arruolati nello studio
Nessuna correlazione statististicamente significativa è stata rilevata tra la proteina GRP78/BiP e i diversi parametri clinico-sierologici presi in esame: Fattore Reumatoide (p-value= 0.64), Anticorpi anti-peptidi citrullinati ciclici (p-value= 0.51), VES (p-value= 0.12), PCR (p-value= 0.55) e DAS 44 (p-value= 0.36).
DISCUSSIONE
In questo studio abbiamo confrontato il profilo proteico salivare di pazienti affetti da AR, con quello di una popolazione selezionata di soggetti sani, confrontabili per sesso e per età, con lo scopo di rilevare specifici biomarkers salivari di malattia. L’analisi ha evidenziato che, anche se l’espressione di alcune delle più comuni proteine salivari è sostanzialmente simile nei pazienti con AR e nei controlli, tuttavia otto proteine sono risultate differentemente espresse: calgranulina A, calgranulina B, E-FABP, 6-PGDH, PRX5, Apo A-1, GRP78/BiP e proteine della famiglia 14-3-3.
Il dato più interessante che abbiamo osservato in questo studio è lo specifico e significativo aumento di espressione della chaperonina GRP78/BiP nei campioni di saliva di pazienti con AR: in questi ultimi, tale proteina è risultata aumentata di 7 volte rispetto ai sani ed il dato è stato confermato con metodiche di Western Blot, attraverso un confronto sia con il gruppo di controllo dei soggetti sani che con i pazienti affetti da artrite psoriasica. La GRP78/BiP appartiene alla famiglia delle heat-shock protein 70 (Hsp70) ed è una chaperonina contenuta nel reticolo endoplasmatico, coinvolta nel corretto assemblaggio delle proteine nascenti (134, 135); essa inoltre è stata implicata nella via non-classica di presentazione dell’antigene e nella regolazione della risposta citotossica delle cellule T CD8+, presentandosi come un possibile marker dello stress cellulare (63, 60). GRP78/BiP infine può essere secreta nello spazio extracellulare (135, 136). Numerose sono le prove che dimostrano come la GRP78/BiP possa essere sovraespressa nell’AR e giocare un ruolo di autoantigene nella malattia (135, 137). Alla base di questa sua aumentata espressione nella sinovia reumatoide, sembra esistere un’up-regulation legata a vari stimoli, quali l’anossia, l’ipoglicemia e la formazione di specie reattive dell’ossigeno (ROS) che caratterizzano il coinvolgimento articolare nell’AR. Nei
descritto una notevole sovraespressione della GRP78/BiP ed hanno rilevato che anticorpi specifici diretti verso la stessa GRP78/BiP erano presenti in più del 60% dei pazienti affetti. Inoltre lo stesso gruppo ha osservato che nell’AR i linfociti T reagiscono contro la GRP78/BiP.
Sempre nel 2001, Panayi et al. hanno dimostrato che tale chaperonina determina una proliferazione aumentata dei linfociti T sinoviali, specificamente nei pazienti con AR e non in pazienti con altre forme di artrite; inoltre più di recente essi hanno eseguito studi in vitro con cellule mononucleate di sangue umano periferico ed in vivo con modelli animali, dimostrando che la GRP78/BiP può:
- prevenire e trattare la progressione delle artriti collagene-indotte, - regolare l’infiammazione attraverso il rilascio di interleuchina-4 ed interleuchina-10, citochine anti-infiammatorie prodotte da monociti ed altre cellule;
- modulare le cellule T che determinano la risposta immune, esercitando una funzione immuno-regolatoria (137-142).
Vista dunque la forte relazione tra AR e GRP78/BiP, in questo studio preliminare l’identificazione dei livelli salivari di GRP78/BiP sottolinea l’importanza della saliva come potenziale sorgente di biomarkers diagnostici per l’AR, anche se il numero di pazienti arruolati non ci ha permesso di evidenziare una correlazione tra la proteina e i diversi parametri clinici e sierologici esaminati nell’AR.
