4.1 Risultati sperimentali ottenuti
4.1.2 Valutazione degli effetti anti-proliferativi di Oxid-2 in co-
Per studiare un potenziale sinergismo d'azione con Oxid-2 è stato scelto everolimus, farmaco già approvato dalla FDA e dall'EMEA per il trattamento del carcinoma mammario, il cui target d'inibizione è mTOR, elemento chiave del pathway di segnalazione PI3K/Akt/mTOR i cui effetti si concretizzano a valle della cascata di trasduzione; dunque everolimus esercita un'inibizione distale rispetto ad Oxid-2 i cui substrati sono invece a monte del pathway.
Le concentrazioni utilizzate negli esperimenti di sinergismo (10 e 20 μM per Oxid-2 e 0,1nM per Everolimus) sono state selezionate poichè in esperimenti preliminari hanno mostrato un'attività borderline sull'inibizione della proliferazione cellulare se prese
91 singolarmente, pertanto è stato ipotizzato che ciò potesse costituire la base per un
possibile sinergismo in co-somministrazione. Il sinergismo a 24 ore prevede la co-incubazione di Oxid-2 (20μM o 10μM) ed
everolimus (0.1nM).
Esperimento a 24 ore: Oxid-2 20μM ed everolimus 0.1nM.
L'analisi dei dati ottenuta dopo 24 ore dall'incubazione verifica un'evidente riduzione della proliferazione cellulare promossa dai tre diversi trattamenti (Oxid-2 20μM, everolimus 0.1nM, Oxid-2 20μM ed everolimus 0.1nM). La significatività di tale riduzione è statisticamente massima (*** : p<0.001) per i risultati promossi da Oxid-2 20 μM e dalla co-incubazione delle due molecole, mentre è pari a p<0.05 (*) per l'effetto provocato da everolimus 0.1nM.
Dall'istogramma A è possibile notare come l'azione anti-proliferativa promossa da Oxid-2 e quella provocata dalla co-incubazione delle due molecole siano del tutto analoghe e ciò non permette di poter rilevare un significativo effetto sinergico fra Oxid- 2 20μM ed everolimus 0.1nM. Oxid-2 20μM 59.0 ± 0.8% Eve 0,1nM 78.6 ± 10.6% Oxid-2+Eve 60.4 ± 1.6%
Istogramma A. Istogramma relativo alla vitalità cellulare della linea MCF7 dopo 24 ore di incubazione con: veicolo (controllo), trattamento alla concentrazione di 20μM con Oxid-2, trattamento alla concentrazione di 0.1nM con Everolimus, trattamento in seguito alla co-somministrazione di Oxid-2 20μM ed Everolimus 0.1nM. Le barre verticali indicano l'errore standard. (* = P<0.05; *** = P<0.001).
92 Esperimento a 24 ore: Oxid-2 10μM ed everolimus 0.1nM.
Considerata la massiva attività promossa da Oxid-2 20μM, l'esperimento a 24 ore è stato ripetuto dimezzando la concentrazione della molecola e verificando l'attività di Oxid-2 10μM a 24 ore.
I risultati, riportati nell'istogramma B, dimostrano che i tre diversi trattamenti (Oxid-2 10μM, everolimus 0.1nM, Oxid-2 10μM ed everolimus 0.1nM) hanno prodotto un effetto significativo statisticamente significativo massimo con p<0.001 (***).
In particolare però, l'effetto mediato dalla co-incubazione non si discosta in maniera significativa da quello che è il risultato promosso dall'azione del solo Oxid-2 : le due azioni anti-proliferative non presentano una differenza statisticamente apprezzabile.
Oxid-2 10μM 57.1 ± 4.4% Eve 0,1nM 66.9 ± 5.3% Oxid-2+Eve 62.6 ± 4.1%
Istogramma B. Istogramma relativo alla vitalità cellulare della linea MCF7 dopo 24 ore di incubazione con: veicolo (controllo), trattamento alla concentrazione di 10μM con Oxid-2, trattamento alla concentrazione di 0.1nM con Everolimus, trattamento in seguito alla co-somministrazione di Oxid-2 10μM ed Everolimus 0.1nM. Le barre verticali indicano l'errore standard. (*** = P<0.001).
