IBB-
CNR)
Index
Abstract………4 Introduction………5-6 WP1 Description………...7-11 WP2 Description………..12-34 WP3 Description………..35-52 WP4 Description………..53-79 WP5 Description………..80-93 WP6 Description………..94-97 BUDGET……….98
Abstract
The concept of combining the MHC-independent antigen recognition of monoclonal antibodies (mAbs) and the effector function of T cells has been a true revolution in the field of immunotherapy, leading to the development and clinical validation of chimeric antigen receptor (CAR)-engineered T cells. The advantages of CAR T cells over mAbs are multiple and mainly rely on the ability of CAR T cells to eliminate tumor cells even at low levels of antigen expression, on self-amplification upon activation and on better distribution into the tissues. Moreover, CAR T cells may enter the memory pool and provide long-lasting protection against tumor recurrence. CD19- directed CAR T-cell therapies for B-cell malignancies are currently the most advanced T-cell therapies tested in clinical trials. The results obtained in patients with B-cell lymphoproliferative disorders led to the recent approval by the Food and Drug Administration (FDA) and subsequently by the European Medicines Agency (EMA) of two CD19-directed CAR T-cell therapies. Despite significant efficacy, unfortunately, CAR-T cells have been associated with a suboptimal safety profile, since severe, sometimes life-threatening or even fatal toxicities have been reported in patients with B-cell neoplasms given CAR T cells. Moreover, the clinical outcome of the few patients with solid tumors or hematological malignancies other than B-lymphoproliferative disorders has been less encouraging. In light of these considerations, this collaborative multi- Institutional project will implement novel pre-clinical approaches to render CAR T-cell applicable to patients with solid tumors and other hematological malignancies, as well as to improve the safety and efficacy of the approach. Another important field of research will be that focused on making CAR-engineered cells universally usable; this will further expand accessibility to this kind of therapy. Finally, we will investigate strategies to develop an automatic production chain for CAR T cells and for manufacturing less costly and immediately available CAR cells.
Introduction
Immunotherapy of B-cell lymphoproliferative malignancies with the use of genetically modified T- lymphocytes redirected to the tumor target through the expression on the cell surface of a Chimeric Antigen Receptor (CAR) has obtained remarkable results. In fact, the use of CAR T-cells has been shown to induce complete remission (CR) in more than 80% of patients with B-cell precursor acute lymphoblastic leukemia (Bcp-ALL) either refractory or relapsed after conventional treatments, including allogeneic hematopoietic stem cell transplantation (allo-HSCT), and in about 50 % of patients with refractory/relapsed B-cell non-Hodgkin lymphoma (NHL). These remarkable results led to the market authorization by FDA, initially, and subsequently by EMA of two drug products (Kymriah®, marketed by Novartis, and Yescarta®, marketed by Gilead), directed against the CD19 antigen,. Both agencies approved the therapy with CAR T cells for pediatric/young adult patients (up to 25 years of age) with Bcp-ALL in second relapse of the disease or with refractory disease or in first relapse after allo-HSCT and for adult patients with diffuse large B-cell lymphomas (DLBCL) and primitive mediastinal large cell B lymphomas (PMBCL), either refractory or resistant to two or more systemic therapy lines.
However, in the context of other hematological malignancies (i.e. acute myeloid leukemia, AML) and of solid tumors, so far, the efficacy of the approach is much more limited. In particular, several hurdles to the development of an effective product emerged. The identification of a suitable target antigen, expressed preferentially or exclusively on the surface of the tumor cells and absent or at very low density on normal tissue, is often a challenge. Moreover, solid neoplasms are characterized by the presence of a tumor microenvironment (TME) that proved to be extremely hostile for CAR T cells, owing to an acid and hypoxic ambient and to the presence of immunosuppressive cells and soluble factors, ultimately leading to the inhibition of the activation and proliferation of CAR T cells. Notably, several clinical and preclinical models clearly showed that the in vivo activity of CAR T cells correlates strictly with their ability to traffic and home into the tumor site, to proliferate in the tumor microenvironment and to persist overtime.
Together with the remarkable efficacy of the treatment with CAR T-cells In B-cell neoplasia, however, some peculiar and sometimes severe, adverse events have emerged, raising the need for the optimization of the safety profile of the approach. In the studies reported to date, a significant proportion of patients developed severe adverse events, sometimes requiring an intensive care management. Exceptionally, toxic-related deaths have been reported, as well.
