TREPONEMA PALLIDUM, NEISSERIA GONORRHOEAE

TREPONEMA PALLIDUM, NEISSERIA GONORRHOEAE

Corso di Laurea in Medicina e Chirurgia A.A. 2013-2014 Corso Integrato di Malattie Infettive e Microbiologia Clinica Prof. O.E. Varnier – Dott.ssa Martini Isabella

Università degli Studi di Genova

SPIROCHETE: TREPONEMA PALLIDUM

Ordine

Spirochetales Famiglie

Spirochetacae Leptospiraceae

Generi

Treponema Leptospira

Borellie

Spirochaetaceae

Leptospiraceae

Treponema pallidum pallidum Treponema pallidum pertenue Treponema carateum

Borrelia recurrentis Borrelia burgdorferi

Leptospira interrogans

Sifilide

Yaws o Frambesia Pinta

Leptospirosi Malattia di Lyme Febbre ricorrente epidemica

Treponema endemicum Bejel

CLASSIFICAZIONE

MORFOLOGIA



Batteri di forma allungata con corpo avvolto a spirale (spiraliforme).



Corpo cellulare mobile con caratteristica progressione serpentiniforme.



Dimensioni:

 Lunghezza tra 4 e 21 µm

 Spessore da 0,15 a 0,25 µm.



Patogeni extracellulari.



Non visibili al microscopio in campo chiaro, visibili in campo scuro, a contrasto di fase e dopo colorazione con sostanze fluorescenti o impregnazione argentica.



Microorganismi molto labili: sensibili all’essicamento e agli agenti chimici anche a basse concentrazioni.



Metabolismo anaerobio (Treponema), microaerofilo (Borrelie) o aerobio

(Leptospire).

MORFOLOGIA

osservazione al microscopio a fluorescenza

osservazione al microscopio in campo scuro

osservazione al microscopio elettronico

A Scanning Transmission Electron Microscope.

(STEM) of T. pallidum

MORFOLOGIA



Parete cellulare simile a quella dei Gram- per architettura e funzione ma con diversa struttura molecolare → differente consistenza, più flessibile.



Composizione chimica della parete cellulare delle spirochete rivela differenze a seconda

dei generi.

MORFOLOGIA



Corpo cellulare costituito da un cilindro protoplasmatico rivestito da da duplice

citoplamatica, esterna

e interna.



Strato sottile di peptidoglicano

aderisce a membrana citoplasmatica interna.



Assenza di flagelli esterni.



Apparato locomotore si trova nello spazio periplasmico tra le 2

membrane ed è formato da peculiari flagelli (endoflagelli)

ricoperti da una membrana esterna.

MORFOLOGIA

 Contrazione endoflagelli: movimento per rotazione/traslocazione.

 Apparato locomotore costituito da uno o più fasci di fibrille, inseriti longitudinalmente nello spazio periplasmatico, scorrono lungo la spirale del corpo e hanno punto di inserzione a ciascuna delle estremità cellulari ove sono ancorati.

MORFOLOGIA

 Ciascun endoflagello è organizzato come un flagello dei Gram+:

 Filamento: formato da numerose sub unità di flagellina.

 Gancio (o uncino): singola proteina con funzione di connettere il filamento al corpo basale; nome si riferisce a forma arcata che imprime moto circolare al filamento.

 Corpo basale: struttura complessa, diversa nei Gram - e +, accomunata dalla presenza dell'anello MS immerso nella membrana citoplasmatica, costituito da due dischi sovrapposti.

Gram + Gram -

MORFOLOGIA

 Le Leptospire hanno 1-2 filamenti assiali, i Treponemi ne hanno da 1 a 8 (quelli virulenti ne hanno 3), le Borrelie da 15 a 20.

 Spirochete si dividono per scissione binaria secondo un piano trasversale, formando setto lungo l’asse minore della cellula:

1. prima si ha la formazione di nuovi flagelli inseriti nella regione centrale del corpo della cellula madre (che avrà propri flagelli alle estremità e nuovi flagelli, che andranno a cellule figlie, inseriti nella regione centrale)

2. successivamente la regione centrale della cellula ha un restringimento citoplasmatico tra i due gruppi di nuovi flagelli: strozzamento delle 2 membrane dividerà le due cellule figlie rimaste unite da comunione membrana esterna, ultima struttura a dividersi.