93 Gli stessi protocolli sperimentali sono stati quindi ripetuti utilizzando un periodo di incubazione dei trattamenti pari a 120 ore: un arco di tempo identificato per garantire un totale allineamento del ciclo cellulare in modo tale da poter escludere un effetto farmacologicamente rilevante esclusivamente in caso di ciclo-specificità d'azione della molecola.
Esperimento a 120 ore: Oxid-2 20μM ed everolimus 0.1nM.
I risultati riportati nell'istogramma C evidenziano una significatività rilevante con un p<0.01 (**) relativo all'effetto anti-proliferativo promosso da everolimus 0.1nM, mentre gli effetti indotti da Oxid-2 20μM e dalla co-incubazione delle due molecole sono descritti con la massima significatività statistica (***: p<0.001).
Tuttavia paragonando i risultati ottenuti da Oxid-2 20μM e dalla co-incubazione delle due molecole non è possibile cogliere una differenza statisticamente rilevante che evidenzi un possibile sinergismo d'azione.
Oxid-2 20μM 55.6 ± 6.4% Eve 0,1nM 76.1 ± 6.0% Oxid-2 + Eve 61.4 ± 1.5%
Istogramma C. Istogramma relativo alla vitalità cellulare della linea MCF7 dopo 120 ore di incubazione con: veicolo(controllo), trattamento alla concentrazione di 20μM con Oxid-2, trattamento alla concentrazione con 0.1nM di Everolimus, trattamento in seguito alla co-somministrazione di Oxid-2
94 Esperimento a 120 ore: Oxid-2 10μM ed everolimus 0.1nM.
Dai risultati presentati nell'istogramma D si rileva come l'attività anti-proliferativa indotta da Oxid-2 10μM non abbia provocato un effetto statisticamente rilevante mentre i risultati promossi da everolimus 0.1nM e dalla co-incubazione delle due molecole presentano una significatività corrispondente rispettivamente a p<0.001 (***) e p<0.05 (*).
Dall'istogramma D si evince inoltre che tra l'attività anti-proliferativa indotta da everolimus 0.1nM e quella promossa dall'azione sinergica di Oxid-2 ed everolimus 0.1nM non vi sia un'apprezzabile differenza statistica.
Oxid-2 10μM 97.7 ± 10.3% Eve 0,1nM 71.2 ± 4.6% Oxid-2+Eve 87.1 ± 6.1%
Istogramma D. Istogramma relativo alla vitalità cellulare della linea MCF7 dopo 120 ore di incubazione con: veicolo(controllo), trattamento alla concentrazione di 10μM con Oxid-2, trattamento alla concentrazione di 0.1nM con Everolimus, trattamento in seguito alla co-somministrazione di Oxid-2
10μM ed Everolimus 0.1nM. Le barre verticali indicano l'errore standard. (* = P<0.05; *** = P<0.001).
95 Possibili ipotesi che giustifichino un'assenza del sinergismo d'azione rilevabile dall'associazione di everolimus ad Oxid-2 potrebbero dipendere da:
un meccanismo d'azione evidentemente pleonastico a causa di un'inibizione proliferativa già esaurita se compiuta in posizione prossimale, a monte del pathway da Oxid-2 od in posizione distale, a valle del signaling promossa su mTOR da everolimus;
il manifestarsi di forme di resistenza, intrinseca od acquisita di tipo crociato, a più livelli del pathway-target, potrebbe provocare la scarsa sensibilità alle due molecole;
un ruolo non fondamentalmente esaustivo svolto dal pathway-target PI3K/Akt/mTOR nei processi di vitalità e di proliferazione delle MCF7; quindi l'effetto inibitorio delle due molecole potrebbe essere neutralizzato da altri signaling, paralleli, più o meno interconnessi e/o più o meno svincolati dalla via PI3K/Akt/mTOR, e maggiormente coinvolti negli eventi promotori della
cancerogenesi.
96
Bibliografia
Aapro M., Andre F., Blackwell K., Calvo E., Jahanzeb M., Papazisis K., Porta C., Pritchard K., Ravaud A. : Adverse event management in patients with advanced cancer receiving oral everolimus: focus on
breast cancer. 2014, Annuals of Oncology 25 : 763–773.
