3. RISULTATI 3.1 Dati grezzi

(1)

3. RISULTATI

3.1 Dati grezzi

LINEARITA' SESSIONE 1

Schema di caricamento: Codice Diluzioni caricate in Log Pozzetti N.D 3,5-4-4,5-5 1-4 1 L 2-2,5-3-3,5 5-8 2 L 1-1,5-2-2,5 9-12 3 L 0,5-1-1,5-2 13-16 4 L T.q.-0,5-1-1,5 17-20 M.N.D T.q. 21 M.D T.q. 22 M T.q. 23 N.D.: Non Diluito

M.N.D.: Mock Non Digerito M.D.: Mock Digerito T.q.: Tal quale M: Magic Marker

Linearità sessione 1

Diluizioni caricate in Log 3.5 4 4.5 5 2 2.5 3 3.5 1 1.5 2 2.5 0.5 1 1.5 2 T.q 0.5 1 1.5 T.q. T.q. T.q. M.

(2)

CALCOLI LINEARITÀ SESSIONE 1

xi xmedio yi ymedio

Log Lin Log Lin Log Lin Log Lin

4,60 39810,72 2,60 8846,74 5 100000,00 2,50 20659,41

3,60 3981,07 2,60 8846,74 3,5 3162,28 2,50 20659,41

2,60 398,11 2,60 8846,74 2 100,00 2,50 20659,41

1,60 39,81 2,60 8846,74 1,5 31,62 2,50 20659,41

0,60 3,98 2,60 8846,74 0,5 3,16 2,50 20659,41

(xi - xmedio) (yi - ymedio) (xi - xmedio)(yi - ymedio)

Log Lin Log Lin Log Lin

2,00 30963,98 2,50 79340,59 5,00 2456700324,44 1,00 -4865,67 1,00 -17497,13 1,00 85135211,47 0,00 -8448,63 -0,50 -20559,41 0,00 173698877,27 -1,00 -8806,93 -1,00 -20627,79 1,00 181667435,07 -2,00 -8842,76 -2,00 -20656,25 4,00 182658190,73

∑

11,00 3079860038,98 (xi - xmedio) 2 (yi - ymedio) 2

Log Lin Log Lin

4,00 958768027,18 6,25 6294928818 1,00 23674704,05 1 306149729,1 0,00 71379355,19 0,25 422689444,1 1,00 77561960,14 1 425505710,6 4,00 78194342,03 4 426680675

∑

10,00 1209578388,58

∑

12,50 7875954376,91 m b r2 1,1000 2,5462 -0,3600 -1866,3813 0,9680 0,9957 2 ) ( ) )( ( x x y y x x m i i i x x x y y x x y b i i i 2 ) ( ) )( ( n i n i n i y y x x y y x x r i i i i 1 1 1 2 ) ( 2 ) ( 2 ) ( ) ( 2

x

i

: titolo teorico di PrP

Sc

(3)

(4)

LINEARITA' SESSIONE 2

Linearità sessione 2

Diluizioni caricate in Log 3.5 4 4.5 5 2.5 3 3.5 4 1 1.5 2 2.5 0.5 1 1.5 2 T.q. 0.5 1 1.5 T.q. T.q T.q. Codice N.D. 1 L 2 L 3 L 4 L M.N. D. M. D M Schema di caricamento: Codice Diluzioni caricate in Log Pozzetti

N.D

3,5-4-4,5-5

1-4

1 L

2,5-3-3,5-4

5-8

2 L

1-1,5-2-2,5

9-12

3 L

0,5-1-1,5-2

13-16

4 L

T.q.-0,5-1-1,5

17-20

M.N.D

1

21 M.D

1

22 Magic

marker

T.q.

