Una strategia farmacologica basata sull’attivazione dei canali mito- KATP, alla
luce di quanto esposto finora sulla perdita di efficacia del target mitocondriale negli animali senescenti, risulta essere di difficile applicazione; tuttavia, gli animali senescenti continuano a essere quelli più indicati per una strategia di questo tipo, in quanto è stato ampiamente dimostrato che l’ incidenza di patologie cardiovascolari è un fenomeno strettamente legato all’età; da qui nasce la necessità di trovare nuovi target.
Recentemente, il gruppo di lavoro presso il quale è stato svolto questo lavoro di tesi ha caratterizzato l’attività cardioprotettiva di naringenina, un flavonoide abbondante nei frutti del genere Citrus, dimostrando il coinvolgimento dei canali mito-BK che sembrano essere un target emergente per gli studi sulla cardioprotezione. Il profilo di efficienza dei canali mito-BK nel mediare le funzioni fisiologiche negli animali giovani e in quelli anziani è ancora oggetto di studio, e ad oggi l’unico lavoro che ha utilizzato farmaci riconosciuti come BK attivatori è quello di Heinen e i suoi collaboratori, nel quale vengono analizzate le differenze legate all’attività di NS1619, un BK attivatore, negli animali giovani e in quelli senescenti, relativamente al suo ruolo nella respirazione mitocondriale (Heinen et al., 2007).
Tuttavia non risultano in letteratura studi specifici su effetti cardioprotettivi in modelli sperimentali di ischemia-riperfusione, riguardanti l’uso di farmaci
BK attivatori negli animali anziani. In questo lavoro di tesi, naringenina è stata utilizzata in acuto come un farmaco BK attivatore. L’esposizione di cuori di animali senescenti, isolati e perfusi alla Langendorff, sottoposti a un ciclo di 30 minuti di ischemia seguito da 120 minuti di riperfusione, ha prodotto un significativo danno riscontrabile in un modesto recupero della funzionalità contrattile cardiaca in termini di RPP % (Graf.1) e di dP/dT % (Graf.2). 0 15 30 45 60 75 90 105 120 0 50 100 150 veicolo_vecchio Naringenina 100mg/kg_vecchio Diazossido 40mg/kg_vecchio minuti di riperfusione % R P P
Grafico 1:RPP percentuale dopo un trattamento in acuto (2 ore prima del
0 20 40 60 80 100 120 0 50 100 150 veicolo_vecchio Naringenina 100mg/kg_vecchio Diazossido 40mg/kg_vecchio minuti di riperfusione d P /d t %
Grafico 2: dP/dT percentuale misurato dopo un trattamento in acuto (2 ore
prima del sacrificio)
Il danno funzionale da ischemia-riperfusione è perfettamente coerente con gli elevati livelli di insulto tissutale presente, come testimoniano le ampie aree di morte cellulare necrotica e/o apoptotica presenti a livello del ventricolo sinistro (Graf.3).
veic olo _vec chio Nar ing enin a 10 0m g/k g_v ecch io Dia zoss ido 40m g/k g_v ecch io 0 10 20 30 40 50 60
*
A
i/
A
v
s
%
Grafico 3:Istogramma raffigurante le percentuali di area ischemica rispetto
all'area totale del ventricolo sinistro dopo somministrazione in acuto del veicolo (DMSO), di naringenina (100mg/kg) e di diazossido (40mg/kg) a ratti vecchi
È interessante notare che i livelli di danno nell’animale anziano sono
significativamente superiori rispetto a quelli riscontrati, in studi precedenti, nel miocardio di animali giovani sottoposti al medesimo protocollo di insulto
da ischemia-riperfusione (Graf.4), confermando ulteriormente la maggior vulnerabilità dell’animale senescente a tale tipo di danno.