Beside the clinical and functional hurdles mentioned, other relevant aspects related to the manufacturing processes limit the broader diffusion of the approach to all the patients that could potentially benefit from its use. They include: a) the still limited manufacturing capacity, unable to provide individualized products in due time to satisfy the clinical need; b) the lack of standardization of the production processes among different production sites, making each experience isolated and not comparable; c) the lack of a network coordinating the distribution of products on the national territory; d) the relevant costs of production of CAR T cells. In order to overcome, at least partially, these hurdles, creating a GMP-grade production process with a high level of automation and using closed system could represent a significant improvement.
The present research project promoted by the Ministry of Health and developed under the aegis of Alliance Against Cancer (ACC) aims at dealing with all the reported limitations, leading to a common and coordinated management through the creation of a collaborative network joining the expertise of the different participating Institutions. In details, the research activities will be developed over 2 years according to the following working packages (WP):
WP1: Coordination; development of an automatic production chain for CAR T cells and of novel approaches for manufacturing CAR cells immediately available and/or less costly.
WP2: Identification of new targets selectively expressed on neoplastic cells and compatible with the clinical use of CAR T.
WP3: Preclinical development of CAR-killer cells against novel cancer targets in solid tumors and hematologic diseases other than B-cell neoplasms.
WP4: Novel strategies to increase activation, expansion, survival, tissue penetration, cytotoxicity and monitoring of CAR expressing cells.
WP5: Strategies to improve the safety profile of CAR T cells.
WP6: Legal aspects and intellectual property.
WP1: Coordination; development of an automatic production chain for CAR T cells and of novel approaches for manufacturing CAR cells immediately available and/or less costly.
Leader: OPBG and ACC; Participants: MolMed; San Gerardo
Rational
In the last few years, a new form of treatment of hematological malignancies has emerged: it is based on the use of genetically modified T-lymphocytes redirected to the tumor target, using proteins expressed on the lymphocyte cell surface and called Chimeric Antigen Receptors (CARs).
In particular, CAR T-cells have been shown to be particularly effective in the context of B-cell lymphoproliferative diseases, including B-cell precursor Acute Lymphoblastic Leukemia (Bcp- ALL) or Non-Hodgkin's Lymphomas of B-lymphocyte origin (B-NHL). In the context of these diseases, CAR T-cells were directed against the CD19 antigen, expressed on the surface of malignant cells.
The use of CAR T-cells has been shown to induce complete remission (CR) in more than 80% of patients with refractory BCP-ALL or relapsed after conventional treatments, including allogeneic hematopoietic stem cell transplantation (allo-HSCT), and in about 50 % of patients with refractory/relapsed B-NHL. A significant proportion of patients who responded to treatment with CAR T cells obtained sustained CR, this observation suggesting that these patients can be considered cured through this approach. Thanks to the conduction of international multicenter studies, two types of CAR T-cells (Kymriah®, marketed by Novartis, and Yescarta®, marketed by Gilead) directed against the CD19 antigen have obtained market authorization initially by FDA, and subsequently by EMA, for the following indications:
- patients up to 25 years of age with Bcp-ALL in second relapse of the disease or with refractory disease or in first relapse after allo-HSCT;
- adult patients with diffuse large B-cell lymphomas (DLBCL) and primitive mediastinal large B- cell lymphomas (PMBCL) either refractory or resistant to two or more systemic therapy lines.
The present WP1a aims at coordinating the activities of the entire project, including also the development of shared research projects, identification and validation of innovative CAR cell platforms that will allow safe administration of allogeneic products. Such an innovation will be applied to either the autologous setting (T cells derived from each single patient) or to a third-party donor banks that can guarantee the availability, as quickly as necessary, of the genetically modified product, resulting in a reduction in waiting time for CAR cell manufacturing and production costs.
Finally, through the development of specific and advanced research projects, the network aims at overcoming the main limitations of the present approach, which emerged from the studies reported to date, with the goal of further improving its effectiveness and treating an increasing number of patients. In particular, the project has the ambition to broaden the spectrum of disorders and number of patients potentially treatable with CAR cells through the development of a sophisticated screening system of molecules expressed on the surface of tumor cells for identifying new targets for CAR cells, and the subsequent creation and development of the relative engineered molecules.
