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Capitolo 4. Parte Sperimentale.

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Academic year: 2021

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Capitolo 4. Parte Sperimentale.

Procedure generali. Tutte le reazioni sono state condotte in schlenk modificati (Kjeldhal

shape) resi anidri alla fiamma e chiusi con tappo di vetro o setto di gomma e sotto pressione positiva di argon. Soluzioni e liquidi sensibili all’aria e all’umidità sono stati aggiunti via siringa.

Tutte le soluzioni organiche sono state essiccate su MgSO4 o Na2SO4 prima di venir evaporate tramite rotavapor a una temperatura del bagnomaria al di sotto dei 40°C e a una pressione intorno ai 25 Torr.

Per la flash-cromatografia è stata impiegata come fase stazionaria gel di silice 60 (Macherey-Nagel 230-400 Mesh). L’andamento delle reazioni è stato seguito tramite TLC analitica su fogli di gel di silice Alugram SIL G/UV254 (Macherey-Nagel) ed evidenziato con una soluzione allo 0.5% di acido fosfomolibdico in EtOH al 95% oppure una soluzione di p-anisaldeide in EtOH al 95% in presenza di acido solforico concentrato e acido acetico glaciale. Le TLC preparative e semipreparative sono state effettuate su lastre da 0.25 e 0.5 mm (Macherey-Nagel F254) di gel di silice contenenti un indicatore di fluorescenza.

Materiali. Benzene, Et2O, THF, toluene sono stati resi anidri per distillazione su Na, indicatore benzofenone. Piridina, DMF, MeCN, t-BuOK, SnCl2, MsCl, LiH sono prodotti Fluka e sono stati utilizzati senza ulteriore purificazione. Tri-O-acetil-D-glucale, TBAF, TBDMS-Cl, LHMDS, MeONa sono invece prodotti Aldrich e anch’essi sono stati utilizzati senza ulteriore purificazione.

Strumenti. Gli spettri IR per il confronto tra i composti sono stati registrati su

spettrofotometro Mattson 3000 FTIR e i dati sono presentati come frequenza di assorbimento (cm-1).

Gli spettri NMR 1H e 13C sono stati effettuati in soluzione di CDCl3, se non diversamente indicato, facendo uso di uno strumento Brucker-AC 200 (50 MHz); i chemical shift sono espressi in ppm (δ) usando Me4Si come standard interno o facendo riferimento ai protoni residui dei solventi (CHCl3: δ 7.26; CH3CN: δ 1.94). I dati sono stati presentati come segue: chemical shift, molteplicità (s=singoletto, d=doppietto, t=tripletto, q=quartetto, m=multipletto e/o risonanze multiple), integrazione, costante di accoppiamento (o W½) in Hertz (Hz). I punti di fusione sono stati determinati con apparecchio Kofler e non sono corretti.

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Sintesi del glicosil accettore 3.3.

3,4-di-O-Acetil-D-glucale (3.9)

Ad una soluzione del tri-O-acetil-D-glucale 3.8 (6.00 g, 22.0 mmoli), diisopropiletere (38.0 mL), tampone fosfato (pH 7.00, 200 mL) e acetone anidro (22.0 mL), si aggiunge la lipasi CCL (lipasi da Candida Cylindracea) (2.30 g). La miscela di reazione è lasciata in agitazione una notte a temperatura ambiente, si filtra su celite, lavando con AcOEt e per evaporazione degli estratti organici lavati (NaCl sol. satura) si ottiene un prodotto grezzo liquido (5.90 g, resa 98%) che viene utilizzato direttamente per la reazione successiva: Rf = 0.26 (1:1 esano/AcOEt);1H

NMR (CDCl3) δ 6.49 (dd, 1H, J = 6.1, 1.2 Hz), 5.41-5.50 (m, 1H), 5.22 (dd, 1H, J = 9.0, 6.5 Hz), 4.81 (dd, 1H, J = 5.9, 2.9 Hz), 3.98-4.09 (m, 1H), 3.66-3.86 (m, 2H), 2.13 (s, 3H). 13C NMR (CDCl3) δ 170.8, 170.6, 99.1, 76.7, 68.4, 67.9, 60.6, 21.2, 21.0. Analisi, calcolato per C10H14O6: C, 52.17; H, 6.13. Trovato: C, 52.27; H, 6.46.

6-(O-2-Tetraidropiranil)-3,4-di-O-acetil-D-glucale (3.10).

Ad una miscela dell’alcool 3.9 (0.378 g, 1.64 mmoli) in DHP (0.22 mL, 2.46 mmoli), mantenuta in agitazione a temperatura ambiente, viene aggiunta goccia a goccia una soluzione di PPTS (0.041 g, 0.164 mmoli) in CH2Cl2 anidro (11.4 mL). Dopo 8 ore la reazione viene diluta con CH2Cl2 e l’evaporazione degli estratti organici lavati (NaHCO3 sol. satura e NaCl sol. satura) fornisce un grezzo di reazione (0.544 g) che viene sottoposto a cromatografia flash (7:3 esano/AcOEt) a dare il THP derivato 3.10 (0.376 g, resa 73%), puro come liquido: Rf = 0.27 (7:3 esano/AcOEt); 1H NMR (CDCl3) δ 6.40 (dt, 1H, J = 6.0, 1.3 Hz), 5.07-5.36 (m, 2H), 4.66-4.75 (m, 1H), 4.44-4.59 (m, 1H), 4.05-4.20 (m, 1H), 3.63-3.91 (m, 2H), 3.31-3.59 (m, 2H), 1.98-1.99 (due s, 3H), 1.94-1.95 (due s, 3H), 1.34-1.64 (m, 6H). 13C NMR (CDCl3) δ 170.4, 169.5, 145.8, 99.3, 99.2, 98.6, 98.4, 75.3, 75.1, 74.9, 74.7, 67.7, 67.4, 65.3, 64.8, 62.1, 61.7, 30.3, 25.3, 21.0, 20.8, 19.2, 19.0. Analisi, calcolato per C15H22O7: C, 57.32; H, 7.05. Trovato: C, 57.38; H, 7.23.

6-(O-2-Tetraidropiranil)-D-glucale (3.11).

Ad una soluzione del derivato diacetilato 3.10 (0.376 g, 1.17 mmoli) in MeOH (4.3 mL), viene aggiunto MeONa (0.009 g, 0.17 mmoli) e la miscela viene mantenuta in agitazione a temperatura ambiente per due ore. O

OH HO

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38 L’evaporazione della fase organica fornisce un liquido sciropposo (0.278 g) costituito dal

diolo 3.11, praticamente puro: Rf = 0.10 (8:2 CH2Cl2/AcOEt); 1H NMR (CDCl3) δ 6.27 (dt, 1H, J = 6.0, 1.9 Hz), 4.65 (dt, 1H, J = 6.1, 1.5 Hz), 4.45-4.62 (m, 1H), 3.37-4.31 (m, 9H), 1.38-1.84 (m, 6H). 1H NMR (CD3CN) δ 6.29 (d, 1H, J = 5.9 Hz), 4.65 (dd, 1H, J = 6.0, 1.6 Hz), 4.54-4.60 (m, 1H), 4.13-4.38 (m, 9H), 1.41-1.80 (m, 6H). 13C NMR (CDCl3) δ 144.3, 144.2, 103.2, 102.8, 100.8, 100.7, 99.4, 77.5, 77.1, 76.6, 69.6, 69.5, 69.4, 66.7, 66.4, 64.4, 62.6, 31.1, 30.8, 30.4, 25.3, 25.1, 21.3, 20.6, 19.5. 13C NMR (CD3CN) δ 144.4, 144.3, 104.7, 104.6, 103.7, 103.5, 102.4, 100.1, 78.7, 78.6, 78.5, 78.0, 75.2, 69.5, 68.6, 67.3, 66.8, 65.6, 65.4, 63.4, 62.8, 31.9, 31.8, 31.4, 31.2, 26.1, 26.0, 20.6, 20.3. Analisi, calcolato per C11H18O5: C, 57.38; H, 7.88; O, 34.74. Trovato: C, 56.99; H, 7.95; O, 35.00.

6-(O-2-Tetraidropiranil)-3-(O-t-butildimetilsilil)-D-glucale (3.12).

Ad una soluzione del diolo 3.11 (0.278 g, 1.21 mmoli) in DMF anidra (3.2 mL), raffreddata a 0°C, si aggiunge imidazolo (0.165 mg, 2.42 mmoli). Successivamente si aggiunge TBDMS-Cl (0.201 g, 1.33 mmoli) e la miscela di reazione viene mantenuta in agitazione per 24 ore lasciando salire la temperatura fino a temperatura ambiente. Dopo diluizione con Et2O, l’evaporazione degli estratti eterei lavati (NaCl sol. satura) fornisce il TBS-derivato 3.12 (0.328 g, resa 95%), puro come liquido: Rf = 0.24 (8:2 esano/AcOEt); 1H NMR (CDCl3)

δ 6.30 (d, 1H, J = 6.0 Hz), 4.52-4.74 (m, 2H), 4.17-4.34 (m, 1H), 3.67-4.11 (m, 5H), 3.43-3.59 (m, 1H), 1.41-1.92 (m, 6H), 0.91 (s, 9H), 0.12 (s, 6H). 13C NMR (CDCl3) δ 143.8, 143.6, 104.5, 104.4, 103.6, 100.6, 100.5, 99.6, 99.5, 77.4, 71.1, 70.4, 70.2, 70.0, 66.9, 66.6, 66.1, 65.2, 64.1, 62.6, 30.9, 30.6, 26.5, 26.4, 26.1, 26.0, 20.6, 19.7, 18.4, 18.2, -4.3, -4.2. Analisi, calcolato per C17H32O5Si: C, 59.27; H, 9.36. Trovato: C, 59.65; H, 8.95.

6-(O-2-Tetraidropiranil)-3-(O-t-butildimetilsilil)-4-(O-mesil)-D-glucale (3.13).

Ad una soluzione del prodotto sililato 3.12 (0.344 mg, 1 mmoli) in piridina (2.2 mL), raffreddata a 0°C, si aggiunge, goccia a goccia, MsCl (0.32 mL, 4 mmoli). La miscela di reazione viene mantenuta in agitazione per una notte a 0°C. Dopo diluizione con AcOEt, l’evaporazione degli estratti organici lavati (NaCl sol. satura) fornisce il mesilato 3.13 (0.369

O

OTBS MsO

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39 mg, resa 88%), praticamente puro come liquido: Rf = 0.32 (7:3 esano/AcOEt); 1H NMR

(CDCl3) δ 6.32-6.41 (m, 1H), 4.71-4.85 (m, 2H), 4.57-4.65 (m, 1H), 4.24-4.39 (m, 2H), 3.67-4.08 (m, 3H), 3.40-3.58 (m, 1H), 3.06-3.08 (due s, 3H), 1.40-1.88 (m, 6H), 0.87 (s, 9H), 0.09 (s, 6H). 13C NMR (CDCl3) δ 143.5, 101.5, 99.5, 99.4, 99.1, 99.0, 98.6, 98.5, 77.7, 76.4, 75.6, 74.8, 65.4, 64.9, 64.8, 64.7, 63.3, 62.4, 62.3, 38.9, 38.8, 30.9, 30.3, 30.4, 25.7, 25.3, 19.8, 19.4, 17.9, -4.5, -4.6, -4.7. Analisi, calcolato per C18H34O5Ssi: C, 55.35; H, 8.77. Trovato: C, 55.21; H, 9.01.

3-(O-t-Butildimetilsilil)-4-(O-mesil)-D-glucale (3.3).

