I
INDICE
1 Introduzione
1
1.1 Il genere Candida 1
1.2 Le specie del complesso “psilosis” 3 1.2.1 Origine del gruppo “psilosis” 3
1.2.2 Tassonomia e filogenesi 5
1.2.3 Generalità delle specie C. parapsilosis, C. orthopsilosis e
C. metapsilosis 6
1.2.4 Suscettibilità ai principali farmaci antifungini 8 1.2.5 Epidemiologia delle infezioni sostenute dal complesso “psilosis” 12
1.2.6 Variabilità genetica 14 1.3 Fattori di virulenza 17 1.3.1 Proteasi 17 1.3.2 Fosfolipasi e lipasi 20 1.3.3 Biofilm 22 1.3.4 Adesività 24
1.4 Oggetto e scopo della tesi 28
2 Materiali e metodi
30
2.1 Ceppi di Candida parapsilosis, C. orthopsilosis e C. metapsilosis 30 2.2 Allestimento del saggio di adesione a cellule epiteliali buccali umane
(HBEC) per C. parapsilosis, C. orthopsilosis e C. metapsilosis 32 2.3 Allestimento di un saggio per la valutazione dell’attività ectofosfatasica in
ceppi di C. parapsilosis, C. orthopsilosis e C. metapsilosis 34 2.4 Saggi di valutazione dell’attività ectofosfatasica e delle capacità adesive dei
lieviti condotti in presenza di inibitori dell’enzima ectofosfatasi 35 2.4.1 Effetto dell’inibitore sodio ortovanadato sull’attività ectofosfatasica
e sul processo adesivo delle specie del gruppo “psilosis” 35 2.4.1.1 Attività ectofosfatasica 36
II
2.4.1.2 Adesività 37
2.4.2 Effetto della concentrazione di fosfato inorganico sull’attività ectofosfatasica e sul processo adesivo delle specie del gruppo
“psilosis”
38
2.4.2.1 Attività ectofosfatasica 38
2.4.2.2 Adesività 39
2.5 Allestimento del saggio di colorazione tramite Alcian Blue di Candida
parapsilosis, C. orthopsilosis e C. metapsilosis 39
2.6 Analisi statistica dei dati 40
3 Risultati
41
3.1 Valutazione delle capacità adesive dei ceppi di C. parapsilosis,
C. orthopsilosis e C. metapsilosis a cellule epiteliali buccali umane (HBEC) 41
3.2 Valutazione delle capacità adesive dei lieviti a cellule HBEC di diversi
donatori 43
3.3 Analisi della correlazione tra capacità adesive e sede di isolamento dei
ceppi saggiati 44
3.4 Valutazione dell’attività ectofosfatasica dei ceppi di C. parapsilosis,
C. orthopsilosis e C. metapsilosis 46
3.5 Analisi della correlazione tra attività ectofosfatasica e capacità adesive dei
ceppi saggiati 48
3.6 Valutazione dell’effetto dell’inibitore sodio ortovanadato (Na3VO4)
sull’attività ectofosfatasica e sul processo adesivo delle specie del
complesso “psilosis” 51
3.6.1 Inibizione irreversibile dell’attività dell’enzima ectofosfatasi 51 3.6.2 Effetto dell’inibizione irreversibile dell’enzima ectofosfatasi sulle
capacità adesive 52
3.7 Valutazione dell’effetto di diverse concentrazioni di fosfato inorganico (Pi) sull’attività ectofosfatasica e sul processo adesivo delle specie del
complesso “psilosis” 53
III
3.7.2 Effetti sulle capacità adesive 54 3.8 Analisi della componente mannoproteica presente nella parete dei ceppi di
C. parapsilosis, C. orthopsilosis e C. metapsilosis saggiati tramite
colorazione con Alcian Blue 55
