Le infezioni da T. gondii sono ampiamente diffuse nell'uomo e negli animali in tutto il mondo (Jones at al., 2012). Le infezioni decorrono spesso in forma asintomatica nei soggetti immunocompetenti, ma la trasmissione verticale negli esseri umani può portare all’aborto, alla morte neonatale o ad anomalie fetali con grave coinvolgimento del sistema nervoso centrale con calcificazioni cerebrali e idrocefalo (Havelaar et al.,2007); nei bambini che sopravvivono alla infezione prenatale si può avere una significativa riduzione della qualità della vita con possibile insorgenza di sintomatologia tardiva, ad esempio corioretinite, epilessia, ritardo intellettivo, strabismo, sordità, durante l’infanzia o l’adolescenza. Negli individui immunocompromessi la toxoplasmosi può causare encefaliti, polmoniti anche mortali (Ajzenberg et al., 2009). La Toxoplasmosi disseminata può anche complicare i trapianti d’organo o di midollo osseo: ci possono essere problemi quando viene trapiantato un organo da un donatore infetto a un ricevente suscettibile oppure alla riattivazione di un’infezione latente di un ricevente dovuta a un trattamento immunosoppressivo. La toxoplasmosi acuta in esseri umani è stata associata al consumo di latte di capra crudo (Riemann et al., 1975; Sacks et al., 1982; Skinner et al., 1990), ma qualsiasi tipo di latte è potenzialmente fonte di infezione se consumato crudo. Nel corso degli ultimi cinque decenni, gli asini autoctoni italiani (Equus asinus) hanno sofferto di una grave riduzione della dimensione della popolazione, che ha portato all'estinzione di sei razze (Kugler et al., 2008). Allo stato attuale ritroviamo in Italia 9 razze tutte classificate dalla FAO come a rischio di estinzione; queste includono l’ Asino Amiatino , l’Asino Argentato di Sologno, l’ Asino dell'Asinara, l’Asino di Martina Franca , l’Asino di Pantelleria ,l’ Asino Ragusano, l’ Asino Romagnolo, l’ Asino Sardo e l’Asino Grigio Siciliano. Di conseguenza, le istituzioni pubbliche italiane e le associazioni di allevatori privati, hanno fatto notevoli sforzi per preservare le razze autoctone ancora esistenti promuovendo l'uso di tutte le rimanenti razze italiane di asini in attività ricreative (agriturismo, trekking) e onoterapia (soprattutto con bambini), così come nella produzione di carne ( salumi , spezzatino ) e di latte ( industria cosmetica , nutrizione umana) (Milonis et al., 2011) . La composizione del latte d'asina è il più vicino al latte di donna (relativamente povera di proteine e grassi ma ricco di lattosio) e può essere usato come un possibile sostituto per neonati, bambini e adulti con allergia IgE mediata al latte vaccino. Il latte d'asina è consigliato anche come aiuto nella prevenzione di aterosclerosi (Tafaro et al., 2007) e nella terapia del tumore (Mao et al., 2009) . In Italia , gli agricoltori sono tenuti a seguire buone pratiche igieniche, ma non ci sono regole specifiche per l'allevamento dell’asino e la produzione di latte. Secondo la legislazione europea esistente (reg. CE 853/2004 e 1662/2006 ), il latte crudo di qualsiasi specie può essere venduto subito dopo la mungitura e
direttamente dal produttore al consumatore ,o da un venditore di latte locale, che a sua volta è il fornitore, al consumatore finale, senza alcun trattamento termico tranne refrigerazione tra 0 e 4 °C (Salimei et al., 2010) . Dato che, recentemente, il latte d'asina è sempre più apprezzato per le sue qualità nutritive, conoscenze sulla sicurezza, qualità e igiene del latte può diventare di cruciale importanza per alcune categorie di consumatori (soggetti immunocompromessi , anziani, convalescenti, bambini con allergia al latte di mucca , o neonati quando l'allattamento al seno non è possibile). Recentemente, la presenza e la vitalità di T. gondii sono state rilevate nel latte crudo di pecore, di capre, di bufale, di bovine e di cammelle.
