Caratterizzazione genetica e molecolare di una mutazione nel gene ADH1 di Saccharomyces cerevisiae

UNIVERSITÀ DEGLI STUDI DI PISA

Facoltà di Agraria

Corso di Laurea Magistrale in

B

V

M

Titolo:

Caratterizzazione genetica e molecolare di una mutazione nel gene

ADH1 di Saccharomyces cerevisiae

Relatori:

Candidato:

Prof.:

Rosario

Muleo

Silvia

Frucci

Prof. Emerito: Mario Polsinelli

Correlatore:

Prof.: Marco Nuti

I N D I C E

1. INTRODUZIONE pag. 3

1.1 Saccharomyces Cerevisiae pag. 3

1.1.1 Ciclo cellulare pag. 5

1.1.2 Il flusso metabolico di Saccaromyces cerevisiae pag. 8

1.1.3 Bilancio energetico cellulare pag. 15

1.2 Regolatori dell’espressione genica pag. 19 1.3 Alcol deidrogenasi pag. 26

1.4 I mutanti ADHs pag. 35

1.5 Morfologia dei ceppi mutanti pag. 40

1.5.1 Isolamento di mutanti resistenti ad alcol allilico dal

ceppo diploide 1014 di Saccharomyces cerevisiae pag. 40

1.5.2 Isolamento di revertanti sensibili all’alcol allico

dal ceppo mutante AA95 di Saccaromyces cerevisiae pag. 41

1.6 Obiettivo del lavoro pag. 42

2. MATERIALI E METODI pag. 44

2.1 Materiali pag. 44

2.2 Metodi pag. 50

3. RISULTATI pag. 58

3.1 Determinazione delle curve di crescita pag. 58

3.2 Amplificazione di tre regioni nella sequenza del gene

ADH1 per localizzare il sito di mutazione pag. 60 3.3 Analisi bioinformatica della mutazione in ADH1 pag. 61 3.4 Espressione dei geni ADHs: ADH1, ADH2 e ADH3 pag. 64

3.5 Analisi dell’espressione e dell’attività proteica

delle alcol deidrogenasi 1,2, e 3 pag. 66

3.6 Il regolatore trascrizionale SWI/SNF pag. 83

3.7 il gene CCE1 pag. 87

4. DISCUSSIONE pag. 94