24

N.D.: Non Diluito

M.N.D.: Mock Non Digerito

M.D.: Mock Digerito

T.q.: Tal quale

M: Magic Marker

(5)

CALCOLI LINEARITÀ SESSIONE 2

4,60 39810,72 2,60 8846,74 4,5 31622,78 2,40 7022,89

3,60 3981,07 2,60 8846,74 3,5 3162,28 2,40 7022,89

2,60 398,11 2,60 8846,74 2,5 316,23 2,40 7022,89

1,60 39,81 2,60 8846,74 1 10,00 2,40 7022,89

0,60 3,98 2,60 8846,74 0,5 3,16 2,40 7022,89

2,00 30963,98 2,10 24599,89 4,20 761710419,98 1,00 -4865,67 1,10 -3860,61 1,10 18784444,04 0,00 -8448,63 0,10 -6706,66 0,00 56662100,63 -1,00 -8806,93 -1,40 -7012,89 1,40 61761999,05 -2,00 -8842,76 -1,90 -7019,73 3,80 62073732,68

∑

10,50 960992696,37

(xi - xmedio)2 (yi - ymedio)2

Log Lin Log Lin

4,00 958768027,18 4,41 605154476,8 1,00 23674704,05 1,21 14904318,84 0,00 71379355,19 0,01 44979303,04 1,00 77561960,14 1,96 49180610,18 4,00 78194342,03 3,61 49276561,31

∑

10,00 1209578388,58

∑

x

i

: titolo teorico di PrP

Sc

(6)

(7)

LINEARITA' SESSIONE 3

N.D. (1), 1 L, 2 L (1), 3 L, 4 L (1): campioni utilizzati per la prova di linearità (1), (2), (3): repliche utilizzate per la prova di verifica della precisione entro la serie

Schema di caricamento:

Fila superiore: Fila inferiore:

Codice Diluzioni caricate in Log Pozzetti Codice Diluzioni caricate in Log Pozzetti

N.D (1)

3,5-4-4,5-5

1-4

N.D (2)

3,5-4-4,5-5

1-4

1 L

2,5-3-3,5-4

5-8

2 L (2)

1,5-2-2,5-3

5-8

2 L (1)

1,5-2-2,5-3

9-12

4 L (2)

T.q.-0,5-1-1,5

9-12

3 L

0.5-1-1.5-2

13-16

N.D. (3)

3,5-4-4,5-5

13-16

4 L (1)

T.q.-0,5-1-1,5

17-20

2 L (3)

1,5-2-2,5-3

17-20

M.N.D..

1

23 4 L (3)

T.q.-0,5-1-1,5

21-24

M.D.

1

24 M

T.q.

25 M

T.q.

25

N.D.: Non Diluito

M.N.D.: Mock Non Digerito M.D.: Mock Digerito T.q.: Tal quale M: Maic Marker

(8)

Linearità sessione 3

Codice N.D.(1) 1 L 2 L(1) 3 L 4 L(1) M . N D M. D M Diluizioni caricate in Log 3.5 4 4.5 5 2.5 3 3.5 4 1.5 2 2.5 3 0.5 1 1.5 2 T.q 0.5 1 1.5 1 1 T.q Diluizioni caricate in Log 3.5 4 4.5 5 1.5 2 2.5 3 T.q 0.5 1 1.5 3.5 4 4.5 5 1.5 2 2.5 3 T.q 0.5 1 1.5 T.q. Codice N.D.(2) 2 L(2) 4 L(2) N.D.(3) 2 L(3) 4 L(3) M

(9)

CALCOLI LINEARITÀ SESSIONE 3

4,60 39810,72 2,60 8846,74 5 100000,00 2,50 20659,41

3,60 3981,07 2,60 8846,74 3,5 3162,28 2,50 20659,41

2,60 398,11 2,60 8846,74 2 100,00 2,50 20659,41

1,60 39,81 2,60 8846,74 1,5 31,62 2,50 20659,41

0,60 3,98 2,60 8846,74 0,5 3,16 2,50 20659,41

2,00 30963,98 2,50 79340,59 5,00 2456700324,44 1,00 -4865,67 1,00 -17497,13 1,00 85135211,47 0,00 -8448,63 -0,50 -20559,41 0,00 173698877,27 -1,00 -8806,93 -1,00 -20627,79 1,00 181667435,07 -2,00 -8842,76 -2,00 -20656,25 4,00 182658190,73

∑

Log Lin Log Lin

4,00 958768027,18 6,25 6294928818 1,00 23674704,05 1 306149729,1 0,00 71379355,19 0,25 422689444,1 1,00 77561960,14 1 425505710,6 4,00 78194342,03 4 426680675

∑

10,00 1209578388,58

∑

x

i

: titolo teorico di PrP

Sc

(10)

(11)

LINEARITA' SESSIONE 4

Linearità sessione 4

Diluizioni caricate in Log 3.5 4 4.5 5 2.5 3 3.5 4 1.5 2 2.5 3 0.5 1 1.5 2 T.q 0.5 1 1.5 1 1 T.q Codice N.D. 1 L 2 L 3 L 4 L M. N D. M. D M Schema di caricamento: Codice Diluzioni caricate in Log Pozzetti

N.D

3,5-4-4,5-5

1-4

1 L

2,5-3-3,5-4

5-8

2 L

1,5-2-2,5-3

9-12

3 L

0.5-1-1.5-2

13-16

4 L

T.q.-0,5-1-1,5

17-20

M.N.D..

