3.3.1. -Procedure generali:
Metodo A – Una soluzione metanolica (15 ml) dell’opportuno sale dell’ammina (1
mmole), ottenuta per aggiunta di HCl metanolico (1%) alla corrispondente ammina dopo 30 minuti di agitazione, è addizionata ad una soluzione metanolica (5 ml) del derivato dicarbonilico (1.0 mmoli). Dopo 30 minuti di agitazione in atmosfera di Argon è gocciolata una soluzione di NaBH3CN (2.2 mmoli) in MeOH anidro (15 ml). La miscela è
mantenuta in agitazione alla temperatura di 60°C fino a scomparsa del prodotto di partenza (TLC). La soluzione è concentrata a pressione ridotta, il residuo grezzo viene ripartito tra AcOEt o CHCl3 e una soluzione acquosa satura di NaHCO3 e, dopo separazione delle fasi,
quella acquosa è ulteriormente estratta con AcOEt o CHCl3 (3 x 30 ml). Le fasi organiche
riunite sono seccate, filtrate e concentrate a pressione ridotta ottenendo un residuo che viene analizzato mediante NMR (1H and 13C) e sottoposto a purificazione cromatografica
su gel di silice eluendo con le opportune miscele di solventi
Metodo B - Ad una soluzione dell’opportuno derivato dicarbonilico (1.0 mmole) in
MeOH anidro (15 ml) sono aggiunte, in successione, una soluzione dell’opportuno sale dell’ammina (1.0 eq) in MeOH anidro (9 ml) e una soluzione di NaBH3CN (2.0 eq) in
O
H O
OH
BnO CHO
MeOH anidro (6 ml). La miscela di reazione è scaldata con un bagno esterno a 60°C e
lasciata in agitazione fino a scomparsa del materiale di partenza (TLC). La soluzione è concentrata a pressione ridotta, il residuo grezzo viene ripartito tra AcOEt e una soluzione acquosa satura di NaHCO3 e, dopo separazione delle fasi, quella acquosa è ulteriormente
estratta con AcOEt (3 x 30 ml). Le fasi organiche riunite sono anidrificate, filtrate e concentrate a pressione ridotta ed il residuo grezzo viene sottoposto ad analisi NMR (1H e 13C) e purificazione flash cromatografica su colonna di gel di silice utilizzando gli
opportuni sistemi eluenti.
3.3.2 – Preparazione del 2-O-benzil-N-benzil-1,5,6-tridesossi-1,5-immino-D-galattitolo (65) e 2-O-benzil-N-benzil-1,5,6-tridesossi-1,5-immino-L-altritolo (66)
Una soluzione del dicarbonilico 49 (1.09 g, 4.30 mmoli) è stata sottoposta a doppia amminazione riducente intramolecolare con PhCH2NH3+Cl- (618 mg, 4.30 mmoli) e
NaBH3CN (541 mg, 8.61 mmoli) secondo la procedura generale B descritta
precedentemente. Dopo 18 ore, l’analisi TLC (AcOEt) ha mostrato la completa scomparsa del materiale di partenza e la formazione di due macchie precedentemente non presenti (Rf
0.40 e 0.27). L’analisi NMR del residuo grezzo (350 mg) ha evidenziato la presenza di una miscela degli azapiranosi 65 e 66 in rapporto 7:3, valutato sulla base dei segnali C-1 rispettivamente a δ 54.1 e 47.8. Una flash cromatografia su gel di silice (CH2Cl2-iPrOH
96:4 + 0.1% Et3N) fornisce 65 (565 mg, resa 40%) e 66 (225 mg, resa 16%) chimicamente
puri all’analisi NMR.