veic olo_ vecc hio veic olo_ giov ane 0 10 20 30 40 50 60 * A i/ A v s %
Grafico 4: Istogramma in cui viene messa a confronto la percentuale di area
ischemica rapportata all'area ischemica totale del ventricolo sinistro (Ai/Avs) in ratti giovani rispetto a ratti vecchi, trattati con il veicolo (DMSO)
In accordo con i dati riportati in letteratura e in linea con l’ipotesi di una
minor espressione e/o attività dei canali mito-KATP nel miocardio di animali
senescenti, è stato dimostrato che l’uso di diazossido, un mito-KATP
attivatore, non ha prodotto alcun tipo di protezione e il danno sia da un punto di vista funzionale che da un punto di vista morfologico, è risultato essere completamente sovrapponibile a quanto misurato in animali trattati esclusivamente con il veicolo (Graf. 1-2-3).
Al contrario, la somministrazione di una dose di naringenina pari a 100mg/kg (i.p.), ha determinato importanti e chiari effetti cardioprotettivi, portando a un pressoché totale recupero della funzionalità contrattile cardiaca (RPP % e dP/dT %) per tutta la durata della fase di riperfusione (Graf. 1-2). L’efficacia di naringenina è stata riscontrata anche nel dato morfologico, che mostra una netta e significativa riduzione dell’ampiezza delle aree ventricolari sinistre danneggiate dal ciclo di ischemia-riperfusione (Graf. 3).
Dopo aver confermato l’effetto protettivo di naringenina sulla funzionalità e sulla morfologia del miocardio esposto a cicli di ischemia-riperfusione, l’indagine si è rivolta alla valutazione dell’attività del flavonoide nei confronti di importanti parametri elettrofisiologici e biochimici, misurabili nei mitocondri cardiaci isolati da animali giovani e anziani, quali il potenziale di
membrana mitocondriale (∆ ) e l’attività dell’enzima citrato sintasi.
Per quanto riguarda il primo parametro, i mitocondri isolati da animali
giovani hanno mostrato un potenziale di membrana di - 170 ± 6 mV, indice di
integrità e corretta funzionalità mitocondriale. Tale parametro è invece risultato significativamente modificato indicando una depolarizazzione nei mitocondri di animali anziani, a dimostrazione di una parziale perdita di efficienza nella funzionalità.
Il trattamento in acuto con naringenina, somministrata due ore prima dell’isolamento mitocondriale e della determinazione del potenziale di
membrana, non ha alterato questo parametro che si è mantenuto a livelli di controllo (Graf. 5). DeltaPsi -200 -150 -100 -50 0 giovani vecchi vecchi_Naringenina 100mg/kg m V
Grafico 5: Istogramma dei valori del potenziale di membrana mitocondriale
dopo trattamento in acuto su ratti giovani, ratti vecchi, e ratti vecchi trattati con naringenina (100mg/kg)
Per quanto riguarda il parametro biochimico, l’attività dell’enzima citrato sintasi nei ratti giovani è risultata pari a 2.7 ± 0.4 (U/ ml/ mg proteine), mentre nei ratti vecchi questo valore risulta essere quasi dimezzato, sebbene tale differenza non sia risultata statisticamente significativa a causa di un ampia varianza nei dati.
Come già osservato per il parametro relativo al potenziale di membrana mitocondriale, naringenina non ha migliorato il parametro riguardante l’attività enzimatica di citrato sintasi registrato in ratti senescenti, indice del fatto che il flavonoide, somministrato in acuto, non è in grado di migliorare l’attività metabolica dei mitocondri senescenti (Graf. 6).
CitratoSintasi 0 1 2 3 4 giovani vecchi vecchi_Naringenina 100mg/kg U /m l/ m g p ro te in e
Grafico 6: Istogramma raffigurante i dati relativi all'attività di citrato sintasi
dopo trattamento in acuto su ratti giovani, ratti vecchi e ratti vecchi trattati con naringenina (100mg/kg)
Tale osservazione sembrerebbe indicare che l’effetto cardioprotettivo di naringenina somministrata in acuto, non sia legato all’instaurazione di un miglioramento nella funzionalità mitocondriale.
