Pseudomonas syringae pv. actinidiae (Psa), agente causale del cancro batterico dell’actinidia, è oggi riconosciuto a livello mondiale come il patogeno più dannoso per le piante di Actinidia spp. I suoi danni sono riscontrabili su tutti gli organi vegetativi e possono portare alla morte le piante in tempi rapidi, con gravi ripercussioni economiche (Serizawa et al., 1989; Takikawa et al., 1989; Green e Saunders, 2012). In alcuni paesi quali Giappone, Cina e Corea vengono utilizzati anche antibiotici per combattere questo batterio e questo fatto ha causato lo sviluppo di popolazioni di Psa antibiotico-resistenti (Nakajima et al., 1995).
Parte dei danni agronomici ed economici, provocati da questa malattia sono da imputare alla scarsità delle conoscenze sul patosistema actinidia - Pseudomonas
syringae pv. actinidiae. La recente epidemia mondiale ha portato ad una
intensificazione delle ricerche ed all’acquisizione di conoscenze da parte della comunità scientifica in tempi brevissimi. D’altronde è ormai ritenuto generalmente che la diffusione epidemica della malattia sia stata determinata in parte dal commercio di materiale di propagazione vegetale non adeguatamente controllato che ne ha permesso una diffusione veloce ed efficiente (Mazzaglia et al., 2010; Renzi et al., 2012).
Obiettivo e scopo della tesi è stato quello di approfondire alcune conoscenze sull’epidemiologia della malattia, cercando di prendere in considerazione in maniera trasversale i diversi stadi di allevamento delle piante di actinidia ed indirizzando poi la ricerca anche sugli aspetti diagnostici nel materiale vegetale asintomatico in propagazione o in campo.
L’utilizzo in questi studi di un ceppo di batterio di riferimento marcato per le prove di inoculo sperimentale è stato di fondamentale importanza per verificare la capacità di questo patogeno di invadere in maniera sistemica la pianta colpita. Inoltre l’utilizzo di quanto disponibile in bibliografia su altri patosistemi in cui erano coinvolti patogeni batterici ha permesso di adattare modelli diagnostici e previsionali alle necessità della sperimentazione in oggetto.
Dagli studi sulla progressione dei cancri in piante adulte, è emerso un alto grado di patoadattamento ed è stato notato come Psa sia in grado di sopravvivere durante l’inverno e colonizzare poi attivamente i tessuti nella stagione vegetativa successiva causando infezioni locali a progressione basipeta, ed infezioni sistemiche in parti di fusto che rimangono asintomatiche (Minardi et al., 2012b). Inoltre Psa non sembra
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colonizzare l’apparato radicale, infatti anche se non sono stati effettuati studi specifici prove condotte nel corso degli studi hanno sempre confermato l’assenza del batterio a livello radicale.
Dal confronto dello stato di avanzamento della malattia con le temperature giornaliere e stagionali, è stato possibile definire che il comportamento policiclico della malattia è limitato da precisi “range” di temperatura, risultati che si vanno a sommare a quanto potuto osservare in merito alla ricerca di una finestra temporale ottimale per il prelievo dei “pianti” , per l’identificazione di Psa da piante di actinidia asintomatiche.
Le indagini condotte su materiale micropropagato confermano inoltre le ipotesi che imputano ad una non-controllata diffusione di materiale infetto la diffusione della malattia. Tutto il materiale micropropagato o derivato da micropropagati inoculati sperimentalmente si è sempre mostrato totalmente asintomatico ma positivo per la presenza del patogeno. Questo fatto conferma la gravità dell’uso di materiale non controllato sanitariamente per propagazioni massali indicando come una normale via di commercializzazione possa rappresentare una reale fonte di dispersione della malattia.
Il fenomeno del “pianto” preso in considerazione per la diagnosi preventiva, oltre ad essersi dimostrato utile offre anche aspetti versatili non di poco conto ai fini delle gestione in laboratorio del materiale di indagine. Le recenti metodiche proposte basate sull’analisi delle gemme dei nuovi tralci per anticipare ancora l’identificazione di Psa, si è mostrato funzionale e valido, ma sicuramente è accompagnato da un procedimento decisamente più laborioso (G.M. Balestra, comunicazione personale; P. Minardi, dati non pubblicati).
La pratica comunemente impiegata nella diagnostica di Psa in laboratorio fa ricorso all’isolamento del batterio da lesioni fogliari o da essudati presenti in fusto e/o branche. Nel corso degli isolamenti microbiologici di controllo effettuati da essudati batterici biancastri e rossi da piane adulte di actinidia in campo, è emerso come questi differiscano nell’origine; infatti dagli isolamenti microbiologici da essudati biancastri, è stato notato come fosse forte la presenza di un vero e proprio consorzio di più specie batteriche dove però Psa non figurava; dai secondi invece si è ottenuto Psa praticamente in coltura pura.
Durante il corso degli isolamenti microbiologici in piastra, in tutte le prove effettuate, è comunque emersa la necessità di studiare un substrato di crescita selettivo per Psa che possa accelerare la fase di riconoscimento microbiologico in piastra ed escluda o almeno riduca l’eventualità di non-identificare Psa in casi in cui siano
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presenti popolazioni microbiche ad alta densità nel campione come si verifica di solito con il progredire della stagione vegetativa (aprile-maggio).
La tecnica di PCR-“nested” messa a punto originariamente per il rilievo del patogeno dai “pianti è poi stata utilizzata routinariamente per l’identificazione di Psa, e si è dimostrata uno strumento utile per tutti gli aspetti di questa ricerca. L’efficacia e l’attendibilità di questo metodo sono sempre stati validati dai risultati coerenti ottenuti con gli altri metodi molecolari o microbiologici anche in diversi ambienti di coltivazione (Italia e Cile) ed in diverse matrici vegetali (campioni da germogli micropropagati, da piante adulte, da essudati e da “pianti”).
La sperimentazione ha permesso di ottenere informazioni utilizzabili in campo e che potranno essere trasferite agli utilizzatori finali, agricoltori, per accelerare la rimozione tempestiva delle piante infette dagli impianti di actinidia e ridurre o meglio eliminare la commercializzazione di materiali micropropagati e non infetti da Psa.
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