5.Conclusioni
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5.Conclusioni
103 Dato il forte impatto ambientale dell’inquinamento troposferico dovuto all’ozono, il presente lavoro di ricerca si è occupato e si propone in futuro di analizzare i meccanismi molecolari che sono alla base della risposta di difesa che gli organismi vegetali mettono in atto nei confronti di questo agente stressante. Partendo da un approccio trascrittomico effettuato su due cloni di pioppo ibridi, Populus deltoides x maximowiczii (clone Eridano) e Populus x euoramericana (clone I-214), rispettivamente sensibile e tollerante all’O3, è stato possibile isolare diversi trascritti attivati durante un’esposizione acuta all’ozono. In questo lavoro ci siamo concentrati su due trascritti in particolare (Ft32C-WAK e Ft312B-WRKY) che sono parte integrante di un pathway più ampio di traduzione del segnale. Il pattern di espressione dei suddetti trascritti è stato analizzato mediante RT_PCR Relativa sia durante le 5 ore di trattamento, sia nelle successive 48 ore dall’esposizione. Nel clone Eridano, una forte attivazione del fattore di trascrizione Ft312B-WRKY, è seguita da un debole aumento del recettore di membrana (appartenente alla famiglia delle RLK) Ft32C-WAK. Nel clone I-214 l’andamento dell’espressione di Ft312B-WRKY è risultato estremamente concordante con l’andamento di Ft32C-WAK, tanto da avanzare l’ipotesi di una possibile correlazione funzionale tra le due attività geniche. Questa ipotesi è corroborata da numerosi dati in letteratura che confermano sia la presenza nelle sequenze promotrici di recettori di membrana appartenenti alla famiglia RLK dei motivi di legame (W-box) specificamente riconosciute dai membri della superfamiglia WRKY, sia dall’osservazione di interazioni RLK/WRKY in particolari programmi fisiologici delle piante. Al fine di avvalorare l’ipotesi avanzata, è stato isolato il promotore del clone I-214. L’analisi della sequenza, effettuata tramite alcuni software disponibili in rete per la ricerca di domini di legame nelle sequenze promotrici delle piante, è stato possibile individuare una zona del promotore vicina al sito di inizio di trascrizione, piuttosto ricca in elementi W-box.
In futuro ci proponiamo di dimostrare con una prova diretta l’interazione del fattore di trascrizione Ft312B-WRKY con la sequenza promotrice del gene Ft32C-WAK nel clone I-214, mediante un metodo come il yeast one-ibrid system. Questo saggio sarà poi seguito da un saggio di attivazione in vivo, per valutare la capacità regolatoria di Ft312B-WRKY su Ft32C-WAK. Verrà inoltre isolato sia il trascritto Ft312B-WRKY sia la sequenza
5.Conclusioni
104 promotrice del gene Ft32C-WAK nel clone Eridano, al fine di analizzare il diverso meccanismo che è alla base della risposta sensibile.