Il 2-O-benzil-N-benzil-1,5,6-tridesossi-1,5-immino-D-galattitolo (65) è
un solido cristallino che presenta Rf 0.27 (AcOEt); p.f. 84-87 °C (da
Et2O); [α]D -11.7(c 1.01, CHCl3). 1H NMR (CDCl3): δ 7.21-7.36 (m,
10H, Ar-H), 4.57, 4.50 (sistema AB, 2H, JA,B 11.6 Hz, OCH2Ph), 3.74, 3.22 (sistema AB,
2H, JA,B 13.5 Hz, NCH2Ph), 3.74 (dd, 1H, J3,4 3.0 Hz, J4,5 1.4 Hz, H-4), 3.51 (ddd, 1H, J2,3
9.1 Hz, J1ax,2 9.8 Hz, J1eq,2 4.6 Hz, H-2), 3.43 (dd, 1H, H-3), 3.00 (dd, 1H, J1eq,1ax 11.3 Hz,
H-1eq), 2.49 (dq, 1H, J5,6 6.5 Hz, H-5), 2.41 (bs, 2H, 2×OH), 1.83 (dd, 1H, H-1ax), 1.34
(d, 3H, H-6); 13C NMR (CDCl
3): δ 138.2, 137.9 (2×Ar-C), 128.7-126.9 (Ar-CH), 76.5 (C-
2), 75.6 (C-3), 74.0 (C-4), 72.1 (OCH2Ph), 58.6 (C-5), 56.4 (NCH2Ph), 54.0 (C-1), 16.8
(C-6). Analisi elementare calcolata per C20H25NO3 (327.43): C, 73.37; H, 7.70; N, 4.28.
trovato: C, 73.21; H, 7.69; N, 4.30. OH N O H OBn
Il 2-O-benzil-N-benzil-1,5,6-tridesossi-1,5-immino-L-altritolo (66) è uno sciroppo trasparente che presenta Rf 0.40 (AcOEt); [α]D
+18.6 (c 1.16, CHCl3). 1H NMR (CDCl3): δ 7.38-7.21 (m, 10H, Ar-
H), 4.65, 4.57 (sistema AB, 2H, JA,B 12.0 Hz, OCH2Ph), 3.67 (m, 3H, H-2, H-3, H-4), 3.62
(s, 2H, NCH2Ph), 3.08 (dq, 1H, J4,5 2.3 Hz, J5,6 6.9 Hz, H-5), 2.79 (dd, 1H, J1eq,1ax 11.5 Hz, J1eq,2 5.3 Hz H-1eq), 2.42 (dd, 1H, H-1ax), 2.40 (bs, 1H, OH), 1.69 (bs, 1H, OH), 1.04 (d,
3H, H-6); 13C NMR (CDCl
3): δ 138.5, 138.4 (2×Ar-C), 128.8-126.9 (Ar-CH), 77.3 (C-2),
73.2 (C-3), 72.2 (OCH2Ph), 71.6 (C-4), 57.9 (NCH2Ph), 57.4 (C-5), 47.8 (C-1), 8.1 (C-6).
Analisi elementare calcolata per C20H25NO3 (327.43): C, 73.37; H, 7.70; N, 4.28. Trovato:
C, 73.11; H, 7.67; N, 4.26.
3.3.3 – Preparazione del 2-O-benzil-N-[(2'R)-1'-carbometossi-2'-benziletil]-1,5,6- tridesossi-1,5-immino-D-galattitolo (67) e 2-O-benzil-N-[(2'R)-1'-carbometossi-2'- benziletil]-1,5,6-tridesossi-1,5-immino-L-altritolo (68)
Una soluzione di 49 (500 mg, 1.98 mmoli) è stata trattata con d-Phe-OMe·HCl (427 mg, 1.98 mmoli) e NaBH3CN (249 mg, 3.96 mmoli) secondo la procedura generale B
descritta precedentemente. La reazione è risultata completa in 24 ore e l’analisi TLC (esano-AcOEt 3:7) ha rivelato la completa scomparsa del materiale di partenza e la formazione di due nuovi spot a Rf 0.28 e 0.16. L’analisi NMR del grezzo risultante (756
mg) ha mostrato (NMR) la presenza di una miscela diastereomerica dei due azapiranosi 67 e 68 in rapporto 25:75, valutato sulla base delle intensità relative dei segnali C-6 rispettivamente a δ 16.7 e 7.1. Una cromatografia su gel di silice (esano-AcOEt 1:1 + 0.1% Et3N) ha fornito campioni chimicamente puri di 67 (110 mg) e 68 (389 mg), in resa del
14% e 49%.
