INDICE
Abstract
Riassunto
11. INTRODUZIONE
41.1 Apprendimento e memoria 4
1.2 La memoria come fenomeno di plasticità sinaptica 9 1.3 Fear conditioning (condizionamento alla paura) 20
1.4 Fear conditioning come paradigma sperimentale per studio dei processi mnemonici 27
1.5 Modificazione dell’espressione genica legata al fear conditioning 38
2. SCOPO DELLA TESI
443. MATERIALI E METODI
463.1 Soggetti sperimentali 46
3.2 Procedure comportamentali 46
3.2.1 Apparecchiatura sperimentale 46
3.2.2 Procedura di condizionamento al contesto 47
3.3 Manipolazioni chirurgiche 48
3.4 Estrazione dell’RNA 49
3.6 Controllo della qualità dell’mRNA poli A+ 52
3.7 Costruzione delle librerie sottrattive 52
3.8 Screening primario delle librerie (colony pcr screening) 57
3.8.1 Amplificazione delle sequenze differenziali 57 3.8.2 Spot Blot del prodotto di PCR 58
3.8.3 Marcatura delle sonde 58
3.8.4 Ibridazione su filtro 59
3.9 Preparazione del DNA plasmidico su piccola scala (miniprep) 62
3.10 Analisi delle sequenze 64
3.11 Analisi di espressione tramite RT-PCR relativa 64
3.11.1 Analisi statistiche 67
4. RISULTATI
684.1 Costruzione delle librerie sottrattive 68
4.2 Risultati screening primario 72
4.3 Analisi delle sequenze 74
4.3.1 Clone 1VH5 75
4.3.2 Clone 1VB9 77
4.3.3 Clone 1VA6 79
4.4 Risultati dell’analisi di espressione tramite RT-PCR relativa 81
5. DISCUSSIONE
835.2 Clone 1VB9 91
5.3 Clone 1VA6 100
