Nel presente studio il test ThT fluorescenza, l'analisi della dimensione delle particelle e lo spettro CD hanno dimostrato che Se-PC ha interrotto la fibrillazione di hIAPP interferendo con la combinazione tra hIAPP e con la formazione indotta di oligomeri. Gli oligomeri hIAPP erano inclini a assemblarsi in nanoparticelle secondo un tempo dipendente. Interferendo con la fibrillazione hIAPP e alterandone la struttura, Se-PC inibisce la generazione di ROS che viene prodotta durante il processo di fibrillazione, alleviando quindil'apoptosi hIAPP-indotta. ROS era responsabile dei danni cellulari, piuttosto che della formazione di fibrille. Sulla base di questi risultati, si conclude che se si inibisce la fibrillazione Se-PC di hIAPP, si sopprime la formazione di ROS e si ha un effetto protettivo sull'apoptosi delle cellule hIAPP-mediata. Questi risultati forniscono
informazioni utili per la nostra comprensione dell'interazione dei meccanismi di hIAPP e presenta un candidato utile per lo sviluppo di farmaci antidiabetici.
73
※ Capitolo 6: Il ruolo degli chaperoni
6.1 Caratteristiche patologiche
Una delle principali caratteristiche patologiche del pancreas nel diabete di tipo 2 (T2D) è la presenza di depositi di amiloide negli isolotti, trovati in più del 80% dei pazienti al
momento dell'autopsia. Questi depositi sono implicati nel processo di deterioramento delle beta-cellule, nella riduzione della massa beta-cellulare e nel coinvolgimento dell'isolotto amiloide polipeptide (IAPP) nell' aggregazione dei monomeri in oligomeri, fibrille e, infine, in depositi di amiloide maturi. Il reticolo endoplasmatico è il sito di diverse importanti funzioni, tra cui la sintesi, piegatura e maturazione delle proteine secrete. Le beta-cellule pancreatiche hanno un RE estremamente sviluppato per consentire la secrezione di proteine comel'insulina e IAPP. Tuttavia, l'accumulo di proteine misfolded può alterare l'omeostasi del reticolo endoplasmatico. Di conseguenza, le cellule attivano un successione di cascate di trasduzione del segnale definita come “risposta della proteina unfolded” (UPR), che possono innescare l'infiammazione e, in ultima analisi, la morte cellulare. Per affrontare il problema delle proteine mal ripiegate, le cellule hanno meccanismi complessi sviluppati che assistono al corretto ripiegamento nel RE. Fattori pieghevoli chiamati chaperoni (accompagnatori) legano la proteina secretoria spiegata per impedire loro il malripiegamento (misfolding) e l'aggregazione. Precedenti studi hanno dimostrato che la sovraespressione beta-specifica delle cellule della proteina glucosio-regolata GRP78 (nota anche come BiP) è in grado di proteggere i topi transgenici dai disturbi dell'omeostasi di RE, come l'intolleranza al glucosio e la resistenza all'insulina, indotta da trattamento di una dieta ricca di grassi. Inoltre, adenoviral BiP sovraespressa è in grado di ridurre lo stress di RE e invertire l'iperglicemia e l'iperlipidemia indotta dalla sintesi dell'insulina e dalla secrezione in vitro. Allo stesso modo,la proteina disolfuro isomerasi (PDI), che catalizza la formazione e la rottura dei legami disolfuro, puo' dare importanti vantaggi come chaperone e svolgere un ruolo chiave nel processo di degradazione delle proteine RE- associate. Recenti studi indicano effetti benefici chimici e farmacologici degli chaperoni, come la taurina coniugata al ursodesossicolicoacido (TUDCA) o 4-fenilbutirrato (PBA), per alleviare lo stress di RE e migliorare il ripiegamento delle proteine , in particolare attraverso un trattamento orale in modelli di roditori obesi e T2D. E' stato già dimostrato che l'aggregazione extracellulare di hIAPP è associata con lo stress reticolare visto nelle
74 beta-cellule del topo. Inoltre, abbiamo rilevato aggregati intracellulari tossici nelle beta- cellule pancreatiche di ratto per sovraespressione hIAPP, che portano ad una sintesi difettosa dell' insulina e a una secrezione di IAPP in risposta al glucosio. Tuttavia, il ruolo di hIAPP sovraespresso e il meccanisco di induzione dello stress non è ancora chiaro. L'obiettivo principale di questo lavoro è quello di chiarire il ruolo di produzione endogena hIAPP nell' induzione dello stress nelle cellule beta pancreatiche del topo. Inoltre, ci proponiamo di studiare se gli chaperoni possono migliorare lo stress esogeno indotto al fine di identificare nuovi bersagli per prevenire la perdita della funzione delle cellule beta nel T2D. Nel presente studio, dimostriamo che hIAPP potenzia lo stress indotto nelle cellulebeta che esprimono hIAPP. Inoltre, la sovraespressione di chaperoni molecolari, e il trattamento con gli chaperoni chimici, è in grado di migliorare lo stress indotto del RE e ripristinare la secrezione di insulina. I nostri risultati suggeriscono che il miglioramento della capacità degli chaperoni può essere importante per diminuire lo stress in cellule che esprimono hIAPP, che alla fine può influenzare la formazione di depositi amiloidi nel T2D.