1

23 M.D.

1

24 M

T.q.

25

N.D.: Non Diluito

(12)

CALCOLI LINEARITÀ SESSIONE 4

4,60 39810,72 2,60 8846,74 5 100000,00 2,50 20659,41

3,60 3981,07 2,60 8846,74 3,5 3162,28 2,50 20659,41

2,60 398,11 2,60 8846,74 2 100,00 2,50 20659,41

1,60 39,81 2,60 8846,74 1,5 31,62 2,50 20659,41

0,60 3,98 2,60 8846,74 0,5 3,16 2,50 20659,41

2,00 30963,98 2,50 79340,59 5,00 2456700324,44 1,00 -4865,67 1,00 -17497,13 1,00 85135211,47 0,00 -8448,63 -0,50 -20559,41 0,00 173698877,27 -1,00 -8806,93 -1,00 -20627,79 1,00 181667435,07 -2,00 -8842,76 -2,00 -20656,25 4,00 182658190,73

∑

Log Lin Log Lin

4,00 958768027,18 6,25 6294928818 1,00 23674704,05 1 306149729,1 0,00 71379355,19 0,25 422689444,1 1,00 77561960,14 1 425505710,6 4,00 78194342,03 4 426680675

∑

10,00 1209578388,58

∑

x

i

: titolo teorico di PrP

Sc

(13)

(14)

LINEARITA' SESSIONE 5

Linearità sessione 5

Diluizioni caricate in Log 3.5 4 4.5 5 2.5 3 3.5 4 1.5 2 2.5 3 0.5 1 1.5 2 T.q 0.5 1 1.5 1 1 T.q Codice N.D. 1 L 2 L 3 L 4 L M. D. M. N. D M Schema di caricamento: Codice Diluzioni caricate in Log Pozzetti

N.D

3,5-4-4,5-5

1-4

1 L

2,5-3-3,5-4

5-8

2 L

1,5-2-2,5-3

9-12

3 L

0.5-1-1.5-2

13-16

4 L

T.q.-0,5-1-1,5

17-20

M.D..

1

23 M.N.D.

1

24 M

T.q.

25

N.D.: Non Diluito

(15)

CALCOLI LINEARITÀ SESSIONE 5

4,60 39810,72 2,60 8846,74 4,5 31622,78 2,50 7027,21

3,60 3981,07 2,60 8846,74 3,5 3162,28 2,50 7027,21

2,60 398,11 2,60 8846,74 2,5 316,23 2,50 7027,21

1,60 39,81 2,60 8846,74 1,5 31,62 2,50 7027,21

0,60 3,98 2,60 8846,74 0,5 3,16 2,50 7027,21

2,00 30963,98 2,00 24595,56 4,00 761576514,54 1,00 -4865,67 1,00 -3864,94 1,00 18805485,88 0,00 -8448,63 0,00 -6710,99 0,00 56698637,20 -1,00 -8806,93 -1,00 -6995,59 1,00 61609654,88 -2,00 -8842,76 -2,00 -7024,05 4,00 62111973,67

∑

Log Lin Log Lin

4,00 958768027,18 4 604941728,4 1,00 23674704,05 1 14937728,4 0,00 71379355,19 0 45037328,4 1,00 77561960,14 1 48938288,4 4,00 78194342,03 4 49337294,4

∑

10,00 1209578388,58

∑

10,00 763192368,00 m b r2 1,0000 0,7943 -0,1000 0,0000 1,0000 1,0000 2 ) ( ) )( ( x x y y x x m i i i x x x y y x x y b i i i 2 ) ( ) )( ( n i n i n i y y x x y y x x r i i i i 1 1 1 2 ) ( 2 ) ( 2 ) ( ) ( 2

x

i

: titolo teorico di PrP

Sc

(16)

