1.1 SCLEROSI MULTIPLA ...1

I

INDICE

1.INTRODUZIONE...1

1.1 SCLEROSI MULTIPLA ...1

1.1.1 PATOLOGIA ED EZIOPATOGENESI ...1

1.1.2 TRATTAMENTI ...2

1.1.3 MIELINA...4

1.2 PRECURSORI DEGLI OLIGODENDROCITI: SVILUPPO E DIFFERENZIAZIONE...6

1.3 IL RECETTORE GPR17...9

1.3.1 LIGANDI DEL RECETTORE GPR17 ...11

1.3.2 DISTRIBUZIONE E RUOLO FISIOPATOLOGICO DEL GPR17 ...14

1.3.3 ESPRESSIONE DEL GPR17 NELLO SVILUPPO DEGLI OPC...16

1.4 MECCANISMI MOLECOLARI CHE REGOLANO LE RISPOSTE DEI RECETTORI ACCOPPIATI A PROTEINE G...19

1.4.1 DESENSITIZZAZIONE RECETTORIALE...19

1.4.2 GRK: G PROTEIN-COUPLED RECEPTOR KINASE ...21

1.4.3 RUOLO DELLE β-ARRESTINE NELLA TERMINAZIONE DEL SEGNALE DEI RECETTORI ACCOPPIATI A PROTEINE G...23

SCOPO DELLA TESI...25

2. MATERIALI E METODI ...26

2.1 COLTURA, ISOLAMENTO E DIFFERENZIAMENTO DELLE CELLULE PRECURSORI DEGLI OLIGODENDROCITI (OPC)...26

2.2 ESTRAZIONE DI mRNA e RETROTRASCRIZIONE A cDNA ...28

2.3 QUANTIFICAZIONE GENICA: REAL-TIME PCR ...30

2.4 SAGGIO DELLA VALUTAZIONE DELLA PRODUZIONE DI cAMP NEI PRECURSORI DEGLI OLIGODENDROCITI ...38

2.4.1 VALUTAZIONE DELLE CINETICHE DI DESENSITIZZAZIONE DEL RECETTORE GPR17 NEI PRECURSORI DEGLI OLIGODENDROCITI ...41

2.5 IMMUNOPRECIPITAZIONE DEL RECETTORE GPR17 DAL LISATO CELLULARE ....42

2.6 DOSAGGIO PROTEICO...43

2.7 WESTERN BLOT ...44

2.8 ANALISI DEI DATI ...48

II

3.RISULTATI E DISCUSSIONE...49

3.1 ANDAMENTO DI ESPRESSIONE DELLA GRK2 E GRK5 DURANTE IL

DIFFERENZIAMENTO DEGLI OPC ...51 3.2 FOSFORILAZIONE DEL RECETTORE GPR17 ...53 3.3 ASSOCIAZIONE DEL RECETTORE GPR17 ALLE GRK ...54 3.4 VALUTAZIONE DELLA DESENSITIZZAZIONE DEL RECETTORE GPR17 A VARI STADI DI MATURAZIONE CELLULARE ...56

3.4.1 DESENSITIZZAZIONE DEL GPR17 ALLO STADIO DI PRE-OLIGODENDROCITI ..56

3.4.2 DESENSITIZZAZIONE DEL GPR17 NEGLI OLIGODENDROCITI IMMATURI ...57

3.5 VALUTAZIONE DEL COINVOLGIMENTO DELLA GRK2 NELLA DESENSITIZZAZIONE

DEL RECETTORE GPR17 ...59

4.CONCLUSIONI...61

5.BIBLIOGRAFIA...62