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INDICE
Riassunto
4Abstract
61 Introduzione
81.1 Il neurotrasmettitore dopamina 8
1.1.1 Pathways dopaminergici e loro coinvolgimento nelle malattie
neurologiche, neuroendocrine e psichiatriche 8
1.1.2 Sintesi della dopamina 10
1.1.3 Rilascio della dopamina 10
1.1.4 Trasporto attivo e ricattura della dopamina 11
1.1.5 I recettori della dopamina 11
1.1.6 Doppia localizzazione e funzione dei recettori D2 15
1.2 L’epilessia 16
1.2.1 Epilessia dei lobi temporali (TLE) 17
1.2.2 Principali alterazioni morfologiche e funzionali durante
l’epilettogenesi nell’uomo 18
1.3 Il sistema dopaminergico e l’epilessia 19
1.3.1 Il ruolo neuroprotettivo della dopamina contro la morte
cellulare indotta dalle crisi epilettiche nell’ippocampo 19 1.3.2 Pathway di segnale D2R/Akt/GSK-3 nello striato di topo 22 1.3.3 Ipotesi sul ruolo neuroprotettivo dei recettori D2 contro
l’“eccitotossicità” indotta dalle crisi epilettiche nell’ippocampo 25
1.4 Effetto neuroprotettivo del litio 27
1.5 Scopo della tesi 32
2 Materiali e metodi
332.1 Animali da esperimento 33
2.2 Verifica del genotipo degli animali 33
2.2.1 Estrazione del DNA 33
2.2.2 Reazione di PCR 34
2.2.3 Elettroforesi su gel d’agarosio 34
2.3 Induzione di crisi epilettiche negli animali 35
2.4 Analisi comportamentale delle crisi 35
2.5 Dissezione di ippocampo e striato dagli animali 35
3
2.6 Pre-trattamento cronico degli animali con LiCl 36
2.6.1 Dosaggio di LiCl nel plasma 36
2.7 Estratto di proteine totali da ippocampo e striato degli animali 36 2.8 Determinazione del contenuto proteico con metodo di Bradford 37
2.9 Western blot 37
2.9.1 Preparazione di pools proteici e SDS-page 37
2.9.2 Immunoblotting 37
2.9.3 Blocco di siti aspecifici sul filtro di nitrocellulosa 38
2.9.4 Anticorpo primario 38
2.9.5 Lavaggi 39
2.9.6 Anticorpo secondario 39
2.9.7 Lavaggi 39
2.9.8 Rivelazione 39
2.10 Quantificazione del segnale 40
2.11 Analisi statistica 40
3 Risultati
413.1 La mancanza del recettore D2 influenza lo stato di fosforilazione della
GSK-3 nell’ippocampo 41
3.2 Il litio non ha nessun effetto sulla fosforilazione di Akt e GSK-3
nello striato e nell’ippocampo di topi WT e D2R-/- 44
4 Discussione
504.1 Breve riassunto dei dati 50
4.2 Nell’ippocampo l’inattivazione di GSK-3 non è determinata da
Akt, ma più probabilmente da un pathway alternativo 50 4.3 Il mancato effetto del litio sulla fosforilazione di Akt e GSK-3
potrebbe essere dovuto a dosi troppo basse di litio nel plasma dei topi 52
4.4 Conclusioni 54
4.5 Esperimenti futuri 54