(17)

LINEARITA' SESSIONE 6

Linearità sessione 6

Diluizioni caricate in Log 3.5 4 4.5 5 2.5 3 3.5 4 1.5 2 2.5 3 0.5 1 1.5 2 T.q 0.5 1 1.5 1 1 T.q Codice N.D. 1 L 2 L 3 L 4 L M. D M. N. D M Schema di caricamento: Codice Diluzioni caricate in Log Pozzetti

N.D

3,5-4-4,5-5

1-4

1 L

2,5-3-3,5-4

5-8

2 L

1,5-2-2,5-3

9-12

3 L

0.5-1-1.5-2

13-16

4 L

T.q.-0,5-1-1,5

17-20

M.D..

1

23 M.N.D.

1

24 M

T.q

25

N.D.: Non Diluito

(18)

CALCOLI LINEARITÀ SESSIONE 6

4,60 39810,72 2,60 8846,74 4,5 31622,78 2,50 7027,21

3,60 3981,07 2,60 8846,74 3,5 3162,28 2,50 7027,21

2,60 398,11 2,60 8846,74 2,5 316,23 2,50 7027,21

1,60 39,81 2,60 8846,74 1,5 31,62 2,50 7027,21

0,60 3,98 2,60 8846,74 0,5 3,16 2,50 7027,21

2,00 30963,98 2,00 24595,56 4,00 761576514,54 1,00 -4865,67 1,00 -3864,94 1,00 18805485,88 0,00 -8448,63 0,00 -6710,99 0,00 56698637,20 -1,00 -8806,93 -1,00 -6995,59 1,00 61609654,88 -2,00 -8842,76 -2,00 -7024,05 4,00 62111973,67

∑

Log Lin Log Lin

4,00 958768027,18 4 604941728,4 1,00 23674704,05 1 14937728,4 0,00 71379355,19 0 45037328,4 1,00 77561960,14 1 48938288,4 4,00 78194342,03 4 49337294,4

∑

10,00 1209578388,58

∑

10,00 763192368,00 m b r2 1,0000 0,7943 -0,1000 0,0000 1,0000 1,0000 2 ) ( ) )( ( x x y y x x m i i i x x x y y x x y b i i i 2 ) ( ) )( ( n i n i n i y y x x y y x x r i i i i 1 1 1 2 ) ( 2 ) ( 2 ) ( ) ( 2

x

i

: titolo teorico di PrP

Sc

(19)

(20)

LINEARITA' SESSIONE 7

Linearità sessione 7

Diluizioni caricate in Log 3.5 4 4.5 5 2.5 3 3.5 4 1.5 2 2.5 3 0.5 1 1.5 2 T.q 0.5 1 1.5 1 1 T.q Codice N.D. 1 L 2 L 3 L 4 L M. N. D M. D M Schema di caricamento: Codice Diluzioni caricate in Log Pozzetti

N.D

3,5-4-4,5-5

1-4

1 L

2,5-3-3,5-4

5-8

2 L

1,5-2-2,5-3

9-12

3 L

0.5-1-1.5-2

13-16

4 L

T.q.-0,5-1-1,5

17-20

M.N.D..

1

22 M.D.

1

23 M

T.q.

25

N.D.: Non Diluito

(21)

CALCOLI LINEARITÀ SESSIONE 7

4,60 39810,72 2,60 8846,74 4,5 31622,78 2,40 6983,97

3,60 3981,07 2,60 8846,74 3,5 3162,28 2,40 6983,97

2,60 398,11 2,60 8846,74 2 100,00 2,40 6983,97

1,60 39,81 2,60 8846,74 1,5 31,62 2,40 6983,97

0,60 3,98 2,60 8846,74 0,5 3,16 2,40 6983,97

2,00 30963,98 2,10 24638,81 4,20 762915568,96 1,00 -4865,67 1,10 -3821,69 1,10 18595067,47 0,00 -8448,63 -0,40 -6883,97 0,00 58160099,98 -1,00 -8806,93 -0,90 -6952,35 0,90 61228794,45 -2,00 -8842,76 -1,90 -6980,81 3,80 61729563,77