Pertanto la sperimentazione si è rivolta alla valutazione di possibili effetti derivati da una somministrazione sub-cronica del flavonoide, che è stato
infatti somministrato alla dose di 100mg/kg al giorno per 6 giorni. Durante il trattamento in sub-cronico sono stati confrontati ratti giovani con ratti anziani e sono stati riportati solo gli effetti di naringenina ottenuti da animali anziani. Ratti anziani trattati sub-cronicamente con il veicolo, hanno mostrato livelli didanno ischemico significativamente maggiori a quanto riscontrato nei ratti giovani, sia in relazione al parametro funzionale ( RPP % ), che in relazione al dato morfologico (Graf. 7-8).
0 15 30 45 60 75 90 105 120 0 20 40 60 80 veicolo_giovane veicolo_vecchio Naringenina 100mg/kg_ vecchio minuti di riperfusione % R P P
Grafico 7:RPP percentuale determinato in seguito a un trattamento in sub-
veic olo _gio van e veic olo _vec chio Nar inge nin a 10 0m g/k g_ v ecch io 0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 * A i/ A v s %
Grafico 8: Istogramma in cui vengono mostrate le percentuali di area
ischemica rispetto all'area totale del ventricolo sinistro (Ai/Avs) dopo aver somministrato naringenina alla dose di 100mg/kg a ratti vecchi e il veicolo
(DMSO) a ratti giovani e vecchi
Mentre il parametro di contrattilità cardiaca dP/dT % è risultato troppo disperso per consentire qualsiasi tipo di valutazione statistica (Graf. 8).
0 20 40 60 80 100 120 0 20 40 60 80 veicolo_giovane veicolo_vecchio Naringenina 100mg/kg_ vecchio minuti di riperfusione d P /d t %
Grafico 9: dP/dT percentuale misurato dopo trattamento in sub-cronico (1
volta al giorno per 6 giorni)
La maggior vulnerabilità del miocardio all’insulto da ischemia-riperfusione nel ratto senescente è stata confermata anche dal parametro morfologico Ai / Avs %, in cui è stato riscontrato un incremento significativo delle aree ischemiche rispetto a quelle presenti nei ratti giovani (Graf. 8).
È interessante notare che il trattamento con naringenina ha consentito ai cuori provenienti da animali anziani, di ottenere un significativo incremento nel recupero funzionale post-ischemico in termini di RPP % (Graf. 7), portando a
un sostanziale ricongiungimento con i valori riscontrati negli animali giovani (Graf. 7).
Inoltre, in perfetta coerenza con i dati ottenuti, il trattamento con naringenina, ha portato a una riduzione nell’ampiezza delle aree ischemiche, che sono risultate pressoché equivalenti a quelle misurate negli animali giovani (Graf. 9).
Per quanto riguarda i parametri mitocondriali, elettrofisiologici e biochimici, si osserva che anche il trattamento sub-cronico con il flavonoide non è comunque riuscito a portare alcun miglioramento nei valori del potenziale di membrana e di citrato sintasi, che nel ratto anziano rimangono ancora deficitari (Graf. 10 e 11).
Grafico 10: Istogramma relativo al valore del potenziale di membrana
mitocondriale in seguito al trattamento in sub-cronico con il veicolo (DMSO) testato su ratti giovani e vecchi e con il flavonoide (naringenina)
1 0 2 4 6 8 giovani_veicolo vecchi_veicolo vecchi_Naringenina 100mg/kg C S U /m l/ m g p ro te in e
Grafico 11: Rappresentazione grafica dei valori di citrato sintasi ottenuti
mediante trattamento sub-cronico con il veicolo (DMSO) somministrato a ratti giovani e vecchi e in seguito alla somministrazione di naringenina a ratti vecchi alla dose di 100mg/kg
Gli effetti protettivi del flavonoide non possono dunque essere ascritti ad una modificazione stabile e “ costituzionale “ della funzionalità mitocondriale, almeno con le modalità posologiche adottate in questo lavoro; indagini future saranno indirizzate verso trattamenti più prolungati.