Il 2-O-benzil-N-[(2'R)-1'-carbometossi-2'-benziletil]-1,5,6-tridesossi-
1,5-immino-D-galattitolo (67) è uno sciroppo trasparente che presenta
Rf 0.16 (esano-AcOEt 3:7); [α]D +37.7 (c 1.1, CHCl3). 1H NMR
(CD3CN-D2O): δ 7.40-7.19 (m, 10 H, Ar-H), 4.64 (s, 2 H, OCH2Ph), 3.74 (dd, 1 H, J2',a 5.1
Hz, J2',b 9.4 Hz, H-2'), 3.56 (s, 3 H, OMe), 3.51 (dd, 1H, J3,4 3.4 Hz, J4,5 1.4 Hz, H-4), 3.49
(ddd, 1H, J2,3 8.8 Hz, J1ax,2 9.8 Hz, J1eq,2 4.9 Hz, H-2), 3.30 (dd, 1H, H-3), 3.29 (dd, 1H, J1eq,1ax 11.3 Hz, H-1eq), 3.00 (dd, 1H, Ja,b 13.4 Hz, CHb-Ph), 2.83 (dd, 1H, CHa-Ph), 2.65
(dq, 1H, J5,6 6.6 Hz, H-5), 2.26 (dd, 1H, H-1ax), 1.13 (d, 3H, H-6); 13C NMR (CD3CN-
D2O): δ 173.6 (C=O), 140.0, 139.8 (2×Ar-C), 130.1-127.2 (Ar-CH), 77.6 (C-2), 76.2 (C-
OH N O H OBn CH2Ph COOMe OH N O H OBn
3), 74.6 (C-4), 72.6 (OCH2Ph), 64.0 (C-2'), 57.6 (C-5), 52.3 (OMe), 50.6 (C-1), 31.8
(NCHCH2Ph), 16.7 (C-6). Analisi elementare calcolata per C23H29NO5 (399.49): C, 69.15;
H, 7.32; N, 3.51. Trovato: C, 69.10; H, 7.30; N, 3.52.
2-O-benzil-N-[(2'R)-1'-carbometossi-2'-benziletil]-1,5,6-tridesossi-1,5- immino-L-altritolo (68) è uno sciroppo trasparente che presenta Rf 0.28
(esano-AcOEt 3:7); [α]D +70.7 (c 1.2, CHCl3). 1H NMR (CD3CN-
D2O): δ 7.38-7.16 (m, 10H, Ar-H), 4.63, 4.54 (sistema AB, 2H, JA,B 11.9 Hz, OCH2Ph),
3.81 (dd, 1 H, J2',a 7.2 Hz, J2',b 7.7 Hz, H-2'), 3.78 (dd, 1H, J3,4 3.1 Hz, J4,5 6.0 Hz, H-4),
3.58 (s, 3H, OMe), 3.52 (ddd, 1H, J2,3 7.9 Hz, J1ax,2 4.6 Hz, J1eq,2 3.0 Hz, H-2), 3.27 (dd,
1H, H-3), 3.05 (dd, 1H, Ja,b 13.6 Hz, CHb-Ph), 2.99 (dd, 1H, J1eq,1ax 12.7 Hz, H-1eq), 2.85
(dd, 1H, CHa-Ph), 2.78 (dq, 1H, J5,6 6.4 Hz, H-5), 2.73 (dd, 1H, H-1ax), 1.01 (d, 3H, H-6);
13C NMR (CD
3CN-D2O): δ 173.3 (C=O), 139.9, 139.8 (2×Ar-C), 130.3-127.1 (Ar-CH),
77.5 (C-2), 73.2 (C-3), 71.8 (OCH2Ph), 70.5 (C-4), 64.2 (C-2'), 56.7 (C-5), 51.6 (OMe),
45.7 (C-1), 36.8 (NCHCH2Ph), 7.1 (C-6). Analisi elementare calcolata per C23H29NO5
(399.49): C, 69.15; H, 7.32; N, 3.51. Trovato: C, 69.12; H, 7.29; N, 3.49.