In questo lavoro abbiamo anche riscontrato una sovra-espressione di due membri della famiglia delle proteine 14-3-3, un gruppo di proteine con sequenza aminoacidica altamente conservata e costituito da sette isoforme diverse denominate β, γ, ε, η, σ, θ e ζ (143, 144). Esse sono coinvolte in numerose funzioni intracellulari cruciali per la cellula stessa, quali il completamento del ciclo di replicazione, l’apoptosi, la regolazione della via di trasduzione del segnale, il traffico cellulare, l’assemblaggio e la degradazione proteica (145). Di recente è stata ipotizzata anche una funzione biologica rilevante a livello extracellulare per tale famiglia di proteine; in particolare Kilani et al. (146) hanno riscontrato livelli
considerate da tempo markers di danno strutturale articolare. Nella saliva dei pazienti con AR abbiamo documentato un incremento delle isoforme σ e γ, pari a due volte il loro valore normale e tale dato è stato confermato attraverso la metodica del Western Blot. A sostegno di tali risultati, abbiamo indagato circa la presenza di queste proteine anche nei campioni di saliva di pazienti affetti da artrite psoriasica; poiché non sono state evidenziate differenze significative rispetto ai pazienti con AR, si è ritenuto che le proteine in questione fossero correlate più con il coinvolgimento articolare in sé, che con la patogenesi dell’AR.
Un altro risultato interessante che è emerso dall’analisi proteomica della saliva è l’incremento, nei pazienti affetti da AR, dell’Apo A-1. Questa proteina, che si presenta come la principale HDL (high-density lipoproteins), si riscontra a livelli aumentati anche nel liquido sinoviale degli stessi pazienti affetti da AR; a tale livello essa sembra bloccare le interazioni tra i linfociti T e i monociti, causando una specifica inibizione della produzione di TNF-α ed IL-1β contatto-mediatada parte dei macrofagi (146, 147).
Si presenta in concentrazioni raddoppiate nei pazienti con AR anche E-FABP, una proteina citoplasmatica di 15 kDa che è stata in passato isolata e caratterizzata nei cheratinociti umani e che forma un legame altamente specifico con gli acidi grassi (FAs), trasportandoli in circolo (148). Oltre a presentarsi quale possibile proteina dello stress, fisiologicamente espressa durante la fase acuta del processo infiammatorio, essa è attualmente considerata un nuovo biomarker circolante di rischio cardio-metabolico (149). Il significato della sovraespressione della E-FABP nell’AR deve tuttavia essere ancora chiarito.
Per quanto riguarda le calgranuline A e B, i dati hanno mostrato un aumento nei pazienti con AR corrispondente a circa 3 volte il valore presente nei controlli sani. Le Calgranuline A e B appartengono alla famiglia delle proteine S100 leganti il Calcio e sono marker di attivazione dei fagociti (150). Dopo la secrezione da parte dei neutrofili e delle cellule attivate dai macrofagi, queste proteine, da sole o associate a formare eterodimeri, sembrano esser coinvolte nel processo di trasporto
bersaglio (150). Nell’AR tali proteine S100 sono significaticamente correlate con le concentrazioni sieriche della proteina C-reattiva (PCR), della metalloproteasi-3 della matrice (MMP-3) e degli anticorpi anti peptidi citrullinati ciclici. In realtà l’aumentata produzione di calgranulina A (S100A8) e di calgranulina B (S100A9) è stata riscontrata nel siero, nel liquido sinoviale e nei campioni bioptici di sinovia prelevati da pazienti affetti da molte altre malattie infiammatorie, reumatiche e non: artrite idiopatica giovanile, artrite psoriasica, spondilite anchilosante e malattie infiammatorie intestinali (120). In aggiunta, si è dimostrata un’up-regulation dei livelli salivari di calgranuline nei campioni di saliva prelevati da pazienti affetti da altri disordini autoimmuni sistemici, come la Sindrome di Sjögren e la Sclerosi Sistemica (128, 130). Da questo punto di vista, le calgranuline, anche se non sono totalmente specifiche per l’AR, possono esser considerate come un eccellente marker di flogosi sistemica.