Ad una soluzione del mesilato 3.13 (0.563 g, 1.34 mmoli) in metanolo (15 mL) mantenuta in agitazione a temperatura ambiente, si aggiunge una soluzione di EtOH/EtONa 1M (5.6 mL) in quattro dosi (1.4 mL x 4) nell’arco di 5 ore. Dopo un totale di 6 ore la fase organica viene evaporata al rotavapor, con l’ottenimento di un prodotto grezzo (0.396 g) che viene sottoposto a cromatografia flash (6:4 esano/AcOEt) per dare l’alcool primario 3.3, puro come liquido: Rf = 0.29 (6:4 esano/AcOEt); 1H NMR (CDCl3) δ 6.37 (dd, 1H, J = 6.2, 1.0 Hz), 4.66-4.79 (m, 2H), 4.43-4.45 (m, 1H), 4.04-4.12 (m, 1H), 3.73-4.00 (m, 2H), 3.10 (s, 3H), 2.77 (dd, 1H, J = 8.0, 5.9 Hz), 0.88 (s, 9H), 0.11 (s, 6H). 13C NMR δ 144.0, 101.4, 76.3, 75.5, 65.7, 60.5, 38.5, 25.6, 17.7, -4.6, -4.7. Analisi, calcolato per C13H26O6SiS: C, 46.13; H, 7.74. Trovato: C, 46.46; H, 7.65.

Sintesi del glicosil donatore 2.2β.

D-Glucale (3.16).

Ad una soluzione del tri-O-acetil-D-glucale 3.8 (10.0 g, 36.7 mmoli) in MeOH (100 mL) si aggiunge MeONa (0.10 g, 1.29 mmoli) e la miscela di reazione è lasciata in agitazione per tutta la notte a temperatura ambiente. L’evaporazione al rotavapor della fase organica fornisce un residuo sciropposo (5.80 g) costituito dal D-glucale 3.16, praticamente puro: Rf = 0.27 (9:1 CH2Cl2/MeOH); 1H NMR δ 6.26 (dd, 1H, J = 6.0 e 1.6 Hz), 4.60 (dd, 1H, J = 6.0 e 2.2 Hz), 4.04 (dt, 1H, J = 7.0 e 1.9 Hz), 3.58-3.85 (m, 3H), 3.48 (dd, 1H, J = 9.5 e 7.0 Hz). 13C NMR δ 146.49, 106.09, 81.86, 72.53, 72.13, 63.84. Analisi, calcolato per C6H10O4: C, 49.31; H, 6.90. Trovato: C, 49.55; H, 6.70.

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6-O-Benzil-D-glucale (3.17).

Ad una soluzione del D-glucale 3.16 (4.59 g, 31.3 mmoli) in DMF anidra (90 mL) si aggiunge, goccia a goccia, LHMDS 1M in THF (34.5 mL, 34.5 mmoli) raffreddando a -40°C. Successivamente si aggiunge BnBr (3.68 mL, 31.3 mmoli), sempre goccia a goccia. La miscela di reazione viene mantenuta in agitazione per 48 ore lasciando salire la temperatura fino a 0°C. Dopo diluizione con AcOEt, l’evaporazione degli estratti organici lavati (NH4Cl sol. satura e NaCl sol. satura) fornisce un prodotto grezzo (8.12 g) che viene sottoposto a cromatografia flash (1:1 esano/AcOEt) per dare il mono benzil derivato 3.17 (3.10 g, resa 48 %) puro come liquido: Rf

= 0.19 (1:1 esano/AcOEt); FTIR ν 3385, 1647, 1263, 1057 cm-1; 1H NMR δ 7.24-7.31 (m, 5H), 6.20 (dd, 1H, J = 6.0 e 1.5 Hz), 4.57 (dd, 1H, J = 6.0 e 1.8 Hz), 4.52 (d, 1H, J = 12.0 Hz), 4.46 (d, 1H, J = 12.0 Hz), 4.05-4.17 (m, 1H), 3.57-3.84 (m, 4H). 13C NMR δ 143.89, 137.37, 128.15, 127.48, 102.53, 77.44, 73.40, 70.02, 69.50, 68.80. Analisi, calcolato per C12H16O4: C, 64.27; H, 7.19. Trovato: C, 63.93; H, 7.38.

3-O-(t-Butildimetilsilil)-6-O-benzil-D-glucale (3.18).

Ad una soluzione del mono benzil derivato 3.17 (3.10 g, 13.2 mmoli) in DMF anidra (35 mL), raffreddata a 0°C, si aggiunge imidazolo (1.79 g, 26.3 mmoli). Successivamente si aggiunge TBDMS-Cl (2.18 g, 14.5 mmoli) e la miscela di reazione viene mantenuta in agitazione per una notte lasciando salire la temperatura fino a temperatura ambiente. Dopo diluizione con Et2O, l’evaporazione degli estratti eterei lavati (NaCl sol. satura) fornisce il TBS-derivato 3.18 (4.35 g, resa 95%), puro come liquido: Rf = 0.20 (1:1 esano/AcOEt); FTIR ν 3393, 1647, 1447, 1248, 1095 cm-1; 1H NMR δ 7.24-7.32 (m, 5H), 6.28 (d, 1H, J = 6.0 Hz), 4.58-4.63 (m, 3H), 4.19 (d, 1H, J = 6.0 Hz), 3.92-3.99 (m, 1H), 3.71-3.79 (m, 3H), 0.87 (s, 9H), 0.084 (s, 6H). 13

C NMR δ 143.52, 138.06, 128.56, 127.90, 103.70, 77.10, 73.81, 70.95, 70.03, 69.42, 25.96, 18.22, -4.27. Analisi, calcolato per C19H30O4Si: C, 65.10; H, 8.63. Trovato: C, 64.97; H, 8.51.

3-O-(t-Butildimetilsilil)-4-O-mesil-6-O-benzil-D-glucale (3.19).

Ad una soluzione del TBS-derivato 3.18 (5.80 g, 16.6 mmoli) in piridina anidra (37 mL), raffreddata a 0°C, si aggiunge goccia a goccia MsCl (2.57 mL, 33.2 mmoli). La miscela di reazione viene mantenuta in agitazione per una notte a 0°C. Dopo diluizione con CH2Cl2, l’evaporazione degli estratti

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41 organici lavati (HCl 10%, ghiaccio e NaCl sol. satura) fornisce il mesilato 3.19 (5.10 g, resa 91%), praticamente puro come liquido: Rf = 0.11 (9:1 esano/AcOEt); FTIR ν 1647, 1361, 1253, 1176, 1072 cm-1; 1H NMR δ 7.24-7.32 (m, 5H), 6.37 (d, 1H, J = 6.4 Hz), 4.71-4.81 (m, 2H), 4.61 (d, 1H, J = 12.3 Hz), 4.52 (d, 1H, J = 12.3 Hz), 4.22-4.42 (m, 2H), 3.81 (dd, 1H, J = 11.0 e 7.0 Hz), 3.69 (dd, 1H, J = 11.0 e 3.5 Hz), 3.05 (s, 3H), 0.86 (s, 9 H), 0.09 (s, 6H). 13C NMR δ 143.48, 138.65, 128.41, 127.86, 127.74, 101.49, 77.35, 75.48, 73.66, 67.97, 64.79, 38.97, 25.86, 18.04, -4.48. Analisi, calcolato per C20H32O6SSi: C, 56.05; H, 7.52. Trovato: C, 54.72; H, 7.18.

4-O-Mesil-6-O-benzil-D-glucale (2.2β).

Ad una soluzione del mesilato 3.19 (2.63 g, 6.14 mmoli) in THF anidro (216 mL), raffreddata a 0°C, si aggiunge goccia a goccia TBAF 1M in THF (6.14 mL, 6.14 mmoli). La miscela di reazione viene mantenuta in agitazione a 0°C per 30 minuti. Dopo diluizione con Et2O, l’evaporazione degli estratti eterei lavati (NaCl sol. satura) fornisce un prodotto grezzo (2.63 g) che viene sottoposto a cromatografia flash (1:1 esano/AcOEt) per dare l’idrossimesilato 2.2β. (1.70 g,

resa 77%), puro come solido: p.f. 39-41°C; Rf = 0.29 (1:1 esano/AcOEt); FTIR ν 3447, 1649, 1348, 1182 cm-1; 1H NMR δ 7.28-7.39 (m, 5H), 6.43 (dd, 1H, J = 6.0 e 1.5 Hz), 4.78-4.90 ( m, 2H), 4.61 (s, 2H), 4.42-4.51 (m, 1H), 4.11 (dt, 1H, J = 9.3 e 3.4 Hz), 3.81-3.85 (m, 2H), 3.14 (s, 3H). 13C NMR δ 144.43, 137.47, 128.43, 127.97, 127.85, 102.03, 79.06, 75.13, 73.74, 68.11, 67.19, 38.63. Analisi, calcolato per C14H18O6S: C, 53.49; H, 5.77. Trovato: C, 53.17; H, 5.54.

Sintesi del trisaccaride 3.1.

6-O-[6’-O-(Benzil)-2’,3’-didesossi-β- D-treo-es-2’-enopiranosil]-4-O-mesil-3-O-(t-butildimetilsilil)-D-glucale (3.20).

Ad una soluzione dell’idrossimesilato 2.2β (0.125 g, 0.4 mmoli) in THF anidro (3.5 mL), si aggiunge t-BuOK (0.045 g, 0.4 mmoli). Trascorsi circa 30 minuti la TLC mostra la scomparsa del prodotto di partenza. A questo punto si aggiunge l’alcool primario 3.3 (0.270 g, 0.8 mmoli) e la miscela viene mantenuta in agitazione a temperatura ambiente per la notte. Dopo diluizione con CH2Cl2, l’evaporazione degli estratti organici lavati (NaCl sol. satura) fornisce un prodotto grezzo (0.277 g) costituito dal disaccaride 3.20 in miscela con il

O OTBS O MsO O BnO HO

(7)

42 nucleofilo 3.3 in eccesso. Tale grezzo viene sottoposto a cromatografia flash (9:1

CH2Cl2/AcOEt) per dare il disaccaride 3.20 (0.113 g, resa 51%), puro come liquido: [α]20D -33.1 (c 2.2, CHCl3); Rf = 0.24 (9:1 CH2Cl2/AcOEt); FTIR ν 3420, 1647, 1464, 1357, 1257, 1186, 1099, 1066, 968 cm-1. 1H NMR (CDCl3) δ 7.34 (s, 5H), 6.37 (dd, 1H, J = 6.3, 1.0 Hz), 6.14 (ddd, 1H, J = 10.1, 5.0, 1.4 Hz), 5.90 (d, 1H, J = 10.1 Hz), 5.13 (dd, 1H, J = 2.8, 1.4 Hz), 4.73-4.81 (m, 2H), 4.58 (s, 2H), 4.28-4.38 (m, 2H), 4.05-4.16 (m, 1H), 3.62-4.01 (m, 6H), 3.07 (s, 3H), 0.89 (s, 9H), 0.11 (s, 6H). 13C NMR (CDCl3) δ 143.6, 138.1, 130.9, 130.6, 128.5, 127.8, 101.8, 98.4, 77.3, 75.5, 74.5, 73.7, 69.7, 66.6, 65.4, 62.8, 39.1, 25.9, 18.0, 4.3, -4.4. Analisi, calcolato per C26H40O9SSi: C, 56.09; H, 7.24. Trovato: C, 56.01, H, 7.55.

