Sommario
1. Riassunto ... 6
2. Abstract ... 9
3. Scopo della tesi ... 11
4. Introduzione ... 13
4.1 Premessa...13
4.2 Sostanze inquinanti...14
4.2.1 Principali inquinanti inorganici... 17
4.2.2 Principali inquinanti organici ... 17
4.3 I biomarcatori...18
4.3.1 Classificazione biomarker. ... ..19
4.3.2 Biomarker come integrazione ai metodi di analisi classiche al monitoraggio delle acque ... 21
4.3.3 Il pesce come biondicatore ... 23
4.4 Area oggetto di studio ... 26
4.5 Il bacino del Cecina ... 29
4.5.1 Inquadramento geografico e ambientale del fiume Cecina ... 31
4.5.2 Fonti di pressione antropica ... 33
4.5.3 Il problema del mercurio nella val di Cecina ... 36
4.5.4 Dati analitici della presenza di mercurio nel bacino del fiume Cecina ... 39
4.5.5 Fonti di origine del mercurio ... 40
4.5.6 Breve descrizione del processo con celle ad amalgama 42 4.5.6 Valutazione delle perdite di mercurio ... 43
5. Genotossicita’ ... 46
5.1 Premessa ... 46
5.2 Rotture del DNA ... 47
5.2.1 Comet assay ... 50
5.2.2 Test del micronucleo ... 53
5.3 Apoptosi...56
5.3.1 Diffusion assay ... 60
5.4 Biotrasformazione delle sostanze organiche (EROD) . 63 5.5 Attività enzima Acetilcolinesterasi ... 66
5.6 Bioaccumulo metalli ... 67
5.7 Interferenti endocrini ... 68
6. Materiali e metodi ... 71
6.1 Campionamenti ... 71
6.2 Single cell gell elctrophoresis ... 72
6.2.1 Preparazione soluzione di lisi ... 74
6.2.2 Diffusion assay ... 74
6.2.3 Analisi statistica ... 75
6.3 Comet assay ... 75
6.3.1 Analisi statistica ... 78
6.4 Test del micronucleo ... 78
6.4.1 Sangue ... 78
6.4.2 Rene cefalico ... 79
6.4.3 Osservazione al microscopio ... 79
6.4.4 Analisi statistica ... 80
6.5 Determinazione del sesso ... 81
6.5.1 Colorazione emallume di Carazzi-eosina ... 82