6.2 Materiali e metodi
Colture cellulari e trattamenti
Una linea di cellule beta pancreatiche del topo INS1E che ha sovraespressione di IAPP di topo e umano è stato analizzato dal laboratorio. Queste cellule sono state trasfettate con cDNA hIAPP (cellule hIAPP-INS1E), il ratto IAPP (rIAPP-INS1E) o un vettore vuoto (controllo INS1E) con promotore del citomegalovirus (CMV). Le cellule sono state
mantenute in RPMI 1640 (Sigma) integrato con mm piruvato di sodio (Thermo Scientific), 10 mM HEPES (Thermo Scientific), il 10% di siero fetale bovino, 2 Lglutamine mM, 5 mM beta-mercaptoetanolo, 200 mg / ml geneticina (Gibco) e 100 unità / ml di penicillina e 100 mg / ml di streptomicina a 37uC con 5% di CO2. Acido palmitico (400 mm, Sigma), combinato con 25 mM di glucosio, è stato aggiunto alle cellule coniugando con 1% (w / v) di albumina di siero bovino (BSA, Sigma). Tapsigargina (Sigma) è stato diluita in DMSO e utilizzata ad una concentrazione finale di 0,5 mM. PBA (Sigma), infine è stato sciolto in PBS e usato a 2,5 mM. TUDCA (Calbiochem) è stata diluita in acqua e usato a 200 mM.
Trasduzione adenovirale
75 cellule hIAPP-, rIAPP- e controllo INS1E sono state trasdotte con 20 MOI di Ad / CMV- bip, Ad / CMV-PDI o Ad / CMV-GFP, e incubate a 37uC e 5% CO2 per 2 ore. In seguito le cellule sono state lavate con PBS e incubate a 37uC e 5% CO2 per 24 ore in terreno fresco RPMI 1640 prima di un ulteriore trattamento.
Test sulla vitalità cellulare
È stata eseguito il test VIVO/ MORTO viabilita / citotossicità con il Kit (Invitrogen) seguendo le istruzioni del produttore. In breve, le cellule trasdotte con adenovirale sono state coltivate in presenza di 20 MOI di Ad-BiP. Le cellule sono state lavate con PBS, e combinate con i reagenti dei saggo VIVO/MORTO e sono stati applicati per 30 minuti a temperatura della camera. Le immagini sono state catturate con una Olympus BX61
microscopio e nel software del controller Vivo o DP. Il trattamento con tapsigargina per 24 ore è stato verificato come controllo positivo.
Interferenze sulla trasfezione dell'RNA
L'abbassamento di espressione CCAAT / proteine-enhancer binding (C / EBP) proteina omologa (CHOP) nelle cellule è stata eseguita utilizzando 20 mm di piccoli RNA
interferenti (Invitrogen) o 20 mm di scramble siRNA (Applied Biosystems) come riprova utilizzando Pro Metafecten (Biontex). Dopo sei ore, il mezzo è stato cambiato per
completare RPMI. Ventiquattro ore dopo la trasfezione, le cellule sono state trattate con il glucosio tapsigargina e BSA-accoppiato all'acido palmitico (400 mM) per altre 24 ore.