6-O-[6’-O-(Benzil)-4’-O-acetil-2’,3’-didesossi-β- D-treo-es-2’-enopiranosil]-4-O-mesil-3-O-(t-butildimetilsilil)-D-glucale (3.20-Ac).

Ad una soluzione del disaccaride 3.20 (0.153 g, 0.28 mmoli) in piridina anidra (1.8 mL), raffreddata a 0°C, si aggiunge Ac2O (0.6 mL) e la miscela di reazione è mantenuta in agitazione per circa 16 ore lasciando salire la temperatura fino a temperatura ambiente. Dopo diluizione con toluene, l’evaporazione degli estratti organici fornisce il prodotto acetilato

3.20-Ac (0.16 g, resa 99%), puro come liquido: [α]20D -87.4 (c 0.7, CHCl3); Rf = 0.42 (6:4 esano/AcOEt); FTIR ν 1739, 1655, 1464, 1357, 1244, 1178, 1093, 1066, 960 cm-1. 1H NMR (CDCl3) δ 7.26-7.42 (m, 5H), 6.39 (d, 1H, J = 6.0 Hz), 6.12 (ddd, 1H, J = 10.1, 4.7, 1.1 Hz), 6.01 (d, 1H, J = 10.1 Hz), 5.18 (s, 1H), 5.09-5.15 (m, 1H), 4.79 (dd, 2H, J = 6.0, 4.2 Hz), 4.60 (d, 1H, J = 12.0 Hz), 4.48 (d, 1H, J = 12.0 Hz), 4.35-4.43 (m, 1H), 4.28-4.34 (m, 1H), 4.12 (dd, 1H, J = 11.4, 2.8 Hz), 3.91-4.05 (m, 2H), 3.64 (d, 1H, J = 6.3 Hz), 3.07 (s, 3H), 2.00 (s, 3H), 0.90 (s, 9H), 0.13 (s, 6H). 13C NMR (CDCl3) δ 170.6, 143.6, 138.0, 132.5, 129.1, 128.5, 128.3, 127.9, 127.8, 126.8, 125.4, 101.7, 98.1, 77.1, 75.4, 73.6, 72.6, 68.7, 66.5, 64.9, 64.0, 39.0, 25.8, 21.6, 21.0, 18.0, -4.4, -4.5. Analisi, calcolato per C28H42O10SSi: C, 56.16; H, 7.07. Trovato: C, 56.44; H, 6.81.

6-O-[6’-O-(Benzil)-4”-O-acetil-2’,3’-didesossi-β- D-treo-es-2’-enopiranosil]-4-O-mesil-D-glucale (3.21-Ac).

Ad una soluzione di mesilato 3.20-Ac (0.090 g, 0.15 mmoli) in THF anidro (6.3 mL), raffreddata a 0°C, si aggiunge TBAF 1M (0.15 mL). La miscela viene mantenuta in agitazione per circa

O OTBS O MsO O BnO AcO O OH O MsO O BnO AcO

(8)

43 2 ore. Dopo diluizione con Et2O, l’evaporazione degli estratti organici lavati (NaCl sol. Satura) fornisce il disaccharide deprotetto 3.21-Ac (0.071 g, resa 98%), puro come liquido: Rf

= 0.10 (6:4 esano/AcOEt); FTIR ν 3420, 1734, 1460, 1371, 1261, 1176, 1080, 1041, 1020, 960 cm-1. 1H NMR (CDCl3) δ 7.27-7.40 (m, 5H), 6.37 (dd, 1H, J = 6.0, 1.0 Hz), 6.10 (ddd, 1H, J = 10.1, 4.6, 1.0 Hz), 6.00 (d, 1H, J = 10.1 Hz), 5.19 (s, 1H), 5.06-5.13 (m, 1H), 4.91 (dd, 1H, J = 9.0, 6.5 Hz), 4.78 (dd, 1H, J = 6.0, 2.6 Hz), 4.60 (d, 1H, J = 12.0 Hz), 4.48 (d, 1H, J = 12.0 Hz), 4.40-4.44 (m, 1H), 4.22 (dd, 1H, J = 11.1, 2.8 Hz), 4.05-4.15 (m, 1H), 3.95-4.04 (m, 1H), 3.86 (dd, 1H, J = 11.1, 4.6 Hz), 3.55-3.77 (m, 3H) 3.17 (s, 3H), 1.99 (s, 3H). 13C NMR (CDCl3) δ 170.7, 144.3, 142.2, 138.0, 132.1, 128.5, 127.9, 127.8, 126.8, 102.8, 98.2, 78.8, 75.1, 73.6, 72.8, 68.9, 67.1, 66.4, 64.9, 64.1, 39.0, 19.8. Analisi, calcolato per C22H28O10S: C, 54.53; H, 5.83. Trovato: C, 54.23; H, 5.59.

6-O-[6’-O-[6”-O-(Benzil)-4-O-acetil-2”,3”-didesossi-β- D-treo-es-2”-enopiranosil]-2’,3’-didesossi-β-D-treo-es-2’-enopiranosil]-4-O-mesil-3-O-(t-butildimetilsilil)-D-glucale_ (3.23-Ac).

Ad una soluzione dell’idrossimesilato 3.21-Ac (0.125 g, 0.4 mmoli) in MeCN anidro (1 mL), si aggiunge t-BuOK (0.011 g, 0.098 mmoli, 1.05 equiv) e la miscela è mantenuta in agitazione a temperatura ambiente per 30 minuti. Trascorso questo tempo la TLC mostra la scomparsa del prodotto di partenza. A questo punto si aggiunge l’alcool primario 3.3 (0.063 g, 0.186 mmoli, 2 equiv) e la miscela viene mantenuta in agitazione a temperatura ambiente per la notte. Dopo diluizione con CH2Cl2, l’evaporazione degli estratti organici lavati (NaCl sol. satura) fornisce un prodotto grezzo (0.092 g) costituito dal trisaccaride 3.23-Ac in miscela con il nucleofilo 3.3 in eccesso. Tale grezzo viene sottoposto a cromatografia flash (1:1 esano/AcOEt) per dare il trisaccaride

3.23-Ac (0.047 g, resa 70%), puro come liquido: [α]20D -77.4 (c 0.8, CHCl3); Rf = 0.17 (1:1 esano/AcOEt); FTIR ν 3431, 1739, 1655, 1464, 1363, 1251, 1178, 1112, 1066, 968 cm-1. 1H NMR (CDCl3) δ 7.29-7.35 (m, 5H), 6.38 (d, 1H, J = 6.0 Hz), 6.05-6.17 (m, 2H), 5.97 (d, 1H, J = 10.2 Hz), 5.91 (d, 1H, J = 10.2 Hz), 5.18 (d, 1H, J = 1.0 Hz), 5.13 (d, 1H, J = 1.0 Hz), 5.07-5.12 (m, 1H), 4.73-4.81 (m, 2H), 4.60 (d, 1H, J = 12.0 Hz), 4.47 (d, 1H, J = 12.0 Hz), 4.29-4.38 (m, 2H), 4.05-4.14 (m, 2H), 3.76-4.04 (m, 6H), 3.58-3.69 (m, 2H), 3.07 (s, 3H), 2.00 (s, 3H), 0.90 (s, 9H), 0.12 (s, 6H). 13C NMR (CDCl3) δ 170.7, 143.7, 138.2, 132.6, 130.8, 128.6, 128.0, 126.9, 102.0, 98.5, 98.2, 77.4, 75.7, 74.6, 73.7, 72.8, 68.8, 68.4, 66.5, O O O BnO AcO HO O OTBS O MsO

(9)

44 65.4, 64.1, 62.3, 39.2, 29.9, 29.5, 26.0, 22.9, 21.1, 18.2, 14.3, -4.3. Analisi, calcolato per C34H50O13SSi: C, 56.18; H, 6.93. Trovato: C, 56.39; H, 6.79.

6-O-[6’-O-[6”-O-(Benzil)-4”-O-acetil-2”,3”-didesossi-β- D-treo-es-2”-enopiranosil]-4’-O-acetil-2’,3’-didesossi-β- D-treo-es-2’-enopiranosil]-4-O-mesil-3-O-(t-butildimetilsilil)-D-glucale (3.23-diAc).

Ad una soluzione di trisaccaride 3.23-Ac (0.040 g, 0.055 mmoli) in piridina anidra (0.6 mL), si aggiunge Ac2O (0.12 mL) e la miscela è mantenuta in agitazione a 0°C lasciando salire la temperatura fino a temperatura ambiente. Dopo diluizione con toluene, l’evaporazione degli estratti organici fornisce il prodotto diacetilato

3.23-diAc (0.042 g, resa 99%) puro come liquido: [α]20D -117.3 (c 0.6, CHCl3); Rf = 0.22 (6:4 esano/AcOEt); FTIR ν 1739, 1568, 1464, 1383, 1238, 1186, 1080, 1053, 968 cm-1. 1H NMR (CDCl3) δ 7.27-7.38 (m, 5H), 6.37 (d, 1H, J = 6.0 Hz), 6.04-6.14 (m, 2H), 6.00 (d, 1H, J = 10.2 Hz), 5.93 (d, 1H, J = 10.2 Hz), 5.16 (s, 2H), 5.08-5.13 (m, 1H), 5.02-5.07 (m, 1H), 4.73-4.81 (m, 2H), 4.60 (d, 1H, J = 12.0 Hz), 4.48 (d, 1H, J = 12.0 Hz), 4.29-4.40 (m, 2H), 4.11 (dd, 1H, J = 11.4, 2.8 Hz), 3.88-4.05 (m, 4H), 3.76-3.86 (m, 1H), 3.59-3.69 (m, 2H), 3.08 (s, 3H), 2.04 (s, 3H), 2.00 (s, 3H), 0.90 (s, 9H), 0.12 (s, 6H). 13C NMR (CDCl3) δ 170.6, 143.7, 138.2, 132.7, 132.5, 128.6, 128.0, 127.9, 126.9, 126.8, 102.0, 98.1, 98.0, 77.5, 77.4, 75.6, 73.7, 73.0, 72.8, 68.9, 67.5, 66.7, 65.4, 64.3, 64.2, 39.2, 32.1, 29.9, 26.0, 21.1, 21.0, 18.2, 1.2, -4.2, -4.3. Analisi, calcolato per C36H52O14SSi: C, 56.23; H, 6.82. Trovato: C, 56.12; H, 6.54.

6-O-[6’-O-[6”-O-(Benzil)-4”-O-acetil-2”,3”-didesossi-β- D-treo-es-2”-enopiranosil]-4’-O-acetil-2’,3’-didesossi-β-D-treo-es-2’-enopiranosil]-4-O-mesil-D-glucale (3.24-diAc).