In questo studio, anticorpi contro T. gondii sono stati trovati in 11 di 44 asini con titoli anticorpali di 1/160 ( n = 2 ) , 1/80 ( n = 1 ) , 1/40 ( n = 3 ) e 1/ 20 ( n = 5 ) . Il DNA di T. gondii è stato ritrovato nel sangue di 6 e nel latte di 3 asini sieropositivi ( di 8 , 11 e 14 anni , rispettivamente). Queste ultime 3 asine sono state sottoposte ad altri due prelievi di sangue e di latte per valutare la durata di escrezione del parassita e si è visto che il movimento anticorpale e la presenza di DNA in sangue e latte variava notevolmente tra i 3 animali. La asina 27 è passata da un titolo anticorpale di 1:40 ad un titolo di 1:160 a distanza di 1 mese mentre il DNA era presente nel sangue e nel latte ancora dopo 15 giorni e nel sangue dopo addirittura 1 mese. La asina 30 ha avuto invece un calo del titolo da 1:160 a 1:80 e dopo già 15 giorni non si è rilevato DNA né nel sangue né nel latte. Situazione ancora differente è stata ritrovata nella asina 31 che ha avuto un abbassamento del titolo da 1:40 a 1:20 ma una positività alla nested-PCR sia del sangue che del latte dopo 20 giorni, ma entrambi negativi al trentesimo giorno. Ovviamente 3 casi sono veramente pochi per poter giungere a conclusioni, però possiamo affermare che in questo studio non si è notata una correlazione tra titolo anticorpale ed escrezione del parassita. Anche se non abbiamo avuto l'amplificazione di tutti i marcatori, i dati disponibili indicano la presenza del genotipo III ( n = 5) e II ( n = 1 ). Per quel che ci risulta, questo è il primo studio di ricerca di DNA di T. gondii in campioni di sangue e di latte di asini, di valutazione della durata di escrezione e la sua genotipizzazione in questa specie ospite. La sieroprevalenza di T.gondii nell’asino è risultata alta in molti studi: nel 1998 El-Ghaysh ha riscontrato in Egitto
risultati dei prelievi che sono stati ripetuti nelle asine che erano positive alla nested-PCR nel latte, e non sembra esserci correlazione tra movimento del titolo anticorpale e escrezione del parassita. Escrezione irregolare di DNA parassitario (e quindi forse anche di tachizoiti) è stato segnalato nella pecora naturalmente infetta (Camossi et al., 2011), in cui è stata formulata l’ipotesi che nel periodo del periparto tachizoiti si possano liberare dalle cisti e possano quindi essere escreti nel latte. Attualmente non si sa sotto quale forma infettante venga escreto T.gondii nel latte, ma si presume essere il tachizoita. Non abbiamo fatto alcun tentativo per stabilire se alla presenza del DNA corrispondeva la vitalità del parassita, ma in un recente studio effettuato in Iran, il 5,7 % dei campioni di latte crudo provenienti da bovini, ovini, caprini, bufali e cammelli allevamenti presentavano T. gondii vitale come evidenziato con la prova biologica sui gatti (Dehkordi e al., 2013). Il consumo di latte crudo è stato epidemiologicamente collegato a toxoplasmosi clinica negli esseri umani , a volte con gravi conseguenze. Ulteriori studi sono necessari per determinare la vitalità di T.gondii nel latte e le sue modalità di escrezione. I risultati del presente studio, così come quelli degli altri sopracitati, suggeriscono la possibilità di trasmissione della toxoplasmosi all'uomo attraverso il consumo di latte crudo non solo di capra, ma anche delle altre specie animali. Questo dato riveste particolare importanza in particolar modo per il latte delle specie animali che viene consumato crudo.
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RINGRAZIAMENTI
Faccio i più sinceri ringraziamenti a tutti coloro che mi hanno aiutato nello svolgimento di questo lavoro, in particolare alla Professoressa Francesca Mancianti, per la fiducia che ha nuovamente riposto in me e per la sua incredibile disponibilità e competenza, alla Dottoressa Simona Nardoni per la sua costante presenza, alla Dottoressa Linda Mugnaini e al Dottore Guido Rocchigiani per il lavoro svolto in laboratorio e per l’aiuto che mi hanno dato, alla Professoressa Mina Martini e alle Dottoresse Federica Salari e Iolanda Altomonte per i campioni che mi hanno procurato e per la loro professionalità e gentilezza nel darmi nozioni utili sul latte di asina .
Ringrazio la mia famiglia per il supporto e la pazienza…
Ringrazio Erika per aver condiviso con me questo viaggio e per l’amicizia che ci lega…
Ringrazio tutti i miei compagni di corso che hanno “alleggerito” con la loro simpatia molte giornate pesanti…
Il ringraziamento più grande è per mio figlio Luca che mi ha dato la forza di raggiungere questo traguardo…