Isolamento di RNA e Real-Time qPCR
RNA totale viene estratto dalla cellule usando il reagente TRIZOL (Invitrogen) e seguendo le istruzioni del produttore. La trascrizione inversa è stata eseguita con 0,5-1 mg di RNA totale usando Apice III (Invitrogen). La Real-Time PCR (RT-PCR) è stata condotta in doppio con 2 mg di cDNA trascritte e MESA Verde qPCR MasterMix Plus per SYBR (Eurogentec) in una sequenza LightCycler 480 II di sistema di rilevamento (Roche Applied Science). I prodotti di PCR sono stati verificati attraverso l'analisi della curva di
dissociazione utilizzando il software SDS (Roche Applied Science). I livelli di espressione sono stati normalizzati per TATA box-binding protein 1 (Tbp1) mRNA e rappresentati in una unità arbitraria. I set di primer utilizzati in questi esperimenti possono vedere nella Tabella 1.
76
Western blot
Alcune cellule in coltura sono state lavate in PBS e lisate in un tampone (50 mmol / l Tris pH 7,5, 5 mmol / l EDTA, 150 mmol / NaCl, 1% Triton X-100, 10 mmol fosfato di sodio / l, 10 mmol fluoruro di sodio / l, 10 mmol / l e il 10% di proteasi inibitori) per 20 min nel ghiaccio, seguito poi da centrifugazione a 1290006g per 20 minuti a 4uC. La
concentrazione proteica nel subnatante è stata determinata utilizzando il kit Bio-Rad Protein Assay (Bio-Rad), seguendo le istruzioni del produttore. La proteina campione (20- 30 mg) è stata analizzata mediante SDS-PAGE e trasferitanella membrana PVDF
(PerkinElmer Life Sciences). Le membrane sono state trattate per 2 ore con latte scremato 5% o 5% BSA e incubate per una notte a 4uC in anticorpi primari: BiP / GRP78 (1: 1000, Santa Cruz), peIF2a (1: 1000, Cell Signaling), ATF3 (1: 1000, Santa Cruz), CHOP (1: 1000, Cell Signaling) e anti-bactin anticorpi (1: 1000). Le membrane sono state lavate con TBST e incubate con perossidasi coniugato secondario anticorpi (GE Healthcare) per 2 ore. Le proteine con bande immunoreattive sono statetrattate con un reagente di
chemiluminescenza ECL. I cambiamenti dei livelli di proteine sono stati valutati mediante un software (laboratori Bio-Rad).
Saggio della secrezione di insulina glucosio-stimolata (GSIS)
77 TUDCA o PBA. Le cellule sono state preincubate in un tampone di bicarbonato di Krebs- Ringer (KRB) contenente 140 mM NaCl, 4,5 mM KCl, CaCl2 2,5 mM, 1 mM
MgCl2.6H2O, 20 mM HEPES, pH 7,4, e integrato con 0,1% BSA e 2,8 mM di glucosio per 30 min a 37uC con 5% CO2, seguito dalla stimolazione con 2,8 mm o 16,7 mM KRB glucosio per 1 ora a 37uC. Il supernatante è stato recuperato e le cellule erano lisate in 500 ml di soluzione di acido-etanolo per misurare il contenuto di insulina.
I livelli e i contenuti di insulina sono stati determinati tramite il test ELISA.
Immunoistochimica
Le cellule hIAPP-INS1E sono state trattatecon paraformaldeide al 4% per 10 minuti. Dopo averle marcate con PBS in 0,2% per 1 ora, le cellule sono state marchiate usando una cavia con anticorpi anti-insulina (Dako), il coniglio anti-caspasi 3.
Analisi statistiche
L'analisi statistica tra i due gruppi è stata effettuata utilizzando il t-test studenti a due code e le differenze tra più di due gruppi sono stati eseguiti da ANOVA seguito dal test di Tukey. Le differenze sono state considerate significative quando * p, 0.05. Dati in grafici a barre sono rappresentati come media 6 SEM.