Ad una soluzione di mesilato 3.23-diAc (0.046 g, 0.060 mmoli) in THF anidro (3 mL), si aggiunge TBAF 1M (0.06 mL). La miscela viene mantenuta in agitazione a 0°C per 40 minuti. Dopo diluizione con AcOEt, l’evaporazione degli estratti organici lavati (NaCl sol. satura) fornisce un prodotto grezzo (0.040 g) costituito dall’idrossi-mesilato 3.24-diAc. Tale grezzo viene sottoposto a cromatografia flash (3:7 esano/AcOEt) per dare il trisaccaride 3.24-diAc (0.029 g, resa 74%), puro come liquido: [α]20D -132.9 (c 1.1, CHCl3); Rf = 0.31 (3:7 esano/AcOEt); FTIR ν 3398, 1739, 1655, 1469, 1377, 1238, 1178, O O O BnO AcO AcO O OTBS O MsO O O O BnO AcO AcO O OH O MsO

(10)

45 1069, 960 cm-1.1H NMR (CDCl3) δ 7.28-7.35 (m, 5H), 6.38 (dd, 1H, J = 6.0, 1.5 Hz), 6.04-6.13 (m, 2H), 6.01 (d, 1H, J = 10.1 Hz), 5.94 (d, 1H, J = 10.1 Hz), 5.18 (s, 2H), 5.07-5.13 (m, 1H), 5.02-5.07 (m, 1H), 4.88 (dd, 1H, J = 9.3, 6.8 Hz), 4.79 (dd, 1H, J = 6.0, 2.6 Hz), 4.58 (d, 1H, J = 12.0 Hz), 4.49 (d, 1H, J = 12.0 Hz), 4.46-4.50 (m, 1H), 4.21 (dd, 1H, J = 11.2, 2.6 Hz), 3.91-4.16 (m, 5H), 3.78-3.90 (m, 2H), 3.58-3.69 (m, 2H), 3.20 (s, 3H), 2.03 (s, 3H), 1.99 (s, 3H). 13C NMR (CDCl3) δ 170.7, 170.6, 144.8, 138.0, 132.6, 132.3, 128.6, 128.0, 127.9, 126.9, 126.8, 102.4, 98.0, 97.9, 78.8, 75.0, 73.7, 73.0, 72.7, 68.9, 67.8, 67.7, 66.2, 64.3, 64.2, 39.0, 21.2. Analisi, calcolato per C30H38O14S: C, 55.04; H, 5.85. Trovato: C, 54.87; H, 5.71.

t-Butil_6-O-[6’-O-[6”-O-(benzil)-4”-O-acetil-2”,3”-didesossi-β-

D-treo-es-2”-enopiranosil]-4’-O-acetil-2’,3’-didesossi-β-D-treo-es-2’-enopiranosil]-2,3-didesossi-β- D-treo-es-2-enopiranoside (3.1-diAc).

Ad una soluzione di idrossi-mesilato

3.24-diAc (0.023 g, 0.035 mmoli) in una soluzione

1:1 di t-BuOH anidro e MeCN (0.8 mL), si aggiunge t-BuOK (0.005 g, 0.044 mmoli, 1.3 equiv) e la miscela di reazione viene mantenuta in agitazioneper circa 18 ore a temperatura ambiente. Dopo diluizione con Et2O, l’evaporazione degli estratti organici lavati (NaCl sol. satura) fornisce il trisaccaride 3.1-diAc

(0.021 g, resa 94%), puro come liquido: [α]20D -117.8 (c 1.0, CHCl3); Rf = 0.36 (4:6 esano/AcOEt); FTIR ν 3439, 1739, 1456, 1377, 1178, 1238, 1118, 1053 cm-1. 1H NMR (CDCl3) δ 7.32 (s, 5H), 5.99-6.15 (m, 3H), 5.95 (dd, 2H, J = 10.1, 4.4 Hz), 5.75 (d, 1H, J = 10.1 Hz), 5.20 (s, 1H), 5.17 (s, 2H), 5.07-5.13 (m, 1H), 4.99-5.06 (m, 1H), 4.59 (d, 1H, J = 12.0 Hz), 4.49 (d, 1H, J = 12.0 Hz), 3.72-4.17 (m, 10H), 3.54-3.68 (m, 2H), 2.04 (s, 3H), 1.99 (s, 3H), 1.28 (s, 9H). 13C NMR (CDCl3) δ 170.7, 170.6, 144.8, 138.0, 132.6, 132.3, 128.6, 128.0, 127.9, 126.9, 126.8, 102.4, 98.0, 97.9, 78.8, 75.0, 73.7, 73.0, 72.7, 68.9, 67.8, 67.7, 66.2, 64.3, 64.2, 39.0, 21.2. Analisi, calcolato per C33H44O12: C, 62.65; H, 7.01. Trovato: C, 62.48; H, 6.69. O O O BnO AcO AcO O O HO O-t-Bu

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46

t-Butil_6-O-[6’-O-[6”-O-(benzilossi)-4”-O-acetil-2”,3”-didesossi-β- D-treo-es-2”-enopiranosil]-4’-O-acetil-2’,3’-didesossi-β- D-treo-es-2’-enopiranosil]-4-O-acetil-2,3-didesossi-β-D-treo-es-2-enopiranoside (3.1-triAc).

Ad una soluzione del trisaccaride 3.1-diAc (0.021 g, 0.033 mmoli) in piridina anidra (0.21 mL), si aggiunge Ac2O (55 µL) e la miscela di reazione viene mantenuta in agitazione per circa 16 ore a 0°C. Dopo diluizione con toluene, l’evaporazione degli estratti organici fornisce un prodotto grezzo (0.022 g, resa 97%) costituito dal trisaccaride 3.1-triAc puro come liquido: [α]20D -206.1 (c 0.6, CHCl3); Rf = 0.62 (4:6 esano/AcOEt); FTIR ν 1739, 1731, 1373, 1176, 1165, 1122, 1053 cm-1. 1H NMR (CDCl3) δ 7.27-7.38 (m, 5H), 5.96-6.15 (m, 3H), 5.82-5.96 (m, 3H), 5.20 (s, 1H), 5.17 (s, 2H), 5.07-5.13 (m, 1H), 4.97-5.06 (m, 2H), 4.58 (d, 1H, J = 12.0 Hz), 4.49 (d, 1H, J = 12.0 Hz), 3.89-4.04 (m, 5H), 3.75-3.88 (m, 2H), 3.56-3.71 (m, 2H), 2.04 (s, 6H), 2.00 (s, 3H), 1.29 (s, 9H). 13C NMR (CDCl3) δ 170.8, 170.7, 170.6, 138.0, 135.2, 132.7, 132.5, 129.2, 128.6, 128.4, 128.0, 127.9, 126.7, 125.9, 125.5, 98.2, 97.9, 92.7, 76.2, 73.7, 73.3, 72.9, 72.8, 68.9, 68.1, 67.5, 66.2, 64.2, 64.1, 64.0, 29.9, 28.8, 21.2, 21.1, 21.0. Analisi, calcolato per C35H46O13: C, 62.30; H, 6.87. Trovato: C, 62.11; H, 6.72. MS, calcolata per [C35H46O13 + Na+]= 697.3. Trovato 597.2.

t-Butil_6-O-[6’-O-[6”-O-(benzilossi)-2”,3”-didesossi-β- D-treo-es-2”-enopiranosil]-2’,3’-didesossi-β-D-treo-es-2’-enopiranosil]-2,3-didesossi-β-D-treo-es-2-enopiranoside (3.1).

a) Ad una soluzione di disaccaride 3.1-diAc

(0.020 g, 0.032 mmoli) in MeOH (0.5 mL), si aggiunge MeONa (0.004 g, 0.032 mmoli) e la miscela di reazione viene mantenuta in agitazione, a temperatura ambiente, per circa 18 ore. Dopo diluizione con Et2O, l’evaporazione degli estratti organici lavati (NaCl sol.satura) fornisce un prodotto grezzo (0.017 g, resa 97%) costituito da trisaccaride 3.1 (1H NMR), puro come liquido: [α]20D -39.2 (c 0.5, CHCl3); Rf = 0.27 (3.6:6:0.4 esano/AcOEt/MeOH); FTIR

ν 3423, 1643, 1369, 1118, 1051 cm-1. 1H NMR (CDCl3) δ 7.29-7.30 (m, 5H), 6.11-6.16 (m, 2H), 6.07 (dd, 1H, J = 10.2, 3.6 Hz), 5.88 (d, 1H, J = 10.2 Hz), 5.86 (d, 1H, J = 10.2 Hz), 5.76 (d, 1H, J = 10.2 Hz), 5.21 (s, 1H), 5.17 (s, 1H), 5.14 (s, 1H), 4.61 (d, 1H, J = 12.0 Hz), 4.58 (d, 1H, J = 12.0 Hz), 3.71-4.10 (m, 10H), 1.30 (s, 9H). 13C NMR (CDCl3) δ 138.1, 133.2, 131.1, 130.9, 130.7, 130.6, 130.1, 128.6, 128.1, 128.0, 98.8, 98.6, 93.0, 77.4, 75.0, O O O BnO AcO AcO O O AcO O-t-Bu O O O BnO HO HO O O HO O-t-Bu

(12)

47 74.7, 74.4, 73.8, 69.9, 69.0, 68.5, 62.8, 62.5, 62.1, 29.9, 28.9. Analisi, calcolato per C29H40O10: C, 63.49; H, 7.35. Trovato: C, 63.80; H, 6.99. MS, calcolata per [C29H40O10+ Cl-]: 583.2. Trovato 583.3.

b) Ad una soluzione del trisaccaride 3.1-triAc (0.020 g, 0.030 mmoli) in MeOH (0.5 mL), si

aggiunge MeONa (0.004 g, 0.074 mmoli) e la miscela di reazione viene mantenuta in agitazione, a temperatura ambiente, per circa 18 ore. Dopo diluizione con Et2O, l’evaporazione degli estratti organici lavati (NaCl sol.satura) fornisce un prodotto grezzo (0.016 g, resa 97%) costituito dal trisaccaride 3.1, puro come liquido.

Sintesi del disaccaride 3.29-diAc.

t-Butil-O-glicoside 3.28 e corrispondente acetil derivato 3.29-Ac.

Ad una soluzione di trans idrossi mesilato 3.26 (0.149 g, 0.31 mmoli) in t-BuOH (2.7 mL) si addiziona t-BuOK (0.045 g, 0.40 mmol, 1.3 equiv.) e si lascia in agitazione a temperatura ambiente per 1h. Dopo diluizione con Et2O, l’evaporazione della fase organica lavata (NaCl sol. sat.) conduce al 6-O-[6’-O-(benzil)-4’-O-acetil-2’,3’-didesossi-β- D-treo-es-2’-enopiranosil]-2,3-didesossi-β-D-treo-es-2-enopiranoside (3.28) (0.143 g, resa 76%) che

viene immediatamente trasformato nell’acetilato 3.29-Ac e riconosciuto come tale:

t-Butil 6-O-[6’-O-(benzil)-4’-O-acetil-2’,3’-didesossi-β- D-treo-es-2’-enopiranosil]-4-O-acetil-2,3-didesossi-β-D-treo-es-2-enopiranoside (3.29-Ac), un liquido: Rf = 0.18 (7.5:2.5

esano/AcOEt); 1H NMR (CDCl3) δ 7.26-7.37 (m, 5H), 6.08 (ddd, 1H, J = 10.1, 4.9, 1.3 Hz), 6.01 (ddd, 1H, J = 10.1, 5.0, 1.5 Hz), 5.89 (ddd, 1H, J = 6.6, 1.0, 0.6 Hz), 5.85 (ddd, 1H, J = 6.6, 1.1, 0.6 Hz), 5.20-5.23 (m, 1H), 5.18 (dd, 1H, J = 2.8, 1.4 Hz), 5.05-5.11 (m, 1H), 4.95-5.00 (m, 1H), 4.58 (d, 1H, J = 12.0 Hz), 4.47 (d, 1H, J = 12.0 Hz), 3.91-4.01 (m, 3H), 3.82 (dd, 1H, J = 8.7, 2.8 Hz), 3.65 (dd, 1H, J = 9.8, 6.2 Hz), 3.60 (dd, 1H, J = 9.8, 6.1 Hz), 2.02 (s, 3H), 1.98 (s, 3H), 1.28 (s, 9H). 13C NMR (CDCl3) δ 170.8, 170.7, 138.0, 135.1, 132.7, 128.6, 127.9, 126.8, 125.9, 98.3, 92.7, 76.2, 73.7, 73.3, 72.7, 68.8, 68.1, 64.1, 28.7, 21.1, 21.0.

