Dicentrarchus labrax Diplectanum aequans

Dicentrarchus labrax (L.) è la seconda specie marina più importante per gli allevamenti ittici in Italia, con una produzione di 3.683 tonnellate in ambienti di transizione e di 2.774 tonnellate in ambiente marino e, per quanto attiene al valore della produzione, rispettivamente 35.772,5 e 26.630,8 migliaia di dollari (FAO, 2010). La produzione risente di perdite annuali dell’ordine del 5– 10% che avvengono in primavera probabilmente a causa dell’infestazione da Diplectanum aequans Il genere Diplectanum è il più numeroso della famiglia Diplectanidae (Hayward, 1996) ed è ampiamente distribuito nel Mediterraneo e nelle aree dell’Atlantico che coincidono con le zone di presenza dell’ospite. D. aequans è la specie parassita più comune nei branzini sia di allevamento sia di ambiente naturale.

I monogenei sono diffusi nel Mediterraneo e a loro è stata attribuita la mortalità di diverse specie allevate: ne sono esempi Microcotyle Van Beneden and Hesse 1863 in Sparus aurata L. (Sanz, 1992; Alvarez-Pellitero and Crespo, 1995; Padrós and Crespo, 1995) e Zeuxapta seriolae (Meserve 1938) in Seriola dumerili Risso (Grau et al., 2003; Montero et al., 2004). Sebbene il presente studio riporti dati sulla mortalità di D. labrax dovuta a D. aequans, le infestazioni di D. laubieri Lambert and Maillard 1974, sono considerate più dannose per l’ospite (Alvarez-Pellitero, 2004).

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Le infestazioni da monogenei, con il loro sistema di ancoraggio e di alimentazione, possono indurre una varietà di modificazioni istopatologiche a carico dell’epitelio, favorendo così l’instaurarsi di sovrainfezioni secondarie causate da funghi, batteri e/o virus (Stoskopf, 1993; Cone, 1995). In letteratura sono ben documentati i danni istologici provocati da varie specie di monogenei (Hayward et al., 2001; Padrós et al., 2001; Ogawa, 2002; Buchmann et al., 2004; Montero et al., 2004; Mansell et al., 2005).

I lavori di Oliver (1977) e González-Lanza et al. (1991), incentrati specificamente sulle infestazioni da D. aequans nel branzino, non includono però nessuna descrizione della reazione dell’ospite. In questa ricerca invece, è stata fatta particolare attenzione alla risposta cellulare dei pesci. Nel sito di ancoraggio del parassita e nelle sue immediate vicinanze non si è documentata una elevata presenza di MCs e neutrofili, a differenza di quanto visto nelle branchie di Abramis brama infestati dal crostaceo Ergasilus sieboldi, il quale nel punto di attacco scatenava un’intensa reazione con abbondanza di cellule immunitarie (MCs e neutrofili).

Per arginare l’epidemia da Diplectanum aequans nel suo ospite Dicentrarchus labrax sono stati testati diversi trattamenti zooprofilattici e chemioterapici (Silan et al., 1996) e sono stati studiati l’effetto della temperatura nelle dinamiche di infestazione e l’impatto della disidratazione nella schiusa delle uova dei parassiti (Cecchini et al., 2003).

Nei pesci le branchie costituiscono la prima linea di contatto con l’ambiente esterno e la sede in cui avvengono processi fisiologici cruciali quali lo scambio gassoso, la regolazione ionica e l’escrezione di ammonio (Das et al., 2006). I pesci allevati sviluppano spesso forti infestazioni da monogenei, che inducono iperplasia e fusione delle lamelle branchiali con la formazione di foci infiammatori e infiltrazione di cellule leucocitarie (Kritsky and Stephens, 2001). Generalmente la presenza dei monogenei stimola nel tessuto dell’ospite un’elevata produzione di muco, che costituisce un primo meccanismo di difesa in risposta alla parassitosi (Jones, 2001). Il muco contiene diverse sostanze con proprietà antimicrobiche o biostatiche, le quali gli conferiscono un ruolo importante nella difesa contro i parassiti (Ross et al., 2000). L’eccesso di muco tuttavia può rivelarsi nocivo per l’ospite in quanto può causare ipossia (Chaves et al., 2006). Nel nostro studio, le branchie parassitate si presentavano ricoperte da un essudato mucoso biancastro e l’osservazione al microscopio elettronico a trasmissione ha rivelato un’iperplasia delle cellule mucose.

I pesci possono organizzare una risposta protettiva contro i monogenei (Lindenstrøm et al., 2003; Faliex et al., 2008) e in alcuni casi addirittura riuscire a eliminare l’infestazione (Buchmann and Lindenstrøm, 2002; Lindenstrøm et al., 2003). Secondo Buchmann (1999), questi parassiti inducono l’espressione di enzimi che attivano la risposta infiammatoria, favorendo così la morte stessa del monogeneo. Diversi tipi di leucociti sono coinvolti nella regolazione delle funzioni

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immunologiche nei pesci (Santhakumar et al., 1999; Kritsky and Stephens, 2001) e questo studio si è focalizzato in particolare sulle MCs.