∑

Log Lin Log Lin

4,00 958768027,18 4,41 607070896,1 1,00 23674704,05 1,21 14605316,01 0,00 71379355,19 0,16 47389013,54 1,00 77561960,14 0,81 48335102,2 4,00 78194342,03 3,61 48731646,62

∑

10,00 1209578388,58

∑

x

i

: titolo teorico di PrP

Sc

(22)

(23)

LINEARITA' SESSIONE 8

Linearità sessione 8

Diluizioni caricate in Log 3.5 4 4.5 5 2.5 3 3.5 4 1.5 2 2.5 3 0.5 1 1.5 2 T.q 0.5 1 1.5 1 1 T.q Codice N.D. 1 L 2 L 3 L 4 L M. D M. N D M Schema di caricamento: Codice Diluzioni caricate in Log Pozzetti

N.D

3,5-4-4,5-5

1-4

1 L

2,5-3-3,5-4

5-8

2 L

1,5-2-2,5-3

9-12

3 L

0.5-1-1.5-2

13-16

4 L

T.q.-0,5-1-1,5

17-20

M.D.

1

22 M.N.D.

1

23 M

T.q

25

N.D.: Non Diluito

(24)

CALCOLI LINEARITÀ SESSIONE 8

4,60 39810,72 2,60 8846,74 4,5 31622,78 2,30 6551,51

3,60 3981,07 2,60 8846,74 3 1000,00 2,30 6551,51

2,60 398,11 2,60 8846,74 2 100,00 2,30 6551,51

1,60 39,81 2,60 8846,74 1,5 31,62 2,30 6551,51

0,60 3,98 2,60 8846,74 0,5 3,16 2,30 6551,51

2,00 30963,98 2,20 25071,26 4,40 776306113,19 1,00 -4865,67 0,70 -5551,51 0,70 27011803,90 0,00 -8448,63 -0,30 -6451,51 0,00 54506443,04 -1,00 -8806,93 -0,80 -6519,89 0,80 57420190,23 -2,00 -8842,76 -1,80 -6548,35 3,60 57905464,82

∑

Log Lin Log Lin

4,00 958768027,18 4,84 628568292,1 1,00 23674704,05 0,49 30819289,16 0,00 71379355,19 0,09 41622011,36 1,00 77561960,14 0,64 42508959,8 4,00 78194342,03 3,24 42880888,42

∑

10,00 1209578388,58

∑

x

i

: titolo teorico di PrP

Sc

(25)

(26)

LINEARITA' SESSIONE 9

Linearità sessione 9

Diluizioni caricate in Log 3.5 4 4.5 5 2.5 3 3.5 4 1.5 2 2.5 3 0.5 1 1.5 2 T.q 0.5 1 1.5 1 1 T.q Codice N.D. 1 L 2 L 3 L 4 L M. D M. N D M Schema di caricamento: Codice Diluzioni caricate in Log Pozzetti

N.D

3,5-4-4,5-5

1-4

1 L

2,5-3-3,5-4

5-8

2 L

1,5-2-2,5-3

9-12

3 L

0.5-1-1.5-2

13-16

4 L

T.q.-0,5-1-1,5

17-20

M.D.

1

22 M.N.D.

1

23 M

T.q.

25

N.D.: Non Diluito

(27)

CALCOLI LINEARITÀ SESSIONE 9

4,60 39810,72 2,60 8846,74 4,5 31622,78 2,30 6551,51

3,60 3981,07 2,60 8846,74 3 1000,00 2,30 6551,51

2,60 398,11 2,60 8846,74 2 100,00 2,30 6551,51

1,60 39,81 2,60 8846,74 1,5 31,62 2,30 6551,51

0,60 3,98 2,60 8846,74 0,5 3,16 2,30 6551,51

2,00 30963,98 2,20 25071,26 4,40 776306113,19 1,00 -4865,67 0,70 -5551,51 0,70 27011803,90 0,00 -8448,63 -0,30 -6451,51 0,00 54506443,04 -1,00 -8806,93 -0,80 -6519,89 0,80 57420190,23 -2,00 -8842,76 -1,80 -6548,35 3,60 57905464,82

∑

Log Lin Log Lin

4,00 958768027,18 4,84 628568292,1 1,00 23674704,05 0,49 30819289,16 0,00 71379355,19 0,09 41622011,36 1,00 77561960,14 0,64 42508959,8 4,00 78194342,03 3,24 42880888,42

∑

10,00 1209578388,58

∑

x

i

: titolo teorico di PrP

Sc

(28)

I dati riportati nella tabella 1.1 del paragrafo 3.2.1 della sezione relativa ai

risultati delle prove di verifica della linearità sono stati calcolati considerando

tutti i valori in unità logaritmiche. Nella presente sezione sono stati riportati gli

stessi dati ottenuti eseguendo i calcoli a partire dai valori in unità decimali. Per

ogni sessione di linearità sono stati riportati entrambi i grafici, sia in unità

logaritmiche che in unità decimali.