L’ultimo aspetto valutato in questo lavoro di tesi è stato quello relativo
all’eventuale coinvolgimento dei canali mito-BK negli effetti
protettiviosservati nei ratti senescenti, in quanto un coinvolgimento dei suddetti canali era già stato osservato in ratti giovani (Testai et al., 2013 a; 2013 b).
Tale indagine ha consentito di osservare che la somministrazione di concentrazioni crescenti di naringenina nei mitocondri cardiaci isolati da ratti
senescenti, provocava un effetto depolarizzante concentrazione-dipendente della membrana mitocondriale, fino a un massimo di circa 30mV. Da notare che questo effetto depolarizzante, rilevato nei mitocondri di ratti anziani, non è significativamente differente da quello misurato nei mitocondri di ratti giovani (Graf. 12); inoltre la depolarizzazione viene antagonizzata efficacemente dal bloccante dei canali mito-BK, Paxillina (10µM).
-5.5 -5.0 -4.5 -4.0 -3.5 -3.0 0 10 20 30 40 50 Naingenina_giovani Naringenina_vecchi Pax10µM-Naringenina_vecchi µM D e lt a P s i m V
Grafico 12: Curve rappresentanti il potenziale di membrana mitocondriale in
seguito a somministrazione di naringenina (100mg/kg) in ratti giovani e vecchi e di paxillina (10µM)
In seguito a queste evidenze sperimentali possiamo ipotizzare che gli effetti protettivi dovuti alla somministrazione di naringenina, siano legati
all’attivazione dei canali BK mitocondriali anche nei ratti anziani, con conseguente attenuazione di quei fenomeni mitocondriali come ad esempio
l’accumulo di Ca2+ nella matrice mitocondriale, l’apertura dell’ MPTP, la
rottura della membrana mitocondriale esterna, il rilascio di fattori pro- apoptotici attraverso l’attivazione dei canali BK e attraverso l’ingresso di ioni
K+, e una parziale depolarizazzione della membrana mitocondriale, secondo
meccanismi cardioprotettivi già ampiamente discussi, che sono prodromici della morte cellulare dovuta a lesioni da ischemia-riperfusione.
BIBLIOGRAFIA
Abete P., Cioppa A., Calabrese C., Pascucci I., Cacciatore F., Napoli C., Carnovale V., Ferrara N., Rengo F.,Ischemic threshold and myocardial
stunning in the aging heart. Exp. Geriontol.,1999; 34: 875-884.
Abete P., de Santis D., Condorelli M., Napoli C., Rengo F.,A four -year-old
rabbit cannot be considered the right model for investigating cardiac senescence. J. Am. Coll. Cardiol., 2002; 39: 1701-1702.
Ajay M., Gilani A.U., Mustafa R.M., Effects of flavonoids on vascular
smooth muscle of the isolated rat thoracic aorta. Life Sci., 2003; 74: 603-
612.
Baines C.P., Kaiser R.A., Purcell N.H., Blair N.S., Osinska H., Hambleton M.A., Brunskill E.W., Sayen M.R., Gottlieb R.A., Dorn G.W., Robbins J., Molkentin J.D., Loss of cyclophilin D reveals a critical role for
mitochondrial permeability transition in cell death. Nature, 2005; 434
(7033): 658-662.
Beckman J.S., Koppenol W.H., Oxidative damage and tyrosine nitration
from peroxynitrite. Chem. Res. Toxicol., 1996; 9 (5): 836-844.
Behrens R., Nolting A., Reimann F., Schwarz M., Waldschutz R., Pongs O.,
hKCNMB3 and hKCNMB4, cloning and characterization of two members of the large-conductance calcium-activated potassium channel
β subunit family. FEBS Let., 2000; 474: 99-106.