(13)

48

Sintesi del glicosil accettore 3.30.

6-(O-2-Tetraidropiranil)-3-(O-t-butildimetilsilil)-4-(O-mesil)-D-glucale (3.31).

Ad una soluzione dell’alcool 3.3 (0.390 g, 1.15 mmoli) con DHP (0.16 mL, 1.74 mmoli), mantenuta in agitazione a temperatura ambiente, viene aggiunta, goccia a goccia, una soluzione di PPTS (0.039 g, 0.15 mmoli) in CH2Cl2 anidro (5.4 mL). Dopo 22 ore la reazione viene diluta con CH2Cl2 e l’evaporazione degli estratti organici lavati (NaHCO3 sol. satura e NaCl sol. satura) fornisce il THP derivato 3.31 (0.483 g, resa >99%), puro come liquido: Rf = 0.37 (7:3 esano/AcOEt); 1H NMR (CDCl3) δ 6.32-6.41 (m, 1H), 4.71-4.85 (m, 2H), 4.57-4.65 (m, 1H), 4.24-4.39 (m, 2H), 3.67-4.08 (m, 3H), 3.40-3.58 (m, 1H), 3.06-3.08 (due s, 3H), 1.40-1.88 (m, 6H), 0.87 (s, 9H), 0.09 (s, 6H). 13C NMR (CDCl3) δ 143.5, 101.5, 99.5, 99.4, 99.1, 99.0, 98.6, 98.5, 77.7, 76.4, 75.6, 74.8, 65.4, 64.9, 64.8, 64.7, 63.3, 62.4, 62.3, 38.9, 38.8, 30.9, 30.3, 30.4, 25.7, 25.3, 19.8, 19.4, 17.9, -4.5, -4.6, -4.7. Analisi, calcolato per C18H34O5SSi: C, 55.35; H, 8.77. Trovato: C, 54.98; H, 9.01.

6-(O-2-Tetraidropiranil)-4-(O-mesil)-D-glucale (3.32).

Ad una soluzione del composto 3.31 (0.184 g, 0.44 mmoli) in THF anidro (15 mL) a 0°C, si aggiunge TBAF 1M (0.44 mL, 0.44 mmoli). La miscela viene mantenuta a 0°C per 20 minuti. Dopo diluizione con AcOEt, l’evaporazione degli estratti organici lavati (NaCl sol. satura) fornisce l’idrossimesilato 3.32 (0.074 g, resa 56%), puro come liquido: Rf = 0.20 (1:1 esano/AcOEt); 1 H NMR (CDCl3) δ 6.37 (d, 1H, J = 5.9 Hz), 4.72-4.85 (m, 2H), 4.58-4.65 (m, 1H), 4.38-4.46 (m, 1H), 3.59-4.12 (m, 4H), 3.39-4.48 (m, 2H), 3.17-3.19 (due s, 3H), 1.40-1.88 (m, 6H). 13 C NMR (CDCl3) δ 144.7, 144.5, 108.2, 102.5, 102.4, 99.6, 99.5, 99.4, 98.6, 79.5, 79.2, 75.3, 75.1, 67.4, 67.3, 65.5, 65.4, 63.4, 62.7, 62.4, 38.9, 38.6, 31.0, 30.5, 30.3, 25.7, 25.5, 25.4, 19.9, 19.5, 19.4, -3.5. Analisi, calcolato per C12H20O5S: C, 52.16; H, 7.29. Trovato: C, 51.82; H, 7.69.

6-(O-2-Tetraidropiranil)-3-desossi-3-azido-D-gulale (3.33).

Ad una soluzione dell’idrossimesilato 3.32 (0.190 g, 0.62 mmoli) in MeCN (12 mL) si aggiunge t-BuOK (69.3 mg, 0.62 mmoli) e la miscela di reazione è mantenuta in agitazione per 30 minuti a temperatura ambiente. Trascorso questo tempo la TLC mostra la scomparsa del prodotto di partenza. Si aggiunge tetrametilguanidinazide (TMGA) (0.293 g, 1.85 mmoli) e la miscela di reazione viene mantenuta per altri 30 minuti a temperatura ambiente. Dopo diluizione con AcOEt, l’evaporazione della fase organica lavata (NaCl sol. satura) fornisce un grezzo di reazione (0.154 g, resa 98%) costituito essenzialmente dal trans azido alcool 3.33 (1H NMR),

O

OH MsO

(14)

49 che viene utilizzato come tale nella reazione successiva: Rf = 0.41 (1:1 esano/AcOEt); 1H NMR (CDCl3) δ 6.70 (d, 1H, J = 6.1 Hz), 4.72-4.98 (m, 2H), 4.64 (d, 1H, J = 2.1 Hz), 4.13-4.93 (m, 3H), 3.52 (dd, 3H, J = 10.2, 4.7 Hz), 3.19 (d, 1H, J = 4.7 Hz), 1.44-1.84 (m, 6H). 13

C NMR (CDCl3) δ 148.2, 110.3, 102.4, 99.4, 99.3, 98.7, 98.6, 95.2, 95.0, 72.1, 71.8, 68.6, 68.1, 67.8, 67.4, 63.5, 62.7, 62.4, 55.7, 55.6, 31.1, 30.5, 30.3, 29.8, 25.9, 25.8, 25.7, 25.6, 25.4, 25.3, 19.9, 19.5, 19.3. 9.7, 1.1. Analisi, calcolato per C11H17O4N3: C, 51.76; H, 6.71; N, 16.46. Trovato: C, 52.01; H, 6.68; N, 16.82.

6-(O-2-Tetraidropiranil)-3-desossi-3-ammino-D-gulale (3.34).

Ad una soluzione del trans azido alcool 3.33 (0.022 mg, 0.085 mmoli) in THF anidro (1.5 mL), si aggiunge LiAlH4 (0.010 mg, 0.255 mmoli) e la miscela è lasciata in agitazione per 3 ore a temperatura ambiente. Dopo diluizione con Et2O, si aggiunge, goccia a goccia, alternativamente, H2O e NaOH sol. 10% fino all’ottenimento di una soluzione limpida. Dopo filtrazione, la fase organica fornisce un grezzo di reazione (0.016 g, 82%) costituito essenzialmente dal desiderato trans ammino alcool 3.34 (1H NMR), che viene utilizzato come tale nella reazione successiva: Rf = 0.11 (9:1 CH2Cl2/MeOH); 1H NMR (CDCl3) δ 6.59 (d, 1H, J = 6.0 Hz), 4.93-5.04 (m, 1H), 4.59-4.71 (m, 1H), 4.27-4.43 (m, 2H), 3.96-4.10 (m, 1H), 3.69-3.93 (m, 3H), 3.41-3.57 (m, 1H), 1.31-1.87 (m, 8H). 13C NMR (CDCl3) δ 145.4, 129.2, 127.5, 127.1, 108.1, 100.9, 100.8, 99.6, 99.5, 99.4, 99.3, 99.1, 72.1, 71.7, 71.6, 70.9, 70.2, 67.5, 62.6, 62.4, 47.8, 30.6, 30.4, 25.3, 20.9, 19.5, 19.4. Analisi, calcolato per C11H19O4N: C, 57.63; H, 8.35; N, 6.11. Trovato: C, 57.99; H, 8.49; N, 6.09.

6-(O-2-Tetraidropiranil)-3-desossi-3-(N-nosilammino)-D-gulale (3.35).

Una soluzione dell’ammino alcool 3.34 (0.106 g, 0.46 mmoli) in CH2Cl2 anidro (1.6 mL) viene trattata a temperatura ambiente con Et3N (0.07 mL, 0.51 mmoli) e o-NsCl (0.112 g, 0.51 mmoli) sotto agitazione magnetica per 3.5 ore. Dopo diluizione con CH2Cl2, l’evaporazione della fase organica lavata (NaHCO3 sol. satura, NaCl sol. satura) fornisce un grezzo di reazione (0.188 g, resa 98%), costituito essenzialmente dal trans N-nosil 3.35 (1H NMR), che viene utilizzato come tale nella reazione successiva: Rf = 0.43 (1:1 CH2Cl2/AcOEt); 1H NMR

(CDCl3) δ 8.15-8.25 (m, 1H), 7.94-7.92 (m, 1H), 7.71-7.82 (m, 2H), 6.54 (d, 1H, J = 5.9 Hz), 5.40 (d, 1H, J = 5.5 Hz, NH), 4.61-4.69 (m, 1H), 4.50 (t, 1H, J = 11.4, 5.7 Hz), 3.33-4,24 (m, 8H), 1.43-1.82 (m, 6H). 13C NMR (CDCl3) δ 148.1, 148.0, 134.1, 133.7, 133.5, 133.2, 131.5, 131.4, 125.7, 99.3, 96.4, 71.5, 71.3, 70.1, 69.3, 68.3, 67.6, 62.6, 60.5, 50.2, 50.1, 30.4, 30.2, 29.8, 25.2, 19.4, 19.3. Analisi, calcolato per C17H22O8N2S: C, 49.27; H, 5.35; N, 6.76. Trovato: C, 49.04; H, 5.67; N, 7.00.

(15)

50

3-Desossi-3-(N-nosilammino)-D-gulale (3.30).

Ad una soluzione del nosil derivato 3.35 (0.047 g, 0.12 mmoli) in EtOH assoluto (0.92 mL), viene aggiunto PPTS (0.005 g, 0.02 mmoli) e la miscela di reazione viene mentenuta in agitazione a 35°C per 48 ore. Dopo diluizione con CH2Cl2, viene aggiunto NaHCO3 solido fino a pH leggermente basico. Si filtra e l’evaporazione del filtrato fornisce un grezzo di reazione (0.036 g) che viene sottoposto a cromatografia flash (1:1 CH2Cl2/AcOEt) per fornire il desiderato alcool primario 3.30 (0.014 g, resa 37%), puro come solido, p.f. 136-138°C: Rf = 0.21 (1:1 CH2Cl2/AcOEt); 1H NMR (CD3CN) δ 8.07-8.15 (m, 1H), 7.80-7.89 (m, 3H), 6.49 (d, 1H, J = 6.0 Hz), 5.98 (d, 1H, J = 6.7 Hz, NH), 4.49 (t, 1H, J = 11.2, 5.6 Hz), 3.67-3.91 (m, 4H), 3.50-3.57 (m, 2H), 3.09-3.20 (m, 1H). 13C NMR (CD3CN) δ 147.9, 135.3, 134.4, 134.0, 131.5, 126.1, 97.5, 74.3, 69.4, 62.5, 51.3. Analisi, calcolato per C12H14O7N2S: C, 43.64; H, 4.27; N, 8.48. Trovato: C, 43.82; H, 4.50; N, 8.88.

Sintesi dell’Aziridina 2.6α.

6-O-Benzil-3-desossi-3-azido-D-gulale (3.36).