(29)

ROBUSTEZZA CONDIZIONI DI MINIMO

Robustezza condizioni di minimo

Diluizioni caricate in

Log

0.5 1 1.5 2 0.5 1 1.5 2 0.5 1 1.5 2 1 T.q 1

Codice 3 L MIN (1)* 3 L MIN (2)* 3 L MIN (3)* M.N_.D M M.D

Schema di caricamento:

Fila superiore: Fila inferiore:

Codice Diluzioni caricate in Log Pozzetti Codice Diluzioni caricate in Log Pozzetti

3 L min

(*1)

0.5-1-1.5-2

10-13

3 L min

(*2)

0.5-1-1.5-2

14-17

3 L min

(*3)

0.5-1-1.5-2

18-21

M.N.D

min

₁

₂₂

M.D.

min

₁

₂₄

M

T.q.

23

N.D.: Non Diluito

M.N.D.: Mock Non Digerito M.D.: Mock Digerito T.q.: Tal quale *: REPLICHE

(30)

ROBUSTEZZA CONDIZIONI DI MASSIMO

Robustezza condizioni di massimo

Diluizioni caricate in

Log

0.5 1 1.5 2 0.5 1 1.5 2 0.5 1 1.5 2 1 T.q 1

Codice 3 L MAX (1)* 3 L MAX (2)* 3 L MAX (3)* M.N. D M M.D Schema di caricamento: Codice Diluzioni caricate in Log Pozzetti

3 L max

(*1)

0.5-1-1.5-2

10-13

3 L max

(*2)

0.5-1-1.5-2

14-17

3 L max

(*3)

0.5-1-1.5-2

18-21

M.N.D

max

₁

₂₂

M.D.

max

1

24 M

T.q.

23

N.D.: Non Diluito

M.N.D.: Mock Non Digerito

M.D.: Mock Digerito

T.q.: Tal quale

(31)

3.2 Elaborazione dati

3.2.1 Verifica della linearità

Nella tabella 1.1 sono mostrati i parametri statistici elaborati secondo

quanto indicato nel paragrafo 2.6.1 a partire dai dati grezzi riportati nel

paragrafo 3.1:

Tabella 1.1. Risultati parametri statistici

Dato che il coefficiente di determinazione r

2

, calcolato dalla regressione

lineare ottenuta attraverso l’interpolazione tra i risultati analitici e le

corrispondenti concentrazioni teoriche di analita, è risultato essere sempre

maggiore o uguale a 0,95 i risultati ottenuti possono essere accettati. Il metodo

risulta essere lineare nell’intervallo 0.6-4.6 Log/ml.

3.2.2 Verifica dell’accuratezza

L’accuratezza del metodo è stata determinata utilizzando i dati ottenuti

durante le prove di linearità del metodo. Nella tabella 1.2 vengono riportati i

dati dei test analitici elaborati secondo quanto descritto nel paragrafo 2.6.2:

Sessione N°:

Pendenza

Intercetta

r

2

1. 27-28/05/2010

Operatore 1

1,10

-0,36

0,97

2. 28-31/05/10

Operatore 2

1,05

-0,33

0,98

3. 31/05/10

Operatore 3

1,10

-0,36

0,97

4. 31/05/10

Operatore 2

1,10

-0,36

0,97

5. 09/06/10

Operatore 3

1,00

-0,10

1,00

6. 09/06/10

Operatore 1

1,00

-0,10

1,00

7. 10-11/06/10

Operatore 2

1,00

-0,20

0,98

8. 05-06/07/10

Operatore 1

0,95

-0,17

0,97

9. 06-07/07/10

Operatore 3

0,95

-0,17

0,97

(32)