The network is also aimed at enhancing the anti-tumor activity of CAR constructs by implementing strategies that increase tissue distribution, penetration in solid mass and persistence of CAR T cells.
Finally yet importantly, it aims at maximizing the safety of CAR cells, thus making this revolutionary therapeutic approach more easily accessible even to centers with less developed expertise in the field.
TASK1.1 The Coordination Program identifies and reports on each research activities carried out by the single WP of this project.
The Coordination Program will support the entire project achieving efficiency and guiding participants on how and when they must act to reach the milestones. OPBG will be in charge of the scientific coordination of the project. ACC will manage the budget of the entire project as well as the implementation of the project plan and the time schedul. The Environment Management of the project will facilitate the collaboration and integration of the WPs; it will help the single WP manage the change processes across the activities to reach the predicted deliverables. The Coordination program will also help identify potential drawbacks and risks before they affect the chance of success of the overall project.
TASK1.2 Facilitate the scientific collaboration between the involved groups.
The Coordination program will aim at optimizing the emerging scientific opportunities across the involved IRCCS/Company/Institutions and the WPs, indentifying public health challenges, or knowledge gaps that deserve special consideration. Such research benefits from conducting or supporting additional research that involves collaboration between IRCCS/academic institutions and the pharmaceutical company MOLMED, involved in the project in view of its relevant contribution in the field of CAR T cell/gene therapy in our Country.
TASK1.3 Management of the Communication Plan between ACC, Italian Health Ministry, Public and Patient foundations.
Communication between ACC, Italian Health Ministry, Parent and Patient associations will be instrumental to allow the dissemination of the information that will be generated across the WP.
TASK1.4 Management of the Communication Plan between IRCCS/Company/Institution Communication among the different involved units will be crucial to speed-up the activities of each WP, and to facilitate the dissemination of the data across the WPs.
Milestones
- Coordination of the activities of the entire project through the organization of virtual meetings of all the WPs every 2 months (1-24 months)
- Coordination of face-to-face meetings every 6 months involving all the WP leaders (1-24 months) - Coordination of 2 annual meetings to update the Italian Health Ministry, Parent and Patient foundations and Hospitals on the progresses of the project (1-24 months)
- Coordination of the communication with the Scientific Advisory Board (2-24 months)
- Coordination of the interactions/collaborations with the private companies potentially interested in the different programs of the project (1-24 months)
TASK2: Definition of the manufacturing and release flow for CAR ATMP to reduce the costs related to the generation of CAR cells
Rational
Together with the remarkable treatment efficacy of CAR T-cells, some peculiar and severe adverse events were recorded. Cytokine Release Syndrome (CRS) and neurotoxicity represent the two most relevant side effects associated with CAR T-cells. Moreover, potential limitations to a wider use of CAR T-cells emerged; they are represented mainly by the limited manufacturing capacity (a specific CAR T-cell product must be created for each individual patient) and by the relevant costs approved in the US for the commercialized drug products. The extraordinary potential to change the therapeutic scenario of several hematological conditions with CAR T-cells is now evident, but there
is certainly the need to better understand and define the mechanisms that regulate efficacy and toxicity of this immunotherapy, as well as to potentiate the therapeutic approach to reproduce comparable results in patients with solid neoplasms. Furthermore, the development of production processes capable of implementing the manufacturing capacity and reducing the costs related to the generation of gene-modified CAR cells could increase the number of patients who might benefit from these therapies and optimize their economic sustainability in the context of a public national system, like that existing in Italy. Finally, the considerable interest that can be raised by an approach of such a clinical relevance could lead to a virtuous collaboration with pharmacological Companies, further enriching the panorama of potential opportunities related to the development of CAR T-cell-based therapies on a national basis. In fact, a potential virtuous synergism between academic institutions and Companies can be created with the goal of reproducing also in Italy the win-win collaboration model that certainly had an important role in the development of CAR T cells in the USA.
The present WP is aimed at dealing with several of the factors limiting the full potential use of CAR T-cells for the treatment of all patients who could potentially benefit from them. In particular, we will take in account that current production capacities are lower than expected and there is no network, to date, that allows the coordination and management of the distribution of products on the national territory. Moreover, the lack of standardization of production processes makes the experiences currently available in Italy isolated, non-homogeneous and, therefore, not comparable.