Ad una soluzione dell’idrossimesilato 2.2β (0.56 g, 1.79 mmoli) in MeCN (36 mL) si aggiunge t-BuOK (0.21 g, 1.79 mmoli) e la miscela di reazione è mantenuta in agitazione per 30 minuti a temperatura ambiente. Trascorso questo tempo la TLC mostra la scomparsa del prodotto di partenza. A questo punto si aggiunge tetrametilguanidinazide (TMGA) (0.849 g, 5.37 mmoli) e la miscela di reazione viene mantenuta sotto agitazione per altri 30 minuti a temperatura ambiente. Dopo diluizione con Et2O, l’evaporazione della fase organica lavata (NaCl sol. satura) fornisce un grezzo di reazione (0.450 g), costituito essenzialmente dal trans azido alcool 3.36 (1H NMR), che viene sottoposto a cromatografia flash. L’eluizione con miscela 7:3 esano/AcOEt conduce al trans azido alcool 3.36 (0.280 g, resa 63%), puro come liquido: Rf = 0.29 (7:3 esano/AcOEt); FTIR ν 3391, 2102, 1643, 1093 cm-1; 1H NMR δ 7.25-7.41 (m, 5H), 6.70 (d, 1H, J = 6.1 Hz), 4.88 (dt, 1H, J = 6.1 e 1.5 Hz), 4.62 (d, 1H, J = 11.9 Hz), 4.56 (d, 1H, J = 11.9 Hz), 3.82-3.91 (m, 4H), 3.70-3.77 (m, 1H). 13C NMR δ 148.2, 137.2, 128.7, 128.2, 127.9, 95.2, 74.0, 72.0, 70.7, 68.5, 55.6. Analisi, calcolato per C13H15N3O3: C, 59.76; H, 5.79; N, 16.08. Trovato: C, 59.67; H, 5.51; N, 15.89.

6-O-Benzil-3-desossi-3-ammino-D-gulale (3.37).

L’azido alcool 3.36 (0.470 g, 1.79 mmoli) viene addizionato ad una soluzione di SnCl2 anidro (0.510 g, 2.68 mmoli), PhSH (1.10 mL, 10.7 mmoli) e Et3N (1.11 mL, 8.06 mmoli) in MeCN anidro e la miscela di reazione risultante viene lasciata sotto agitazione a temperatura ambiente

(16)

51 per 30 minuti. Dopo diluizione con CH2Cl2, l’evaporazione della fase organica lavata (NaOH sol. 10%) fornisce un prodotto grezzo (0.530 g), costituito dall’ammino alcool 29 e PhSH non reagito, che viene sottoposto a cromatografia flash. L’eluizione con miscela 93:7 CH2Cl2/MeOH conduce al trans ammino alcool 3.37 (0.380 g, resa 72%), puro come liquido: Rf = 0.19 (93:7 CH2Cl2/MeOH); FTIR ν 3425, 3364, 1647, 1591, 1240, 1091 cm-1; 1H NMR δ

7.28-7.40 (m, 5H), 6.51 (d, 1H, J = 6.1 Hz), 4.86 (dt, 1H, J = 6.1 e 1.4 Hz), 4.65 (d, 1H, J = 12.0 Hz), 4.57 (d, 1H, J = 12.0 Hz), 3.95-4.03 (m, 1H), 3.73-3.93 (m, 3H), 3.20-3.27 (m, 1H). 13C NMR δ 145.08, 134.17, 128.75, 128.20, 128.06, 99.26, 74.21, 72.73, 71.23, 69.67, 36.95. Analisi, calcolato per C13H17NO3: C, 66.36; H, 7.28; N, 5.95. Trovato: C, 66.28; H, 7.01; N, 5.64.

6-O-Benzil-3-desossi-3-N-(nosilammino)-D-gulale (3.38).

Una soluzione dell’ammino alcool 3.37 (0.117 g, 0.5 mmoli) in CH2Cl2 anidro (1.7 mL) viene trattata a temperatura ambiente con Et3N (0.076 mL, 0.55 mmoli) e o-NsCl (0.121 g, 0.550 mmoli) sotto agitazione magnetica per 2 ore. Dopo diluizione con CH2Cl2, l’evaporazione della fase organica lavata (NaHCO3 sol. satura, NaCl sol. satura) fornisce prodotto un grezzo (0.214 g), costituito dal trans N-nosil derivato che viene sottoposto a cromtografia flash. L’eluizione con esano/AcOEt conduce al trans N-nosil derivato 3.38 (0.108 g, resa 53%),puro come liquido: Rf = 0.19 (1:1 esano/AcOEt); FTIR ν 3479, 3350, 1650, 1540, 1450, 1360,

1240, 1150, 1020 cm-1. 1H NMR (CDCl3) δ 8.10-8.18 (m, 1H), 7.82-7.90 (m, 1H), 7.65-7.80 (m, 2H), 7.24-7.43 (m, 5H), 7.00 (d, 1H, J = 7.5 Hz), 5.35 (m, 1H, NH), 4.62 (d, 1H, J = 12.0 Hz), 4.52 (d, 1H, J = 12.0 Hz), 4.36 (t, 1H, J = 3.7 Hz), 3.74 (d, 2H, J = 3.7 Hz),

3.56-3.81 (m, 2H), 3.18 (bs, 1H, OH). 13C NMR

(CDCl3) δ 150.0, 133.6,133.0, 131.0, 128.7, 128.3, 128.0,

125.6, 92.5, 77.4, 69.8, 64.4, 51.2. Analisi, calcolato per C19H20N2O7S: C, 54.28; H, 4.79; N, 6.66. Trovato: C, 54.03; H, 4.65; N, 6.56.

6-O-Benzil-3-desossi-3-N-(nosilammino)-4-O-mesil-D-gulale (2.6α).

Ad una soluzione del trans N-nosil derivato 3.38 (2.13 g, 5.05 mmoli) in CH2Cl2 anidro (27 mL) viene trattata a 0°C con piridina anidra (1.22 mL, 15.21 mmoli) e MsCl (0.780 mL, 10.14 mmoli). Tale miscela viene mantenuta in agitazione per 18 ore a 0°C. Dopo diluizione con CH2Cl2, l’evaporazione della fase organica lavata (NaCl sol. satura) fornisce un prodotto grezzo (2.90 g), costituito dal trans N-nosil-O-mesil derivato 2.6α, che viene sottoposto a cromatografia flash. L’utilizzo di una miscela 4:3:3 esano/ CH2Cl2/AcOEt conduce al trans N-nosil-O-mesil derivato 6α (1.26 g, resa 50%), puro come solido, p.f. 102-105°C: Rf = 0.33 (1:1

(17)

52 esano/AcOEt); FTIR ν 3319, 1647, 1543, 1371, 1251, 1178 cm-1. 1H NMR (CDCl3) δ 8.22−8.31 (m, 1H), 7.61-7.92 (m, 3H), 7.23-7.43 (m, 5H), 6.57 (d, 1H, J = 5.9 Hz), 5.39 (d, 1H, J = 4.9 Hz, NH), 4.96-5.03 (m, 1H), 4.63 (td,1H, J = 5.9, 1.7 Hz), 4.52 (s, 2H), 4.22 (t, 1H, J = 6.8 Hz), 3.96-4.05 (m, 1H), 3.74 (dd, 1H, J = 9.8, 6.0 Hz), 3.64 (dd, 1H, J = 9.8, 7.5 Hz), 3.03 (s, 3H). 13C NMR (CDCl3) δ 148.2, 137.4, 134.3, 133.4, 132.2, 128.7, 128.3, 125.7, 95.5, 73.9, 73.8, 70.0, 67.4, 47.7, 37.9. Analisi, calcolato per C20H22N2O9S2: C, 48.19; H, 4.45; N, 5.62. Trovato: C, 48.31; H, 4.49; N, 5.70.

Sintesi dell’α-O-isopropil-1,6-trisaccaride-4-N-nosil-2,3-insaturo (3.2)

6-O-[6’-O-(Benzil)-2’,3’,4’-tridesossi-4-N-(nosilammino)-α- D-eritro-es-2’-enopiranosil]-3-desossi-3-N-(nosilammino)-D-gulale (3.39).

Ad una soluzione del trans N-nosil-O-mesilato 2.6α (0.050 g, 0.10 mmoli) in MeCN (5.7 mL), viene aggiunto l’alcool 3.30 (0.050 g, 0.15 mmoli) e successivamente si addiziona K2CO3 (0.042 g, 0.30 mmoli). La reazione è mentenuta a temperatura ambiente per 2 ore. Dopo diluizione con AcOEt, l’evaporazione degli estratti organici lavati (NaCl sol. satura) fornisce un grezzo (0.094 g) costituito dal composto 3.39 e dal nucleofilo 3.30 in eccesso che viene sottoposto a cromatografia flash (2:8 esano/AcOEt) a dare il composto 3.39 (0.024 g, resa 33%), puro come liquido: Rf = 0.36 (2:8 esano/AcOEt);

1

H NMR (CD3CN) δ 8.02-8.13 (m, 2H), 7.68-7.87 (m, 6H), 7.21-7.39 (m, 5H), 6.44 (d, 1H, J

= 6.2 Hz), 5.94-6.23 (m, 2H, NH), 5.73 (dt, 1H, J = 10.2, 2.5 Hz), 5.58 (d, 1H, J = 10.7 Hz),

4.97-5.06 (m, 1H, anom.), 3.32-4.64 (m, 13H). 13C NMR (CD3CN) δ 144.8, 139.5, 135.4, 134.4, 134.3, 134.0, 133.3, 131.7, 131.6, 131.5, 131.4, 129.3, 128.6, 128.5, 128.2, 126.1, 126.0, 97.6, 95.2, 73.8, 70.0, 69.8, 69.0, 68.1, 61.0, 51.2, 49.6. Analisi, calcolato per C31H32O13N4S2: C, 52.84; H, 4.58; N, 3.98. Trovato: C, 53.01; H, 4.22; N, 3.69.

6-O-[6’-O-(Benzil)-2’,3’,4’-tridesossi-4-N-(nosilammino)-α- D-eritro-es-2’-enopiranosil]-4-O-mesil-3-desossi-3-N-(nosilammino)-D-gulale (3.40).

Ad una soluzione del composto 3.39 (0.006 g, 0.008 mmoli) in CH2Cl2 (0.05 mL) con piridina anidra (2 µl, 0.024 mmoli), raffreddata a 0°C, si aggiunge, goccia a goccia, MsCl (1.24 µl, 0.016 mmoli). La miscela di reazione viene mantenuta per una notte a 0°C. Dopo diluizione con AcOEt, l’evaporazione degli estratti organici lavati (NaCl sol. satura) fornisce un grezzo (0.018 mg) che sottoposto a TLC preparativa (4:6 esano/AcOEt) fornisce il mesilato 3.40 (0.004 mg, resa 62%), puro

O O O BnO NsHN NHNs HO O O O BnO NsHN NHNs MsO

(18)

53 come liquido: Rf = 0.22 (4:6 esano/AcOEt); 1H NMR (CD3CN) δ 8.02-8.15 (m, 2H),

7.66-7.96 (m, 6H), 7.23-7.41 (m, 5H), 6.53 (d, 1H, J = 5.9 Hz), 5.71 (dt, 1H, J = 10.2, 2.4 Hz), 5.54-5.63 (m, 1H), 4.98-5.03 (m, 1H, anom.), 4.83-4.89 (m, 1H), 4.60 (td, 1H, J = 5.8, 1.8 Hz), 4.43 (d, 1H, J = 12.0 Hz), 4.35 (d, 1H, J = 12.0 Hz), 3.86-4.33 (m, 5H). 13C NMR (CD3CN) δ 148.8, 138.1, 135.7, 135.4, 134.2, 134.0, 133.7, 132.0, 131’8, 131.7, 131.5, 129.3, 128.7, 128.5, 128.0, 126.4, 126.1, 97.0, 95.6, 75.8, 73.9, 75.1, 70.0, 69.9, 66.7, 49.6, 48.6, 38.6. Analisi, calcolato per C32H34O15N4S3: C, 47.40; H, 4.23; N, 6.91. Trovato: C, 47.69; H, 4.60; N, 7.17.

