0 25 50 75 100
0 30 60 90 120
Tempo di incubazione (min) Concentrazione GSH extracellulare (% del tempo 0)
*
*
*
(□) Controllo (▲) + Gly-Gly
A
0 25 50 75 100
0 30 60 90 120
Tempo di incubazione (min) Concentrazione AA extracellulare (% del tempo 0)
*
*
*
*
(□) Controllo (▲) + Gly-Gly
B
0 50 100 150 200
Controllo + Gly-Gly + Gly-Gly + AT125
Concentrazione AA intracellulare (120 min; nmol/mg di proteina) *
n.s.
C
125
Figura 4.6 Effetti dell’attività di GGT sulla captazione dell’AA da parte del clone di cellule di melanoma umano Me665/2/60 con alta attività di GGT. Le cellule sono state incubate in Hank’s buffer, pH 7,4 a 37°C per 120 minuti in presenza di AA (0,5 mM), GSH (0,5 mM) e ADP-FeCl3 (200-20 µM di ADP e di FeCl3, rispettivamente).
Le reazioni sono state fatte partire aggiungendo l’ADP-FeCl3 in presenza o in assenza di Gly-Gly (20 mM). Dove indicato, le cellule sono state trattate, prima dell’incubazione, con l’inibitore non competitivo della GGT acivicina (AT125; 1 mM). (A) Variazioni della concentrazione del GSH extracellulare; (B) variazioni della concentrazione dell’AA extracellulare; (C) concentrazione intracellulare di AA dopo 120 minuti di incubazione.
I risultati sono la media ± d.s. di tre determinazioni indipendenti. I dati delle concentrazioni extracellulari sono stati analizzati mediante il test di analisi della varianza a due vie, mentre i dati delle concentrazioni intracellulari finali sono stati analizzati mediante il test di analisi della varianza corredato con il test di Student- Newman-Keuls per confronti multipli. (n.s.) Non significativamente differente; (*) p
< 0,001 confrontato con il controllo.
126