3.3.4 – Preparazione del N-benzil-3-O-benzil-1,5-di-desossi-1,5-immino-D-glucitolo
(69)
Una soluzione (18 ml) del grezzo contenente il dicarbonilico 54 (2.61 mmoli) è stata sottoposta a doppia amminazione riducente intramolecolare con PhCH2NH2·HCl (279 mg,
2.61 mmoli, 1 eq.) e NaBH3CN (360.7 mg, 5.74 mmoli, 2.2 eq.) secondo la procedura
generale A descritta precedentemente. Dopo 18 ore, l’analisi TLC (esano-AcOEt 2:8) mostra la completa scomparsa del materiale di partenza e la formazione di una macchia prevalente Rf 0.28 e l’analisi NMR del residuo grezzo (350 mg) ha evidenziato la presenza
dell’azapiranoso 69. Una flash cromatografia su gel di silice (esano-AcOEt 2:8 + 0.1% Et3N) fornisce 69 (380 mg, resa 42% calcolata da 53) chimicamente puro all’analisi NMR.
L’imminoderivato 69 è una schiuma gialla che presenta Rf 0.28 (esano-
AcOEt 2:8); [α]D +31.2(c 1.1, CHCl3); 1H-NMR (CD3CN): δ 7.43-7.27
(m, 10H, Ar-H), 4.82 (s, 2H, CH2Ph), 4.15, 3.48 (sistema AB, 2H, JA,B 13.4 Hz, NCH2Ph),
3.95-3.74 (m, 2H, H-6a, H-6b), 3.95-3.34 (m, 3H, H-2, H-4, OH), 3.26-3.00 (m, 2H, H-3, OH), 2.77 (dd, 1H, J1ax,1eq 11.4 Hz, J1eq,2 4.6 Hz, H-1eq), 2.35-2.08 (m, 2H, H-5, OH), 2.91
(dd, 1H, J1ax,2 11.0 Hz, H-1ax); 13C NMR (CD3CN): δ 140.5, 140.1 (2x Ar-C), 129.8-127.8
(Ar-CH), 87.9 (C-3), 74.8 (OCH2Ph), 71.5, 70.3 (C-4, C-2), 68.0 (C-5), 59.6 (C-6), 57.3 OH N O H OBn CH2Ph COOMe O H N OH OH BnO Ph
(NCH2Ph, C-1). Analisi elementare calcolata (%) per: C20H25NO4 (343,43): C, 69.95; H,
7.34; N, 4.08. Trovato: C, 69.87; H, 7.36; N, 4.01.
3.3.5. – Tentativi di preparazione del 3-O-benzil-N-[(2'R)-1'-carbometossi-2'- benziletil]-1,5-didesossi-1,5-immino-D-glucitolo (70a)
Una soluzione (4 ml) del grezzo contenente il dicarbonilico 54 (0.56 mmoli) è stata sottoposta a doppia amminazione riducente intramolecolare con d-Phe-OMe·HCl (120.8 mg, 0.56 mmoli, 1 eq.) e NaBH3CN (77.4 mg, 1.23 mmoli, 2.2 eq.) secondo la procedura
generale A descritta precedentemente. Dopo 12 ore, l’analisi TLC (esano-AcOEt 2:8) mostra la completa scomparsa del materiale di partenza e la formazione di una macchia prevalente Rf 0.68 e l’analisi NMR del residuo grezzo (350 mg) ha evidenziato la presenza
del lattone 70. Una flash cromatografia su gel di silice (esano-AcOEt 4:6 + 0.1% Et3N)
fornisce 70 (48 mg, resa 22% calcolata da 19) chimicamente puro all’analisi NMR.
