IgG capture step from sample SN/I on MBI resin: trials 19ACCS - 28ACCS

(1)

Trial 19ACCS 20ACCS 21ACCS 22ACCS 23ACCS 24ACCS 25ACCS 26ACCS 27ACCS 28ACCS Average Standard deviation

Parameter Measure Unit

Column Device XK16/20 XK16/20 XK16/20 XK16/20 XK16/20 XK16/20 XK16/20 XK16/20 XK16/20 XK16/20

Diameter (cm) 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6

Bed height (cm) 15 15 15 15 15 15 15 15 15 15 15 0

Bed volume (ml) 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 0

Load IgG mg/ml of resin 9 8 9 9 19 9 9 13 13 7 11 4

Protein mg/ml of resin 88 66 62 54 118 59 55 100 82 45 73 23

Plasma equivalent volume (ml) 31 31 31 31 69 33 30 54 43 44 40 13

Sample volume (ml) 40 40 40 40 87 42 38 68 55 56 51 16 Sample volume (CV) 1,3 1,3 1,3 1,3 2,9 1,4 1,3 2,3 1,8 1,9 1,7 0,6 Total protein (mg) 2655 1974 1854 1618 3550 1776 1661 2991 2447 2532 2306 641 Total IgG (mg) 283 246 257 272 563 272 275 392 390 392 334 100 Total albumin (mg) N.D. 1086 1123 1116 2361 1178 1039 1755 1512 1371 1393 433 Protein/plasma (g/L) 85,64 64,00 59,81 52,19 51,45 53,82 55,37 55,39 56,91 57,55 59,21 9,99 IgG/plasma (g/L) 9,13 7,93 8,30 8,77 8,16 8,24 9,20 7,26 9,07 8,91 8,50 0,63 Albumin/plasma (g/L) N.D. 35,03 36,22 36,00 34,22 35,70 34,63 32,50 35,16 31,16 34,51 1,68 Volume (CV) 1,0 1,5 5,3 5,3 2,9 1,4 1,3 2,3 1,8 1,9 2,5 1,6 Total protein (mg) 780 1064 600 830 2278 775 688 1647 1096 1491 1125 531 Total IgG (mg) 0 0 0 3 30 0 0 10 5 8 6 9 Total albumin (mg) 363 776 544 810 2062 735 73 1357 1075 1077 887 555 Albumin/plasma (g/L) 11,71 25,00 17,55 26,13 29,88 22,27 2,43 25,13 25,00 24,48 20,96 8,24 Protein recovery (%) 14 54 32 51 65 44 41 55 45 59 46 15 IgG recovery (%) 0 0 0 1 5 1 0 4 1 2 1 2 Albumin yield (%) N.D. 71 48 73 89 62 7 77 71 79 64 24 Volume (CV) 3,8 2,9 5,3 5,7 4,9 5,2 5,1 5,1 5,1 2 4,5 1,2 Total protein (mg) 1135 480 590 449 653 700 611 693 537 404 625 206 Total IgG (mg) 0 60 22 22 108 32 N.D. 81 74 18 46 36 Total albumin (mg) 479 248 487 301 387 518 N.D. 374 373 204 375 109 Albumin/plasma (g/L) 15,45 8,00 15,71 9,71 12,90 15,70 N.D. 6,93 8,70 4,64 10,86 4,19 Protein recovery (%) 43 24 32 28 18 39 37 23 21 15 28 9 IgG recovery (%) 0 24 9 8 19 12 N.D. 20 18 4 13 8 Albumin yield (%) N.D. 23 43 27 16 44 N.D. 21 24 14 27 11 Volume (CV) 4,5 3,0 3,1 3,2 2,9 4,8 3,9 3,9 4,0 4,8 3,8 0,7 Total protein (mg) 777 188 174 201 406 214 180 328 272 330 307 183 Total IgG (mg) 122 156 170 204 423 211 469 291 287 292 263 114 Protein/plasma (g/L) 7,1 6,06 5,6 6,5 5,88 6,48 15,63 6,07 6,33 7,5 7,32 2,98 IgG/plasma (g/L) 3,94 5,03 5,5 6,6 6,13 6,39 6 5,4 6,67 6,64 5,83 0,88 Protein yield (%) 29 9,5 9 12 11 12 28 11 11 13 15 7 IgG yield (%) 43 63 66 75 75 77 65 89 74 75 70 12 IgG/protein ratio (%) 16 83 98 100 100 99 38 89 100 88 81 30 I Starting material Run through Washing IgG eluate