Replica

Titolo Teorico

4,6 Log/ml 2,6 Log/ml 0,6 Log/ml 1 (sessione 27-28/05/2010 Operatore 1) 5,0 2,0 0,5 2 (sessione 28-31/05/2010 Operatore 2) 4,5 2,5 0,5 3 (sessione 31/05//2010 Operatore 3) 5,0 2,0 0,5 Media 4,83 2,17 0,5 Dev Std 0,29 0,29 0 Recupero %

105,07

83,33

Tabella 1.2. Raccolta dati accuratezza del metodo

In conformità al criterio di accettazione, il valore medio di recupero dei

campioni analizzati per ogni livello di concentrazione è risultato compreso tra

80% e 120% rispetto al valore teorico.

Dall’analisi dei risultati ottenuti, il metodo risulta essere accurato per i titoli

di proteina prionica compresi tra 0.6-4.6 Log/ml.

3.2.3 Verifica della precisione intermedia

Nella tabella 1.3 sono mostrati i valori di deviazione standard calcolati sui

titoli delle tre differenti sedute di analisi effettuate per le prove di linearità

(sessioni 27-28/05/2010 Operatore 1, sessione 28-31/05/2010 Operatore 2,

sessione 31/05/2010 Operatore 3).

Campione Media (Log/ml) Deviazione standard

(Log/ml) Titolo teorico 4, 6 Log/ml

_4,83

_0,29

Titolo teorico 2,6 Log/ml

_2,17

_0,29

Titolo teorico 0,6 Log/ml

_0,50

_0,00

Tabella 1.3. Raccolta dati precisone intermedia

(33)

Log. Per tale ragione possiamo dire che il metodo risulta preciso per tutto il

range di analisi: 0.6-4.6 Log/ml.

3.2.4 Verifica della precisione entro la serie

Nella tabella 1.4 sono mostrati i valori di media e deviazione standard

calcolati con i titoli di proteina prionica ottenuti nella seduta analitica (sessione

31/05/2010 Operatore 3) inerente la verifica della precisione intermedia.

Titolo Log/ml Replica Risultato Log/ml Media (Log/ml) Dev Std (Log/ml) 4,6 log/ml 1° 5,00 Media: 4,83

Dev. Std: 0,29

2° 5,00 3° 4,50 2,6 log/ml 1° 2,00 Media: 2,33

Dev. Std: 0,29

2° 2,50 3° 2,50 0,6 log/ml 1° 0,50 Media: 0,5

Dev. Std: 0,00

2° 0,50 3° 0,50

Tabella 1.4. Raccolta dati precisone entro la serie

Per ogni titolo la deviazione standard dei risultati analitici ottenuti è risultata

essere ≤ 0,5 Log.

Da ciò si può concludere che il metodo risulta essere ripetibile per i titoli di

proteina prionica che sono compresi nel range 0.6-4.6 Log/ml.

3.2.5 Verifica del range del metodo

Basandosi sui risultati ottenuti e tenendo conto dei criteri di accettazione

stabiliti per l’accuratezza, la precisione intermedia e la linearità, il range del

metodo è individuato nei titoli di proteina prionica compresi tra 0,6 Log/ml ± 0,5

Log/ml e 4,6 Log/ml ± 0,5 Log/ml:

(34)