Bernardi P., Mitochondrial transport of cations: channels, exchangers,
and permeability transition. Physiol. Rev., 1999; 79 (4): 1127-1155.
Bernhard D., Laufer G., The aging cardiomyocyte: a mini-review. Gerontology, 2008; 54: 24-31.
Besse S., Bulteau A.L., Boucher F., Riou B., Swynghedauw B., de Leiris J.,
Antioxidant treatment prevents cardiac protein oxidation after ischemia- reperfusion and improves myocardial function and coronary perfusion in senescent hearts. J. Physiol. Pharmacol., 2006; 57: 541-552.
Brenner R., Jegla T.J., Winckenden A., Liu Y., Aldrich R.W., Cloning and
Functional Characterization of Novel Large Conductance Calcium- activated Potassium Channel β Subunits, hKCNMB3 and hKCNMB4. J.
Biol. Chem., 2000; 275: 6453-6461.
Boengler K., Konietzka I., Buechert A., Garcia-Dorado D., Heusch G., Schulz R., Loss of ischemic preconditioning’s cardioprotection in aged mouse
hearts is associated with reduced gap junctional and mitochondrial levels of connexin 43. Am. J. Physiol. Heart. Circ. Physiol., 2007; 292: H1764-
H1769.
Bolli R., Cardioprotective function of inducible nitric oxide synthase and
role of nitric oxide in myocardial ischemia and preconditioning: an overview of a decade research. J. Mol. Cell. Cardiol., 2001; 33 (11): 1897-
1918.
Bolotina V.M., Najibi S., Palancino J.J., Pagano J.B., Cohen R.A., Nitric
oxide directly activates calcium-dependent potassium channels in vascular smooth muscle. Nature, 1994; 368: 850-853.
Burns P.G., Krunkenkamp I.B., Calderone C.A., Kirvaitis R.J., Gaudette G.R.L.S., Is the preconditioning response conserved in senescent
myocardium? Ann. Thorac. Surg., 1996; 61: 925-929.
Calderone V., Large-conductance Ca2+-activated K+ channels:
functioncardioprotection of ischemic preconditioning. J. Pharmacol. Exp.
Ther., 2005; 312 (2): 644-650.
Cao C.M., Xia Q., Gao Q., Chen M., Wong T.M., Calcium-activated
potassium channel triggers Beckman J.S., Koppenol W.H., Oxidative damage and tyrosine nitration from peroxynitrite. Chem. Res. Toxicol.,
1996; 9 (5): 836-844.
Cave A.C., Hearse D.J., Ischemic preconditioning and contractile
function: studies with normothermic and hypothermic global ischaemia.
Chen J.C., Warshaw J.B., Sanadi D.R., Regulation of mitochondrial
respiration in senescence. J. Cell. Physiol., 1972; 80: 141-148.
Cheng E.H., Sheiko T.V., Fisher J.K., Craigen W.J., Korsmeyer S.J., VDAC2
inhibits BAK activation and mitochondrial apoptosis. Science, 2003; 301
(5632): 513-517.
Choksi K.B., Papaconstantinou J., Age-related alterations in oxidatively
damaged proteins of mouse heart mitochondrial electron transport chain complexes. Free. Radic. Biol. Med., 2008; 44: 1795-1805.
Cohen M.V., Yang X.M., Liu G.S., Heusch G., Downey J.M., Acetylcoline,
bradykinin, opioids, and phenylephrine, but not adenosine, trigger preconditioning by generating free radicals and opening mitochondrial K (ATP) channels. Circ. Res., 2001; 89(3) : 273-278.
Cuong D.V., Kim N., Joo H., Youm J.B., Chung J.Y., Lee Y., Park W.S., Kim E., Park Y.S., Han J., Subunit composition of ATP-sensitive
potassium channels in mitochondria of rat hearts. Mitochondrion, 2005; 5:
121-133.