(2)

Trial 29ACCS 30ACCS 31ACCS 32ACCS 33ACCS 34ACCS Average Standard deviation

Column Device XK16/20 XK16/20 XK16/20 XK16/20 XK16/20 XK16/20

Diameter (cm) 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6

Bed height (cm) 15 15 15 15 15 15 15 0

Bed volume (ml) 30 30 30 30 30 30 30 0

Load IgG mg/ml of resin 13 13 15 17 15 15 15 1

Protein mg/ml of resin 91 90 86 119 113 102 100 13

Plasma equivalent volume (ml) 50 46 58 77 57 53 57 11

Sample volume (ml) 64 58 73 98 72 67 72 14 Sample volume (CV) 2,1 1,9 2,4 3,3 2,4 2,2 2,4 0,5 Total protein (mg) 2730 2688 2579 3570 3397 3055 3003 408 Total IgG (mg) 392 387 450 508 451 449 440 45 Total albumin (mg) 1629 1605 1823 1947 1692 1741 1740 129 Protein/plasma (g/L) 54,60 58,43 44,47 46,36 59,60 57,64 53,52 6,52 IgG/plasma (g/L) 7,80 8,41 7,76 6,60 7,91 8,47 7,83 0,67 Albumin/plasma (g/L) 32,58 34,89 31,43 25,29 29,68 32,85 31,12 3,33 Volume (CV) 2,1 1,9 2,4 3,3 2,4 2,2 2,4 0,5 Total protein (mg) 1643 1354 1507 2421 1802 1593 1720 374 Total IgG (mg) 15 9 18 63 22 0 21 22 Total albumin (mg) 1318 1128 1517 1665 1556 1357 1424 194 Albumin/plasma (g/L) 26,36 24,52 26,12 21,62 27,30 25,60 25,25 2 Protein recovery (%) 60 50 58 68 53 52 57 7 IgG recovery (%) 4 2 4 12 1 0 4 4 Albumin yield (%) 81 70 83 86 92 78 82 7 Volume (CV) 2,0 1,1 1,1 1,0 0,9 1,1 1,2 0,4 Total protein (mg) 361 528 404 430 386 621 455 100 Total IgG (mg) 54 26 30 49 14 0 29 20 Total albumin (mg) 174 352 368 230 275 435 306 97 Albumin/plasma (g/L) 3,48 7,65 6,35 2,99 4,82 8,21 5,58 2,17 Protein recovery (%) 13 20 16 12 11 20 15 4 IgG recovery (%) 14 7 7 10 3 0 7 5 Albumin yield (%) 11 22 20 12 16 25 18 6 Volume (CV) 2,7 3,7 3,6 3,8 4,7 4,9 3,9 0,8 Total protein (mg) 389 411 412 461 701 537 485 118 Total IgG (mg) 321 337 322 427 425 378 368 49 Protein/plasma (g/L) 7,78 8,93 7,10 5,99 12,30 10,13 8,71 2,27 IgG/plasma (g/L) 6,42 7,33 5,55 5,55 7,46 7,13 6,57 0,87 Protein yield (%) 14 15 16 13 21 18 16 3 IgG yield (%) 82 87 72 84 94 84 84 7 IgG/protein ratio (%) 83 82 78 93 61 70 78 11 II Starting material Run through Washing IgG eluate

(3)

Trial 1RWCS 2RWCS 3RWCS 4RWCS 5RWCS 6RWCS 7RWCS 8RWCS 9RWCS 10RWCS 11RWCS 12RWCS 13RWCS 14RWCS Average Standard deviation

Column Device Crio MD121 Crio MD121 Crio MD121 Crio MD121 Crio MD121 Crio MD121 Crio MD121 Crio MD121 Crio MD121 Crio MD121 Crio MD121 Crio MD121 Crio MD121 Crio MD121

Bed volume (ml) 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 30 0

Load IgG mg/ml of resin 30 30 30 30 30 30 25 18 26 30 30 30 30 30 29 3

Protein mg/ml of resin 200 213 207 222 241 253 250 148 230 305 296 233 224 273 235 40