Range metodo analitico

Range

Valore

Limite inferiore range

0,6 Log/ml ± 0,5 Log/ml

Limite superiore range

4,6 Log/ml ± 0,5 Log/ml

Sommario linearità del metodo

Test # Data di

esecuzione Conc minima Conc massima R

2

1 27-28/05/10

Operatore 1

0,6 Log/ml

4,6 Log/ml

0,97

2 28-31/05/10

Operatore 2

0,6 Log/ml

4,6 Log/ml

0,98

3 31/05/10

Operatore 3

0,6 Log/ml

4,6 Log/ml

0,97

4 31/05/10

Operatore 2

0,6 Log/ml

4,6 Log/ml

0,97

5 09/06/10

Operatore 3

0,6 Log/ml

4,6 Log/ml

1,00

6 09/06/10

Operatore 1

0,6 Log/ml

4,6 Log/ml

1,00

7 10-11-06/10

Operatore 2

0,6 Log/ml

4,6 Log/ml

0,98

8 05-06/07/10

Operatore 1

0,6 Log/ml

4,6 Log/ml

0,97

9 06-07/07/10

Operatore 3

0,6 Log/ml

4,6 Log/ml

0,97

Sommario Accuratezza

Conc. minima

testata

0,6 Log/ml

Recovery %

83,33%

Conc. massima

testata

4,6 Log/ml

Recovery %

105,07%

Sommario precisione entro la serie

Conc. minima

testata

0,6 Log/ml

Dev. Standard

0,00 Log/ml

Conc. massima

testata

4,6 Log/ml

Dev. Standard

0,29 Log/ml

Sommario precisione intermedia

Conc. minima

testata

0,6 Log/ml

Dev. Standard

0,00 Log/ml

Conc. massima

testata

4,6 Log/ml

Dev. Standard

0,29 Log/ml

Tabella 1.5. Sommario dati verifica range del metodo analitico

3.2.6 Verifica della robustezza del metodo

(35)

condizioni indicate come condizioni di minimo e massimo, variando i parametri

considerati critici e riportati nella tabella 1 del paragrafo 2.6.6.

In conformità al criterio di accettazione in tutti i campioni analizzati

(sessione 07-08/07/2010 Operatore 3), il titolo ottenuto eseguendo il metodo

con i parametri modificati non differisce per più di 0,5 Log dal titolo teorico.

Parametro Valore minimo Titolo ottenuto Valore massimo Titolo ottenuto

Tempo di digestione con proteinase K 45 min 1,5 Log/ml 1,5 Log/ml 1,5 Log/ml 1h e 15 min 1,5 Log/ml 1,5 Log/ml 1,5 Log/ml

Tempo di centrifugazione 1h e 45 min 2 h e 15 min

Quantità di anticorpo primario

1,5 µl/20 ml 2,5 µl/20 ml

Tempo di incubazione con anticorpo primario

50 min 1 h e 10 min

Tempo di incubazione con anticorpo secondario

20 min 40 min

Tempo di incubazione con substrato

4 min 6 min

Tempo di attesa fra rimozione substrato ed esposizione

3 min 7 min

Tempo di esposizione 8 min 12 min

Tabella 1.6. Risultati verifica robustezza del metodo

Condizioni di Replica Titolo teorico Titolo ottenuto Differenza fra

titolo teorico e titolo ottenuto

minimo

1 1.6 Log/ml

1.5 Log/ml

0.1 Log/ml

2 1.5 Log/ml

0.1 Log/ml

3 1.5 Log/ml

0.1 Log/ml

massimo

1 1.5 Log/ml

0.1 Log/ml

2 1.5 Log/ml

0.1 Log/ml

3 1.5 Log/ml

0.1 Log/ml

Tabella 1.7. Differenze titolo teorico e titolo calcolato

Le tabelle 1.6 e 1.7 dimostrano la robustezza del metodo: infatti

considerando che il titolo teorico è 1.6 Log la differenza fra titolo teorico e titolo

ottenuto per tutte le repliche è risultato pari a 0,1 Log/ml rientrando nei criteri di

(36)

3.2.7 Verifica limite di quantificazione

Per determinare il limite di quantificazione sono stati valutati i risultati di

accuratezza e precisione, riportati nelle relative sezioni, per il campione a

concentrazione minima.

Analisi Data Quantità minima teorica Log /ml Titolo calcolato Log /ml

1 27-28/05/10 Operatore 1 0,6 Log /ml 0,5 Log /ml 2 28-31/05/10 Operatore 2 0,6 Log /ml 0,5 Log /ml 3 31/05/10 Operatore 3 0,6 Log /ml 0,5 Log /ml 4 31/05/10 Operatore 2 0,6 Log /ml 0,5 Log /ml 5 09/06/10 Operatore 3 0,6 Log /ml 0,5 Log /ml 6 09/06/10 Operatore 1 0,6 Log /ml 0,5 Log /ml 7 10-11/06/10 Operatore 2 0,6 Log /ml 0,5 Log /ml 8 05-06/07/10 Operatore 1 0,6 Log /ml 0,5 Log /ml 9 06-07/07/10 Operatore 3 0,6 Log /ml 0,5 Log /ml Media 0,5 Log /ml Dev Std 0,0 Log /ml Recupero % 83,33 %

Tabella 1.8. Raccolta dati limite di quantificazione