Le MCs sembrano essere presenti in tutti, o quasi, i teleostei, in vari tessuti e organi (fra cui canale alimentare, pelle, branchie) (Ezeasor and Stokoe, 1980; Ellis, 1985; Mazon et al., 2007; Murray et al., 2007; Dezfuli et al., 2008a), soprattutto in regioni ad elevato rischio infiammatorio, dovuto a infezioni batteriche e parassitarie (Reimschuessel et al., 1987; Sharp et al., 1989; Dezfuli et al., 2008a, b, 2009a, b). Si tratta di cellule mobili che sono state osservate spesso all’interno o nelle immediate vicinanze dei capillari (Vallejo and Ellis, 1989; Reite and Evensen, 2006). Vi sono prove della loro capacità migratoria nelle branchie di Oncorhynchus mykiss infettate da Vibrio anguillarum (Powell et al., 1990). L’associazione delle MCs alle cellule endoteliali dei capillari suggerisce che esse possano migrare attraverso l’endotelio (Powell et al., 1990; Murray et al., 2007). Le MCs si spostano inoltre attraverso la microcircolazione delle branchie, la quale permette una rapida diffusione nel tessuto branchiale (Powell et al., 1990). In tutti i vertebrati le MCs sono strategicamente collocate in posizione perivascolare per regolare la risposta infiammatoria (Mekori, 2004) e questo suggerisce che le branchie siano fondamentali per il sistema immunitario innato, scatenando una risposta immediata verso i patogeni (Flaño et al., 1996; Campos-Perez et al., 2000). Le MCs possono spostarsi attraverso il tessuto connettivo lasso degli archi branchiali e alcuni autori hanno ipotizzato la presenza di una popolazione residente (Noya and Lamas, 1997; Murray et al., 2007) e di una circolante (Powell et al., 1990; Murray et al., 2007; Dezfuli et al., 2008a). Il grado di infiltrazione delle MCs (aumento del loro numero) viene tipicamente utilizzato per valutare se queste cellule siano coinvolte nella risposta dell’ospite (Dezfuli et al., 2008a, 2009a, b). In questa ricerca il numero delle MCs positive per le piscidine 3 e 4 non aumentava nelle branchie parassitate da D. aequans rispetto a quelle dei sani, ma l’intensità della marcatura delle MCs era più forte nei parassitati (indipendentemente dall’intensità di infestazione e dalla vicinanza del parassita) rispetto agli esemplari sani. Anche se ulteriori indagini sono necessarie per confermare questi risultati, si può ipotizzare che la concentrazione delle piscidine nel tessuto parassitato aumenti, non per la proliferazione delle MCs, ma perché le MCs sono stimolate ad aumentare l’espressione/sintesi di questi peptidi antimicrobici (Dezfuli et al., 2010b). Le variazioni nel numero delle MCs nel tessuto non sarebbero quindi sempre un buon metodo per valutare il coinvolgimento di queste cellule nella reazione infiammatoria.

Molte ricerche hanno dimostrato che, a seguito dell’esposizione a vari agenti stimolanti e patogeni, le MCs degranulano rilasciando il loro contenuto (Ellis, 1985; Sharp et al., 1989; Vallejo and Ellis, 1989; Powell et al., 1990; Flaño et al., 1996; Murray et al., 2007; Dezfuli et al., 2008b;

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Manera et al., 2011). Nel nostro studio non si è evidenziato rilascio di granuli delle MCs né nelle branchie sane né in quelle parassitate.

Le somiglianze funzionali tra le MCs dei pesci e quelle dei mammiferi hanno stimolato gli studi volti a scoprire il contenuto dei granuli delle MCs dei pesci. Le MCs dei mammiferi sono molto eterogenee e comprendono popolazioni che si diversificano tra loro per caratteristiche istochimiche, biochimiche e funzionali (Welle, 1997; Corrales et al., 2009). Nei pesci questa eterogeneità è stata descritta da Mulero et al. (2008a).

Recentemente si è scoperto che l’istamina è presente nei granuli delle MCs dei pesci perciformi, il più grande e più evoluto ordine di teleostei (Mulero et al., 2007), e che essa regola la risposta infiammatoria (Noya and Lamas, 1997). Diversi lavori hanno documentato che le MCs delle branchie e dell’intestino producono peptidi antimicrobici, come le pleurocidine (Secombes, 1996; Murray et al., 2007) e le piscidine (Silphaduang and Noga, 2001; Noga and Silphaduang, 2003; Silphaduang et al., 2006), e questo fa ipotizzare che le MCs siano direttamente coinvolte nell’uccisione dei microbi. Silphaduang et al. (2006), hanno suggerito che, se i granuli non vengono rilasciati dalle MCs tramite il fenomeno della degranulazione, le piscidine in essi contenute potrebbero agire a livello intracellulare sui microbi fagocitati. Secondo quanto riportato da Murray et al. (2007), le MCs potrebbero essere direttamente coinvolte nella distruzione dei patogeni e svolgere un ruolo multifunzionale nell’immunità dei teleostei.