Das A.M., Harris D.A., Control of mitochondrial ATP synthase in heart
cells: inactive to active transitions caused by beating or positive inotropic agents. Cardiovasc. Res., 1990; 24 (5): 411-417.
Diaz L., Meera P., Amigo J., Stefani E., Alvarez O., Toro L., Latorre L., Role
of the S4 Segment in a Voltage-dependent Calcium-sensitive Potassium (hSlo) Channel. J. Biol. Chem., 1998; 273: 32430-32436.
Di Lisa F., Bernardi P., Mitochondrial function and myocardial aging. A
critical analysis of the role of permeability transition.Cardiovasc. Res.,
2005; 66 (2): 222-232.
Di Lisa F., Canton M., Menabo R., Kaludercic N., Bernardi P., Mitochondria
and cardioprotection. Heart. Fail. Rev., 2007; 12: 249-260.
Downey J.M., Davis A.M., Cohen M.V., Signaling pathways in ischemic
preconditioning. Heart. Fail. Rev., 2007; 12: 181-188.
Ebrahim Z., Yellon D.M., Baxter G.F., Ischemic preconditioning is lost in
aging hypertensive rat heart: independent effects of aging and long- standing hypertension. Exp. Gerontol., 2007; 42: 807-814.
Erlund I., Meririnne E., Alfthan G., Aro A., Plasma kinetics. Urinary
excretion of the flavanones naringenin and hesperetin in humans after ingestion of orange juice and grapefruit juice. J. Nutr., 2001; 131: 235-
241.
Fannin S.W., Lesnefsky E.J., Slabe T.J., Hassan M.O., Hoppel C.L., Aging
selectively decreases oxidative capacity in rat heart interfibrillar mitochondria. Arch. Biochem. Biophys., 1999; 372: 399-407.
Ferdinandy P., Schulz R., Baxter G.F., Interaction of cardiovascular risk
factors with myocardial ischemia/reperfusion injury, preconditioning, and postconditioning. Pharmacol. Rev., 2007; 59: 418-458.
Franke A.A., Cooney R.V., Henning S.M., Custer L.J., Bioavailability and
antioxidant effects of orange juice components in humans. Agric. Food.
Chem., 2005; 53 (13) : 5170-5178.
Garcia-Calvo M., Knaus H.G., McManus O.B., Giangiacomo K.M., Kaczorowski G.J., Garcia M.L., Purification and reconstitution of the high-
conductance, calcium-activated potassium channel from tracheal smooth muscle. J. Biol. Chem., 1994; 269: 676-682.
Garlid K.D., Opening mitochondrial K(ATP) in the heart: what happens
and what does not happen. Basic. Res. Cardiol., 2000; 95: 275-279.
Garlid K.D., Pauacek P., Mitochondrial potassium transport the K+ cycle.
Biochim. Biophys. Acta., 2003; 1606: 23-41.
Griffiths E.J., Ocampo C.J., Savage J.S., Rutter G.A., Hansford R.G., Stern M.D., Silverman H.S., Mitochondrial calcium transporting pathways
during hypoxia and reoxygenation in single rat cardiomyocytes.
Cardiovasc. Res., 1998; 39 (2): 423-433.
Groenenboom M., Gomez-Roldan V., Stigter H., Astola L., van Daelen R., Beekwilder J., Bovy A., Hall R., Molenaar J., The Flavonoid pathway in
tomato seedlings: transcript abundance and the modeling of metabolite dynamics. PloseOne., 2013; 8 (7):e68960. .
Gunter T.E., Buntinas L., Sparagna G., Eliseev R., Gunter K., Mitochondrial
calcium transport: mechanisms and functions. Cell. Calcium., 2000; 28 (5-
Hacham M., White R.M., Argov S., Segal S., Apte R.N., Interleukin-6 and
interleukin-10 are expressed in organs of normal young and old mice.
Eur. Cytokine. Netw.,2004; 15 (1): 37-46.