Ahn Y., Hwang C.Y., Lee S.R., Kwon K.S., Lee C. : Tumor suppressor PTEN mediates a negative
regulation of E3 ubiquitin-protein ligase Nedd4. 2008, Biochemistry Journal 412 : 331–338.
Ahnert J.R., Schuler M.H., Machiels J.P.H. : Phase lb study of BEZ235 plus either paclitaxel (ptx) in
advanced solid tumors (ast) or ptx plus trastuzumab (tz) in her2+ breast cancer (bc) [abstract 627].
2014, Journal of Clinical Oncology 32.
Akinleye A., Avvaru P., Furqan M., Song Y., Liu D.: Phosphatidylinositol 3-kinase (pi3k) inhibitors as
cancer therapeutics. 2013, Journal of Hematology and Oncology 6 : 88.
Albiges L., Chamming’s F., Duclos B.: Incidence and management of mTOR inhibitor–associated
pneumonitis in patients with metastatic renal cell carcinoma. 2012, Annuals of Oncology 23 : 1943–
1953.
Alì A.: Valutazione degli effetti anti-tumorali di un nuovo inibitore multi-target PDK1/GSK3/CHK1 su
linee cellulari chemioresistenti di glioblastoma umano. Tesi di Laurea, Anno Accademico 2013-2014.
Ali I.U., Schriml L.M., Dean M., : Mutational spectra of PTEN/MMAC1 gene: a tumor suppressor with
lipid phosphatase activity. 1999, Journal of Natlional Cancer Institutes 91 : 1922–1932.
American Cancer Society : Breast Cancer Facts and Figures 2013–2014. 2013, Atlanta, GA: American Cancer Society.
Anderson W.F., Chatterjee N., Ershler W.B., Brawley O.W.: Estrogen receptor breast cancer phenotypes
in the Surveillance, Epidemiology, and End Results database. 2002, Breast Cancer Research and
Treatment 76 : 27–36.
Arpino G., Bardou V.J., Clark G.M., Elledge R.M.: Infiltrating lobular carcinoma of the breast: tumor
characteristics and clinical outcome. 2004, Breast Cancer Research 6 : 149-156.
Bachelot T., Bourgier C., Cropet C., Ray-Coquard I., Ferrero J.M., Freyer G., Abadie-Lacourtoisie S., Eymard J.C., Debed M., Spaėth D., Legouffe E., Allouache D., El Kouri C., Puujade-Lauraine E.:
97
receptor-positive, human epidermal growth factor receptor 2–negative metastatic breast cancer with prior exposure to ais: a gineco study. 2012, Journal of Clinical Oncology 30 : 2718–2724.
Barket J., Lukas J.: Chk1 and Chk2 kinases in checkpoint control and cancer. 2003, Cancer Cell 3 : 421- 429.
Baselga J., Campone M., Piccart M., Burris III H.A., Rugo H.S., Sahmoud T., Noguchi S., Gnant M., Pritchard K.I., Lebrun F. : Everolimus in postmenopausal hormone receptor-positive advanced breast
cancer. 2012, The New England Journal of Medicine 366 : 520–529.
Beaber E.F., Malone K.E., Mei-Tzu Chen T., Barlow W.E., Porter P.L., Daling J.R., Li C.I.: Oral
Contraceptives and Breast Cancer Risk Overall and by Molecular Subtype Among Young Woman. 2014,
Cancer Epidemiology, Biomarkers & Prevention 1 : 755-764.
Bendell J., Rodon J., Burris H., De Jonge M., Verweij J., Birle D.: Phase I, dose escalation study of
BKM120, an oral pan-class I PI3K inhibitor, in patients with advanced solid tumors. 2012, Journal of
Clinical Oncology 30 : 282–290.
Bhattacharyya A., Ear U.S., Koller B.H., Weichselbaum R.R., Bishop D.K.: The breast cancer
susceptibility gene BRCA1 is required for subnuclear assembly of Rad51 and survival following treatment with the DNA cross-linking agent cisplatin. 2000, The Journal of Biological Chemistry 275:
23899–23903.
