Composti fenolici isolati dall’olio extra-vergine d’oliva modulano

4. RISULTATI E DISCUSSIONE

4.1 Composti fenolici isolati dall’olio extra-vergine d’oliva modulano

surnatante

Per valutare il potenziale effetto di modulazione dei polifenoli estratti dall’EVOO sull’espressione di miRNA associati all’infiammazione, gli adipociti sono stati pre-

incubati con HT (10 mol/L), OC o OA (25 mol/L) per 6 ore, quindi stimolati con

TNF-α (10 ng/mL) per 18 ore. I miRNA sono stati estratti da adipociti e da esosomi rilasciati nel mezzo di coltura, quindi analizzati mediante real-time qPCR.

In risposta allo stimolo infiammatorio, si osserva una up-regolazione dei livelli di e- spressione del miR-155-5p sia negli adipociti che negli esosomi rispetto al controllo, non trattato con TNF-α. Il pre-trattamento con OC, OA o HT contrasta in maniera significativa l’aumento dell’espressione del miR-155-5p sia negli adipociti che negli esosomi, rispetto al trattamento con TNF-α (Figura 11A e B).

MiR-155-5p è stato uno dei primi miRNA individuati in un contesto infiammatorio, dove risulta essere up-regolato da NF-kB. Il risultato ottenuto concorda con la lette- ratura, in quanto altri lavori hanno documentato la modulazione, in negativo, dell’espressione di miR-155 in seguito a somministrazione, in vitro o in vivo, di so- stanze anti-infiammatorie e antiossidanti, ivi inclusi polifenoli di varia derivazione vegetale. Si osserva una riduzione dei livelli di miRNA associati all’infiammazione, tra cui let-7b e miR-155-3p, in leucociti di soggetti con sindrome metabolica, in seguito ad un programma dietetico basato sulla dieta mediterranea (di cui l’EVOO è un importante componente alimentare) (Marques-Rocha et al., 2016). L’apigenina (fla- vone presente nel sedano e nel prezzemolo) espleta un’azione anti-infiammatoria a livello polmonare, riducendo in vivo l’espressione LPS-indotta di miR-155 (Arango et al., 2015). Il trattamento di macrofagi murini LPS-stimolati con quercetina (flavo- nolo presente in cipolla, tè, vino rosso, mela) favorisce un’attenuazione dell’espressione di geni infiammatori e una diminuzione dei livelli di miR-155 (Bo-

Figura 11: Livelli di espressione del miR-155-5p, estratto da adipociti (A) e da e- sosomi isolati dal surnantante (B), in adipociti umani SGBS di controllo (ctrl), trat-

tati con stimolo pro-infiammatorio (TNF-) e pre-trattati con polifenoli quali oleo-

esch-Saadatmandi et al., 2011). Nel tessuto sottocutaneo di individui con

BMI ≥ 25,4 kg/ e con T2DM, si osserva un’espressione significativamente eleva-

ta di miR-155, rispetto a soggetti normopeso e con normale tolleranza al glucosio. Inoltre, tale espressione è risultata essere correlata in maniera significativa con il tas- so di infiltrazione macrofagica, a sua volta positivamente correlata con il grado di infiammazione cronica a livello del deposito tissutale in questione. Si conferma pertan- to che il miRNA gioca un ruolo nel stabilire un collegamento tra la disfunzione del tessuto adiposo e lo sviluppo di disordini metabolici obesità-correlati, incluso il T2DM (Klöting et al., 2009). Tili e colleghi evidenziano un possibile meccanismo d’azione epigenetico del resveratrolo (fenolo stilbenico presente nell’uva e nel vino rossi) in un modello di monociti umani (THP-1): il resveratrolo up-regola l’espressione del miR-663, anti-infiammatorio, riducendo i livelli di miR-155 (Tili et al., 2010). In una linea cellulare di macrofagi LPS-stimolati, il trattamento con il polifenolo curcumina ha un effetto inibente la produzione di fattori pro-infiammatori e l’espressione di miR-155 (F. Ma et al., 2017).

4.2 Composti fenolici isolati dall’olio extra-vergine d’oliva modulano

i livelli di miR-34a-5p negli adipociti e negli esosomi isolati dal

surnatante

In risposta allo stimolo infiammatorio, si osserva una up-regolazione dei livelli di e- spressione del miR-34a-5p sia negli adipociti che negli esosomi, rispetto alle cellule trattate con TNF-α. Il pre-trattamento con OC, OA o HT contrasta in maniera significativa l’aumento dell’espressione del miR-34a-5p sia negli adipociti che negli eso- somi, rispetto al trattamento con TNF-α (Figura 12A e B).