Hajnóczky G., Csordás G., Yi M., Old players in a new role: mitochondria-
associated membranes, VDAC, and ryanodine receptors as contributors to calcium signal propagation from endoplasmic reticulum to the mitochondria. Cell. Calcium., 2002; 32 (5-6): 363-377.
Halestrap A.P., Kerr P.M., Javadov S., Woodfield K.Y., Elucidating the
molecular mechanism of the permeability transition pore and its role in reperfusion injury of the heart. Biochim. Biophys. Acta., 1998; 1366 (1-2):
79-94.
Halestrap A.P., Brenner C., The adenine nucleotide translocase: a central
component of the mitochondrial permeability transition pore and key player in cell death. Curr. Med. Chem., 2003; 10 (16): 1507-1525.
Hansford R.G., Castro F., Effect of senescence on Ca2+- ion transport by
heart mitochondria. Mech. Ageing. Dev., 1982; 19 (1): 5-13.
Heginbotham L., Lu Z., Abramson T., MacKinnon R., Mutations in the K+
channel signature sequence. Biophys. J., 1994; 66: 1061-1067.
Heinen A., Winning A., Schlack W., Hollmann M.W., Preckel B., Fräβdorf J., Weber N.C., The regulation of mitochondrial respiration by opening of
mkCa channels is age-dependent. Eur. J. Pharmacol., 2007; 578 (208): 108-113.
Herrero A., Portero-Otin M., Bellmunt M.J., Pamplona R., Barja G., Effect of
the degree of fatty acid unsaturation of rat heart mitochondria on their rates of H2O2 production and lipid and protein oxidative damage. Mech. Ageing. Dev., 2001; 122: 427-443.
Heusch G., Boengler K., Schulz R., Cardioprotection: nitric oxide, protein
kinases, and mitochondria. Circulation., 2008; 118: 1915-1919.
Hewawasam P., Meanwell N.A., Gribkoff V.K., Dworetzky S.I., Boissard G.,
Discovery of a novel class of BK channel openers: enantiospecific synthesis and bk channel opening activity of 3-(5-chloro-2- hydroxyphenyl)-1,3-dihydro-3-hydroxy-6-(trifluoromethyl)-2h-indol-2- one. Bioorg. Med. Chem. Lett., 1997; 7: 1255-1260.
Holmuhamedov E.L., Jovanovic S., Dzeja P.P., Jovanovic A., Terzic A.,
Mitochondrial ATP-sensitive K+ channels modulate cardiac mitochondrial function. Am. J. Physiol., 1998; 275: H1567-H1576.
Holmuhamedov E.L., Wang L., Terzic A., ATP-sensitive potassium channel
openers prevent calcium overload in rat cardiac mitochondria. J.
Physiol., 1999; 519: 347-360.
Hunter D.R., Haworth R.A., Southard J.H., Relationship between
configuration, function, and permeability in calcium-treated mitochondria. J. Biol. Chem., 1976; 251: 5069-5077.
Jahangir A., Ozcan C., Holmuhamedov E.L., Terzic A., Increased calcium
vulnerability of senescent cardiac mitochondria: protective role for a mitochondrial potassium channel opener. Mech. Ageing. Dev., 2001; 122:
1073-1086.
Jiang Z., Wallner M., Meera P., Toro L., Human and Rodent Maxi K
Channel β Subunit Genes: Cloning and Characterization. Genomics,
1999; 55: 57-67.
Jones S.P., Bolli R., The ubiquitous role of nitric oxide in
cardioprotection. J. Mol. Cell. Cardiol., 2006; 40 (1): 16-23.
Judge S., Jang Y.M., Smith A., Hagen T., Leeuwenburgh C., Age-associated
increases in oxidative stress and antioxidant enzyme activities in cardiac interfibrillar mitochondria: implications for the mitochondrial theory of aging. FASEB J., 2005; 19: 419-421.