6.3 Risultati
Apoptosi indotta da stress reticolare in cellule hIAPP-INS1E
Per verificare se la sovraespressione hIAPP potenzia lo stress nelle cellule beta, abbiamo stabilito un modello in cui la linea delle cellule beta del pancreas del ratto, INS1E, è stato trasfettato con entrambi hIAPP (cellule hIAPP-INS1E) e rIAPP (rIAPP-INS1E) o un vuoto vettore (cellule di controllo INS1E). Dopo il trattamento con sostanze chimiche, come l'induttore di stress tapsigargina a 1 mM per 8 e 24 ore, le cellule INS1E aumentano i livelli di espressione dei geni dello stress, come l'attivazione del fattore di trascrizione 3 (ATF3), si forma in parallelo il legame X-box protein 1 (sXPB1) e CCAAT / proteine- enhancer binding (C / EBP) della proteina omologa (CHOP) (Figura 1A). Inoltre, il trattamento con 1 mM tapsigargina per 24 ore non ha aumentato l' espressione della proteina di CHOP e non ha influenzato i livelli di espressione di insulina o IAPP (Figura 1B, a sinistra pannello). Tuttavia, il trattamento di cellule hIAPP-INS1E con 1 mM di
78 tapsigargina per 8 ore induce stress e grave apoptosi, dall'attivazione di CHOP e caspasi spaccati 3 (Figura 1B, a destra pannello). Inoltre, il trattamento con tapsigargina
diminuiscel'insulina e la produzione hIAPP (Figura 1B, pannello di destra), ciò indica che 1 mMof tapsigargina è stata associata ad elevata tossicità nelle cellule hIAPP-INS1E. Così, per determinare le dosi ottimali di tapsigargina espressa dalle cellule hIAPP , abbiamo eseguito un esperimento di dosaggio / risposta (0,25, 0,5 e 1 mm) per 8 e 24 ore. Le cellule hIAPP-INS1E mostrano un elevata attivazione del marcatore di stress CHOP e effettori di caspasi da 3 a 24 ore (Figura 1C). Inoltre, le cellule hIAPP-INS1E hanno perso
l'espressione hIAPP, suggerendo che sia, 0,5 o 1 mM di tapsigargina a 24 ore si è rivelata letale in queste cellule (Figura 1C). Tuttavia, la dose di 0,5 mM di tapsigargina a 8 ore ha mostrato un lieve attivazione di CHOP, assenza di spaccati caspasi 3 ed espressione inalterata di hIAPP. Così, una dose di 0,5 mm per 8 ore è stata scelta per ulteriori esperimenti basati su induzione dello stress lieve in assenza di apoptosi.
[Fig.1]
Le cellule hIAPP-INS1E sono più sensibili agli induttori di stress reticolari
A 11 mm di glucosio, le cellule hIAPP-INS1E non hanno mostrato modifiche nei geni di stress, come ad esempio CHOP, collegato a XBP1 (sXBP1) o ATF3, rispetto ai rIAPP- INS1E o alle cellule di controllo INS1E (Figura 2A). Quando le cellule sono state esposte a
79 tapsigargina 0.5 mm per 8 ore, l'espressione di CHOP e ATF3 era significativamente superiore in hIAPP-INS1E rispetto ai rIAPP-INS1E o alle cellule di controllo INS1E (Figura 2B). Per studiare l'effetto fisiologicodegli induttori di stress hIAPP-INS1E, rIAPP- INS1E e alcune cellule INS1E sono stati coltivati in 25mm di glucosio per 8 ore. Tuttavia, le cellule hIAPP-INS1E non hanno mostrato cambiamenti nelle proteine o nell'espressione genica rispetto al glucosio. Al contrario, quando le cellule hIAPP-INS1E sono state trattate con 25 mm di glucosio insieme a 400 mm acido palmitico (PA), i marker di stress come la CHOP, ATF3 e sXBP1 hanno avuto un aumento significativo dei livelli di mRNA (Figura 2C) rispetto ai controlli precedenti. Questi risultati indicano che la sovraespressione di hIAPP è rilevata dal RE e innesca l'attivazione della via UPR, rendendo le cellule hIAPP- INS1E più sensibili allo stress.
[Fig.2]
80
L'inibizione CHOP protegge dallo stress indotto e dall'apoptosi
[Fig.3]
Abbiamo testato se CHOP è richiesto nello stress indotto dall' alto dosaggio di glucosio e di acido palmitico nelle cellule hIAPP-INS1E. Una piccola interferenza di RNA siCHOP è stato utilizzata per abbattere l'espressione di CHOP nelle cellule hIAPP-INS1E
precedentemente trattate per 24 ore sia con tapsigargina che alte concentrazioni di glucosio e acido palmitico. Come previsto, il trattamento con tapsigargina e con alte concentrazioni di glucosio e acido palmitico induce l'espressione di CHOP a valle caspasi 3. L'upstream dei livelli di proteine ATF3 non sono stati influenzati (Figura 3A, B). Nell'espressione delle cellule trasfettate con siCHOP, tapsigargina o il combinazione di glucosio 25 mM e acido palmitico non sono riusciti a indurre l' espressione di CHOP (figura 3A, B),
confermando il knockdown di CHOP, mentre siRNA ha mostrato livelli simili di CHOP rispetto ai controlli trattati. Nelle stesse condizioni, la diminuzione dell'espressione CHOP è stata associata con una diminuzione del marcatore apoptotico caspasi 3 (Figura 3C, D), suggerendo che gli effetti osservati sono mediati da CHOP, poiché il knockdown di CHOP
81 da solo è sufficiente abbastanza per impedire stress e apoptosi indotte da alti livelli di glucosio e tapsigargina.