Biondi R.M., Komander D., Thomas C.C., Lizcano J.M., Deak M., Alessi D., Van Aalten D.M.F.: High
resolution crystal structure of the human PDK1 catalytic domain defines the regulatory phosphopeptide docking sit. 2002, The EMBO Journal 21 : 4219-4228.
Bissler J.J., Kingswood J.C., Radzikowska E., Zonnenberg B.A., Frost M., Belousova E.,: Everolimus for
angiomyolipoma associated with tuberous sclerosis complex or sporadic lymphangioleiomyomatosis (EXIST-2) : a multicentre, randomised, double-blind, placebo controlled trial. 2013, Lancet 318 : 817–
824.
Blasina A., Hallin J., Chen E., Arango M.E., Kraynov E., Register J., Grant S., Ninkovic S., Chen P., Nichols T., O’Connor P., Anderes K.: Breaching the DNA damage checkpoint via PF-00477736, a novel
small-molecule inhibitor of checkpoint kinase 1. 2008, Molecular Cancer Therapeutics 7 : 2394–2404.
Boice J.D., Harvey E.B., Blettner M.: Cancer in the contralateral breast after radiotherapy for breast
cancer. 2012, New England Journal of Medicine 326 : 781-785.
98
Brandt J., Garne J.P., Tengrup I., Manjer J.: Age at diagnosis in relation to survival following breast
cancer : a cohort study. 2015, World Journal of Surgical Oncology 92 : 550-556.
Brooks K., Oakes V., Edwards B., Ranall M., Leo P., Pavey S., Pinder A., Beamish H., Mukhopadhyay P., Lambie D., Gabrielli B.: A potent Chk1 inhibitor is selectively cytotoxic in melanomas with high levels
of replicative stress. 2013, Oncogene 32 : 788–796.
Brown E.J., Baltimore D.: Essential and dispensable roles of ATR in cell cycle arrest and genome
maintenance. 2003, Genes Development 17 : 615-628.
Bryant C., Rawlinson R., Massey A.: Chk1 Inhibition as a novel therapeutic strategy for treating triple-
negative breast and ovarian cancers. 2014, BioMedicalCentral Cancer 14 : 570.
Bryant H.E., Schultz N., Thomas H.D., Parker K.M., Flower D., Lopez E., Kyle S., Meuth M., Curtin N.J., Helleday T.: Specific killing of BRCA2-deficient tumours with inhibitors of poly(ADP-ribose)
polymerase. 2005, Nature 434 : 913–917.
Bucher N., Britten C.D.: G2 checkpoint abrogation and checkpoint kinase-1targeting in the treatment of cancer. 2008, British Journal of Cancer 98 : 523–528.
Burris lll H.A. : Overcoming acquired resistance to anticancer therapy: focus on the pi3k/Akt/mTOR
pathway. 2013, Cancer Chemotherapy and Pharmacology 71 : 829–842.
Burris III H.A., Lebrun F., Rugo H.S., Beck J.T., Piccart M., Neven P., Baselga J., Petrakova K., Hortobagyi G.N., Komorowski A.: Health-related quality of life of patients with advanced breast cancer
treated with everolimus plus exemestane versus placebo plus exemestane in the phase 3, randomized, controlled, BOLERO-2 trial. 2013, Cancer 119 : 1908–1915.
Cai Z., Chehab N.H., Pavletich N.P.: Structure and activation mechanism of the CHK2 DNA damage
checkpoint kinase. 2009, Molecular Cell 35 : 818–829.
Campone M., Bachelot T., Gnant M., Deleu I., Rugo H.S., Pistilli B., Noguchi S., Shtivelband M., Pritchard K.I., Provencher L.,: Effect of visceral metastases on the efficacy and safety of everolimus in
postmenopausal women with advanced breast cancer: Subgroup analysis from the BOLERO-2 study.
2013, Europe Journal Cancer 49 : 2621–2632.
Cantley L.: The phophoinositide 3 -kinase pathway. 2002, Science 296 : 1655-1657.
Carey L.A., Perou C.M., Livasy C.A.: Race, breast cancer subtypes, and survival in the Carolina Breast
99
Carracedo A., Salmena L., Pandolfi P.P.: SnapShot: PTEN Singnaling Pathway. 2008, Cell 133 : 550- 551.
