3.2.3 Identificazione di interattori funzionali specifici di BRAF V600E tramite cross expression
ID MRS2 BRAF V600E LCMT2 ACSS1 SGPL1 SHMT2 LCMT1 FAM63A FAM63B ACSS2 SHMT1 ACSF
5. C ONCLUSIONI E PROSPETTIVE FUTURE
Utilizzando il metodo di Screening genetico su una Yeast Deletion Pool, ho potuto trovare degli interattori funzionali della proteina BRAFV600E. La delezione di questi
geni, in concomitanza con l’espressione della proteina eterologa umana, ha causato il rallentamento-‐letalità delle cellule trasformate.
Per il lavoro di tesi mi sono concentrato a caratterizzare soltanto i geni che hanno l’ortologo umano, tuttavia sarà interessante vedere se i geni identificati che non sono ortologhi a geni umani hanno omologia di funzione e quindi studiare i pathway in cui sono coinvolti.
Gli scenari di possibili indagini che si aprono grazie a questi risultati sono assai vasti: per ciascun gene trovato che ha l’omologo nell’uomo possiamo infatti disegnare dei primer per andare così a verificare il loro livello di espressione in diverse linee di melanoma e, in caso di risultati incoraggianti, possiamo pensare di modulare in vitro l’espressione di questi, e vedere se ciò comporta una diminuzione della proliferazione delle cellule cancerose.
Per ampliare il numero di geni da investigare ripeteremo lo screening, andando però a trasformare l’YDP con i plasmidi contenti il BRAF wt e la forma di BRAF responsabile della resistenza al farmaco Vemurafenib.
Potremo successivamente riproporre esperimenti di cross expression per i differenti cloni individuati nei vari screening, andando così a stilare una lista di nuovi interattori, isoforma-‐specifici e non, potenzialmente utilizzabili nella terapia del melanoma.
È bene specificare che quelli ottenuti sono un range di dati definito a cui se ne aggiungeranno altri dai successivi due screening. Dobbiamo considerare comunque che gli screening sono fatti manualmente e quindi la discriminazione ad occhio nudo dei ceppi, che hanno un difetto di crescita, risente del limite della percezione visiva, dando così una selezione di dati dove il fenotipo è molto marcato. Andando a
fare un studio utilizzando un sistema di microarray per l’identificazione dei cloni dell’YDP potremmo valutare cosa accade con precisione a ciascuno dei 4741 ceppi deleti e come varia la loro fitness in presenza della proteina umana espressa. In atre parole ci troveremo a valutare le variazioni di tutti i ceppi deleti, con il risultato di un’enorme quantità di dati da poter analizzare al fine di ricercare target ancora più specifici e completi.
I risultati di questo lavoro di tesi sono quindi un punto di partenza essenziale per poter proseguire e permetterci di investire in futuro su metodi investigativi più dettagliati. Sono stati inoltre un’ulteriore dimostrazione che il lievito Saccharomyces
cerevisiae è un ottimo modello per identificare geni umani che hanno un ruolo nelle
malattie e nella terapia conseguente.
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