Oltre alle calgranuline e all’E-FABP, in questo studio siamo riusciti a dimostrare la sovra espressione di altre due proteine correlate con lo stress ossidativo: la PRX5 e la 6-PGDH. La prima appartiene alla famiglia delle perossiredoxine, specifiche proteine antiossidanti dotate di gruppi tiolici che svolgono una funzione perossidasica, riducendo il perossido di idrogeno ed altri idroperossidi (151-153). Recentemente, sono stati descritti autoanticorpi diretti verso le perossiredoxine nei pazienti con AR, Lupus Eritematoso Sistemico, malattia di Behçet e vasculiti sistemiche; per tale motivo esse sono considerate come potenziali targets nelle malattie autoimmuni sistemiche (154). La 6-PGDH è invece una proteina enzimatica della classe delle ossido riduttasi che catalizza una reazione della via dei pentosi fosfati del metabolismo glucidico:
Attualmente, infatti, numerose sono le evidenze che suggeriscono un ruolo di tale stress ossidativo nella patogenesi dell’AR e le specie reattive dell’ossigeno sono state chiamate in causa principalmente nel danno delle cellule cartilaginee e nell’up- regulation dei mediatori della degradazione della matrice. Le ROS sono prodotte principalmente dai fagociti attivati durante i bursts ossidativi, ma anche durante la riperfusione post-ischemica sinoviale che segue il danno articolare; esse possono “attaccare” tutte le molecole biologiche incluse proteine, lipidi ed acidi nucleici, contribuendo attivamente al processo infiammatorio che coinvolge le articolazioni (156, 157).
La sovra espressione salivare di PRX5 e di 6-PGDH sottolinea la potenzialità della saliva di rispecchiare i diversi aspetti patogenetici di una malattia sistemica complessa come l’AR, incluso lo sbilanciamento dei fattori pro- ossidanti/antiossidanti in favore dei primi, che è stato notevolmente dimostrato nei numerosi diversi gruppi anche nel siero e nel liquido sinoviale.
CAPITOLO 6 - CONCLUSIONI
In conclusione, questo primo studio preliminare indirizzato alla ricerca dei biomarkers salivari nell’AR, aggiunge ulteriori prove delle potenzialità dell’analisi proteomica della saliva, eseguita combinando la 2DE e la MALDI-TOF/TOF, nella ricerca di specifici biomarkers delle malattie autoimmuni sistemiche.
Infatti i risultati ottenuti sono di particolare rilievo, considerando che i pazienti con AR e sindrome di Sjögren secondaria sono stati esclusi dallo studio; è possibile pertanto avanzare l’ipotesi che la saliva possa riflettere aspetti di un processo patologico sistemico, indipendentemente dalla presenza di un coinvolgimento delle ghiandole salivari. Alla luce di questo, l’identificazione nei campioni salivari, per la prima volta, della proteina GRP78/BiP, un biomarker dell’AR largamente dimostrato nel siero e nella sinovia dei pazienti affetti, risulta di notevole importanza.
Questo lavoro fornisce infine un razionale per avviare ulteriori studi mirati all’identificazione di markers nella saliva umana, che possano fornire indicazioni di significato diagnostico e terapeutico. In particolare possibili sviluppi dello studio potrebbero prevedere l’analisi dell’espressione delle proteine nelle diverse fasi dell’AR, alla ricerca di biomarkers in grado di identificare in fase iniziale la malattia stessa.
BIBLIOGRAFIA
1. Markenson JA. Worlwide trends in the socio-economic impact and long- term prognosis of Rheumatoid Arthritis. Sem Arthritis Rheum 1991; 21 (Supp. 1): 4-12.
2. C M Deighton, J Wentzel, G Cavanagh, D F Roberts, and D J Walker. Contribution of inherited factors to rheumatoid arthritis. Ann Rheum Dis. 1992 February; 51(2): 182–185.
3. Aho K; Koskenvuo M; Tuominen J; Kaprio J. Occurrence of rheumatoid arthritis in a nationwide series of twins. J Rheumatol 1986 Oct;13(5):899-902.
