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Indice delle figure
Figura 1 Rappresentazione di nanosfere e nanocapsule [Salerno, 2009] ... 7 Figura 2 Nanovettori utilizzati per il drug delivery. A. Tipi di nanovettori descritti
in studi preclinici e clinici. B. Sistemi PEGilati e associati a ligandi [Danhier et al., 2010] ... 8
Figura 3 Rappresentazione schematica di un nanotubo al carbonio SWCNT
coniugato a DNA [Vardharajula et al., 2012] ... 9
Figura 4 Varie tipologie di nanovettori e loro dimensioni [Conti et al., 2006] ... 12 Figura 5 Tipologia di drug delivery delle nanoparticelle: targeting attivo e passivo
... 13
Figura 6 Alterazione della permeabilità dei vasi dell’endotelio tumorale.
Meccanismo di targeting passivo delle nanoparticelle [Danhier et al., 2010] ... 14
Figura 7 Meccanismo di targeting attivo delle nanoparticelle [Danhier et al., 2010]
... 15
Figura 8 Rappresentazione schematica del meccanismo endocitotico di trasporto di
NP in cellula [Lerch et al., 2013] ... 16
Figura 9 Conseguenze dello stress ossidativo indotto da NP polimeriche [Manke et
al., 2013] ... 17
Figura 10 Funzioni della survivina [ Li, Brattain, 2006] ... 18 Figura 11 Espressione della survivina in vari tipi di tumore... 19 Figura 12 Rappresentazione del molecular beacon prima e dopo l’ibridazione con
sequenza complementare ... 23
Figura 13 Morfologia delle cellule A549 a bassa (destra) e alta (sinistra) densità di
crescita ... 24
Figura 14 Morfologia delle cellule A375 a bassa (destra) e alta (sinistra) densità di
crescita ... 25
Figura 15 Rappresentazione schematica di nanoparticelle QTAM-02 e QTAM-03
... 28
Indice delle figure
73
Figura 17 Range di quenching del Blackberry650 ... 29
Figura 18 Struttura del Cisplatino ... 30
Figura 19 Spettro di eccitazione e di emissione del Vybrant DiI... 31
Figura 20 Spettro di eccitazione e di emissione dell’ Hoechst ... 32
Figura 21 Protocollo di trasfezione con la lipofectamina ... 38
Figura 22 Riduzione del reagente WST-1 a sale di formazano... 39
Figura 23 Schema di preparazione dei campioni di cellule A549 per l’acquisizione delle immagini al microscopio a fluorescenza e confocale ... 48
Figura 24 Schema di preparazione dei campioni di cellule A375 e monociti per l’acquisizione delle immagini al microscopio confocale ... 51
Figura 25 Vitalità cellulare di cellule A549 dopo 60’ di trattamento con nanoparticelle QTAM-02 ... 54
Figura 26 Vitalità cellulare di cellule A549 dopo 60’ di trattamento con nanoparticelle QTAM-03 ... 54
Figura 27 Cellule A549 non trattate (controllo). Le immagini sono ottenute con obiettivo 10X (a sinistra) e 20X (a destra) ... 55
Figura 28 Cellule A549 trattate con QTAM-02 (10µg/mL) per 60’. Le immagini sono ottenute con obiettivo 10X (a sinistra) e 20X (a destra) ... 56
Figura 29 Cellule A549 trattate con QTAM-03 (10µg/mL) per 60’. Le immagini sono ottenute con obiettivo 10X (a sinistra) e 20X (a destra) ... 56
Figura 30 Cellule A549 trattate con QTAM-03 10µg/mL. Dettagli di cellule A549 trattate con QTAM-03 (a destra) ... 57
Figura 31 Marcatura dei nuclei di cellule A549 trattate con nanoparticelle QTAM-03 ... 59
Figura 32 Elettroforesi su gel d’agarosio per il prodotto di PCR ottenuto con primer per GAPDH e survivina su cellule A375 e monociti ... 61
Figura 33 Cellule A375 trasfettate con MB 100nM dopo 1 ora di esposizione ... 62
Figura 34 Cellule A375 trasfettate con MB 100nM dopo 3 ore di esposizione ... 62
Figura 35 Cellule A375 trasfettate con MB 100nM a 6 ore di esposizione ... 63
Figura 36 Monociti trasfettati con MB 100nM dopo 6 ore di esposizione ... 63
74
Figura 38 Vitalità cellulare di cellule A375 trasfettate con MB e revMB 100nM a
24 e 48 ore ... 65
Figura 39 Vitalità cellulare di cellule A375 trasfettate con MB 100nM e trattate con
75
Indice delle tabelle
Tabella 1 Tipi di NP e loro caratteristiche generali ... 10
Tabella 2 Oligonucleotidi approvati dalla FDA e presenti in commercio [Khar et al., 2010; Hair et al., 2013; Sundaram et al., 2013] ... 21
Tabella 3 Sequenze dei primer utilizzati ... 33
Tabella 4 Supporti e diluizioni per la trasfezione con lipofectamina ... 37