 La spiralizzazione del corpo batterico, la presenza delle due membrane citoplasmatiche, la presenza dei flagelli è indispensabile per la classificazione morfologica di una spirocheta.

MORFOLOGIA



Treponema osservato al microscopio elettronico.



Ben evidente il fascio di endoflagelli (F) che scorre lungo il corpo batterico.



Per tre di essi è chiaramente visibile la zona di ancoraggio terminale (IP)

(da: Jepsen, Hougen e Birch-Andersen : Acta Path. Et microbiol. Scandinav., 1968, 74, 241).

TREPONEMI

 Spirochete più importanti dal punto di vista clinico: T. pallidum pallidum agente

eziologico della sifilide , malattia a trasmissione sessuale e a diffusione mondiale.



Forma molto allungata (0,2 x 5 -15



1-8 flagelli inseriti in membrana citoplasmatica.

 Molti NON sono patogeni e fanno parte flora batterica della mucosa orale, gastroenterica e regioni genitali.

 Patogeni

solo per l’uomo (T. pallidum pallidum, T. pallidum pertenue, T. carateum,

non (facilmente) coltivabili in vitro.



Non coltivabilità dovuta a necessità metaboliche e tempi di duplicazione lunghi (T. pallidum 30-33 h).

 Popolazione residente

(soprofiti): T. non patogeni coltivabili.

TREPONEMI



T. coltivabili possono essere mantenuti in appositi terreni, in condizioni di anaerobiosi.



Non esiste terreno universale per coltura (diverse capacità biosintetiche dei Treponemi): diversi supplementi sono fondamentali per differenti specie (es.

siero di coniglio per T. che richiedono siero per presenza acidi grassi a lunga catena; Glucosio o altri carboidrati fermentabili, Aminoacidi, Vitamina B , Acido Isobutirrico).



Peptone e estratto lievito richiesti da maggior parte dei T. coltivabili per

crescere.

T. pallidum



T. pallidum pallidum agente eziologico della sifilide: epidemie sifilide conosciute a partire dal XV sec.).



Nome dovuto al fatto che fosse invisibile al microscopio ottico se non colorato con impregnazione argentica oppure osservato in campo scuro.



Studi fattori virulenza limitati per lungo tempo da non coltivabilità in terreno liquido/solido.



Possibile la propagazione in vivo: inoculazione intra-testicolare nel coniglio.



Per lungo tempo ritenuto anaerobio; recentemente si è scoperto che è in

grado di ossidare i carboidrati e lo si è classificato come microaerofilo.

T. pallidum



Scoperta della microaerofilia T. pallidum ha permesso di superare in parte difficoltà di coltivarlo in vitro: coltura sottoposta a incubazione microaerofila (0,8-3% O

).



Difficoltà non risolvibile è data dal lunghissimo tempo di replicazione (30- 33 ore nell’infezione in vivo e moltiplicazione è influenzata da fattori sconosciuti).



Nel 1981 è stato descritto il primo sistema di coltivazione in vitro riproducibile anche se risultato è di durata limitata e soggetto a numerose variabili.



Possibilità di disporre di un sistema in vitro ha permesso di incrementare gli

studi fattori virulenza.

T. pallidum:

fattori di virulenza



T. pallidum ha un cromosoma circolare di 1138 kbp.



Cromosoma è stato completamente sequenziato nel 1998.



Sequenziamento ha fornito informazioni su fattori di virulenza, per esempio:



non sono stati trovati geni che codificano per tossine batteriche



esistono nel genoma batterico geni codificanti per lipoproteine, duplicati in grande numero.



Membrana esterna priva di lipopolisaccaride (endotossina; Gram-).



