NEONATALI
Paolo Giliberti Paolo Giliberti Paolo Giliberti Paolo Giliberti
Tabarka Tabarka Tabarka
Tabarka 25 25 25 – 25 – – 30 luglio 2009 – 30 luglio 2009 30 luglio 2009 30 luglio 2009
NEONATALI
Paolo Giliberti Paolo Giliberti Paolo Giliberti Paolo Giliberti
Tabarka Tabarka Tabarka
Tabarka 25 25 25 – 25 – – 30 luglio 2009 – 30 luglio 2009 30 luglio 2009 30 luglio 2009
STADIO ASINTOMATICO
STADIO ASINTOMATICO STADIO SINTOMATICO STADIO SINTOMATICO
INIZIO BIOLOGICO
INIZIO BIOLOGICO
INTERVALLO DI SCREENING
INTERVALLO
DI SCREENING PERIODO
CONVENZIONALE DI INDIVIDUAZIONE
PERIODO CONVENZIONALE DI INDIVIDUAZIONE
PIENA ESPRESSIONE
CLINICA PIENA ESPRESSIONE
CLINICA INIZIO
INDIVIDUABILITA’
CON SCREENING INIZIO
INDIVIDUABILITA’
CON SCREENING
PERIODO OTTIMALE TRATTAMENTO
PERIODO OTTIMALE TRATTAMENTO
MALATTIA IDEALE PER LO
SCREENING: STORIA NATURALE MALATTIA IDEALE PER LO
SCREENING: STORIA NATURALE
CRITERI DI SELEZIONE
DI UN PROGRAMMA SCREENING CRITERI DI SELEZIONE DI UN PROGRAMMA SCREENING
Che riguardano la malattia:
• Gravità
• Frequenza
• Efficaci possibilità terapeutiche
• Miglioramento della prognosi a seguito della diagnosi precoce
Che riguardano la malattia:
• Gravità
• Frequenza
• Efficaci possibilità terapeutiche
• Miglioramento della prognosi a
seguito della diagnosi precoce
CRITERI DI SELEZIONE
DI UN PROGRAMMA SCREENING CRITERI DI SELEZIONE DI UN PROGRAMMA SCREENING
Che riguardano il metodo:
• Accettabilità
• Semplicità
• Riproducibilità
• Economicità
• Sensibilità
• Specificità
Che riguardano il metodo:
• Accettabilità
• Semplicità
• Riproducibilità
• Economicità
• Sensibilità
• Specificità
SENSIBILITA’ = SENSIBILITA’ =
Numero dei veri positivi Numero dei veri positivi
+
Numero dei falsi negativi Numero dei veri positivi Numero dei veri positivi
+
Numero dei falsi negativi
X 100
X 100
SPECIFICITA’ = SPECIFICITA’ =
Numero dei veri negativi Numero dei veri negativi
+
Numero dei falsi positivi Numero dei veri negativi Numero dei veri negativi
+
Numero dei falsi positivi
X 100
X 100
FALSI NEGATIVI FALSI NEGATIVI FALSI NEGATIVI
FALSI POSITIVI
FALSI FALSI POSITIVI POSITIVI
100%100% 41%41% 18%18% 00
00 30%30% 80%80% 100%100%
BB CC
BASSO
BASSO SCALA DI SCREENINGSCALA DI SCREENING ALTOALTO
SOGGETTI SANISOGGETTI SANI SOGGETTI AMMALATI
SENSIBILITA’
SENSIBILITA’
SPECIFICITA’
SPECIFICITA’
AA
Gene alterato
Gene alterato
In 1 settimana 4-5 mesi In 1 settimana
4-5 mesi
Enzima inattivo Enzima
inattivo Abnorme
milieu chimico a livello cellulare Abnorme milieu chimico
a livello cellulare
Danno dei tessuti sensibili Danno dei
tessuti sensibili
Sintomi clinici Sintomi
clinici Deficienza di
Deficienza di
Accumulo di Accumulo di
B B
Metaboliti alternativi Metaboliti alternativi
A A
Assenza di crescita
Assenza di crescita Ac. arginino-
succinico Ac. arginino-
succinico
Campione di sangue privo di
argininosuccinasi Campione di sangue
privo di argininosuccinasi
Mezzo di coltura con Ac. argininosuccinico
privo di arginina Mezzo di coltura con Ac. argininosuccinico
privo di arginina B. SUBTILIS
6051 auxotroph
+
JP3
B. SUBTILIS
6051 auxotroph
+
JP3
Crescita batterica Crescita batterica arginina
arginina
Campione di sangue con
argininosuccinasi Campione di sangue
con
argininosuccinasi
Mezzo di coltura con Ac. argininosuccinico
privo di arginina Mezzo di coltura con Ac. argininosuccinico
privo di arginina B. SUBTILIS
6051 auxotroph
+
JP3
B. SUBTILIS
6051 auxotroph
