Lezione di Anatomia Patologica
BIOLOGIA MOLECOLARE
NEL LINFONODO SENTINELLA
Luigia Macrì
Università degli Studi di Torino
AO-U San Giovanni Battista
di Torino
Linfonodo Sentinella
1. Cos’è il linfonodo sentinella?
Il Linfonodo Sentinella è il primo linfonodo che riceve la linfa da un tumore ed è quello che più probabilmente viene colonizzato dalle cellule tumorali, dando origine alle
“METASTASI” linfonodali.
Sentinella
2. Chi esamina il linfonodo sentinella?
L’ANATOMO PATOLOGO è il
medico che con un esame al
microscopio valuta la presenza
di metastasi nel Linfonodo
Sentinella.
3. Quando può essere esaminato?
La diagnosi al microscopio sul Linfonodo Sentinella, per definire se ci sono o meno metastasi, viene effettuata dall’anatomo patologodopo
o durante l’intervento.
In questo caso si parla di esame intraoperatorio .
EE
ICC
2 mm 2 mm
LINFONODO SENTINELLA
FISSATO IN FORMALINA ED INCLUSO IN PARAFFINA
RIDUZIONE CON SEZIONI SERIATE
UN BLOCCHETTO IN PARAFFINA
J Clin Pathol 2004;57:695–701.
Le procedure anatomo-patologiche per la valutazione del LS mancano di standardizzazione
• riduzione macroscopica
• utilizzo dell’esame al congelatore
• numero di sezioni istologiche da esaminare
• utilizzo di colorazioni ancillari
• stesura del referto
Based on AJCC/UICC TNM, 7th edition Protocol web posting date:
October 2009
(sn): Valutato il solo linfonodo(i) sentinella. Se vengono asportati 6 o più linfonodi sentinella e/o linfonodi non sentinella, questa sigla non dovrebbe essere utilizzata.
pN0
Istologicamente non metastasi in linfonodo regionale, non ulteriori valutazioni per cellule tumorali isolate.
pN0(i–)
Istologicamente non metastasi in linfonodo regionale, conSTAGING
nella VALUTAZIONE CLASSICA DEL LINFONODO SENTINELLA
pN1
pN1 a: METASTASI interessanti da1 a 3 linfonodi ascellari, con almeno una metastasi più grande di 2.0 mm
pN1mi: MICROMETASTASI (più grandi di 0.2 mm e/o composte da più di 200 cellule, ma nessuna metastasi più grande di 2.0 mm).
pN0(i–)
Istologicamente non metastasi in linfonodo regionale, con valutazione immunoistochimica negativapN0(i+)
Gruppi di cellule maligne, o singole cellule, in linfonodo(i) regionale(i) non più grandi di 0.2 mm, o meno di 200 cellule in una singola sezione istologica (evidenziate da colorazione E/E o ICC, incluse le cellule tumorali isolate)LINFONODO SENTINELLA
FISSATO IN FORMALINA ED INCLUSO IN PARAFFINA
RIDUZIONE CON SEZIONI SERIATE
UN BLOCCHETTO IN PARAFFINA
4. Nuove tecnologie
In questo caso l’anatomo patologo non cerca più le cellule tumorali al microscopio, ma esegue indagini di biologia molecolare che permettono valutare la presenza di molecole di RNA proprie delle cellule di tumori della mammella (proteina CK19) nel Linfonodo Sentinella.
In particolare la metodica One Step Nucleic Acid Amplification (OSNA)
prevede l’uso di uno strumento automatizzato e di prodotti dedicati (kit).
OSNA OSNA
One
One Step Step Nucleic Nucleic Acid Acid Amplification Amplification
PROCEDURA AUTOMATIZZATA DI AMPLIFICAZIONE DEGLI ACIDI NUCLEICI
VERIFICA LA PRESENZA DEL GENE DELLA CK19 NEL TESSUTO LINFONODALE
TESSUTO LINFONODALE
CONSENTE UNA DIAGNOSI MOLECOLARE DEL
LINFONODO SENTINELLA INTRAOPERATORIA DEFINITIVA
FORNISCE UN RISULTATO DI NEGATIVO, MICROMETASTASI
O MACROMETASTASI
Macro-Metastasi ++
mRNA della CK19 Dimensioni delle metastasi
La diagnosi OSNA
SENTINELLA CLASSICO
SENTINELLA OSNA
++
+
- Macro-Metastasi
Micro-Metastasi
ITC / background
250
copiemRNA/µL – CK19
(5.0 x 106)
5.000
copiemRNA/µL – CK19 (1.0 x 108)
Diagnosi di carcinoma
mammario Valutazione ECOGRAFICA dei linfonodi
LNF non sospetti LNF sospetti
Agoaspirato LINFONODO SENTINELLA
FLOW-CHART DIAGNOSTICA - MOLINETTE
positivo negativo
dissezione ascellare
Metodica istologica standard Valutazione ICC della positività per CK-19
(sul tumore primitivo)
CK-19 POSITIVO CK-19 NEGATIVO
OSNA + Imprint
EE
ICC
2 mm 2 mm