T. pallidum non produce esotossine.

T. Pallidum:

fattori di virulenza



Membrana esterna ricca di lipoproteine (per le quali esistono nel genoma batterico geni duplicati in grande numero) coinvolte:



nell’adesione alle cellule dell’ospite.



nel mimetismo antigenico: il batterio si riveste della fibronectina (proteina di matrice intercellulare) della cellula ospite, a cui aderisce tramite lipoproteine, mascherando gli Ag di superficie e rendendosi meno visibile al sistema immunitario (MIMESI MOLECOLARE).



Variazione Antigenica: presenza di copie multiple di geni delle lipoproteine

conferiscono la capacità di variare gli Ag di superficie per sfuggire

all’azione del sistema immunitario.

T. Pallidum:

fattori di virulenza



Produzione Ialuronidasi: enzima che idrolizza A. ialuronico che avvolge e tiene insieme cellule; facilita la penetrazione tra le giunzioni intracellulari quindi favorisce l’infiltrazione.



T. pallidum non produce esotossine ma possiede geni che codificano per proteine simili alle emolisine batteriche (tossine emolitiche) il cui significato è tutt’oggi sconosciuto.



Motilità: agevola la diffusione nei tessuti

T. Pallidum:

meccanismi di patogenicità



La distruzione dei tessuti e la comparsa delle lesioni sono dovute all’azione del batterio e alla risposta immunitaria dell’ospite.



Una volta superata la barriera epiteliale i Treponemi si moltiplicano (30h) e nello spazio di 10-20 gg compare papula che successivamente si ulcera (lesione primaria: “sifiloma” ).



Sifiloma si sviluppa in corrispondenza della penetrazione del batterio ed è caratterizzato da infiltrazione di leucociti polimorfonucleati e macrofagi.



Esso rappresenta la principale sede di replicazione del batterio.

Sifilide - Ieri

 Personaggi famosi morti per sifilide:

Baudelaire Oscar Wilde Manet Ivan il Terribile Casanova Dostoyevsky Schumann Enrico VIII

Nietzsche Gaugin Schopenhauer

 1905: August Paul von Wassermann mette a punto il test per la diagnosi di sifilide.

 Reazione di fissazione del complemento: siero del paziente + Ag (cardiolipina) + complemento; se nel siero del paziente sono presenti Ab, questi interagiscono con l’Ag fissando il complemento (che cosi non sarà più disponible).

 L'avvenuta o meno fissazione del complemento viene evidenziata con l'aggiunta di un sistema rilevatore (emazie + anticorpi antiemazie).

 Lisi delle emazie: il complemento disponibile si è fissato al sistema rivelatore in assenza di anticorpi del sistema test (reazione di Wasserman negativa).

 Mancata lisi emazie: presenza di Ab nel siero (reazione di Wasserman positiva).

DIAGNOSTICA SIEROLOGICA

Test non specifici per i Treponemi



Rilevano gli anticorpi IgM e IgG che riconoscono l’Ag cardiolipina (

) rilasciato dalle cellule danneggiate nelle fasi precoci dell’infezione e presenti anche sulla superficie delle cellule dei treponemi.

 VDRL (Venereal Diseases Research Laboratory)

 RPR (Rapid Plasma Reagin)



Entrambi i test misurano la flocculazione dell’Ag cardolipina nel siero del paziente.



Limiti:

(70% circa) nella sifilide primaria precoce, nella sifilide latente e nella sifilide congenita tardiva;

in presenza di particolari condizioni (infezioni virali, patologie neoplastiche, malattie autoimmuni, gravidanza, età avanzata).



I risultati dei test non treponemici devono essere dunque sempre confermati da un test treponemico specifico.

Test sierologici per diagnosi sifilide

 VDRL-slide (flocculazione su vetrino)

DIAGNOSTICA SIEROLOGICA

Test non specifici per i Treponemi

DIAGNOSTICA SIEROLOGICA Test specifici per i Treponemi



Rilevano anticorpi contro antigeni specifici del Treponema:



FTA-ABS (fluorescent treponemal antibody-adsorption test)



TPHA (Treponema pallidum haemoagglutination)



TPI (Treponema pallidum immobilization)

 FTA-ABS - test di immunofluorescenza indiretta dove l’Ag è costituito da una sospensione di treponemi uccisi che vengono messi a contatto con il siero del paziente in esame.