Chen P., Luo C., Deng Y., Ryan K., Register J., Margosiak S., Tempczyk-Russell A., Nguyen B., Myers P., Lundgren K., Kan C.C., O’Connor P.M.: The 1.7 A crystal structure of human cell cycle checkpoint
kinase Chk1: implications for Chk1 regulation. 2000, Cell 100 : 681–692.
Chen X., Thakkar H., Tyan F., Gim S., Robinson H., Lee C.: Constistutively active Akt is an important
regulator on TRAIL sensitivity in prostate cancer. 2001, Oncogene 20 : 6073-6077.
Chia S., Gandhi S., Joy A.A., Edwards S., Gorr M., Hopkins S., Kondejewski J., Ayoub J.P., Calfaretti N., Rayson D., Dent S.F.: Novel agents and associated toxicities of inhibitors of the PI3K/Akt/mTOR
pathway for the treament of breast cancer. 2015, Current Oncology 22 : 33-46.
Cho H., Thorvaldsen J.L., Chu Q., Feng F., Birnbaum M.J.: Akt1/ PKBalpha is required for normal
growth but dispensable for maintenance of glucose homeostasis in mice. 2001, The Journal of Biological
Chemistry 276 : 38349-38352.
Cho S.H., Toouli C.D., Fujii G.H., Crain C., Parry D.: Chk1 is essential for tumor cell viability following
activation of the replication checkpoint. 2005, Cell Cycle 4 : 131–139.
Cleator S.J., Ahamed E., Coombes R.C., Palmieri C.: A 2009 update on the treatment of patients with
hormone receptor-positive breast cancer. 2009, Clinical Breast Cancer 9 : 6–17.
Clodferder-Miller B., De Sarno P., Zmijewska A.A., Song L., Jope R.S.: Phisiological and pathological
changes in glucose regulate brain Akt and glycogen synthase kinase-3. 2005, The Journal of Biological
Chemistry 280 : 39723-39731.
Cohen P., Frame S.: The renaissance of GSK3. 2001, Nature Reviews Molecular Cell Biology 2 : 769- 776.
Cole K.A., Huggins J., Laquaglia M., Hulderman C.E., Russell M.R., Bosse K., Diskin S.J., Attiyeh E.F., Sennett R., Norris G., Laudenslager M., Wood A.C., Mayes P.A., Jagannathan J., Winter C., Mosse Y.P., Maris J.M.: RNAi screen of the protein kinome identifies checkpoint kinase 1 (CHK1) as a therapeutic
target in neuroblastoma. 2011, Proceedings of the Nationall Academy of Sciences USA 108 : 3336–
100
Cummings S.R., Eckert S., Krueger K.A.: The effect of raloxifene on risk of breast cancer in
postmenopausal women: results from the more randomized trial. Multiple outcomes of raloxifene evaluation. 2009, Journal of American Medical Association 281 : 2189-2197.
Dai Y., Grant S.: New insights into checkpoint kinase 1 in the DNA damage response signaling network. 2010, Clinical Cancer Research 16 : 376-383.
Daling J.R., Malone K.E., Voigt L.F.: Risk of breast cancer among young women: relationship to
induced abortion. 1994, Journal of the National Cancer Institute 86 : 1584-1592.
Dang C.V.: Myc on the path to cancer. 2012, Cell 149: 22–35.
Datta S.R., Brunet A., Greenberg M.E.: Cellular surivival : a play in three Akts. 1999, Genes Development 13: 2905-2927.
Davies K.D., Humphries M.J., Sullivan F.X., Von C.I., Le H.Y., Mohr P.J., Wang B., Blake J.F., Lyon M.A., Gunawardana I., Chicarelli M., Wallace E., Gross S.: Single-agent inhibition of Chk1 is
antiproliferative in human cancer cell lines in vitro and inhibits tumor xenograft growth in vivo. 2011,
Oncology Research 19 : 349–363.