Last, but not least, the production costs of CAR T-cells are significant and potentially limiting their use on a large scale. The creation of a national network dedicated specifically to the development of the CAR cell technology, under the aegis of the ACC, has the purpose of reducing these costs and, at the same time, of implementing the production capacity through the harmonization and automation of the processes. Moreover, the network can be open to the participation of pharmaceutical and industrial partners, upon expressions of interest.
TASK2.1. Generation of the automatic production chain for CAR T cells.
An automated production chain will be defined in compliance with the current GMP rules, with a high degree of automation and closure of the system itself. Through this implementation, it will be possible to: 1) facilitate multiple contemporary productions in the same environment; 2) reduce the costs related to the personnel employed for production; 3) carry out the production in unclassified environments, or class C; 4) limit the occurrence of biological contamination; 5) generate highly standardized procedures.
TASK2.2. Generation of an allogenic production for CAR cells.
A research project aimed at obtaining allogeneic products that can integrate or replace patient- specific productions of CAR cells will be carried out in OPBG and in San Gerardo Units. The production of allogeneic CAR cells will allow the generation of banks for cellular products that can be readily sent to the requesting clinical center whenever needed, avoiding an ad hoc production for each patient. This approach would have several advantages, both managerial and clinical. For the first aspect, the creation of allogeneic CAR banks will solve the issues of the GMP facility capability, as well as it will reduce the impact of the costs of each treatment. From the clinical point of view, the main expected improvements include: 1) patients will not undergo lymphocyte- apheresis, avoiding the risk of obtaining low-quality T cells from heavily pre-treated patients; 2) the risk of production failures of the cellular product will be decisively reduced; 3) the product will be readily available, whenever needed, upon request, avoiding the waiting time of the production, sometimes incompatible with the rapid progression of the disease; 4) the possibility to design clinical studies that envisage the use of multiple doses of CAR cells.
Milestones
- OPBG will perform validation runs to obtain the automation of the CAR T platform (1-24 months)
- Molmed will optimize the large-scale viral production to achieve high expression of CAR in the target cells (1-24 months)
- OPBG will generate an allogenic CAR platform based on Natural Killer (NK) and γδ/T cells.
- San Gerardo will generate an allogenic CAR platform based on cytokine-induced killer (CIK) cells from cord blood (CB) units.
Feasibility, risk assessment and contingency plans
The feasibility of the WP1 proposal is guaranteed by the leading role played by OPBG in the immunotherapy field and its long lasting experience in driving coordinative roles of several researche grants. In particular, OPBG has started and almost completed two Phase I-II academic clinical trials using CAR T-cells for treatment of paediatric patients affected by Bcp-ALL, B-NHL or neuroblastoma, enrolling more than 30 patients so far. Moreover, MolMed will provide its relevant contribution as Company to support the clinical translation of the project, focusing on research, development, manufacturing and clinical validation of cell & gene therapies for the treatment of cancer and rare diseases. Indeed, based on a dual business model leveraging on common technological assets, MolMed is able to manage from pure to clinical research, development, manufacturing and regulatory authorization, market access and pricing &
reimbursement. Finally, the San Gerardo Hospital Unit has developed and optimized an adoptive immunotherapy approach based on donor-derived CIK CAR cells employed in patients relapsing after HSCT and obtained with a non-viral platform, currently implemented in a Phase I clinical trial.
Its contribution will be of a great value to guarantee the feasibility of the system optimization.
TASK1.1 The Coordination Program identifies and reports on each research activities carried out by the single WP of this project.
The Milestones and deliverables of each WP will be managed by each WP leaders who will refer to the Coordination program for the steps achieved or missed. The Coordination Leader will monitor and guide each WP leader to properly address major risks affecting the overall success of the WP.
The Coordination Leader will act with a problem-solving strategy to ensure the achievement of the milestones.
TASK1.2 Facilitate the scientific collaboration between the involved IRCCS.
The involvement of different activities from each WP carries the potential risk of an inadequate integration amongst the WPs. Thus, the Coordination Leader will act to maximize the collaboration between the different Units, at both academic and industrial level.
