DISCUSSIONE E CONCLUSION

Lo studio del DAT nei linfociti può essere molto rilevante nel settore della ricerca sui disturbi neuropsichiatrici associati ad un’alterata regolazione della neurotrasmissione dopaminergica, quali depressione, ansia, psicosi, in quanto può permettere di disporre di un “marker periferico” da mettere in correlazione con i parametri clinici relativi alla patologia psichiatrica.

Inoltre, lo studio del DAT linfocitario potrebbe rivelarsi utile per valutare il sistema dopaminergico anche in condizioni fisiologiche; infatti, un’elevata attività del sistema dopaminergico, valutata in maniera piuttosto indiretta, è stata collegata ad un tipo particolare di personalità che si definisce “sensation seeker”, che connota individui curiosi, amanti del rischio e delle sensazioni forti. Studi precedenti focalizzati sulla caratterizzazione del DAT sui linfociti e sulle piastrine mediante saggi di binding del 3_{H-GBR 12935, riportano risultati}

paragonabili a quelli ottenuti in altri studi che avevano caratterizzato questo sistema nel cervello ed in tessuti periferici, anche se è emersa una non completa selettività di questo radioligando per il DAT [Gordon et al. 1994].

La nostra ricerca è il primo studio ad avere evidenziato la presenza del DAT in membrane linfocitarie umane, mediante il binding del 3_{H-WIN-35428, ligando}

specifico e selettivo per questa proteina [Aloyo et al.,1995].

saturabile per il DAT sulle membrane linfocitarie dei soggetti sani e dei pazienti con disturbi psicotici inseriti nel nostro studio. Il numero di Hill vicino all’unità conferma l’esistenza di un solo sito di legame che corrisponde esattamente alla proteina di trasporto della dopamina.

I dosaggi effettuati sulle membrane linfocitarie dei pazienti hanno evidenziato una riduzione della densità del DAT e questa è la prima dimostrazione di un’alterazione del DAT in linfociti di pazienti psicotici.

In altri studi era stata riportata una riduzione dell’immunoreattività del DAT in cellule mononucleate del sangue in vari disturbi neurologici, come il morbo di Parkinson [Buttarelli et al.,2006] e la sclerosi laterale amiotrofica [Caronti et al.,2001; Pellicano et al., 2007].

I nostri risultati possono essere considerati in accordo con quelli derivanti da studi di imaging “in vivo”, che mostrano una riduzione della disponibilità del DAT nello striato e nelle regioni corticali di pazienti psicotici. [Laakso et al.,2001; Sekine et al., 2001,2003; Sjoholm et al., 2004; Mateos te al., 2005,2006,2007]. Per quanto riguarda le cellule periferiche, le informazioni disponibili sul DAT nei disturbi psicotici sono molto scarse: è stato riportato un ridotto re-uptake della

3_{H-dopamina in piastrine di pazienti schizofrenici [Rotman et al., 1980; Rabey et}

al., 1992; Dean et al., 1992] ma questi dati sono discutibili per la possibile contaminazione del trasportatore della serotonina (5-HT), presente in alta densità nelle piastrine.

fosse troppo piccolo per effettuare analisi statistiche affidabili, non abbiamo notato nessuna differenza tra pazienti trattati e non trattati. Ciò potrebbe evidenziare comunque, che gli stabilizzanti dell’umore e le benzodiazepine, non sembrano interferire con i parametri del binding del 3_{H-WIN-35,428, almeno in}

vitro [Amenta et al.,1999].

Sebbene uno studio di Tomografia ad emissione di fotone singolo (SPECT) non abbia dimostrato differenze di densità del DAT nello striato tra pazienti trattati e non trattati [Stamenkovic et al., 2001], la maggior parte degli studi riportano una densità del DAT striatale più bassa in pazienti schizofrenici trattati, rispetto ai soggetti sani di controllo o a pazienti con morbo di Parkinson [Laakso et al., 2001; Sjoholm et al., 2004; Mateos et al., 2005,2006], mentre i pazienti schizofrenici “drug-free”, sembrano non essere distinguibili dai soggetti sani di controllo [Hsiao et al., 2003; Yang et al., 2004; Schmitt et al., 2005,2006; Mateos et al., 2007].

Sebbene il nostro metodo di estrazione e purificazione dei linfociti dal sangue intero sia stato accurato, consentendoci di escludere la presenza di altre cellule del sangue, non abbiamo potuto distinguere i linfociti estratti in sottopopolazioni B o T: potrebbe essere possibile che differenti sottopopolazioni linfocitarie, in diverse condizioni (attivati o non attivati) mostrino una diversa distribuzione del DAT, studi futuri potrebbero aiutarci a chiarire meglio questa questione.

Possiamo comunque formulare l’ipotesi che un’alterazione nella densità delle proteine trasportatrici della dopamina (riscontrata a livello delle cellule ematiche

periferiche) potrebbe, qualora si manifestasse anche a livello centrale, avere importanti effetti sulla disponibilità intrasinaptica della dopamina, il che potrebbe essere alla base dei sintomi osservati in diversi disturbi psichiatrici. Tuttavia, al momento, non possiamo escludere la possibilità che la diminuzione della densità del DAT possa rappresentare un elemento compensatorio piuttosto che un fenomeno primario.

Per quanto riguarda il tipo di “modello periferico” che abbiamo scelto di studiare, ovvero i linfociti, ulteriori studi potrebbero permetterci di valutare l’espressione del DAT mediante tecniche di biologia molecolare. Infatti, la presenza del DAT in cellule nucleate quali i linfociti, potrebbe facilitare lo studio anche da un punto di vista genetico di questa struttura e la regolazione dei suoi processi trascrizionali in periferia, sebbene vi sia la possibilità che il DAT possa essere regolato diversamente in cellule nucleate e in cellule non-nucleate così come nel sangue rispetto al SNC.

Studi futuri con tecniche di ibridazione in-situ potrebbero consentire di determinare se una riduzione del legame del 3_{H-WIN-35,428 sia dovuta o}

meno ad una alterata espressione della proteina di trasporto. .

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Ringraziamenti

Desidero porgere i miei rispettosi ringraziamenti alla Prof.ssa L. Dell’Osso per i preziosi insegnamenti durante la mia frequentazione al reparto di psichiatria.

indispensabili per la realizzazione della tesi.

Vorrei esprimere la mia sincera gratitudine al Dott. S. Baroni per il suo costante e fondamentale aiuto fornitomi nella stesura di questa tesi.

Inoltre, ho desiderio di ringraziare con affetto i miei amici, Andrea e in particolare i miei genitori, per il sostegno e il grande aiuto che mi hanno dato in ogni momento.