Gli chaperoni miglioranolo stress di ER nelle cellule INS1E Hiapp
Al fine di aumentare l'espressione di chaperoni endogeni, abbiamo usato vettori
adenovirali che codificano per gli chaperoni BIP e PDI. La trasduzione adenovirale di BiP in hIAPP-INS1E ha mostrato un aumento di espressione della proteina BiP con l'aumentare MOI di adenovirus (Figura 4A). L'espressione adenovirale PDI / GFP è stata testata in modo simile nelle cellule hIAPP-INS1E (Figura 4B). Un MOI di 20 per ciascun adenovirus è stato scelto per futuri esperimenti, sulla base dell'espressione BiP o PDI/ GFP in assenza di cellule morte o di tossicità cellulare rilevabile (Figura 4C). Sebbene BiP fosse altamente espressa in condizioni basali (Figura 4A) e dopo il trattamento con alte concentrazioni di glucosio e acido palmitico (Figura 5A), BiP non era sovraespressonelle cellule hIAPP- INS1E in presenza di tapsigargina (Figura 5A), cio'suggerisce che la tapsigarginaattenua l'espressione della proteina adenovirale. Le cellule hIAPP-INS1E sono state coltivate in presenza di tapsigargina contenente chaperoni chimici TUDCA e PBA per 24 ore. Dopo l'esposizione a tapsigargina, le cellule hIAPP-INS1E hanno mostrato alti livelli di espressione di proteine con alto stress e marcatori CHOP e ATF3 (Figura 5B),
confermando i risultati di espressione dell'mRNA osservato in Figura 1B e 1C. Quando le cellule hIAPP-INS1E vengono trattate con chaperoni chimici TUDCA e PBA, i livelli di CHOP e ATF3 diminuiscono (Figura 5B), anche se i livelli BiP non vengono recuperati. Insieme, questi risultati suggeriscono che gli chaperoni chimici TUDCA e PBA sono in grado di ridurre lo stress di RE hIAPP-potenziato associato con tapsigargina. Per simulare il ruolo protettivo plausibile degli chaperoni durante lo stress di RE indotto dal glucosio e dall'acido palmitico, le cellule hIAPP-INS1E sono state incubate con glucosio 25 mM e acido palmitico e trattate con TUDCA, PBA o precedentemente trasdotte con Ad-BiPo Ad- PDI per 24 ore. Le cellule hIAPP-INS1E esposte ad alti livelli di glucosio e acido
palmitico hanno mostrato un aumento dei geni di stress quali ATF3, o factor 2 bis fosfo eucariotica (peIF2a), rispetto ai controlli non trattati (Figura 5C). Tuttavia, le cellule hIAPP-INS1E trattate con chaperoni (TUDCA, PBA, BiP o PDI), hanno dimostrato una diminuzione dello stress da RE con un abbassamento dei livelli proteici ATF3 e p-eIF2a (Figura 5C). I livelli di BiP non sono stati sovraespressi dopo l'esposizione ad acido glucosio e palmitico, tranne quando le cellule hIAPP erano state trasdotte con adenovirus,
82 confermando i risultati osservati in Figura 5A. Insieme, questi dati suggeriscono che gli chaperoni sono in grado di migliorare stress indotto-ER nelle beta-cellule; pertanto, il miglioramento della capacità degli chaperoni potrebbe essere importante per la diminuzione della tossicità hIAPP.