TASK1.3 Management of the Communication Plan between ACC, Italian Health Ministry, Public and Patient foundations.
Since the goal of the project is to create novel therapeutic option for patients, it will be crucial to plan a correct communication of the results. Thus, the Coordination Leader, together with ACC, will provide a professional communication of the information to the Parent and Patient foundation/associations. Moreover, the coordination leader will represent with ACC the interface with the Italian Health Ministry for the constant monitoring of the project conduction.
TASK1.4 Management of the Communication Plan between IRCCS/Company/Institutions
Considering the large number of Units involved in the project, the absence of a defined and well- established Communication Plan would negatively influence the project success. Thus, the Coordination Leader will schedule and organize meeting to facilitate the dissemination of the data/results obtained across the WPs.
TASK2.1. Generation of the automatic production chain for CAR T cells.
The generation of an automated process for the manufacturing of CAR T is an ambitious task that also involve the contribution of the expertise of medical engineers, as well as of informatics in order to develop dedicated software to manage novel instrumentation. If the milestone will be judged not feasible to be reached in 2 years, OPBG will focus on the validation of the best and more automated procedure, even if not completely and fully automatic.
TASK2.2. Generation of an allogenic production for CAR cells.
The previous experience of OPBG and San Gerardo will ensure the feasibility of this specific aspect of the project. We do not envisage relevant issues. The only issue might be related to the large-scale validation of the allogenic products, due the lack of adequate bioreactors. If it will be the case, we will consider a medium scale of production using culture bags.
WP2: Identification of new targets selectively expressed on neoplastic cells and compatible with the clinical use of CAR T
Leader: Fondazione Policlinico Gemelli (FPG); Participants: Istituto Europeo di Oncologia (IEO), Ospedale Pediatrico Bambino Gesù (OPBG), Fondazione Casa Sollievo della Sofferenza (CSS), Istituto Nazionale dei Tumori (INT), Fondazione del Piemonte per l'Oncologia (FPO), Istituto di Biostrutture e Bioimmagini- Consiglio Nazionale delle Ricerche (IBB-CNR)
Rational
To date, the clinically most relevant CAR T cell target molecules are expressed on the surface of neoplastic elements, but also on healthy normal cells. CAR T cells directed against CD19 or CD22 are very effective in Bcp-ALL or B-NHL (Fry et al., 2018; Maude et al., 2014; Maude et al., 2018;
Neelapu et al., 2017; Schuster et al., 2017). However, both surface molecules are also expressed by normal B lymphocytes. Fortunately, the patient survives this off-target activity without substantial or unacceptable clinical risks as the off-target killing of B-cells can be compensated through regular immunoglobulin replacement therapy. We are still facing the unmet medical need to expand CAR T-cell therapies to other cancers, including solid tumors, such as advanced colorectal cancer (CRC) or glioblastoma (GB) and other leukemias including acute myeloid leukemia (AML) or T-cell acute lymphoblastic leukemia (T-ALL).
For efficiently targeting tumors, the identification of molecules preferentially, or, at best, selectively present only on neoplastic cells represents a goal of primary importance to extend the use of CAR T cells. The research groups participating in WP2 of the project will contribute to the identification or validation of targets expressed on the surface of tumor cells and to the generation of new CARs targeting these targets. According to the expertise of the participating groups, priority will be given to the identification of targets that are expressed by brain tumors, sarcoma, T-ALL and AML (OPBG), carcinomas of different origin (INT), leukemia-initiating cells (LIC) in leukemic cell subsets in T-ALL (CSS), and cancer stem cells (CSCs) of solid tumors, such as GB and metastatic CRC (FPG).