Demetri GD, Chawla SP, Ray–Coquard I., Le Cesne A., Staddon A.P., Milhem M.M., Penel N., Riedel R.F., Bui-Nguyen B., Cranmer L.D., Reichardt P., Bompas E., Alcindor T., Rushing D., Song Y., Lee R., Ebbinghaus S., Eid J.E., Loewy J.W., Haluska F.G., Dodion P.F., Bla J.Y.: Results of an international
randomized phase lll trial of the mammalian target of rapamycin inhibitor ridaforolimus versus placebo to control metastatic sarcomas in patients after benefit from prior chemotherapy. 2013, Journal of
Clinical Oncolology 31 : 2485–2492.
Dodwell D., Wardley A., Johnston S.: Postmenopausal advanced breast cancer: options for therapy after
tamoxifen and aromatase inhibitors. 2006, Breast 15 : 584–594.
Double B.W., Woodgett J.R.: GSK3 : tricks of the trade for a multi-tasking kinase. 2003, Journal of Cell Science 116 : 1175-1186.
Douros J., Suffnes M.: New antitumor substances of natural origin. 1981, CancerTreatment and Reviews 8 : 63–87.
Elkabets M., Vora S., Juric D., Morse N., Mino-Kenudson M., Muranen T.: mTORC1 Inhibition Is
Required for Sensitivity to Pi3k P110alpha Inhibitors in Pik3ca-Mutant Breast Cancer. 2013, Science
Translational Medicine 5: 196-199.
101
Engelman J.A.: Targeting PI3K signalling in cancer: opportunities, challenges and limitations. 2009, Nature Reviews Cancer 9 : 550-562.
Engelman J.A., Luo J., Cantley L.C.: The evolution of phosphatidylinositol-3-kinases as regulators of growth and metabolism. 2006, Nature Review Genetics 7 : 606-619.
Fadare O., Tavassoli F.A.: The phenotypic spectrum of basal-like breast cancer : a critical appraisal. 2007, Advances in Anatomic Patology Journal 5 : 358-373.
Faivre S., Kroemer G., Raymond E.: Current development of mTOR inhibitors as anti cancer agents. 2006, Nature Review Drugs Discovery 5 : 671–688.
Farmer H., McCabe N., Lord C.J., Tutt A.N., Johnson D.A., Richardson T.B., Santarosa M., Dillon K.J., Hickson I., Knights C., Martin N.M., Jackson S.P., Smith G.C., Ashworth A.: Targeting the DNA repair
defect in BRCA mutant cells as a therapeutic strategy. 2005, Nature 434 : 917–921.
Feng Z., Xu S., Liu M., Zeng Y.X., Kang T.: Chk1 Inhibitor Go6976 enhances the sensitivity of
nasopharyngeal carcinoma cells to radiotherapy and chemotherapy in vitro and in vivo. 2010, Cancer
Letters Journal 297 : 190-197.
Ferkey D.M., Kimelman D.: Glycogen synthase kinase-3 beta mutagenesis identifies a common binding
for GBP and Axin. 2002, Journal of Biology and Chemistry 277 : 16147-16152.
Ferrao P.T., Bukczynska E.P., Johnstone R.W., McArthur G.A.: Efficacy of CHK inhibitors as single
agents in MYC-driven lymphoma cells. 2012, Oncogene 31 : 1661–1672.
Foster J.G., Blunt M.D. Carter E., Ward S.: Inhibition of PI3K signaling spurs new therapeutic
opportunities in inflammatory/autoimmune diseases and hematological malignancies. 2012 :
Pharmacological Reviews 64 : 1027-1054.
Frame S., Cohen P.: GSK3 takes centre stage more than 20 years after its discovery. 2001, Biochemical Journal 359 : 1-16.
Franz D.N., Belousova E., Sparagana S., Bebin E.M., Frost M., Kuperman R.: Efficacy and safety of
everolimus for subependymal giant cell astrocytomas associated with tuberous sclerosis complex (EXIST- 1): a multi centre, randomised, placebo-controlled phase 3 trial. 2013, Lancet 381 : 125–132.
Frenso-Vara J.A., Casado E., De Castro J., Cejas P., Belda-Iniesta C., Gonzales-Baron M.: PI3K/Akt
102
Fruman D.A., Meyers R.E., Cantley L.C.: Phosphoinositide kinases. 1998, Annual Review of Biochemistry 67 : 481-507.