Plasma equivalent volume (ml) 367 390 397 384 397 394 405 248 386 489 443 378 370 447 393 54

Sample volume (ml) 463 491 500 484 500 500 514 315 490 621 563 480 470 568 497 68 Sample volume (CV) 4,6 4,9 5,0 4,8 5,0 5,0 5,1 3,2 4,9 6,2 5,6 4,8 4,7 5,7 5,0 0,7 Total protein (mg) 19987 21334 20658 22218 24115 25285 24963 14757 23001 30553 29636 23328 22400 27252 23535 4037 Total IgG (mg) 2998 3001 2998 3003 3016 3009 2486 1767 2619 3003 2999 3000 2999 3002 2850 352 Total albumin (mg) 12751 13885 12830 12807 12835 14380 14299 8899 13504 17475 14953 12490 13935 13465 1910 Protein/plasma (g/L) 54,46 54,70 52,97 57,86 60,74 64,18 61,64 59,50 59,59 62,48 66,90 61,71 60,54 60,97 59,87 3,84 IgG/plasma (g/L) 8,17 7,69 7,60 7,82 7,6 7,64 6,14 7,13 6,79 6,14 6,77 7,94 8,10 6,72 7,29 0,69 Albumin/plasma (g/L) 34,74 35,60 32,32 33,35 32,33 36,50 35,30 35,88 34,98 35,74 33,75 33,04 37,66 34,71 1,65 Volume (CV) 4,6 4,9 4,9 4,8 5,0 5,0 5,1 3,2 4,9 6,2 5,5 4,9 4,7 5,7 5,0 0,7 Total protein (mg) 13923 15301 15133 16705 17940 19327 17797 9524 16006 23331 14366 15820 20683 16604 3412 Total IgG (mg) 316 397 554 582 543 627 587 156 568 990 733 554 694 896 586 213 Total albumin (mg) 11170 13308 13115 12023 11905 12966 11404 7101 12270 14360 15306 12246 13179 15670 12573 2072 Albumin/plasma (g/L) 30,44 34,12 33,03 31,31 29,99 32,91 28,16 28,63 31,79 29,37 34,55 31,64 35,62 35,06 31,90 2,41 Protein recovery (%) 70 72 73 75 74 73 71 65 70 76 62 71 76 72 4 IgG recovery (%) 11 13 18 19 18 21 24 9 22 33 24 18 23 30 20 7 Albumin yield (%) 88 87 100 94 93 90 80 80 91 82 100 98 95 91 7 Volume (CV) 2,5 3,8 4,7 2,9 3,4 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0 0,8 1,9 1,3 Total protein (mg) 1005 842 1022 1124 1553 1866 1326 1443 2120 1924 1363 609 1367 460 Total IgG (mg) 33 29 142 105 90 102 126 67 122 164 123 137 151 57 103 43 Total albumin (mg) 684 666 817 668 698 1018 1223 1178 1181 1289 1152 1154 935 373 931 280 Albumin/plasma (g/L) 1,86 1,71 2,05 1,74 1,76 2,58 3,02 4,75 3,06 2,64 2,60 3,05 2,53 0,84 2,44 0,9 Protein recovery (%) 5 4 5 5 6 7 9 6 7 8 6 2 6 2 IgG recovery (%) 1 1 5 3 3 3 5 4 8 5 4 5 5 2 4 2 Albumin yield (%) 5 5 6 5 5 7 9 13 9 7 8 9 7 7 2 Volume (CV) 7,9 7,8 7,7 7,3 10,6 8,4 6,4 5,1 5,8 6,2 5,8 5,4 5,5 5,4 6,8 1,6 Total protein (mg) 3218 3317 2787 3075 2724 3345 3352 2321 2983 3267 3183 2894 2707 3137 3022 303 Total IgG (mg) 2672 2633 2125 2106 2191 1913 1606 1458 2123 1836 1674 2354 1748 2021 2033 361 Protein/plasma (g/L) 8,77 8,51 7,02 8,01 6,86 8,49 8,28 9,36 7,73 6,68 7,19 7,66 7,32 7,02 7,78 0,81 IgG/plasma (g/L) 7,28 6,75 5,45 5,48 5,56 4,86 3,97 5,88 5,50 3,75 3,78 6,23 4,72 4,52 5,27 1,07 Protein yield (%) 16 16 13 14 11 13 13 16 13 11 11 12 12 12 13 2 IgG yield (%) 89 88 71 70 73 64 65 83 81 61 56 78 58 67 72 11 IgG/protein ratio (%) 83 79 76 68 80 57 48 63 71 56 53 81 65 64 67 11 III Starting material Run through Washing IgG eluate