The research groups participating in this project have contributed to the characterization of LICs (Giambra et al., 2018; Giambra et al., 2015; Giambra et al., 2012) and discovered the existence of CSCs in many solid tumors including CRC and other tumors (Eramo et al., 2008; Ricci-Vitiani et al., 2007; Ricci-Vitiani et al., 2008; Todaro et al., 2010). Furthermore, biobanks of molecularly annotated primary spheroids and organoids from different tumors, such as GB and metastatic CRC (Manic et al., 2018; Ricci-Vitiani et al., 2008) were established. These primary tumor cultures of GB and metastatic CRC readily generate orthotopic xenografts in mice that reproduce histological phenocopies of the original patient tumors. The groups participating to this project aim at developing known antibodies raised against tumor-associated antigens (INT and OPBG) or at identifying novel targets expressed on the surface of tumor cells (FPG, IEO and CSS). For the de novo identification of antigens different complementary approaches will be used: the first methodology is based on the de novo generation of monoclonal antibodies (mAbs) recognizing CRC and GB stem cells. Because tumor associated antigens (TAAs) are often lost by long-term established cell lines (RodrIguez et al., 2018; Steentoft et al., 2018), mAbs raised against antigens expressed by primary CSC cultures enriched in tumorigenic cells represent strong tools for the comprehension and targeting of solid tumors (Haas et al., 2017). The immunization with primary tumor cells can give rise to mAbs binding virtually all possible tumor-specific epitopes, including tumor-specific protein undergoing modifications, such as proteolytic processing, glycosylation or conformational changes that are not detectable by genomic or proteomic (i.e. LC-ESI-MS/MS) approaches. In fact, many known tumor-selective mAbs bind oligosaccharides (i.e. SSEA-3), posttranslational modifications (i.e. CD133, CA 19-9) or structural epitopes (i.e. CA-125) (Kannagi et al., 1983; Kemper et al., 2010; Nustad et al., 1998). Two hybridoma libraries producing
antibodies against CSCs of different solid tumors are already available. These libraries were obtained by immunization techniques of immunocompetent mice with primary CSCs. Subsequent screening was established by the research group of the FPG (Haas et al., 2017) and allowed for the isolation of mAbs able to recognize target cells, but not normal cells derived from healthy human tissues. These mAbs will be used to generate the antigen-binding portions of the CAR construct (i.e.
scFv) and thus the targeting domain of CAR T cells. In addition, new tumor-specific antibodies will be developed to increase the repertoire of targetable surface structures. A second screening methodology that will be used by researchers of the IEO to select tumor-specific scFv is based on a library of phages expressing recombinant human scFv. A platform, that allows the in vivo selection of scFv specific for human cells transplanted into immunocompromised mice, has been developed.
The library is initially subjected to a procedure, which ensures the elimination of all scFv that can react against healthy cells. The most specific antibodies for both CSCs and the bulk of proliferating tumor cells are, then, selected in an unbiased manner with respect to the target antigen. The most promising scFvs are identified by next generation sequencing and their tumor affinity and specificity are determined in silico and validated with multi-parameter flow-cytometry techniques.
In parallel with the discovery activities, a screening platform combining flow-cytometry and immunohistochemistry on normal tissues, primary tumors and metastases will be optimized, to test the specificity of the new targets that will be further validated upon FDA-approved healthy tissue microarrays. Furthermore, the CSS group will perform single-cell RNA sequencing in Wnt-active LIC-enriched cell populations in T-ALL to identify markers, exclusively expressed in leukemia cell subsets, resistant to conventional therapeutic treatments. The aim of this part of the project is to explore the cellular heterogeneity of acute leukemia in selected cell subsets associated with LIC activity. Through approaches of single cell RNA-Sequencing (scRNA-Seq) and computational reductions, researchers at the CSS will identify novel targets, specifically expressed in LIC-enriched subsets of T-cell ALL. These markers can then be used to develop scFvs in collaboration with the research groups of IEO in order to generate CARs targeting this highly malignant cell population. In addition to the screening for new markers, in this project also previously identified antigens will be considered. At the INT, researchers identified as cancer biomarker the Lewis Y (LeY or CD174) antigen overexpressed on several human carcinomas (ovary, colon, breast, prostate, lung, melanoma), with relatively limited expression in normal tissues thus representing an attractive target for immunotherapy. Starting point is a mAb, MLuC1 (Leoni et al., 1992), directed against LeY. Unlike others anti-carbohydrates mAb, MLuC1 revealed a good strength of binding. A scFv with the VL-linker-VH structure was constructed and used to produce one of the first CAR-T construct, named T-body (Mezzanzanica et al., 1998). However, although the T-body showed the ability to recognize LeY positive tumor cell targets, its limited affinity and the absence of a co- stimulation reduced the efficacy of such a reagent. Taking advantage of the previous experience on the target biology, new technologies will be employed to improve the performance of the MLuC1 scFv and obtain an optimized CAR targeting of LeY-positive tumors.