Fulford L.G., Easton D.F., Reis-Filho J.S., Sofronis A., Gillett C.E., Lakhani A.: Specific morphological
features predictive for the basal phenotype in grade 3 invasive ductal carcinoma of breast. 2006,
Histopathology 49 : 22-34.
Fulfold L.G., Reis-Filho J.S., Ryder K., Jones C., Gillett C.E., Hanby A., Faston D., Lakhani S.R.: Basal-
like grade III invasive ductal carcinoma of the breast : patterns of metastasis and long-term survival.
2007, Breast Cancer Research 9 : 1-14.
Gabelli S.B., Mandelker D., Schmidt-Kittler O., Vogelstein B., Mario Amzel L.M.: Somatic mutations in PI3Kα: structural basis for enzyme activation and drug design. 2010, Biochimica et Biophysica Acta 1804 : 533-540.
Gagliardi P.A., Di Blasio L.,Orso F., Seano G., Sessa R., Taverna D., Bussolino F., Primo L. :
Phosphoinositide–Dependent Kinase 1 Controls Breast Tumor Growth in a Kinase-Dependent but Akt- Independent Manner. 2012, Neoplasia 14 : 719-731.
Garber J.E., Smith B.L.: Management of the high risk and the concerned patient. In: Harris JR, Morrow M, Lippman ME, Hellman S, editors. Diseases of the breast. 1996, Philadelphia: Lippincot-Raven : 323- 334.
Garofalo R. S., Orena S.J., Rafidi K., Torchia A.J., Stock J.L., Hildebrandt A.L., Coskran T., Black S.C., Brees D.J., Wicks J.R., McNeish J.D., Coleman K.G.: Severe diabetes, age-dependent loss of adipose
tissue, and mild growth deficiency in mice lacking Akt2/PKB beta. 2003, Journal Clinical Investigation
112 : 197-208.
Garrett M.D., Collins I.: Anticancer therapy with checkpoint inhibitors: what, where and when? 2011, Trends in Pharmacoligs Sciences 32 : 308–316.
Goldenberg R., Punthakee Z.: Definition, classification and diagnosis of diabetes, prediabetes and
metabolic syndrome. Canadian Diabetes Association Clinical Practice Guidelines Expert Committee,
2013, Canadian Journal of Diabetes 37 : 8–11.
Grasso s., Piedad M.G., Carrasco-Garcìa E., Mayor-Lòpez L., Tristante E., Rocamora-Reverte L., Gòmez-Mertìnez L., Gàrcia-Morales P., Ferragut J., Saceda M., Martinèz-Lacaci I.: Cell death and
103
Greenlee R.T., Hill-Harmon M.B., Murray T., Thun M.: Cancer statistics. 2001, A Cancer Journal for Clinicians 51 : 15-36.
Grimes C.A., Jope R.S.: CREB DNA binding activity is inhibited by glycogen synthase kinase-3 beta and
facilitated by lithium. 2001, Journal of Neurochemistry 78 : 1219-1232.
Guertin A., Sabatini D.M.: Defining the role of mTOR in cancer. 2007, Cancer Cell 12: 9-22.
Hara K., Mukari Y., Long X., Yoshino K., Oshiro N., Hidajat S., Tokunaga C., Avruch J., Yonezawa K.:
Raptor, a binding partner of target of rapamycin (TOR), mediates TOR action. 2002, Cell 110 : 177-179.
Harris J.R., Lippman M.E., Veronesi U., Willett W.: Breast cancer. 1992, New England Journal of Medicine 327 : 319-28.
Hay N., Soneberg N.: Upsteam and downstream of mTOR. 2004, Genes & Development 18 : 1926-1945.
Henderson I.C.: What can a woman do about her risk of dying from breast cancer? . 1990, Current Problems in Cancer 14 : 161-230.
Hess G., Herbrecht R., Romaguera J., Verhoef G., Crump M., Gisselbrecht C.: Phase III study to evaluate
temsirolimus compared with investigator’s choice therapy for the treatment of relapsed or refractory mantle cell lymphoma. 2009, Journal of Clinical Oncology 27 : 3822–3829.
