Il test sierologico è stato eseguito nel Dipartimento di Patologia Animale, Profilassi e Igiene degli alimenti dell’Università di Pisa.
E’ stato utilizzato il Kit ELISA competitivo (SERELISA BHV-1 gB Ab Mono Blocking®, Synbiotics Europe SAS) per la ricerca di anticorpi anti-gB (glicoproteina B dell’envelope virale).
65
3.3
RISULTATI E DISCUSSIONE
Tramite i risultati delle analisi sierologiche eseguite precedentemente all’inizio dei nostri controlli è stato possibile conoscere la sieroprevalenza nell’allevamento relativamente all'anno 2009 (tabella 11) e alla prima metà del 2010 (tabella 12).
Tabella 11: Risultati ELISA-IBR gE del 02.10.09
Risultato MANZE
(>6 mesi)
FATTRICI TORI TOTALE negativi positivi dubbi* %+
CHIANINE 10 17 1 28 28 0 0 0
MAREMMANE 10 25 1 36 30 6 0 16,70%
LIMOUSINE 6 32 1 39 31 8 0 25,80%
totale 26 74 3 103 89 14 0 15,70%
*= considerati come positivi ai fini dell’attuazione del piano
Tabella 12: Risultati ELISA-IBR gE 19.04.10
Risultato MANZE
(>6 mesi)
FATTRICI TORI TOTALE negativi positivi dubbi* %+
CHIANINE 5 16 1 22 22 0 0 0
MAREMMANE 8 27 1 36 30 5 1 16,70%
LIMOUSINE 5 30 1 36 28 8 0 22,20%
totale 18 73 3 94 80 13 1 13,80%
*= considerati come positivi ai fini dell’attuazione del piano
Consultando le tabelle 11 e 12 è possibile constatare che la sieroprevalenza in allevamento nel mese di ottobre 2009 è del 15,7%. I soggetti sieropositivi sono 6 capi di razza maremmana (tra i quali il toro) e 8 capi di razza limousine (tra i quali il toro). Non si riscontrano invece capi positivi di razza chianina né tantomeno soggetti dubbi nelle tre mandrie. Nel mese di aprile 2010, la sieroprevalenza risulta del 13,8%. I risultati hanno confermato le positività riscontrate ad ottobre 2009 per quanto riguarda gli 8 capi di razza limousine, mentre dei 6 capi di razza maremmana risultati sieropositivi ad ottobre 2009 solo 5 sono stati confermati sieropositivi ed uno sieronegativo, inoltre è stata evidenziata la presenza di un soggetto dubbio che al controllo precedente era risultato negativo. Questa parziale discrepanza nei dati può essere ascrivibile a valori di positività o negatività molto vicini al valore soglia. Può succedere che un animale positivo a basso titolo per una infezione di vecchia data e con valore vicino al limite soglia possa risultare sieronegativo ad un controllo successivo per un ulteriore
66 abbassamento del titolo anticorpale. Ai fini dell'eradicazione i soggetti sieropositivi avrebbero dovuto essere subito allontanati dall'allevamento senza aspettare il secondo controllo. Anche per un certo ritardo nella notifica degli esiti del controllo di aprile la rimozione degli animali sieropositivi è stata fatta solo nell'estate del 2010. Questi soggetti (ad eccezione di uno, contraddistinto dalla matricola n° AR028C027) sono stati spostati in un pascolo lontano da quello utilizzato per i soggetti sieronegativi in attesa di essere macellati. Con questa operazione si è in pratica dato inizio al programma di eradicazione aziendale.
Nei Campionamenti del mese di novembre 2010 (con il quale è iniziato il nostro studio di monitoraggio dell’andamento del piano) ed in quelli successivi, sono stati ottenuti i risultati riassunti nella tabella 13, 14 e 15 e commentati di seguito.
Tabella 13: Risultati ELISA-IBR gE 18.11.10.
Risultati MANZE
(>6 mesi)
FATTRICI TORI TOTALE negativi positivi dubbi* %+
CHIANINE 5 17 1 23 23 0 0 0
MAREMMANE 18 20 2 40 39 0 1 2,50%
LIMOUSINE 18 18 1 37 36 1 0 2,70%
totale 41 55 4 100 98 1 1 2,00%
*= considerati come positivi ai fini dell’attuazione del piano
Nella mandria maremmana è stato confermato come dubbio lo stesso animale dubbio al prelievo precedente (matricola n° 990012760). E' stato identificato inoltre un soggetto sieropositivo nella mandria limousine. Si trattava del soggetto n° AR028C027 già risultato positivo al controllo precedente del 19.04.10 e non rimosso dall'allevamento con gli altri soggetti sieropositivi.