6-O-[6’-O-[6”-O-(Benzil)-2”,3”,4”-tridesossi-4”-N-(nosilamino)-α- D-eritrro-es-2”-enopiranosil]-2’,3’,4’-tridesossi-4’-N-(nosilamino)-α- D-eritro-es-2’-enopiranosil]-3-desossi-3-N-(nosilamino)-D-gulale (3.42).

Ad una soluzione del composto mesilato 3.40 (0.015 g, 0.0184 mmoli) in MeCN (1.1 mL), viene aggiunto l’alcool 3.30 (0.018 g, 0.0552 mmoli) e successivamente si addiziona K2CO3 (0.008 g, 0.0552 mmoli). La reazione è mentenuta a temperatura ambiente per una notte. Dopo diluizione con AcOEt, l’evaporazione degli estratti organici lavati (NaCl sol. satura) fornisce un grezzo (0.036 g) costituito dal composto 3.42 e dal nucleofilo 3.30 in eccesso. Questo grezzo viene sottoposto a TLC preparativa (8:2 CH2Cl2/acetone) a dare il composto

3.42 (0.006 g, resa 32%), puro come liquido: Rf = 0.16 (3:7 esano/AcOEt); 1H NMR (CD3CN)

δ 8.01-8.15 (m, 3H), 7.75-7.91 (m, 9H), 7.22-7.41 (m, 5H), 6.46 (d, 1H, J = 5.6 Hz), 5.47-5.81 (m, 4H), 4.90-5.02 (m, 2H, 2 anom.), 4.43-4.54 (m, 1H), 4.38 (d, 1H, J = 12.0 Hz), 4.31 (d, 1H, J = 12.0 Hz), 3.36-4.20 (m, 14H). 13 C NMR (CD3CN) δ 148.6, 147.8, 135.5, 135.3, 134.6, 134.4, 134.2, 134.0, 132.9, 131.6, 131.5, 131.2, 129.3, 128.5, 128.4, 126.1, 126.0, 97.6, 95.0, 94.5, 73.7, 72.8, 69.7, 69.5, 69.0, 68.1, 67.4, 51.1, 50.0, 49.4. Analisi, calcolato per C43H44O19N6S3: C, 49.42; H, 4.24; N, 8.04. Trovato: C, 49.31; H, 4.39; N, 8.39.

6-O-[6’-O-[6”-O-(Benzil)-2”,3”,4”-tridesossi-4”-N-(nosilamino)-α- D-eritrro-es-2”-enopiranosil]-2’,3’,4’-tridesossi-4’-N-(nosilamino)-α- D-eritro-es-2’-enopiranosil]-4-O-mesil-3-desossi-3-N-(nosilamino)-D-gulale (3.43).

Ad una soluzione del composto 3.42 (0.006 g, 0.0061 mmoli) in CH2Cl2 (0.041 mL) con piridina anidra (1.47 µl, 0.0183 mmoli), raffreddata a 0°C, si aggiunge goccia a goccia MsCl (0.94 µl, 0.0122 mmoli). La miscela di reazione viene mantenuta in agitazione per 48

O O O BnO NsHN NsHN O O HO NHNs O O O BnO NsHN NsHN O O MsO NHNs

(19)

54 ore a 0°C. Dopo diluizione con AcOEt, l’evaporazione degli estratti organici lavati (NaCl sol. satura) fornisce un grezzo costituito dal mesilato 3.43 (0.007 mg, resa 95%) (1H NMR), praticamente puro come liquido che viene utilizzato come tale nella reazione successiva: Rf =

0.22 (4:6 esano/AcOEt); 1H NMR (CD3CN) δ 8.02-8.17 (m, 3H), 7.76-7.95 (m, 9H), 7.22-7.43 (m, 5H), 6.56 (d, 1H, J = 5.5 Hz), 5.30-6.07 (m, 4H), 4.93-5.03 (m, 2H, 2 anom.), 4.84-4.89 (m, 1H), 3.88-4.67 (m, 15H), 3.13 (s, 3H). Analisi, calcolato per C44H46O21N6S3: C, 48.44; H, 4.25; N, 7.70. Trovato: C, 48.79; H, 4.65; N, 7.38.

Isopropil 6-O-[6’-O-[6”-O-(benzil)-2”,3”,4”-tridesossi-4”-N-(nosilamino)-α- D-eritro-es-2”-enopiranosil]-2’,3’,4’-tridesossi-4’-N-(nosilamino)-α- D-eritro-es-2’-enopiranosil]-2,3,4-tridesossi-4-N-(nosilamino)-α-D-eritro-es-2-enopiranoside (3.45).

Ad una soluzione del trans N-nosil-O-mesilato 3.43 (0.10 g, 0.089 mmoli) in i-PrOH (6.0 mL), si aggiunge K2CO3 (0.037 g, 0.27 mmol, 3 equiv) e la miscela di reazione è mantenuta in agitazione per una notte. Dopo filtrazione, l’evaporazione degli estratti organici fornisce un prodotto grezzo costituito dall’isopropile α-O-glicoside 3.45 (0.087 g, resa 90%), puro come liquido: [α]20D +196.8 (c 0.7, CHCl3); Rf = 0.28 (4:6 esano/AcOEt); FTIR ν 3379, 1587, 1464, 1381, 1267, 1194, 1161, 1078, 1041, 968 cm-1. 1H NMR (CD3CN) δ 8.04-8.19 (m, 3H), 7.74-7.93 (m, 9H), 7.25-7.41 (m, 5H), 6.03-6.23 (m, 3H, NH), 5.62-5.81 (m, 3H), 5.60 (d, 1H, J = 10.2 Hz), 5.47 (d, 1H, J = 10.2 Hz), 5.39 (d, 1H, J = 10.2 Hz), 5.04 (d, 1H, J = 2.6 Hz), 5.01 (d, 1H, J = 2.6 Hz), 4.97 (d, 1H, J = 2.8 Hz), 4.41 (d, 1H, J = 12.0 Hz), 4.36 (d, 1H, J = 12.0 Hz), 3.54-4.22 (m, 13H), 1.19 (d, 3H, J = 6.2 Hz), 1.12 (d, 3H, J = 6.2 Hz). 13C NMR (CD3CN) δ 148.6, 139.6, 135.5, 135.4, 135.3, 134.6, 134.5, 134.3, 134.1, 134.0, 131.6, 131.5, 130.7, 130.4, 129.4, 129.2, 128.7, 128.5, 128.4, 126.2, 126.1, 126.0, 95.0, 94.7, 93.0, 73.7, 71.0, 69.8, 69.6, 69.5, 69.0, 68.7, 67.6, 50.5, 49.9, 49.5, 24.0, 22.1. Analisi, calcolato per C46H50N6O19S3: C, 50.82; H, 4.64; N, 7.73. Trovato: C, 51.03; H, 4.39; N, 7.89. O O O BnO NsHN NsHN O O NsHN O-i-Pr

(20)

55

Isopropil 6-O-[6’-O-[6”-O-(benzil)-2”,3”,4”-tridesossi-4”-amino-α- D-eritro-es-2”-enopiranosil]-2’,3’,4’-tridesossi-4’-amino-α- D-eritro-es-2’-enopiranosil]-2,3,4-tridesossi-4-amino-α-D-eritro-es-2-enopiranoside (3.2).

Ad una soluzione del trisaccaride 3.45 (0.031 g, 0.029 mmoli) in MeCN anidro (1.0 mL), si aggiunge PhSH (27 µL, 0.26 mmoli, 3 equiv) in presenza di una base K2CO3 (0.048 g, 0.35 mmoli, 4 equiv) e la miscela di reazione viene mantenuta in agitazione per circa 5 ore a temperatura ambiente. Dopo diluizione con AcOEt e filtrazione su celite, l’evaporazione degli estratti organici fornisce un prodotto grezzo costituito dall’isopropile α-O-glicoside 3.32 e dal nucleofilo in eccesso. Questo grezzo viene sottoposto a TLC prepartiva (9:1 cloroformio/metanolo) a dare il composto 3.2 (0.010 g, resa 65%), puro come liquido: [α]20D +62.1 (c 0.3, CHCl3); Rf = 0.14 (1:1 CHCl3/MeOH); FTIR ν 3375, 1660, 1454, 1383, 1317, 1099, 1016 cm-1. 1H NMR (CDCl3) δ 7.25-7.40 (m, 5H), 5.74-5.86 (m, 3H), 5.56-5.73 (m, 3H), 5.02 (s, 1H), 4.98 (broad s, 1H), 4.94 (t, 1H, J = 1.0 Hz), 4.58 (d, 1H, J = 11.9 Hz), 4.54 (d, 1H, J = 11.9 Hz), 3.85-4.08 (m, 3H), 3.40-3.82 (m, 7H), 3.07-3.35 (m, 3H), 1.16 (d, 3H, J = 6.2 Hz), 1.10 (d, 3H, J = 6.2 Hz). 13C NMR (CD3CN) δ 139.8, 136.7, 136.6, 136.0, 129.3, 128.7, 128.4, 126.8, 125.8, 94.6, 94.5, 93.5, 74.1, 73.8, 73.7, 73.5, 71.6, 70.5, 68.1, 67.9, 47.6, 47.1, 47.0, 30.9, 24.1, 22.3. Analisi, calcolato per C28H41N3O7: C, 63.26; H, 7.77; N, 7.90. Trovato: C, 63.01; H, 7.54; N, 7.67. MS, calcolata per [C28H41N3O7+H+]= 532.3. Trovato 532.3.

Sintesi del disaccaride 3.46.

Isopropil 6-O-[6’-O-(benzil)-2’,3’,4’-tridesossi-4'-N-(nosilammino)-α- D-eritro-es-2’-enopiranosil]-2,3,4-tridesossi-4-N-(nosilammino)-α-D-eritro-es-2-enopiranoside (3.46).

Una soluzione del trans N-nosil-O-mesilato 3.40 (0.050 g, 0.068 mmoli) in i-PrOH anidro (4.0 mL) è trattata con K2CO3 (0.028 g, 0.205 mmol, 3 equiv) e la risultante miscela di reazione è mantenuta a temperatura ambiente per 48 ore. Dopo diluizione con AcOEt ed evaporazione della fase organica lavata (NaCl sol. sat.) si ottiene un grezzo di reazione (0.042 g) costituito dall’isopropil α-O-glicoside 3.46 (disaccaride 3.46) (1H NMR) che viene sottoposto a TLC preparativa con una miscela eluente esano/AcOEt 4:6. Per estrazione della banda più intensa si ottiene il disaccaride 3.46 (0.036 g, resa 73%), puro

O O O BnO H2N H2N O O H2N O-i-Pr

(21)

56 come liquido: [α]20D +150.9 (c 0.2, CHCl3); Rf= 0.39 (4:6 esano/AcOEt); FTIR ν 3379, 1545,

1464, 1381, 1261, 1174,1084, 1026, 968 cm-1. 1H NMR (CD3CN) δ 8.04-8.13 (m, 2H), 7.67-7.88 (m, 6H), 7.25-7.40 (m, 5H),6.10 (s br, 2H, NH), 5.72 (ddd, 1H, J = 10.1, 2.7, 2.3 Hz), 5.65 (ddd, 1H, J = 10.1, 2.7, 2.3 Hz), 5.56-5.62 (m, 1H), 5.39 (dt, 1H, J = 10.0, 1.2 Hz), 5.01 (d, 1H, J = 2.7 Hz), 4.97 (d, 1H, J = 2.7 Hz), 4.37 (d, 1H, J = 12.0 Hz), 4.33 (d, 1H, J = 12.0 Hz), 4.09-4.18 (m, 1H), 3.83-4.08 (m, 4H), 3.78 (dd, 1H, J = 11.4, 4.6 Hz), 3.65 (dd, 1H, J = 11.4, 2.1 Hz), 3.49-3.58 (m, 2H), 1.16 (d, 3H, J = 6.2 Hz), 1.09 (d, 3H, J = 6.2 Hz). 13 C NMR (CD3CN) δ 148.6, 139.5, 135.4, 135.3, 134.6, 134.3, 134.1, 134.0, 131.6, 131.5, 131.4, 130.1, 129.5, 129.2, 128.5, 128.4, 128.3, 126.1, 126.0, 94.7, 93.1, 73.7, 71.0, 69.7, 69.6, 69.2, 67.6, 50.0, 49.4, 24.0, 22.2.