4. Silman AJ, MacGregor AJ, Thomson W, Holligan S, Carthy D, Farhan A, et al. Twin concordance rates for rheumatoid arthritis: results from a nationwide study. Br J Rheumatol 1993; 32: 903-907.
5. MacGregor AJ, Snieder H, Rigby AS et al. Characterizing the quantitative genetic contribution to rheumatoid arthritis using data from twins. Arthritis Rheum 2000;43:30–7.
6. Stastny P. Association of the B-cell alloantigen DRw4 with RA. N Engl J Med 1978; 298: 869-71.
7. Gregersen PK, Silver J, Winchester RJ. The shared epitope hypotesis. An approach to understanding the molecular genetics of susceptibility to RA. Arthritis Rheum 1987; 30: 1205-13.
8. Ollier W, Thomson W. Population genetics of RA. Rheum Dis Clin North Am 1992; 18: 741-59.
9. Crilly A, MaidenN, Capell HA, Madhock R. Genotyping for disease associated HLA-DRβ1 alleles and the need for early joint surgery in RA a quantitative evaluation. Ann Rheum Dis 1999; 58: 114-17.
10. Smith JB, Haynes MK. RA: a molecular understanding. Ann Intern Med 2002; 136: 908-22.
11. D Jaraquemada, W Ollier, J Awad, A Young, A Silman et al. HLA and rheumatoid arthritis: a combined analysis of 440 British patients. Annals of the Rheumatic Diseases, 1986; 45, 627-636.
12. T Olee, P M Yang, K A Siminovitch, N J Olsen, J Hillson, J Wu, F Kozin, D A Carson and P P Chen. Molecular basis of an autoantibody- associated restriction fragment length polymorphism that confers susceptibility to autoimmune diseases. J. Clin. Invest, 1991; 88(1): 193- 203.
13. Feldmann M, Brennan FM, Maini RN. Role of cytokines in rheumatoid arthritis. Annu Rev Immunol 1996; 14:397–440.
14. Elliott MJ, Maini RN, Feldmann M, Kalden JR, Antonio C, Smolen JJ, et al. Randomized double-blind comparison of chimeric monoclonal antibody to tumor necrosis factor alpha (cA2) versus placebo in rheumatoid arthritis. Lancet 1994; 344:1105–10.
15. A Martinez, M Fernandez-Arquero, DP Salcedo, L Conejero, H Alves, A Balsa ed E G. De La Concha. Primary association of Tumor Necrosis Factor-region genetic markers with susceptibility to Rheumatoid Arthritis. Arthritis & Rheumatism 2000; 43: 1366–1370.
16. Lundy SK, Sarkar S, Tesmer LA, Fox DA. Cells of the synovium in rheumatoid arthritis. T lymphocytes. Arthritis Res Ther., 2007; 9(1): 202.
17. Hazes JMW. Pregnancy and its effect on the risk of developing rheumatoid arthritis. Ann Rheum Dis 1991; 50:71.
18. Cutolo M, Otsa K, Yprus M, Seriolo B. Vitamin D and rheumatoid arthritis: comment on the letter by Nielen et al. Arthritis Rheum., 2007; 56(5):1719-20.
19. A Linos, VG. Kaklamani, E Kaklamani, et al. Dietary factors in relation to rheumatoid arthritis: a role for olive oil and cooked vegetables. Am J Clin Nutr, 1999; 70:1077-1082.
20. Karlson EW, Lee IM, Cook NR, Manson JE, Buring JE, Hennekens CH. A retrospective cohort study of cigarette smoking and risk of rheumatoid arthritis in female health professionals. Arthritis Rheum. 1999; 42:910– 917.
particularly in patients without a family history of RA. Ann Rheum Dis. 2001; 60:223–227.
22. Mattey DL, Dawes PT, Fisher J, Brownfield A, Thomson W, Hajeer AH, Ollier WE. Nodular disease in rheumatoid arthritis: association with cigarette smoking and HLA-DRB1/TNF gene interaction. J Rheumatol. 2002; 29:2313–2318.