+
JP3
Assenza di crescita Assenza di
crescita Mezzo di coltura privo
di arginina contenente Ac. argininosuccinico Mezzo di coltura privo di arginina contenente Ac. argininosuccinico B. SUBTILIS
6051 auxotroph
+
JP3
B. SUBTILIS
6051 auxotroph
+
JP3
ENZYME AUXOTROPH TEST
APPLICATO ALL’ARGININOSUCCINURIA
ENZYME AUXOTROPH TEST
APPLICATO ALL’ARGININOSUCCINURIA
Robert Guthrie Robert Guthrie
TEST DI INIBIZIONE BATTERICA
TEST DI INIBIZIONE BATTERICA
Crescita batterica Crescita batterica
Campione di sangue contenente l’aminoacido
Campione di sangue contenente l’aminoacido
Mezzo di coltura con inibitore Mezzo di coltura
con inibitore BATTERI +
BATTERI +
Assenza di crescita Assenza di
crescita Mezzo di coltura
con un inibitore per competizione con
un aminoacido Mezzo di coltura con un inibitore per
competizione con un aminoacido BATTERI +
BATTERI +
Crescita batterica Crescita batterica Mezzo di coltura
Mezzo di coltura BATTERI +
BATTERI +
TEST DI INIBIZIONE BATTERICA
(Guthrie)
TEST DI INIBIZIONE BATTERICA
(Guthrie)
TEST DI INIBIZIONE BATTERICA
FENILCHETONURIA
TEST DI INIBIZIONE BATTERICA
FENILCHETONURIA
TEST SCREENING IN ETA’ NEONATALE TEST SCREENING IN ETA’ NEONATALE
BM test BM test
“meconio”
“meconio”
Mucovoscidosi Mucovoscidosi
M. Chimici M. Chimici ++
Iperlipidemie Iperlipidemie
M.C.M.C.
++ ++
Altre aminoacidopatie ed acidosi organiche
Altre aminoacidopatie ed acidosi organiche
RIARIA ++
++ ++
Ipotiroidismo Ipotiroidismo
Test di Beutler Test di Beutler ++
++ ++
++ Galattosemie
Galattosemie
E.A.T.
E.A.T.
++ ++
++ ASUASU
M.C.M.C.
++ ++
++ ++
Leucina (MSUD) Leucina (MSUD)
M.C. – test di Brand M.C. – test di Brand ++
++ ++
++ Metionina (omocistinurie)
Metionina (omocistinurie)
M.F. – M.C.
M.F. – M.C.
++ ++
++ Istidinemia
Istidinemia
M.F. – M.C.
M.F. – M.C.
++ ++
++ ++
Tirosinemia Tirosinemia
M.F. – M.C.
M.F. – M.C.
++ +/-+/-
++ ++
PKUPKU
Altri Altri Guthrie
Guthrie Urine
Urine Siero
Siero Sangue
essiccato Sangue essiccato Condizione
Condizione
Tests disponibili Tests disponibili Tipo di materiale biologico
Tipo di materiale biologico
SPETTROMETRIA DI MASSA TANDEM SPETTROMETRIA DI MASSA TANDEM
Settore magnetico Settore elettrostatico
Camera di
ionizzazione γγγγ= 2 V
B Rivelatore
ioni m
e
H2γγγγ2 2 V
=
SPETTROMETRIA DI MASSA TANDEM SPETTROMETRIA DI MASSA TANDEM
Sorgente ionica
Cella di collisione
MS1 MS2 Detector
SPETTROMETRIA DI MASSA TANDEM SPETTROMETRIA DI MASSA TANDEM
MST MST
Aminoacidi Aminoacidi
Coniugati della carnitina
Coniugati della carnitina
• Fenilalanina
• Tirosina
• AA ramificati
• Difetti del ciclo dell’urea
• Difetti dell’AA solforati
• Disordini del trasporto degli AA
• Iperglicinemia non chetotica
• Prolinemia
• Deficit di ornitina - δδδδ -aminotransferasi
• Fenilalanina
• Tirosina
• AA ramificati
• Difetti del ciclo dell’urea
• Difetti dell’AA solforati
• Disordini del trasporto degli AA
• Iperglicinemia non chetotica
• Prolinemia
• Deficit di ornitina - δδδδ -aminotransferasi
• Disordini del trasporto della carnitina e delle acilcarnitine
• Disordini della β-ossidazione
• Disordini del metabolismo comune alla valina e leucina
• Etc.
• Disordini del trasporto della carnitina e delle acilcarnitine
• Disordini della β-ossidazione
• Disordini del metabolismo comune alla valina e leucina
• Etc.
SPETTROMETRIA DI MASSA TANDEM:
PROFILO DELLE ACIL-CARNITINE
SPETTROMETRIA DI MASSA TANDEM:
PROFILO DELLE ACIL-CARNITINE
Octanoil- carnitina
