Disegno sperimentale e durata degli esperiment

1. GF677, il substrato utilizzato era lo stesso dell’esperimento sulla

4.6 Disegno sperimentale e durata degli esperiment

Per gli esperimenti di proliferazione sono stati utilizzati dieci vasi con cinque apici/vaso per ogni concentrazione ormonale, di cui cinque usati come controlli e cinque messi nella camera di crescita con le luci dinamiche; gli apici sono stati trasferiti su un substrato nuovo, rinnovando il taglio senza suddividere il cluster per favorire l’assorbimento delle sostanze nutritive, dopo 2 settimane. Dopo altre 2 settimane i clusters sono stati analizzati e sono stati campionati i dati relativi ad ogni esperimento che consistevano

nella misurazione del peso fresco, del peso secco, la % di sostanza secca, il numero e la lunghezza dei germogli.

Per gli esperimenti di radicazione non sono invece stati effettuati rinnovi del substrato e gli apici/vaso erano 10; i germogli sono stati lasciati nei vasi per 4 settimane prima di essere analizzati rilevando il numero di germogli radicati, il numero di radici medio per germoglio, la loro lunghezza e l’altezza finale dei germogli, sia radicati che non radicati.

4.6.1 Esperimenti su Ba 29

4.6.1.1 Esperimento 1

Obiettivo : valutare l’effetto del trattamento luminoso dinamico sulla proliferazione di BA 29 dopo 40 giorni di esposizione.

L’esperimento è stato basato sul confronto tra il controllo, contenente 3 mg a vaso di citochinina (1,5 mg da BA + 1,5 mg di BAR), e le tesi sotto le luci dinamiche, suddivise in tre gruppi:

• Tesi A (1,5 mg BA + 1,5 mg BAR) = 3 mg/litro • Tesi B (2,25 mg BA + 2,25mg di BAR) = 4,5 mg/litro • Tesi C (3 mg Ba + 3 mg di BAR) = 6 mg/litro

In questo esperimento sono stati inseriti 8 clusters a vaso.

4.6.1.2 Esperimento 2

Obiettivo : confermare l’effetto del trattamento luminoso dinamico sulla proliferazione di BA 29 dopo 40 giorni di esposizione con tre concentrazioni diverse nei vasi di controllo.

Questo esperimento era simile a quello precedente, sebbene siano stati utilizzati 5 clusters a vaso e invece di avere solo una concentrazione nei vasi di controllo ne sono state preparate tre uguali a quelle sotto le luci dinamiche:

• Tesi A (1,5 mg BA + 1,5 mg BAR) = 3 mg/litro • Tesi B (2,25 mg BA + 2,25mg di BAR) = 4,5 mg/litro • Tesi C (3 mg Ba + 3 mg di BAR) = 6 mg/litro

4.6.1.3 Esperimento 3

Obiettivo: valutare l’effetto del trattamento luminoso dinamico sul contenuto di clorofilla nelle foglie dei clusters di BA 29

Sono stati effettuati 2 rilievi presi a caso tra i clusters dell’esperimento precedente alla concentrazione di ormone di 3,0 mg/litro tra gli espianti di controllo e 2 rilievi per gli espianti sotto luci mobili.

Il metodo scelto per l’estrazione è stato quello di Moran e Porath (1980). La caratteristica principale di questo metodo consisteva nel fatto che i tessuti prelevati dovevano essere immersi integri in 2 ml di dimetilformamide e qui mantenuti per 24 ore a 4°C in assenza di luce; questo rendeva l’analisi più semplice e pratica rispetto ad altri metodi che prevedono la macerazione e la centrifugazione del

surnatante per varie volte con l’utilizzo di estrattori molto costosi e rischiosi per l’operatore.

Una volta estratto il liquido, è stata misurata allo spettrofotometro l’assorbanza della soluzione alle lunghezze d’onda di 664 nm (chl A), 647 nm (chl B) e di 625 nm (protoclorofilla).

Dai valori dell’assorbanza, utilizzando l’equazione di Moran, è stato possibile calcolare le concentrazioni di clorofilla nelle soluzioni dei vari estratti.

Determinazione del contenuto di clorofilla (microgrammi per 2 ml di dimetilformamide).

Chl A : (12,6 X Abs 664) – (2,99 X Abs647) – (0,04 X Abs 625) Chl B : (23,44 X Abs 647) – (5,48 X Abs 664) – (0,97 X Abs625) Protoclorofilla: (28,3 X Abs 625) – (3,49 X Abs664) – (5,25 X

Abs647)

4.6.2 Esperimenti su MM106

4.6.2.1 Esperimento 4

Obiettivo : valutare l’effetto del trattamento luminoso dinamico sulla proliferazione di MM106 dopo 50 giorni di esposizione.

L’esperimento è stato basato sul confronto tra le tre concentrazioni dei vasi di controllo e le tesi sotto le luci dinamiche, suddivise in tre gruppi:

• Tesi A = BA 2,5 mg/litro • Tesi B = BA 3,75 mg/litro • Tesi C = BA 5,0 mg/litro

4.6.3 Esperimenti su Mr.S. 2/5

4.6.3.1 Esperimento 5

Obiettivo : valutare l’effetto del trattamento luminoso dinamico sulla proliferazione di Mr.S. 2/5 dopo 30 giorni di esposizione.

L’esperimento è stato basato sul confronto tra le tre concentrazioni dei vasi di controllo e le tesi sotto le luci dinamiche, suddivise in tre gruppi:

• Tesi A = BAP 0,5 mg/litro • Tesi B = BAP 1,0 mg/litro • Tesi C = BAP 1,5 mg/litro

In questo esperimento sono stati inseriti 5 clusters a vaso.

4.6.3.2 Esperimento 6

Obiettivo : valutare l’effetto del trattamento luminoso dinamico sulla proliferazione di Mr.S. 2/5 dopo 30 giorni di esposizione.