INDICE
INTRODUZIONE ... pag 1
Le talassemie... pag 1
1. Emoglobina ed emopoiesi ... pag 1 2. Patogenesi ... pag 5 3. Classificazione ... pag 5 4. Epidemiologia ... pag 6 5. Prevenzione ... pag 7 α-talassemia... pag 8 β-talassemia ... pag 9 1. Classificazione ... pag 9 2. Patogenesi ... pag 12 3. Diagnosi ... pag 12 4. Complicanze sistemiche ... pag 13 5. Strategie terapeutiche convenzionali ... pag 18 5.a. Regime trasfusionale ... pag 18 5.b. Terapia ferro-chelante ... pag 20 5.c. Splenectomia ... pag 26 5.d. Trapianto di midollo osseo ... pag 27 6. Strategie terapeutiche alternative ... pag 27 6.a. Terapia genica ... pag 27 6.b. Induzione di HbF ... pag 28 Il resveratrolo ... pag 34
1. Fonti naturali ... pag 34 2. Cenni storici ... pag 35
3. Caratteristiche chimico-fisiche ... pag 36 4. Farmacocinetica... pag 36 5. Tossicità ed effetti collaterali ... pag 37 6. Attività biologiche ... pag 37 7. Resveratrolo come induttore del differenziamento eritroide ... pag 39
SCOPO ... pag 41
MATERIALI E METODI ... pag 43
1. Obiettivi dello studio ... pag 43 2. Pazienti arruolati ... pag 43 3. Fasi dello studio ... pag 44 4. Prodotto utilizzato nel trial clinico: Transmax (BIOTIVA) ... pag 45 5. Metodiche di laboratorio ... pag 47 5.a. Estrazione del DNA ... pag 47 5.b. Quantificazione del DNA... pag 47 5.c. Coltura di precursori eritroidi ... pag 47 5.d. Estrazione dell’mRNA totale dai precursori eritroidi ... pag 48 5.e. Produzione del cDNA a partire dall’RNA estratto ... pag 48 5.f. Real Time Quantitative-PCR: quantificazione dei geni globinici . pag 48 5.g. Quantificazione dell’emoglobina fetale nei precursori eritroidi
mediante analisi HPLC ... pag 49
RISULTATI ... pag 50
1. Pazienti arruolati nello studio ... pag 50 2. Valutazione mediante HPLC del contenuto di HbF nel sangue
3. Coltura di precursori eritroidi isolati dal sangue periferico dei
pazienti arruolati ... pag 54 4. Valutazione degli effetti del trattamento in vitro con PC2
sull’espressione dei geni globinici mediante RT-PCR ... pag 55 5. Trattamento in vivo con il prodotto commerciale del resveratrolo:
analisi dell’andamento dell’espressione dei geni globinici mediante RT-PCR ... pag 56 6. Analisi HPLC della variazione di HbF durante il trattamento con
resveratrolo ... pag 59
DISCUSSIONE ... pag 61