As mentioned above, there is so far an unmet medical need to extend CAR T cell therapy to patients with AML. As compared to Bcp-ALL, this type of leukemia is by far the most prevalent one in the adult population. In this project, the OPBG group will develop research strands aiming at identifying strategies that can make CAR T-cell treatment extensible also to patients with AML, both as a preparation therapy approach for transplantation, and as a rescue in case of post-transplant relapse. More specifically, we will aim at identifying constructs able to guarantee an action of CAR T cells preferentially expressed on leukemia blasts with respect to normal hematopoietic progenitors. Furthermore, constructs capable of attacking molecules that are not currently investigated as potential targets for CAR Ts will be explored.
In summary, the integration of existing competences within the various groups participating in the research project, together with the strong expertise of the FPO in IHC analyses for target expression validation, will facilitate the identification of these new targets. The availability of primary cell lines deriving from different human tumor histotypes and their sharing among the various groups
that participate in this project will help ensure the development of these new constructs. The clinical potency of the novel CAR T will be validated in mouse models specifically developed for this purpose in WP3.
Preliminary data
The part of the project proposed by FPG is based on low-passage primary tumor cultures enriched in CSCs derived from metastatic CRC and GB. Using GB and CRC CSCs, two different hybridoma libraries were already generated (see FPG Figure 1). A combined FACS and IHC workflow (Fig.
1a) was established to identify additional tumor-specific surface markers and will be further optimized in this project. Interestingly, in preliminary experiments, all mAbs showing a high specificity for tumor tissue by IHC (Fig. 1b) and flow-cytometry analysis (Fig. 1c) preferentially bind to primary cultures of CRC when compared to long-term ATCC cell lines (Fig. 1d). Although the mAbs were raised and screened using patient-derived primary tumor cells, the expression of the antigens was also present in the metastatic CRCs and will be further developed as CAR target in this project (Fig. 1d).
e)
Spleen
Lymph node Adrenal gland Thyroid
gland
Liver
Lung Small Intestine Breast
Gallbladder
Pancreas
CRC (Patient 1)
CRC (Patient 2) Kidney
Prostate
Liver mets (Patient 3)
Liver mets (Patient 4)
Figure 1. Identification of antibodies binding to primary CRC-CSCs and tumor-tissue. (a) Workflow for the hybridomas isolated from the large-scale screening for mAbs binding to CRC-CSCs: After the initial screening (Fig.
1a), we established the IHC protocol on frozen sections from embedded inclusions of CRC-CSCs. Then, the functional mAbs were tested on frozen tissue slides from CRC patients and on normal colon mucosa. The mAbs were then tested for functionality in IHC performed with formalin fixed paraffin embedded (FFPE) tissues. (b) Representative IHC analysis of FFPE CRC tissue versus normal mucosa from the same patient: staining was performed with the mAbs isolated as described in (a). The normal mucosa was derived from the same surgery and examined by an experienced pathologist. (c) Representative FACS dot plots from the analysis of mAbs binding on freshly dissociated CRC tissue versus normal mucosa: The upper row shows the binding of the mAbs on normal mucosa, the lower row on cancer tissue from the same patient. Please note that we used the marker EpCAM to distinguish between epithelial (mucosa or CRC) and tissue derived from the microenvironment. (d) Analyses for the expression of the 13C4, 19D10 and 20G4:
CRC cultures either obtained from ATCC or primary cultures from patient CRCs (primary tumor or liver metastases).
(e) Green: Representative TMA for 12 out of 18 healthy tissues analyzed. Red: Representative IHC analyses for primary CRC tissues and liver metastases from patients with metastatic CRC.
In collaboration with the FPO, the mAbs were used to stain tissue microarrays constructed with a large series of normal tissues, and either very weak or no immunoreactivity was detected on all 18 healthy tissues investigated. In contrast, both primary and metastatic CRC samples showed widespread staining in cancer cells (Fig. 1e). Thus, these antigens are not lost during the formation of metastases and may be exploited to target metastases in patients that all appeared to be positive for the antigen. These mAbs will provide the starting point for the in-depth characterization of the tissue binding (WP2 Task 2) and the generation of recombinant scFvs to target CAR T cells.
