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Indice
Abbreviazioni 1 Riassunto 2 Abstract 4 1. Introduzione 6 1.1 La g-glutammiltransferasi 6 1.1.1 Struttura e localizzazione 61.1.2 Espressione genica e biosintesi 8
1.2 Meccanismo d’azione e principali substrati 10
1.3 Le funzioni fisiologiche della GGT 11
1.3.1 Il ruolo antiossidante: la sintesi del glutatione 11
1.3.2 Azione proossidante della GGT 12
1.3.3 Escrezione degli acidi biliari 17
1.3.4 Metabolismo del S-nitrosoglutatione 18
1.3.5 Metabolismo dei leucotrieni 18
1.4 Ruolo della GGT sierica 21
1.4.1 La GGT sierica: origine e caratteristiche chimico fisiche 21
1.4.2 Valore predittivo della GGT sierica 23
1.5 Nuovo metodo per l’analisi delle frazioni plasmatiche di GGT 26 1.6 Determinazione dei parametri cinetici Km e Vmax 28
1.6.1 Grafico dei doppi reciproci 30
2. Scopo della tesi 32
3. Materiali e metodi 33
3.1 Preparazione del campione 33
3.2 Analisi del profilo di eluizione delle frazioni di GGT 33 3.3 Profilo di eluizione dell'autofluorescenza e raccolta delle frazioni 37
II 3.5 Curva di calibrazione dell' ammminometilcumarina (AMC) 38
4. Risultati e discussione 40
4.1 Descrizione del profilo di eluizione delle frazioni di GGT nel campione
di plasma utilizzato nel presente studio 40
4.2 Autofluorescenza del campione di plasma 40
4.3 Messa a punto delle condizioni per lo studio della cinetica enzimatica 40 4.4 Curva di calibrazione dell' ammminometilcumarina (AMC) 41 4.5 Determinazione della velocità iniziale (V0), calcolo della Km e Vmax 41 Figure : Figura 4.1 43 Figura 4.2 43 Figura 4.3A 44 Figura 4.3B 44 Figura 4.4 45 Figure 4.5 46 Figure 4.6 47 Figure 4.7 48 Figura 4.8 49 Figura 4.9 50 5. Conclusioni e discussione 51 6. Lettura citata 52 7. Appendice 63