Hidalgo M., Buckner J.C., Erlichman C., Pollack M.S., Boni J.P., Dukart G.: A phase I and
pharmacokinetic study of temsirolimus (CCI779) administered intravenously daily for 5 day severy 2 weeks to patients with advanced cancer. Clinical Cancer and Research 12 : 5755–5763.
Hortobagyi G.N.: Everolimus plus Exemestane for the treatment of advanced breast cancer : a review of
subanalyses from BOLERO-2. 2015, Neoplasia 17 : 279-288.
Hortobagyi G., Noguchi S., Neven P., Heng D.Y.C., Brechenmacher T., Ringeisen F., Bachelot T.:
Everolimus plus exemestane in patients with advanced invasive lobular carcinoma: efficacy and safety results from BOLERO-2. 2014, Presented at the American Society of Clinical Oncology Breast Cancer
Symposium (ASCO-BCS), San Francisco, CA, September 4–6.
Hudes G., Carducci M., Tomczak P., Dutcher J., Figlin R., Kapoor A.: Temsirolimus, interferonalfa, or
both for advanced renal-cell carcinoma. 2007, The New England Journal of Medicine 356 : 2271–2281.
Hutter R.P.V., Albores - Saavedra J., Aderson A.: Is "fibrocystic disease" of the breast pre-cancerous?. 2006, Archives of Pathology and Laboratory Medicine 110 : 171- 173.
104
Ihle N., Williams R., Chow S., Chew W., Berggren M., Paine-Murrieta G., Minion D.J., Halter R.J., Wipf P., Abraham R., Kirkpatrick L., Powis G.S.: Molecular pharmacology and antitumor activity of PX-866,
a novel inhibitor of phosphoinositide-3-kinase signaling. 2004, Molecolar Cancer Therapeutics 3: 763–
772.
Inoki K., Li Y., Zhu T., Wu J., Guan K.L.: TSC2 is phosphorilated and inhibited by Akt and suppresses
mTOR signalling. 2002, Nature and Cellular Biology 12 : 12.
Jacobs K.M., Bhave S.R., Ferraro D.J., Jabion J.J., Hallahan D.E., Thotala D.: GSK-3β : ABifunctional
Role in Cell Death Pathways. 2012 : International Juornal of Cell Biology .
Jewel J.J., Russel R.C., Guan K.L. : Amino acid signalling upstream of mTOR. 2013, Nature Reviews Molecular Cell Biology 14 : 133-139.
Kandoth C., McLellan M.D., Vandin F., Ye K., Niu B., Lu C., Xie M., Zhang Q., Mc Micheal J.F., Wyczalkowski M.A., Leiserson M.D., Miller C.A., Welch J.S., Walter M.J., Wendl M.C., Lev T.J. Wilson R.K., Raphael B.J., Ding L.: Mutational landscape and significance across 12 major cancer
types. 2013, Nature 502 : 333-339.
Katso R., Okkenhaug K., Ahmaldi K., White S., Timms J., Waterfield M.D.: Cellular functions of PI3K :
implications for development, immunity, homeostasis and cancer. 2001, Annual review of cell and
development biology 17 : 615-675.
Kawabe T.: G2 checkpoint abrogators as anticancer drugs. 2004, Molecular Cancer Therapeutics 3 : 513–519.
Kelsey J.L.: A review of the epidemiology of human breast cancer. 1994, Epidemiological Review 1 : 74-109.
Kelsey J.L., Gammon M.D., John E.M.: Reproductive factors and breast cancer. 1993, Epidemiological Review 15 : 36-47.
Kim D.H., Sarbassov D.D., Ali S.M., King J.E., Latek R.R., Erjument-Bromage H., Tempest P., Sabatini D.M.: mTOR interacts with raptor to form a nutrient-sensitive compex that signals to the cell growth
machinery. 2002, Cell 110 : 163-175.
Kogure Y., Yamada Y., Saka H., Kitagawa C., Iwasa S., Yamamoto N., Aoki T., Kakizume T., Robson M., Quadt C., Mitsuma A., Shibata T., Ando Y.: Abstract B118: A Phase l study of BYL719, an α-isoform