Successivamente si aggiunge un Ab anti-Ig umane coniugato con fluorescina.

 TPHA - reazione di emoagglutinazione passiva nella quale l’Ag è costituito da globuli rossi alla cui superficie sono adsorbiti Ag treponemici

 TPI – reazione di immobilizzazione.

- Impiega come Ag una sospensione di treponemi mantenuti vitali in apposito terreno che viene messa a contatto con il siero del paziente in esame.

- In presenza di Ab specifici, l’unione di Ab e complemento alla superficie del microorganismo, causa alterazioni strutturali → perdita della capacità di movimento.

- La valutazione viene fatta al microscopio in campo oscuro valutando la % di treponemi immobilizzati rispetto a siero di controllo.

DIAGNOSTICA SIEROLOGICA

Test specifici per i Treponemi

DIAGNOSTICA SIEROLOGICA Test specifici per i Treponemi

Negativo

Positivo

Sifilide - Oggi

Sifilide - Oggi

NEISSERIA GONORRHOEAE



Genere Neisseria comprende un’ampia varietà di specie non patogene, commensali nelle prime vie respiratorie.



Importanza clinica legata a 2 specie patogene: N. Gonorrhoeae (Gonococco) e

(Meningococco) che hanno come unico serbatoio l’uomo.



Gram negativo - diametro da 0,6 a 1,0 µm – immobile - asporigeno.



Tipicamente a forma coccoide - disposti a coppie : DIPLOCOCCHI



I lati adiacenti schiacciati l’uno contro l’altro ricordano i chicchi di caffè



Cit.C ossidasi +



Catalasi +



Fermentano glucosio (meningococco fermenta

glucosio e maltosio).



Aerobi, ambiente umido,

povero O

, 35°-37° in CO

NEISSERIA GONORRHOEAE



Patogeno esclusivamente umano.



Agente eziologico della gonorrea, STD, patologia già descritta nel 1550 a.C.



Lo stato di portatore può essere asintomatico in particolare nelle donne (50% asintomatiche).



Le infezioni causate da N. gonorrhoeae sono processi multifattoriali che coinvolgono una serie di interazioni mediate da recettori batterici e cellule bersaglio (cellule epiteliali).



Batteri sono capaci di aderire alla superficie e penetrare nelle

cellule, poi, contenuti all’interno di vacuoli fagosomali, possono

passare per transcitosi nei tessuti subepiteliali.

NEISSERIA GONORRHOEAE



Non rivestiti da capsula polisaccaridica (come N. meningitidis).



Membrana esterna della cellula provvista di diverse strutture di superficie che svolgono una funzione essenziale nell’infezione:

1.

PILI

2.

PROTEINE (Opa, Por, Rmp …)

3.

LIPOOLIGOSACCARIDE (LOS)

Pili di N. gonorrhoeae al Microscopio Elettronico

NEISSERIA GONORRHOEAE : PILI



Originano da membrana citoplasmatica e attraversano membrana esterna.



Pili tipo IV: filamenti polimerici 6 nm Ø.



Composti da unità proteiche ripetute : PILINE, adesine la cui espressione è

regolata da complesso genetico “pil”.



Espressione associata alla virulenza: coinvolte nell’interazione iniziale

con cellule epiteliali (epitelio vagina, tube Falloppio, cavità buccale)

NEISSERIA GONORRHOEAE : PILI



PilE (subunità maggiore del pilus) non sembra in grado di interagire direttamente con cellula ospite: adesione pilus-mediata si realizzerebbe ad opera di una grossa proteina di 110KDa (PilC).



PilC; proteina associata all’estremità libera del pilus.

Pili di tipo IV non sono semplici passive fibre adesive ma mediano la motilità del batterio:

motilità contrattile (“twitching”) e per

scivolamento (“gliding”) → migrazione attiva

anche se considerevolmente più lenta (1µm/s) di

quella a propulsione mediata dal flagello (fino

60 µm/s).