23. Stolt P, Bengtsson C, Nordmark B, Lindblad S, Lundberg I, Klareskog L, Alfredsson L. Quantification of the influence of cigarette smoking on rheumatoid arthritis: results from a population based case-control study, using incident cases. Ann Rheum Dis. 2003; 62:835–841.
24. Albano SA, Santana-Sahagun E e Weisman MH. Cigarette smoking and rheumatoid arthritis. Seminars in Arthritis and Rheumatism, 2001; 31:146-159.
25. Padyukov L, Silva C, Stolt P, Alfredsson L e Klareskog L. A Gene – Environment Interaction Between Smoking and Shared Epitope Genes in HLA –DR Provides a High Risk of Seropositive Rheumatoid Arthritis. Arthritis Rheum, 2004; 50: 3085–92.
26. Klareskog L, Stolt P, Lundberg K et al. A New Model for an Etiology of Rheumatoid Arthritis Smoking May Trigger HLA –DR (Shared Epitope)–Restricted Immune Reactions to Autoantigens Modified by Citrullination. Arthritis Rheum, 2006; 54: 38-46.
27. Ray NB, Nieva DR, Seftor EA, Khalkhal-Ellis Z, Naides SJ. Induction of an invasive phenotype by human parvovirus B19 in normal human synovial fibroblasts. Arthritis Rheum 2001; 44: 1582-6.
28. Roudier J, Petersen J, Rhodes GH, Luka J, Carson DA. Susceptibility to rheumatoid arthritis maps to a T-cell epitope shared by the HLA-Dw4 DR β-1 chain and the Epstein-Barr virus gly-coprotein gp110. Proc Natl Acad Sci USA. 1989; 86:5104–5108.
29. Lotz M, Roudier J. Epstein-Barr virus and rheumatoid arthritis: cellular and molecular aspects. Rheumatol Int. 1989; 9:147–152.
30. Ebringer A, Cunningham P, Ahmadi K, Wrigglesworth J, Hosseini R, Wilson C. Sequence similarity between HLA-DR1 and DR4 subtypes
associated with RA and Proteus/Serratia membrane haemolysins. Ann Rheum Dis 1992; 51: 1245-6.
31. BA Torres, S Kominsky, GQ Perrin, AC Hobeika and HM Johnson. Superantigens: The Good, the Bad, and the Ugly, 2001. Experimental Biology and Medicine 226:164-176.
32. Buckley CD, Amft N, Bradfield PF, Pilling D et al. Persistent induction of the chemokine receptor CXCR4 by TGF-beta1 on synovial T cells contributes to their accumulation within the rheumatoid synovium. J Immunol 2000; 165: 3423-9.
33. Kinne RW, Kinne EP, Emmrich F. T-cells in the pathogenesis of rheumatoid arthritis. Villains and accomplices? Biochem Biophys Acta 1997; 1360:109-41.
34. Banchereau J, Steinman RM. Dendritic cells and the control of immunity. Nature 1998; 392: 245-52.
35. MacPherson, G. G., Jenkins, C. D., Stein, M. J., Edwards, C. Endotoxin- mediated dendritic cell release from the intestine. Characteriza-tion of released dendritic cells and TNF dependence. J. Immunol. 1995; 154: 1317–1322.
36. Paleolog, E. M., Hunt, M., Elliott, M. J., Feldmann, M., Maini, R. N., Woody, J. N. Deactivation of vascular endothelium by monoclonal anti- tumor necrosis factor alpha antibody in rheumatoid arthritis. Arthr. Rheum. 1996; 39: 1082–1091.
37. Ernest H.S. Choy, M.D., and Gabriel S. Panayi, M.D., Sc.D. Cytokine Pathways and Joint Inflammation in Rheumatoid Arthritis. N Engl J Med, 2001; 344: 907-916.