[Fig.4]
83
Il trattamento con chaperoni migliora la funzione delle cellule beta aumentando la secrezione di insulina glucosio-stimolata
Per studiare l'effetto degli chaperoni sulla secrezione di insulina, le cellule hIAPP-INS1E vengono trattate 24 h con Ad-GFP, Ad-BIP, Ad-PDI e chaperoni chimici TUDCA e PBA. Il rilascio di insulina dalla cellula non trattata hIAPP-INS è aumentato a 16,7mmdi glucosio rispetto a cellule trattate a 2,8 mM glucosio. Tuttavia, l'iperespressione di hIAPP altera la glucosiostimolazione e la secrezione di insulina rispetto alle cellule INS1E (Figura 6A). Secondo trattamenti chimici e endogeni, lo chaperone è stato in grado di ripristinare e migliorare la secrezione glucosio-stimolata di insulina, anche se la risposta insulinica secretoria di controllo delle cellule INS1E non è stata raggiunta. Il miglioramento della secrezione di insulina nelle cellule hIAPP-INS1E trattato con BiP, TUDCA e PBA non sembra essere associato ad una diminuzione del contenuto di insulina, poiché tutti i gruppi avevano livelli analoghi di insulina nei lisati prima e dopo l'esposizione a glucosio (Figura 6B). Tuttavia, il trattamento di PDI nelle cellule hIAPP-INS1E sembra avere un effetto negativo sul contenuto di insulina, suggerendo che PDI può aumentare la secrezione grazie alla degranulazione delle vescicole di insulina (Figura 6B).
84
Il trattamento con chaperone migliora la funzione beta-cellulare alterata dal glucosio e dall'acido palmitico
Al fine di studiare il ruolo degli chaperoni nel rilascio di insulina sotto condizioni di stress fisiologico, alcune INS1E che esprimono hIAPP vengono esposte ad alte concentrazioni di glucosio e acido palmitico per 24 ore in presenza di chaperoni. Alte concentrazioni di glucosio e l'esposizione acido palmitico diminuita glucosio-stimolata diminuiscono il rilascio di insulina glucosio stimolata dalle cellule hIAPP-INS1E fino a a 16.7 mM di glucosio rispetto alle cellule hIAPPINS1E non trattate (Figura 7). Al contrario, il
trattamento con BiP, PDI, TUDCA e PBA era in grado di prevenire la disfunzione delle cellule beta e mantenere la risposta insulinica risposta in modo simile alle cellule non trattate. Il contenuto di insulina delle cellule hIAPP-INS1E stimolato a 16 mm e 2.8 mM di glucosio era simile in tutti i gruppi. Questi risultati dimostrano che il miglioramento della capacità dello chaperone può migliorare la funzione delle cellule beta in condizioni di stress.
[Fig.7]
6.4 Discussione
Il processo di deposizione dell'isolotto amiloide è stato riconosciuto come una notevole scoperta fisiopatologica coinvolta nel fallimento delle funzionalità delle cellule beta nel T2D. Nel presente studio, usiamo una linea delle cellule beta del ratto con iperespressione del transgene hIAPP che ha mostrato oligomeri intracellulari e una forte alterazione di insulina glucosio-stimolata e secrezione di IAPP. Abbiamo dimostrato che la tapsigargina
85 con la combinazione di alte concentrazioni di glucosio e trattamento acido palmitico sono marcatori di stress tramite il percorso di CHOP, e alterano la capacità secretoria delle cellule hIAPP-INS1E. Migliorando la capacità degli chaperoni, siamo stati in grado di recuperare i marcatori dello stress e contrastare la secrezione dell'insulina glucosio-
stimolata delle cellule hIAPP-INS1E. Abbiamo già visto che le cellule hIAPP-INS1E non hanno mostrato cambiamento nella morte cellulare e nessun cambiamento nel marcatore dello stress, CHOP, rispetto alle cellule di controllo rIAPP-INS1E. Abbiamo scoperto che i percorsi coinvolti nello stress del RE, come ad esempio quelli di sXBP1 o ATF3, non sono stati contagiati, confermando che la sovraespressione di hIAPP non porta a stress in condizioni basali (11 mM di glucosio). Tuttavia, il ruolo di hIAPP nell'induzione da stress del RE deve ancora essere chiarito. In accordo con i nostri studi, Hull ha dimostrato che l'iperespressione di hIAPP nei topi transgenici non è stata associata ad un significativo aumento dell'espressione di marcatori di stress reticolari. Al contrario, alcuni rapporti hanno dimostrato che l'iperespressione del roditore hIAPP attiva lo stress mediato da apoptosi, portando ad una riduzione della massa delle cellule beta. Queste differenze