Indice
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1. Introduzione
1.1 Invecchiamento e rigenerazione
1.2 Induzione neurale e formazione degli assi 1.3 Neurogenesi embrionale
1.4 Neurogenesi adulta
1.5 I geni ZNF367 e MEX3A
2. Scopo della tesi
3. Materiali e Metodi
3.1 Clonaggio
3.1.1 Digestione di DNA plasmidico
3.1.2 Estrazione ed eluizione di DNA plasmidico
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3.2 Trasformazione di cellule competenti di E.coli per l’amplificazione del DNA plasmidico
3.2.1 Trasformazione
3.2.2 Inoculo ed estrazione di DNA plasmidico
3.3 Digestione di DNA plasmidico con enzimi di restrizione
3.4 Purificazione del DNA
3.4.1 Estrazione fenolica 3.4.2 Precipitazione alcolica
3.5 Elettroforesi su gel di agarosio
3.6 Embrioni di Xenopus laevis
3.7 Microiniezione
3.7.1 Microiniezione in embrioni di Xenopus laevis
3.7.2 “Morpholino”
3.7.3 Sintesi in vitro dei trascritti da microiniettare 3.7.4 Reazione cromogenica per la galattosidasi
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3.8 Ibridazione in situ
3.8.1 Preparazione della sonda
3.8.2 Ibridazione in situ “whole mount”
3.8.3 Depigmentazione (“Bleaching”)
3.8.4 Inclusione e taglio al criostato 3.8.5 Ibridazione in situ su sezioni
4. Risultati
4.1 Profilo di espressione di ZNF367 e MEX3A 4.2 Sovraespressione di ZNF367 e MEX3A
4.3 Perdita di funzione di ZNF367 e MEX3A
