Parte biologica
49
Tutti i prodotti oggetto di studio di questa tesi sono stati sottoposti a prove di attività per il TSPO presso i laboratori del Dipartimento di Psichiatria, Neurobiologia, Farmacologia e Biotecnologie dell’Università di Pisa.
L’affinità è stata determinata in base alla capacità delle molecole di inibire il legame specifico del [3H]PK11195 da
membrane mitocondriali di rene di ratto. In un primo momento viene fatto uno screening ad una determinata concentrazione (per i composti oggetto di questa tesi 10µM); successivamente, per quelli più attivi, viene calcolata l’IC5 0,
cioè la concentrazione del composto che è in grado di spiazzare il 50% del ligando radioattivo del recettore. Una volta ottenuto l’IC5 0, viene calcolata la Ki del composto in
accordo con l’equazione di Cheng e Prusoff.[ 1 6 ]
La Tabella 4 riporta l’affinità al TSPO dei derivati N1-metilati. In generale, l’introduzione del gruppo metilico in posizione N-1 non sembra influenzare significativamente l’affinità di legame al recettore. In particolare i composti 3, 4, 8, 9, 12, 13 mantengono valori di Ki molto simili a quelli dei rispettivi precursori non metilati. Questi risultati sono in accordo con l’ipotesi di modello farmacoforo/recettore precedentemente descritta nel quale non è prevista l’interazione fra 1-NH dell’indolo e la proteina recettoriale.
Fra i nuovi composti sintetizzati i più attivi sono rappresentati da 5 e 6, con una Ki=0.3 nM [5: R1:=(CH2)3CH3;
R2=(CH2)3CH3; R3=CH3], [6: R1=(CH2)5CH3; R2=(CH2)5CH3;
R3=CH3], che mostrano un leggero incremento dell’ affinità
Parte biologica 50 Tabella 4 N° R1 R2 R3 X Ki (nM) 1h CH(CH3)2 CH(CH3)2 H H 103.00±9 1d (CH2)2CH3 (CH2)2CH3 H H 12.2±1.0 1e (CH2)3CH3 (CH2)3CH3 H H 7.50±0.7 1g (CH2)5CH3 (CH2)5CH3 H H 1.40±0.2 1ttt CH3 (CH2)3CH3 H H 53.3±4.0 1aab CH3 (CH2)4CH3 H H 12.1±1.0 1aac CH3 CH2C6H5 H H 12.0±1.0 1vvv CH2CH3 (CH2)3CH3 H H 12.1±1.0 1j CH2CH3 CH2C6H5 H H 11.0±1.0 1n (CH2)2CH3 (CH2)2CH3 H F 4.28±0.32 1p (CH2)5CH3 (CH2)5CH3 H F 0.37±0.13 1aad CH3 CH2C6H5 H F 1.8±0.1 3 CH(CH3)2 CH(CH3)2 CH3 H 64.89±5.2 4 (CH2)2CH3 (CH2)2CH3 CH3 H 19.49±1.5 5 (CH2)3CH3 (CH2)3CH3 CH3 H 0.3±0.05 6 (CH2)5CH3 (CH2)5CH3 CH3 H 0.299±0.05 7 CH3 (CH2)3CH3 CH3 H 190.00±10 8 CH3 (CH2)4CH3 CH3 H 38.16±4.0 9 CH3 CH2C6H5 CH3 H 20.93±1.8 10 CH2CH3 (CH2)3CH3 CH3 H 60.24±6.0 11 CH2CH3 CH2C6H5 CH3 H 2.92±0.3 12 (CH2)2CH3 (CH2)2CH3 CH3 F 19.80±2.0 13 (CH2)5CH3 (CH2)5CH3 CH3 F 1.07±0.11 14 CH3 CH2C6H5 CH3 F 6.77±0.5 PK11195 9.3±0.5 Ro5-4864 23±3.1 Alpidem 0.5-7
La concentrazione dei composti testati che inibisce per il 50% il legame del [3H]PK11195 alle membrane mitocondriali di ratto (IC50), è stata determinata con
6 concentrazioni differenti di ligandi spiazzanti, ognuna in triplicato. La Ki ottenuta deriva dalla media dei risultati dei 3 esperimenti ± SEM.
N N O O R1 R2 R3 X