NEISSERIA GONORRHOEAE :

PRINCIPALI PROTEINE DI MEMBRANA

 Proteine Por

(già nota come Proteina I) Por = Porine



Esistono 2 classi: PorA e Por B n.b. Gene PorA è silente in N. gonorrhoeae



Formano canali ionici voltaggio dipendenti essenziali per sopravvivenza batteri



Probabile coinvolgimento nella traslocazione citoplasmatica dei batteri

 Proteine Opa (Proteina II) Opa

= opacità; responsabili aspetto opaco colonie.

 Adesine/Invasine



Coinvolte nell’adesione intima e nell’invasione delle cellule ospiti



Due classi di recettori:

1. proteoglicani eparansolfato (HPS Gs) 2. proteine CD66-correlate.

 Rmp

(già nota come Proteina III) Rmp = proteina modificabile per riduzione

Protegge la cellula batterica dalla lisi mediata da Ab sierici diretti verso altri Ag

superficiali (Por e LOS), che vengono mascherati da Rmp.

NEISSERIA GONORRHOEAE : Altre PROTEINE DI MEMBRANA



Tbp1 e Tbp2 = T ransferrin Binding Protein 1 e 2



Lbp = Lactoferrin Binding Protein



Proteine che legano l'emoglobina

Funzione in comune: mediano l’acquisizione di Fe

per il metabolismo batterico, sottraendolo all’ospite.

NEISSERIA GONORRHOEAE : LIPOOLIGOSACCARIDE



Membrana esterna contiene un LPS costituito da brevi catene di zuccheri e privo di alcune catene ripetitive dell’Ag polisaccaridico

«O» → definito LIPOOLIGOSACCARIDE (LOS)



Componente endotossica delle cellule batteriche (Endotossina)



Media l’adesione batterio-batterio (microcolonie)



Funzione antigenica (core oligosaccaridico): stimola la risposta

infiammatoria e innesca il rilascio di TNF-



IgA-proteasi (endoproteasi) → ruolo importante nella patogenesi batterica.



idrolizzano le Ig della classe A1degli ospiti umani (neutralizzano IgA secretorie prodotte da cellule mucosali)



Attaccano la principale glicoproteina strutturale di membrana dei lisosomi (LAMP1 – Lysosome Associated Membrane Protein) la cui degradazione promuoverebbe la sopravvivenza del batterio

all’interno della cellula infettata.



Beta-lattamasi (alcuni ceppi di N. gonorrhoeae)



idrolizzano l’anello beta-lattamico degli antibiotici betalattamici

NEISSERIA GONORRHOEAE : ENZIMI



Le popolazioni microbiche non solo devono adattarsi ai cambiamenti ambientali cui vanno incontro durante l’interazione con l’ospite, ma anche durante il corso di una infezione stessa .



Per rispondere ai continui cambiamenti ambientali e per assicurare la flessibilità genetica, i microrganismi hanno sviluppato meccanismi adattativi a lungo termine.



Meccanismi adattativi→ meccanismi genetici spesso interconnessi :

• variazione genetica (variazione di fase e antigenica); modifica casuale del livello di espressione del gene. Coinvolge cambiamenti spontanei del DNA: mutazioni e ricombinazioni.

• regolazione genica modifica non casuale del livello di espressione del gene ma necessario segnale specifico dall’ambiente

NEISSERIA GONORRHOEAE : PATOGENESI

1. Regolazione genica trascizionale: processo che permette ad una cellula in un determinato contesto di esprimere un determinato gruppo di geni (geni regolati) e di silenziarne altri.



GENI COSTITUTIVI: es. per enzimi coinvolti nel metabolismo glucosio.



GENI INDUCIBILI: in N. Meningitidis gene nadA che codifica per invasina/adesina si trova sotto controllo eventi finemente regolati dall’ambiente (regolazione trascrizionale in seguito a stress ossidativo); indotta durante colonizzazione dell’orofaringe dove esplica un ruolo importante nell’adesione e invasione della mucosa.