(4)

IgG capture step from sample SN/I on CaptoS resin: trials 48ACCS - 57ACCS

Trial 48ACCS 49ACCS 50ACCS 51ACCS 52ACCS 53ACCS 54ACCS 55ACCS 56ACCS 57ACCS Average Standard deviation

Diameter (cm) 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6

Bed height (cm) 22 22 22 21 21 21 21 21 21 21 21 0

Bed volume (ml) 48 48 48 42 42 42 42 42 42 42 44 3

Load IgG mg/ml of resin 37 39 37 40 40 40 40 40 39 39 39 1

Protein mg/ml of resin 270 320 335 348 305 295 343 252 286 311 307 31

Plasma equivalent volume (ml) 218 264 228 186 199 190 233 201 220 215 215 23

Sample volume (ml) 277 336 289 236 253 242 296 256 280 273 274 29 Sample volume (CV) 17,3 22,7 22,7 23,6 21,0 20,2 23,4 20,9 22,9 21,9 21,7 1,9 Total protein (mg) 12981 15339 16080 14602 12795 12375 14420 10573 12018 13041 13422 1668 Total IgG (mg) 1760 1886 1758 1680 1679 1680 1680 1685 1658 1621 1709 75 Total albumin (mg) 8209 8595 6985 5830 6980 6874 9560 6372 6695 7380 7348 1124 Protein/plasma (g/L) 59,55 58,10 70,53 78,51 64,30 65,13 61,89 52,60 54,63 60,66 62,59 7,62 IgG/plasma (g/L) 8,07 7,14 7,71 9,03 8,44 8,84 7,21 8,38 7,54 7,54 7,99 0,66 Albumin/plasma (g/L) 37,66 32,43 30,64 31,34 35,08 36,18 41,03 31,70 30,43 34,33 34,08 3,46 Volume (CV) 16,8 22,7 28,5 29,0 29,5 20,2 24,5 27,7 30,9 30,4 26,0 4,8 Total protein (mg) 11165 13070 13074 10346 10201 10181 9929 8293 10548 10965 10777 1435 Total IgG (mg) 283 337 320 187 215 213 230 204 257 232 248 51 Total albumin (mg) 7544 8671 7135 4818 6717 6874 10237 6465 6846 8016 7332 1441 Albumin/plasma (g/L) 34,61 32,84 31,29 25,90 33,75 36,18 43,94 32,16 31,12 37,28 33,91 4,72 Protein recovery (%) 86 85 81 71 80 82 69 78 88 84 80 6 IgG recovery (%) 16 18 18 11 13 13 14 12 16 14 15 2 Albumin yield (%) 92 100 100 83 96 100 100 100 100 100 97 6 Volume (CV) 3,7 3,0 7,7 7,1 5,4 2,4 Total protein (mg) 250 241 246 6 Total IgG (mg) 16 17 48 27 18 Total albumin (mg) 144 0 0 53 49 68 Albumin/plasma (g/L) 0,66 0,00 0,00 0,00 0,17 0,33 Protein recovery (%) 2 2 2 0 IgG recovery (%) 1 1 3 3 2 1 Albumin yield (%) 2 0 0 0 1 1 Volume (CV) 9,0 6,7 6,3 7,4 7,4 7,1 6,0 7,5 7,4 7,5 7,2 0,8 Total protein (mg) 2208 2547 2607 2818 2205 2337 2034 2510 2423 2319 2401 229 Total IgG (mg) 1272 1558 1469 1289 1374 1324 1356 1476 1432 1373 1392 91 Protein/plasma (g/L) 10,13 9,65 11,43 15,15 11,08 12,30 8,73 12,49 11,01 10,79 11,28 1,77 IgG/plasma (g/L) 5,83 5,9 6,44 6,93 6,90 6,97 5,82 7,34 6,51 6,39 6,50 0,53 Protein yield (%) 17 17 16 19 17 19 14 24 20 18 18 3 IgG yield (%) 72 83 84 77 82 79 81 88 86 85 82 5 IgG/protein ratio (%) 58 61 56 46 62 57 67 59 59 59 58 5 IV Starting material Run through Washing IgG eluate