38. Klimiuk PA, Sierakowski S, Latosiewicz R, Cylwik JP, Cylwik B, Skowronski J, et al. Soluble adhesion molecules (ICAM-1, VCAM-1, and E-selectin) and vascular endothelial growth factor (VEGF) in patients with distinct variants of rheumatoid synovitis. Ann Rheum Dis, 2002; 61: 804-9.
soluble tumour necrosis factor receptors in patients with different patterns of rheumatoid synovitis. Ann Rheum Dis, 2003; 62: 472-5. 40. Isler P, Vey E, Zhang JH, Dayer JM. Cell surface glycoproteins
expressed on activated human T cells induce production of interleukin-1 beta by monocytic cells: A possible role of CD69. European Cytokine Network 1993; 4: 15-23.
41. Kong YY, Feige U, Sarosi I, et al. Activated T cells regulate bone loss and joint destruction in adjuvant arthritis through osteoprotegerin ligand. Nature 1999; 402:304-309.
42. Taylor PC. Serum vascular markers and vascular imaging in assessment of rheumatoid arthritis disease activity and response to therapy. Rheumatology 2005; 44(6):721-728.
43. Smolen JS. Autoantibodies in rheumatoid arthritis. In: van Venrooij WJ, Maini RN (eds). Manual of biological markers of disease. Dordrecht: Kluwer Academic Publishers, 1996; 1–18.
44. Zhang Z, Bridges SL Jr. Pathogenesis of rheumatoid arthritis. Role of B lymphocytes. Rheum Dis Clin North Am 2001; 27:335–53.
45. Van Zeben D, Hazes HM, Zwinderman AH et al. Clinical significance of rheumatoid factors in early rheumatoid arthritis: results of a follow up study. Ann Rheum Dis, 1992; 51:1029–35.
46. G. S. Panayi. B cells: a fundamental role in the pathogenesis of rheumatoid arthritis? Rheumatology, 2005; 44 (Suppl. 2):ii3–ii7.
47. Kaufmann SHE. Heat-shock proteins: a link. between rheumatoid arthritis and infection? Curr Opin Rheumatol, 1990; 2:420.
48. Corrigall VM, Panayi GS. Autoantigens and immune pathways in rheumatoid arthritis. Crit Rev Immunol., 2002; 22(4):281-93.
49. Nienhuis RLF, Mandema EA. A new serum factor in patients with rheumatoid arthritis. The Antiperinuclear factor. Ann Rheum Dis, 1964; 23: 302-5.
50. Hoet RM, van Venrooij WJ. The antiperinuclear factor (APF) and antikeratin antibodies (AKA) in rheumatoid arthritis. In: Smolen JS, Kalden JR, Maini RN, eds. Rheumatoid arthritis. Berlin, Heidelberg:
51. Goldbach-Mansky R, Lee J, Hoxworth J, Yarboro C, Smolen JS, Steiner G, et al. Rheumatoid arthritis associated autoantibodies in patients with sinovitis of recent onset. Arthritis Res, 2000; 2: 236-43.
52. Sebbag M, Simon M, Vincent C, Masson-Bessière, Girbal E, Durieux JJ, et al. The Antiperinuclear factor and the so called antikeratin antibodies are the same rheumatoid arthritis-specific autoantibodies. J Clin Invest, 1995; 95: 2672-9.
53. Dale BA, Resing KA, Haydock PV, Fillaggrins. In cellular and molecular biology of intermediate filaments. Goldman RD, Steinert Pm, editors, Plenum Publishing Corporation, New Jork/London, 1992; 393- 412.
54. Schellekens GA, De Jong BAW, Van de Hoogen FHJ, Van de Putte LBA, Van Venrooij WJ. Citrulline is an essential constituent of antigenic determinants recognized by rheumatoid arthritis-specific autoantibodies. J Clin Invest, 1998; 101: 273-7.
55. Masson-Bessière C, Sebbag M, Durieux JJ, Nogueira L, Vincent C, Girbal-Neuhauser E, et al. In the rheumatoid pannus, antifillagrin autoantibodies are produced by local plasma cells and constitute a higher proportion of IgG than in synovial fluid and serum. Clin Exp Immunol, 2000; 119: 544-52.