Diidrossilazione dei disaccaridi 3.29-diAc, 3.46 e 3.47-Ac.

Diidrossilazione del disaccaride 3.29-diAc mediante il protocollo OsO4/NMO.

Tipica procedura. Ad una soluzione del disaccaride

3.29-Ac (0.025 g, 0.049 mmoli) in una miscela di

t-BuOH/acetone 1:1 (0.1 mL), si aggiunge, a 0°C e in assenza di luce, una soluzione acquosa (50% p/v) di N-ossido-N-metil-moRf olina (NMO) (0.024 mL) e la miscela di reazione risultante viene trattata con una soluzione (2.5% p/v) di OsO4 in t-BuOH (0.049 mL) e lasciata in agitazione per circa 4 ore alla stessa temperatura. La diluizione con una miscela 9:1 di Et2O/MeOH e l’evaporazione della fase organica filtrata (Celite-silica gel) fornisce un prodotto grezzo costituito dal disaccaride tetraidrossilato 3.48 (0.027 g, resa 96%), puro come liquido: Rf = 0.14 (2:8 esano /AcOEt); 1H NMR (CDCl3) δ 7.26-7.34 (m, 5H), 5.05 (s br, 1H), 4.99 (d, 1H, J = 2.7 Hz), 4.85 (d, 1H, J = 8.3 Hz, H-1 or H-1’), 4.67 (d, 1H, J = 8.1 Hz, H-1 or H-1’), 4.56 (d, 1H, J = 12.1 Hz), 4.42 (d, 1H, J = 12.1 Hz), 4.18-4.37 (m, 2H), 3.75-3.91 (m, 2H), 3.68-3.74 (m, 1H), 3.43-3.62 (m, 5H), 2.05 (s, 3H), 1.98 (s, 3H), 1.28 (s, 9H). 13C NMR (CDCl3) δ 171.0, 170.3, 137.9, 128.6, 128.0, 100.2, 94.8, 73.6, 70.9, 70.7, 70.3, 69.9, 69.3, 69.2, 68.9, 68.6, 68.3, 29.9, 28.9, 21.2, 21.0.

Il disaccaride 3.48 viene acetilato (Ac2O/Py) a dare il corrispondente tetra acetil derivato 3.48-Ac: disaccaride acetilato 3.48-Ac, solido, pf 48-50°C:

[α]20D +8.7 (c 0.08,CHCl3). 1H NMR (CDCl3) δ 7.26-7.35 (m, 5H), 5.31-4.40 (m, 2H), 4.97-5.02 (m, 1H), 4.84-4.96 (m, 4H), 4.81 (d, 1H, J = 8.3 O O AcO BnO O AcO OBut OH OH OH OH O O AcO BnO O AcO OBut OAc OAc OAc OAc

(22)

57 Hz), 4.55 (d, 1H, J = 11.8 Hz), 4.42 (d, 1H, J = 11.8 Hz), 4.13-4.23 (m, 2H), 3.88 (dd, 1H, J = 10.6, 3.1 Hz), 3.65 (dd, 1H, J = 10.6, 8.3 Hz), 3.55 (dd, 1H, J = 9.6, 6.2 Hz), 3.49 (dd, 1H, J = 9.6, 6.9 Hz), 2.12 (s, 3H), 2.09 (s, 3H), 2.08 (s, 3H), 2.05 (s,3H), 1.99 (s, 3H), 1.97 (s, 3H), 1.23 (s, 9H). 13C NMR (CDCl3) δ 169.8, 169.7, 169.6, 169.5, 169.1, 137.6, 129.1, 128.6, 128.3, 128.1, 98.3, 93.1, 76.1, 73.7, 72.4, 71.6, 68.8, 68.7, 68.4, 68.3, 68.2, 67.8, 67.7, 29.9, 28.7, 20.9.

Diidrossilazione del disaccaride 3.46 mediante il protocollo OsO4/NMO.

Ad una soluzione del disaccaride 3.46 (0.025 g, 0.032 mmoli) in una miscela 1:1 t-BuOH/acetone (0.062 mL), si aggiunge, a 0°C e in assenza di luce, una soluzione acquosa (50% p/v) di N-ossido-N-metil-moRf olina (NMO) (0.016 mL) e la miscela di reazione risultante viene trattata con una soluzione (2.5% p/v) di OsO4 in t-BuOH (0.032 mL) e lasciata per 24 ore alla stessa temperatura. Seguendo il tipico trattamento si ottiene un prodotto di reazione (0.025 g) costituito dal disaccaride tetraidrossilato 3.49 (1H NMR) che è solubilizzato in piridina anidra (0.25 mL) e trattato a 0°C con Ac2O (0.10 mL). La miscela di reazione viene mantenuta in agitazione per circa 16 ore a temperatura ambiente e il grezzo di reazione ottenuto (0.020 g) viene sottoposto a TLC preparativa, utilizzando una miscela 4:6 esano/AcOEt come eluente. Per estrazione della banda più intensa si ottiene il disaccaride-tetracetil-derivato 3.49-Ac (0.010 g, resa 33%), puro come solido, pf 92-94°C; [α ] 20D +3.0 (c 0.19, CHCl3); Rf = 0.20 (4:6 esano/AcOEt): 1H NMR (CD3CN) δ 8.12-8.18 (m, 1H), 8.03-8.08 (m, 1H), 7.73-7.91 (m, 6H), 7.28-7.41 (m, 5H), 6.18 (d, 1H, J = 9.5 Hz, NH o NH’), 6.05 (d, 1H, J = 9.3, NH o NH’), 5.30 (dd, 1H, J = 10.6, 3.3 Hz, 3 o 3’), 5.13 (dd, 1H, J = 10.6, 3.3 Hz, 3 or H-3’), 5.14-5.19 (m, 1H, H-2 o H-2’), 4.99 (dd, 1H, J = 3.3, 1.9 Hz, H-2 o H-2’), 4.83-4.91 (m, 2H, H-1 e H-1’), 4.50 (s, 2H), 3.69-4.13 (m, 7H), 3.61 (dd, 1H, J = 11.2, 5.5 Hz), 3.51-3.60 (m, 1H), 2.08 (s, 3H), 2.06 (s, 3H), 1.99 (s, 3H), 1.97 (s, 3H), 1.22 (d, 3H, J = 6.2 Hz), 1.13 (d, 3H, J = 6.2 Hz). 13C NMR (CDCl3) δ 170.9, 170.7, 170.6, 170.5, 148.6, 139.7, 135.1, 135.0, 134.1, 131.7, 131.3, 129.3, 128.5, 126.1, 98.2, 96.1, 73.6, 72.1, 71.4, 70.7, 70.3, 69.9, 69.5, 67.0, 51.9, 51.8, 30.9, 30.4, 23.5, 21.6, 20.9. O O NsHN BnO O NsHN OPri OAc OAc OAc OAc

(23)

58

Diidrossilazione del disaccaride 3.47-Ac mediante il protocollo OsO4/NMO.

Ad una soluzione del disaccaride 3.47-Ac (0.024 g, 0.032) in una miscela 1:1 t-BuOH/acetone (0.094 mL), si aggiunge, a 0°C e in assenza di luce, una soluzione acquosa (50% p/v) di N-ossido-N-metil-moRf olina (NMO) (0.024 mL) e la miscela di reazione è trattata con una soluzione (2.5% p/v) di OsO4 in

t-BuOH (0.050 mL) e lasciata per 3 ore alla stessa temperatura. Seguendo il tipico trattamento

si ottiene un prodotto di reazione (0.024 g) costituito dal disaccaride tetraidrossilato 3.50 che è solubilizzato in piridina anidra (0.25 mL) e trattato a 0°C con Ac2O (0.08 mL). La miscela di reazione è mantenuta in agitazione per circa 16 ore, a temperatura ambiente, a dare un grezzo di reazione (0.019 g) costituito dal disaccaride 3.50-Ac, che viene sottoposto a TLC preparativa utilizzando una miscela 1:9 esano/AcOEt come eluente. Per estrazione della banda più intensa si ottiene il disaccaride-esaAc (3.50-Ac) (0.013 g, resa 84%), puro come liquido: [α ] 20D +39.8 (c 0.18, CHCl3); Rf = 0.28 (1:9 esano/AcOEt); 1H NMR (CDCl3) δ 7.27-7.39 (m, 5H), 5.34-5.40 (m, 1H), 5.27-533 (m, 1H), 5.21 (dd, 1H, J = 10.6, 3.7 Hz), 5.05-5.10 (m, 1H), 4.89-5.00 (m, 3H), 4.80 (d, 1H, J = 1.6 Hz, H-1’), 4.55 (s, 2H), 4.26-4.43 (m, 1H), 4.09-4.22 (m, 1H), 3.76-3.87 (m, 2H), 3.60-3.66 (m, 2H), 3.47 (dd, 1H, J = 10.6, 4.8 Hz), 2.16 (s, 3H), 2.14 (s,3H), 2.03 (s, 6H), 2.00 (s, 3H), 1.87 (s, 3H), 1.27 (s, 9H). 1H NMR (CD3CN) δ 7.32-7.39 (m, 5H), 6.23(d, 1H, J = 9.5 Hz, NH), 5.27 (t, 1H, J = 3.6 Hz), 5.06 (dd, 1H, J = 9.6, 3.4 Hz, H-3’), 5.08-5.10 (m, 2H), 5.00 (d, 1H, J = 8.3 Hz, H-1), 4.88 (dd, 1H, J = 3.6, 1.6 Hz), 4.80 (d, 1H, J = 1.6 Hz, H-1’), 4.74 (dd, 1H, J = 8.3, 3.5 Hz), 4.55 (d, 1H, J = 11.8 Hz), 4.48 (d, 1H J = 11.8 Hz), 4.18-4.26 (m, 1H, W½= 15.5 Hz, H-4’), 4.10-4.17 (m, 1H), 3.82-3.90 (m, 1H), 3.69 (dd, 1H, J = 10.6, 7.2 Hz), 3.46-3.62 (m, 3H), 2.18 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 2.06 (s, 3H), 2.02 (s, 3H), 1.95 (s, 3H), 1.92 (s, 3H), 1.21 (s. 9H).13C NMR (CDCl3) δ 171.5, 170.4, 169.9, 169.6, 169.2, 138.3, 128.5, 127.9, 127.8, 97.4, 93.3, 76.3, 73.7, 72.1, 71.4, 70.2, 69.2, 68.8, 68.6, 68.4, 66.5, 47.8, 29.9, 28.8, 23.5, 21.1, 21.0, 20.9, 20.8. O O AcHN BnO O AcO OBut OAc OAc OAc OAc

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