Gli organismi sono in grado di regolare l’espressione dei propri geni in modo che le proteine, e le altre molecole, vengano sintetizzate nella quantità esatta e nel momento esatto del ciclo (ECONOMIA CELLULARE)

NEISSERIA GONORRHOEAE : PATOGENESI

2. Variazione genetica (VARIAZIONE DI FASE E ANTIGNICA):

comparsa di ceppi batterici geneticamente diversi dalle cellule da cui derivano (mutazioni e ricombinazione).

VARIAZIONE DI FASE (coinvolge Opa, Opc, Por e proteine del metabolismo del LOS)

 Oscillazione reversibile tra stati di espressione alternativi di determinati geni)→

proteine Opa (circa 11 loci Opa – alta frequenza variazioni di fase; almeno 8 Opa).

 Evoluzione di segmenti di DNA ripetuti (omopolimerici), dentro o nelle vicinanze di regioni codificanti, che favoriscono l’insorgenza di mutazioni “frame-shift” ad alta frequenza e reversibili, mediante un meccanismo di scivolamento dello stampo.

 Mutazioni frame-shift : dovute a delezione o inserzioni di un numero di nucleotidi non divisibile per 3, questo comporta lo spostamento della cornice di lettura a valle della mutazione e quindi la codificazione di una sequenza Aa non corrispondente a quella del trascritto originario.

 Conseguenza: produzione di proteine che hanno solo porzioni di sequenza

corrispondenti all'originaria o mancata esportazione o traduzione dell'mRNA mutato.

NEISSERIA GONORRHOEAE : PATOGENESI

Variazione di fase e mutazioni frame-shift

Mutazioni frame-shift : dovute a delezione o inserzioni di un numero di nucleotidi non divisibile per 3, questo comporta lo spostamento della cornice di lettura a valle della mutazione e quindi la codificazione di una sequenza amminoacidica non

corrispondente a quella del trascritto originario.

VARIAZIONE DI ANTIGENICA



Elaborazione di versioni strutturalmente differenti di determinati componenti di superficie



Nelle strutture piliali il fenomeno interessa la componente strutturale PilE.



Eventi di ricombinazione omologa tra loci silenti pilS ed il locus di espressione pilE, con formazione di nuove combinazioni di geni pilE.

varianti antigeniche di nuove PILINE che presentano nuovi epitopi

NEISSERIA GONORRHOEAE : PATOGENESI



Il LOS delle neisserie rientra nelle strutture della superficie batterica soggette a enorme eterogeneità strutturale → N.B. proteine coinvolte nel metabolismo del LOS sono soggette a VARIAZIONE DI FASE.



Batteri isolati durante infezione gonococciche:



Fasi precoci : forma breve di LOS



Dopo la risposta infiammatoria: predomina fenotipo provvisto di una forma lunga di LOS.



Il LOS può essere modificato con aggiunta residui Ac. Sialico ad opera di una sialiltranferasi codificata dal batterio (donatore di Ac. Sialico è ospite-derivato) → sialilazione è un fenotipo variabile.



Residui Ac. Sialico aumentano carica negativa superficie batterio e conferiscono resistenza al complemento e alla fagocitosi.

NEISSERIA GONORRHOEAE : PATOGENESI

Fase 1 - INGRESSO con rapporti sessuali Fase 2 - ADESIONE iniziale con pili che si attaccano a epitelio mucosale → ADESIONE intima (Opa).

Fase 3 Endocitosi – traslocaz. citoplasmatica (Por) - Invasione (Opa) - IgAproteasi anti

lisosomi. INFEZIONE: esocitosi e diffusione nello spazio sub-epiteliale

Fase 4 - DISSEMINAZIONE

LOS: stimolo del rilascio del TNF- α dai Macrofagi e induce risposta infiammatoria Por: Inibizione della fusione fagosoma-

lisosoma nei PMN

SINTOMATOLOGIA , formazione dell’essudato infettivo.