Tabella 14: Risultati ELISA-IBR gE 30.05.11:
Risultati MANZE
(>6 mesi)
FATTRICI TORI TOTALE negativi positivi dubbi* %+
CHIANINE 4 18 1 23 23 0 0 0
MAREMMANE 19 20 2 41 40 0 1 2,40%
LIMOUSINE 22 18 1 41 40 0 1 2,40%
totale 45 56 4 105 103 0 2 1,90%
67 Sono stati rinvenuti solo due soggetti dubbi uno nella mandria maremmana (lo stesso risultato dubbio al precedente controllo n° 990012760) ed uno nella mandria limousine (lo stesso risultato positivo ai due precedenti controlli n° AR028C027) Questa discrepanza fra positivo e dubbio può essere piegata con un graduale abbassamento del titolo anticorpale col passare del tempo. Per una corretta applicazione del piano di eradicazione il soggetto avrebbe dovuto essere rimosso tempestivamente dopo il primo controllo al quale è risultato sieropositivo.
Tabella 15: Risultati ELISA-IBR gE 23.09.11
Risultati MANZE
(>6 mesi)
FATTRICI TORI TOTALE negativi positivi dubbi* %+
CHIANINE 1 18 1 20 20 0 0 0
MAREMMANE 17 21 2 40 39 0 1 2,50%
LIMOUSINE 16 23 1 40 39 1 0 2,50%
totale 34 62 4 100 98 1 1 2,00%
*= considerati come positivi ai fini dell’attuazione del piano
All'ultimo prelievo del 23.09.11 è risultato dubbio lo stesso soggetto maremmano risultato dubbio al prelievo del 30.05.11 (n° 990012760) e nella mandria limousine il soggetto dubbio al precedente controllo (n° AR028C027) è risultato positivo. A seguito di quest'ultimo risultato ambedue i soggetti sono stati isolati per essere successivamente inviati al macello.
Per quanto riguarda il soggetto n° AR028C027 abbiamo assistito ad una leggera fluttuazione del titolo anticorpale (positivo, positivo, dubbio, positivo) ai 4 prelievi eseguiti in successione. Questo risultato ci conferma che per maggiore scrupolo, soprattutto nelle ultime fasi del processo di eradicazione è preferibile rimuovere dall'allevamento anche i soggetti dubbi. In alternativa questi dovrebbero essere ricontrollati al più presto e se confermati dubbi essere prontamente rimossi.
Non sono state riscontrate positività per anticorpi diretti verso la gilicoproteina B di BoHV-1 nei campioni di siero dei caprioli abbattuti nella stagione venatoria di febbraio/marzo 2011.
68
3.4 CONCLUSIONI
Il nostro monitoraggio del piano di eradicazione regionale applicato ad un allevamento da riproduzione allo stato brado, sebbene sia stato eseguito per un periodo di tempo abbastanza limitato, ha confermato che il piano stesso può essere applicato anche in quella particolare realtà di allevamento. Il piano, nonostante alcune irregolarità quali il ritardo nell'allontanamento di alcuni soggetti positivi o dubbi, sembra essere arrivato ad una fase terminale. A questo punto sarà necessario procedere ad ulteriori controlli semestrali fino al raggiungimento di due controlli consecutivi negativi su tutti i soggetti, condizione necessaria per l'acquisizione della qualifica di indennità. Riteniamo che in questa fase sia ancora necessario continuare la vaccinazione con vaccino gE deleto e sospenderla soltanto quando si sarà raggiunta la qualifica di allevamento indenne. Riteniamo che la vaccinazione abbia contribuito a mantenere alto il livello di immunità umorale ed in questo modo ridotto la escrezione virale durante eventuali fasi di riattivazione dell'infezione latente. Considerando che alcuni soggetti positivi e dubbi sono rimasti per un certo periodo di tempo nell'allevamento nel caso che questi fossero tornati ad essere escretori di virus i soggetti sieropositivi potevano essere in numero superiore. Pensiamo che le condizioni di stress, fattore importante per la riattivazione dell'infezione latente, possano verificarsi con minor frequenza in un allevamento brado rispetto alla stabulazione permanente. E' verosimile inoltre che nei bovini allo stato brado la trasmissione virale risulti meno efficiente che negli animali allevati in ambienti più ristretti. Gli aspetti sopra menzionati compensano in parte le maggiori difficoltà che si possono riscontrare negli allevamenti bradi soprattutto nella esecuzione dei prelievi e degli interventi vaccinali.
Gli esami sierologici, con risultato negativo, eseguiti sui caprioli abbattuti sul territorio della tenuta, sebbene piuttosto limitati, fanno pensare che una volta eradicata l'infezione nei bovini questi non abbiano possibilità di reinfettarsi mediante contatti occasionali con questi selvatici. Su questo aspetto dovrà comunque continuare l'opera di monitoraggio in modo da raccogliere ulteriori informazioni anche nelle prossime stagioni venatorie.
69
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