Juhaszova M., Rabuel C., Zorov D.B., Lakatta E.G., Sollott S.J., Protection
in the aged heart: preventing the heart-break of old age? Cardiovasc.
Res., 2005; 66: 233-244.
Kanno S., Tomizawa A., Hiura T., Osanai Y., Shouji A., Ujibe M., Ohtake T., Kimura K., Ishikawa M., Inhibitory effects of naringenin on tumor
growth in human cancer cell lines and sarcoma S-180-implanted mice.
Biol. Pharm. Bull., 2005; 28 (3): 527-530.
Kawaii S., Tomono Y., Katase E., Ogawa K., Yano M., Quantitation of
flavonoid constituents in citrus fruits. J. Agric. Food. Chem., 1999; 47:
Khaidakov M., Heflich R.H., Manjanatha M.G., Myers M.B., Aidoo A.,
Accumulation of point mutations in mitochondrial DNA of aging mice.
Mutat. Res., 2003; 526: 1-7.
Knaus H.G., Folander K., Garcia-Calvo M., Garcia M.L., Kaczorowoski G.J., Smith M., Swanson R., Primary sequence and immunological
characterization of beta-subunit of high conductance Ca2+-activated K+ channel from smooth muscle.J. Biol. Chem., 1994; 269: 17274-17278.
Kocic B., Kitic D., Brankovic S., Dietary flavonoid intake and colorectal
cancer risk: evidence from human population studies. J. Buon., 2013; 18
(1) : 34-43.
Korge P., Honda H.M., Weiss J.N., Protection of cardiac mitochondria by
diazoxide and protein kinase C: implications for ischemic preconditioning. Proc. Natl. Acad. Sci. USA., 2002; 99: 3312-3317.
Kowaltowski A.J., Seetharaman S., Paucek P., Garlid K.D., Bioenergetic
consequences of opening the ATP-sensitive K(+) channel of heart mitochondria. Am. J. Physiol. Heart. Circ. Physiol., 2001; 280 (2): H649-
H657.
Kuhlmann C.R., Trumper J.R., Abdallah Y., Wiebke Ludders D., Schafer C.A., Most A.K., Backenkohler U., Neumann T., Walther S., Piper H.M.,
Tillmanns H., Erdogan A., The K+-channel opener NS1619 increases
endothelial NO-synthesis involving p42/p44 MAP-kinase. Thromb.
Haemost., 2004; 92: 1099-1107.
Lacerda L., Somers S., Opie L.H., Lecour S., Ischaemic postconditioning
protects against reperfusion injury via the SAFE pathway. Cardiovasc.
Res., 2009; 84: 201-208.
Lee S.H., Park Y.B., Bae K.H., Bok S.H., Kwon Y.K., Lee E.S., Choi M.S.,
Cholesterol-lowering activity of naringenin via inhibition of 3-hydroxy-3- methylglutaryl coenzyme A reductase and acyl coenzyme A: cholesterol acyltransferase in rats. Ann. Nutr. Metab., 1996; 43 (3) : 173-180.
Lee T.M., Su S.F., Chou T.F., Lee Y.T., Tsai C.H., Loss of preconditioning
by attenuated activation of myocardial ATP-sensitive potassium channels in elderly patients undergoing coronary angioplasty. Circulation, 2002;
Leri A., Kjstura J., Li B., Sonnenblick E.H., Beltrami C.A., Anversa P., Frishman W.H., Cardiomyocyte aging is gender-dependent: the local IGF-
1-IGF-1R system. Heart. Dis., 2000; 2 (2): 108-115.
Lesnefsky E.J., Gallo D.S., Ye J., Whittingham T.S., Lust W.D., Aging
increases ischemia-reperfusion injury in the isolated, buffer-perfused heart. J. Lab. Clin. Med., 1994; 124: 843-851.
Lesnefsky E.J., Moghadass S., Tandler B., Kerner J., Hoppel C.L.,
Mitochondrial dysfunction in cardiac disease: ischemia-reperfusion,