Il lattone 70 è uno sciroppo incolore che presenta Rf 0.68 (esano-
AcOEt 2:8); [α]D -3.4(c 1.12, CHCl3); 1H-NMR (CD3CN): δ 7.60-
7.19 (m, 10H, Ar-H), 4.81, 4.79 (sistema AB, 2H, JA,B 11.3 Hz,
OCH2Ph), 4.21 (dd, 1H, J4,5 2.7 Hz, J3.4 10.8 Hz, H-4), 3.68-3.55 (m, 2H, H-2, OH), 3.52 (t,
J 4.5 Hz, H, CH), 3.18 (t, 1H, J2,3 10.8 Hz, H-3), 3.25 (t, 1H, J6a,6b =J5,6b 10.5 Hz, H-6b),
3.08-2.90 (m, 5H, H-1eq, H-6a, OH, CH2Ph), 2.54-2.45 (m, 2H, H-5, OH), 2.13 (dd, 1H,
J1ax,1eq 11.7 Hz, J1ax,2 10.7 Hz, H-1ax); 13C NMR (CD3CN): δ 171.0 (C=O), 140.3, 138.4
(2x Ar-C), 131.4-127.6 (Ar-CH), 87.6 (C-3), 75.3 (OCH2Ph), 72.4 C-2), 70.6 (C-4), 70.4
(C-6), 65.4 (CH), 59.7 (C-5), 57.3 (C-1), 38.7 (CH2Ph),
3.3.6. – Preparazione del N-[(2-N-t-butossicarbonil)-aminoetil]-3,6-di-O-benzil-1,5-di- desossi-1,5-immino-D-glucitolo (33)
Una soluzione metanolica (8 ml) del grezzo contenente il dicarbonilico 32 (1.12 mmoli) è stata sottoposta a doppia amminazione riducente intramolecolare con N- benzilossicarbonil-etilendiammina cloridrato (168.8 mg, 1.12 mmoli, 1 eq.) e NaBH3CN
(154.3 mg, 2.456 mmoli, 2.2 eq.) secondo la procedura generale A descritta precedentemente. Dopo 24 ore l’analisi TLC (AcOEt) indica la presenza di vari prodotti visibili all’UV di cui uno prevalente. Dopo trattamento della reazione con una soluzione acquosa satura di K2CO3, estrazione con CHCl3 e concentrazione delle fasi organiche a
pressione ridotta si ottiene un residuo grezzo (614 mg) che viene purificato mediante flash
N O O H OH BnO O Ph
cromatografia (esano-AcOEt 4:6) su colonna di gel di silice. Si isola l’azazucchero 33 (204 mg, resa 35% calcolata a partire da 56) chimicamente puro all’analisi NMR.
L’imminoderivato 33 è una schiuma bianca avente Rf 0.153
(esano-AcOEt 2:8); [α]D +20.2 (c 1.2, CHCl3); 1H-NMR
(CD3CN): δ 7.44-7.24 (m, 15H, Ar-H), 5.56 (bt, 1H, J 5.4 Hz,
CH2NH), 4.85, 4.79 (sistema AB, 2H, JA,B 11.5 Hz, CH2Ph), 4.50, 4.45 (sistema AB, 2H,
JA,B 11.8 Hz, CH2Ph), 3.77 (dd, 1H, J6a,6b 10.6 Hz, J5,6b 2.4 Hz, H-6b), 3.76 (dd, 1H, J5,6a
4.1 Hz, H-6a), 3.56 (ddd, 1H, J1eq,2 4.7 Hz, J1ax,2 10.3 Hz, J2,3 9.8 Hz, H-2), 3.41 (t, 1H, J3,4=J4,5 8.7 Hz, H-4), 3.10-2.89 (m, 5H, H-3, 2xOH, CH2NH), 2.86, 2.47 (2bt, each 1H, J
6.8 Hz, CH2N), 2.40 (m, 1H, H-5), 2.19 (dd, 1H, J1ax,1eq 11.3 Hz, H-1ax), 1.39 (s, 9H,
CMe3); 13C NMR (CD3CN): δ 157.0 (OCON), 140.3, 139.3 (2xAr-C), 130.4-128.2 (Ar-
CH), 87.5 (C-3), 79.2 (CMe3), 74.8, 73.6 (2xCH2Ph), 71.3 (C-4), 70.2 (C-2), 68.5 (C-6),
66.1 (C-5), 56.1 (C-1), 52.1 (CH2N), 38.3 (CH2NH), 28.6 (CMe3). Analisi elementare
calcolata (%) per: C30H36N2O6 (520.63): C, 69.21; H, 6.97; N, 5.38. Trovato: C, 69.19; H,
6.94; N,5.41.