Fase 5 – TRASMISSIONE (rapporti sessuali)

NEISSERIA GONORRHOEAE : PATOGENESI

Fase 1 - INGRESSO Fase 2 - ADESIONE

Fase 3 Endocitosi- INVASIONE e INFEZIONE

Fase 4 - DISSEMINAZIONE

SINTOMATOLOGIA e formazione dell’essudato infettivo.

Fase 5 – TRASMISSIONE (rapporti sessuali)

NEISSERIA GONORRHOEAE : PATOGENESI

LOS: induce risposta infiammatoria e

stimola rilascio del TNF- α dai Macrofagi.

Por: Inibizione della fusione fagosoma-lisosoma nei PMN e Macrofagi

NEISSERIA GONORRHOEAE :

FATTORI DI VIRULENZA

 Resistenza mediate da plasmidi (esogene)

 Ceppi penicillasi-produttori (PPNG)- 50% di tutti i gonococchi: resistenza alla penicillina, mediata da plasmidi.

Colonizzazione da parte di TEM-1, proveniente da enterobatteri, con conseguente diffusione del plasmide capace di produrre ß-lattamasi deriva dalla presenza di un gene codificante ß-lattamasi.

 Ceppi con resistenza alla tetraciclina (TRNG): mediata da plasmidi, derivata dall’introduzione di un gene streptococcico tetM.

N.B. 1/5 Gonococchi isolati negli USA ha i plasmidi per entrambe le resistenze.

 Resistenza di tipo cromosomico (endogene – dovute a mutazioni spontanee) per penicillina e tetracicline (Chromosomally Mediated Resistant N. Gonorrhoeae - CMRNG).

N.B. Aumento resistenze fluorochinoloni (Quinolone Resistant N. Gonorrhoeae - QRNG).

NEISSERIA GONORRHOEAE :

EPIDEMIOLOGIA & RESISTENZE

NEISSERIA GONORRHOEAE

CAMPIONI BIOLOGICI



Essudato uretrale



Tamponi vaginali



Tamponi cervicali



Pus



Sangue

NEISSERIA GONORRHOEAE :

DIAGNOSI DI LABORATORIO

NEISSERIA GONORRHOEAE :

DIAGNOSI DI LABORATORIO

 Come tutti i cocchi piogeni, determina formazione di pus, che si accompagna alla corsa dei leucociti PMN, alla loro lisi e liberazione (molto materiale purulento).

 Nel materiale, N. Gonorrhoeae appare dentro i PMN dove si moltiplica, a differenza del meningococco che non riesce a replicarsi all’interno del citoplasma leucocitario:

osservando dunque materiale patogeno infettato da N. Gonorrhoeae , si vedranno molti microrganismi dentro i leucociti e pochi fuori, viceversa per il meningococco ce ne saranno molte fuori e poche dentro.

 Le altre neisseria le avremo tutte fuori e nessuna dentro e poco materiale purulento.

NEISSERIA GONORRHOEAE : DIAGNOSI DI LABORATORIO

Campioni di essudato colorati con colorazione di Gram



Terreno arricchito e selettivo: AgarTayer-Martin, selettivo per crescita della flora microbica commensale (gram+, gram-, miceti).



Morfologia colonie: piccole, traslucide, non mucose (assenza capsula)



Cresce in 5-10% CO2 in almeno 48h (per la risposta NEG: 5 gg)



Ossidasi +: colonia scura in presenza di ossidasi

NEISSERIA GONORRHOEAE : DIAGNOSI DI LABORATORIO

Agar Thayer-Martin

Test della Catalasi

Test dell’utilizzazione dei carboidrati

NEISSERIA GONORRHOEAE :

DIAGNOSI DI LABORATORIO

NEISSERIA GONORRHOEAE :

DIAGNOSI DI LABORATORIO

TREPONEMA PALLIDUM, NEISSERIA GONORRHOEAE

Corso di Laurea in Medicina e Chirurgia A.A. 2013-2014 Corso Integrato di Malattie Infettive e Microbiologia Clinica Prof. O.E. Varnier – Dott.ssa Martini Isabella

Università degli Studi di Genova