In un contesto infiammatorio, miR-34a risulta essere up-regolato da NF-kB. In uno studio randomizzato controllato con placebo, condotto su uomini ipertesi e con T2DM, si è osservata una modulazione di miRNA coinvolti nella risposta infiammatoria nel gruppo supplementato con estratto di uva contenente più di 8 mg di resveratrolo (GE-RES): in particolare, miR-155 e miR-34a risultavano down-regolati in seguito al trattamento, rispetto al controllo. A questa modulazione, faceva seguito una minore espressione di alcuni marcatori infiammatori (IL-6, fosfatasi alcalina - ALP, IL-1β, CCL3/C-C motif chemokine ligand 3, TNF-α) (Tomé-Carneiro et al., 2013). In un altro lavoro si documenta che il danno epatico arsenico-indotto può essere atte- nuato e migliorato in seguito a somministrazione di estratto di melograno, ricco in antociani, catechine e tannini idrolizzabili: la minore produzione di ROS ha, in vitro, un effetto anti-apoptotico e anti-infiammatorio, grazie ad una minore attivazione dei

pathways p53- e NF-kB-mediati. In questo contesto, miR-34a e Bax (Bcl2 Associated

Figura 12: Livelli di espressione del miR-34a-5p, estratto da adipociti (A) e da eso- somi isolati dal surnantante (B), in adipociti umani SGBS di controllo (ctrl), trattati

con stimolo pro-infiammatorio (TNF-) e pre-trattati con polifenoli quali oleocanta-

X), fattori pro-apoptotici e pro-infiammatori, nonché target di p53 e NF-kB, risultano

4.3 Composti fenolici isolati dall’olio extra-vergine d’oliva modulano

i livelli di let-7c-5p negli adipociti e negli esosomi isolati dal

surnatante

In risposta allo stimolo infiammatorio, si osserva una down-regolazione dei livelli di espressione del miRNA let-7c-5p sia negli adipociti che negli esosomi, rispetto al controllo, non trattato con TNF-α. Il pre-trattamento con OC, OA o HT previene in maniera significativa la minore espressione di let-7c-5p sia negli adipociti che negli esosomi, rispetto al trattamento con TNF-α (Figura 13A e B).

In un contesto infiammatorio, let-7c risulta essere down-regolato da NF-kB. È stata documentata un’aumentata espressione di let-7c in linea cellulare di cancro epatico (HepG2) in seguito al trattamento con epigallocatechina 3-gallato (EGCG, polifenolo presente nel tè verde) (Tsang & Kwok, 2010). Nwaeburu e colleghi hanno dimostrato che il trattamento di cellule di adenocarcinoma duttale pancreatico con quercetina porta ad una maggiore espressione cellulare di let-7c (Nwaeburu et al., 2016). L’espressione di let-7 (let-7b, let-7i) risulta essere up-regolata anche da AKBA (a-

cetyl-11-keto-β-boswellic acid), componente attivo presente negli acidi boswellici

della resina gommifera di Boswellia serrata, i quali hanno riconosciute proprietà an- ti-infiammatorie (Shah et al., 2009).

Figura 13: Livelli di espressione del let-7c-5p, estratto da adipociti (A) e da eso- somi isolati dal surnantante (B), in adipociti umani SGBS di controllo (ctrl), trattati

con stimolo pro-infiammatorio (TNF-) e pre-trattati con polifenoli quali oleocan-

5. CONCLUSIONI

Il trattamento di adipociti umani, infiammati, con i polifenoli OC, OA e HT si è dimostrato valido nel contrastare l’alterata espressione di miR-155-5p, miR-34a-5p e let-7c-5p, indotta dall’esposizione degli adipociti al TNF-α. Tale evidenza è stata ot- tenuta sia negli stessi adipociti che nella frazione extracellulare costituita da esosomi. Poiché gli esosomi partecipano alla comunicazione cell-to-cell, e sono in grado di at- traversare la parete dei capillari per essere internalizzati da una cellula ricevente, la diversa espressione esosomiale dei miRNA dopo il trattamento pro-infiammatorio potrebbe verosimilmente avere un impatto anche in tessuti distanti da quello adiposo. L’aver evidenziato che il trattamento con i componenti dell’EVOO risulta favorevole a migliorare questo aspetto dell’infiammazione ha pertanto grande rilevanza nell’ambito di un approccio a livello sistemico.

Rimangono inesplorati gli effetti dei polifenoli sulla modulazione di miRNA in studi clinici sull’uomo, che potrebbero rappresentare un ulteriore approfondimento in questo ambito di ricerca.

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Nel documento POLIFENOLI ISOLATI DALL'OLIO EXTRA-VERGINE DI OLIVA MODULANO L'ESPRESSIONE DI MICRORNA CORRELATI AL PROCESSO INFIAMMATORIO IN UN MODELLO IN VITRO DI ADIPOCITI (pagine 58-89)