56. Bizzaro N, Mazzanti G, Tonutti E, Villalta D, Tozzoli R. Diagnostic accuracy of Anti-citrulline antibody assay for rheumatoid arthritis. Clinical Chemistry, 2001; 47: 1089-93.
57. Schellekens GA, Visser H, De Jong BA, Van de Hoogen FH, Hazes JM, Breedveld FC, et al. The diagnostic properties of rheumatoid arthritis recognizing a cyclic citrullinated peptide. Arthritis Rheum, 2000; 43: 155-63.
58. Erre GL, Tocco A, Faedda R, Cossu A, Carcassi A. Diagnostic and prognostic value of antibodies to cyclic citrullinated peptide (Anti-CCP) in rheumatoid arthritis. Rheum, 2004; 56(2):118-123.
chaperone BiP is an autoantigen for rheumatoid arthritis and prevents the induction of experimental arthritis. J Immunol, 2001; 166: 1492-8. 60. Melnick J, Argon Y. Molecular chaperones and the biosynthesis of
antigen receptors. Immunol Today, 1995; 16:243–50.
61. Jamora C, Dennert G, Lee AS. Inhibition of tumor progression by suppression of stress protein GRP78/BiP induction in fibrosarcoma B/C10ME. Proc Natl Acad Sci U S A, 1997; 93:7690–4.
62. Bläss S, Union A, Raymackers J, Schumann F, Ungethüm U, Müller- Steinbach S, De Keyser F, Engel JM, Burmester GR. The Stress Protein BiP Is Overexpressed and Is a Major B and T Cell Target in Rheumatoid Arthritis. Arth & Rheum, 2001; 44: 761–771.
63. Herve CA, Wait R, Venables PJ. Glucose-6-phosphate isomerase is not a specific autoantigen in rheumatoid arthritis. Rheumatology, 2003; 42: 986–988.
64. Despres N, Boire G, Lopez-Longo FJ, Menard HA. The Sa system: a novel antigen–antibody system specific for rheumatoid arthritis. J Rheumatol, 1994; 21:1027-1033.
65. Hueber W, Hassfeld W, Smolen JS, Steiner G. Sensitivity and specificity of anti-Sa autoantibodies for rheumatoid arthritis. Rheumatology (Oxford), 1999; 38:155-159.
66. Hayem G, De Bandt M, Palazzo E, Roux S, Combe B, Eliaou JF, Sany J, Kahn MF, Meyer O. Anti-Sa antibody is an accurate diagnostic and prognostic marker in adult rheumatoid arthritis. J Rheumatol, 1999; 26:7-13.
67. Hassfeld W, Steiner G, Hartmuth K, Kolar Z, Scherak O, Graninger W, Thumb N, Smolen J. Demonstration of a new antinuclear antibody (anti-RA33) that is highly specific for rheumatoid arthritis. Arthritis Rheum, 1989, 32:1515-1520.
68. Steiner G, Hartmuth K, Skriner K, Maurer-Fogy I, Sinski A, Thal-mann E, Hassfeld W, Barta A, Smolen JS. Purification and partial sequencing of the nuclear autoantigen RA33 shows that it is indistinguishable from the A2 protein of the heterogeneous nuclear ribonucleoprotein complex.
69. Hassfeld W, Steiner G, Studnicka-Benke A, Skriner K, Graninger W, Fischer I. Autoimmune response to the spliceosome. An immunologic link between rheumatoid arthritis, mixed connective tissue disease, and systemic lupus erythematosus. Arthritis Rheum, 1995; 38:777-785. 70. Dumortier H, Monneaux F, Jahn-Schmid B, Briand JP, Skriner K,
Cohen PL, Smolen JS, Steiner G, Muller S. B and T cell responses to the spliceosomal heterogeneous nuclear ribonucleoproteins A2 and B1 in normal and lupus mice. J Immunol, 2000; 165: 2297-2305.
71. Steiner and Smolen. Arthritis, Res 2002; 4(Suppl.2): S1. doi:10.1186/ar551.
72. Fauci A, Braunwald E, Kasper DL, Hauser SL, Longo DL, Jameson JL.