(5)

IgG polishing step from S/D treated diafiltered CaptoS eluate: trials 18ACPS - 27ACPS

Trial Not reported 18ACPS 19ACPS 20ACPS 21ACPS 22ACPS 23ACPS 24ACPS 25ACPS 26ACPS 27ACPS

Diameter (cm) 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6

Bed height (cm) 12 12 12 12 12 12 10 10 10 10

Bed volume (ml) 24 24 64 24 24 24 21 21 21 21

Load IgG mg/ml of resin 21 46 23 26 31 30 34 25 26 32

Protein mg/ml of resin 32 65 34 40 30 40 50 37 46 57

Plasma equivalent volume (ml) 89 177 234 115 134 111 132 98 143 179

CaptoS eluate volume (ml) 138 270 375 218 160 132 157 116 170 212

CaptoS eluate volume (CV) 5,8 11,3 5,9 9,1 6,7 5,5 7,5 5,5 8,1 10,1

Total protein (mg) 777 1569 2156 962 1202 964 1053 778 964 1202

Total IgG (mg) 508 1110 1466 632 749 718 716 529 544 678

Protein/plasma (g/L) 8,73 8,86 9,21 8,37 8,97 8,68 7,98 7,94 6,74 6,72

IgG/plasma (g/L) 5,71 6,27 6,26 5,50 5,59 6,47 5,42 5,40 3,80 3,79

Volume (CV) 5,8 11,3 5,9 9,2 6,7 5,5 7,5 5,5 7,9 10,0

Total protein (mg) Not reported 5 Not reported 29 0 0 0 0 0 0

Total IgG (mg) 0 0 0 0 0 0 0 0 Not reported Not reported

Protein recovery (%) Not reported 0,3 Not reported 3 0 0 0 0 0 0

IgG recovery (%) 0 0 0 0 0 0 0 0 Not reported Not reported

Volume (CV) 3,1 5,4 3,0 4,5 4,2 2,6 5,3 5,0 6,0 5,2

Total protein (mg) Not reported 17 Not reported Not reported 0 0 0 0 0 0

Protein recovery (%) Not reported 1 Not reported Not reported 0 0 0 0 0 0

IgG recovery (%) 0 2 0 0 0 0 0 0 Not reported Not reported

Volume (CV) 8,1 10,8 8,6 9,8 10,6 10,8 12,3 14,0 14,3 14,0 Total protein (mg) 520 1009 1386 674 762 580 609 447 669 750 Total IgG (mg) 446 879 1282 534 659 629 543 371 502 667 Protein/plasma (g/L) 5,84 5,70 5,92 5,87 5,69 5,23 4,61 4,56 4,68 4,19 IgG/plasma (g/L) 5,01 4,97 5,48 4,64 4,92 5,67 4,11 3,79 3,51 3,73 Protein yield (%) 57 64 64 70 63 60 58 57 69 62 IgG yield (%) 88 79 87 84 88 88 76 70 92 98 IgG/protein ratio (%) 86 87 92 79 86 100 89 83 75 89 Volume (CV) 3,3 4,5 3,8 3,3 2,0 2,5 2,9 3,1 4,3 5,5 Total protein (mg) 238 379 728 340 326 279 343 244 248 254

Protein/plasma (g/L) 2,67 2,14 3,11 2,96 2,43 2,51 2,60 2,49 1,73 1,42

IgG/plasma (g/L) 0,78 0,46 1,02 0,70 0,66 0,95 0,97 1,16 Not reported Not reported

Protein yield (%) 31 24 34 35 27 29 33 31 26 21

IgG yield (%) 14 7 16 13 12 15 18 22 Not reported Not reported

IgG/protein ratio (%) 29 22 33 24 27 38 37 47 Not reported Not reported

V 300 mM eluate Starting material Run through Washing 75 mM IgG eluate