CAPITOLO 2 : SCOPO DELLA TESI CAPITOLO 3 : MATERIALI E METODI INDICE RIASSUNTO.......................................................................................4 SUMMARY.................................................................................

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INDICE

RIASSUNTO ... 4

SUMMARY ... 7

CAPITOLO 1: INTRODUZIONE

...10 1.1 Le microparticelle ...10 1.1.1 Composizione delle MP...10 1.1.2 Generazione delle MP...12 1.1.3 Funzioni delle MP...13

1.2 Epitelio delle vie aeree...16

1.2.1 Cenni di anatomia ...16

1.2.2 Funzioni dell’epitelio delle vie aeree...17

1.3 L’Infiammazione ...20

1.3.1 Le Citochine...21

1.3.2 Le Chemochine ...23

1.3.3 IL-8 (Interleuchina 8 ) ...24

1.3.4 MCP-1 (Monocyte Chemotactic Protein 1) ...25

1.4 I PPAR (Peroxisome Proliferator-Activated Rceptors) ...27

1.4.1 Caratteristiche strutturali e meccanismi biologici dei PPAR...28

1.4.2 PPAR-α ...30

1.4.3 PPAR-β/δ ...30

1.4.4 PPAR-γ ...31

1.4.5 15-deoxy-∆12,14-PGJ2 (15d-PGJ2) ...34

1.4.6 Rosiglitazone ...35

CAPITOLO 2 : SCOPO DELLA TESI

...36

CAPITOLO 3 : MATERIALI E METODI

...37

3.1 Materiali...37

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3.1.2 Trattamenti...37

3.1.3 Kit ELISA ...38

3.1.4 Kit per l’estrazione delle proteine nucleari ...38

3.1.5 Primers e reagenti per RT-PCR e REAL TIME PCR...38

3.1.6 Soluzioni e buffers ...39

3.1.7 Modelli sperimentali ...41

3.2 Metodi ...42

3.2.1 Le colture cellulari ...42

3.2.2 Induzione di MP da parte di monociti/macrofagi attiavti con Calcio- ionoforo A23187 (C29H37 N3O6) e stimolazione di A549 e BEAS2B ...44

3.2.3 Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) per la misurazione MCP-1 e IL-8...44

3.2.4 Estrazione di RNA ...45

3.2.5 RT-PCR ...46

3.2.6 Real Time PCR ...47

3.2.7 Estrazione nucleare ...47

3.3 Presentazione dei dati ed Analisi statistica ...48

CAPITOLO 4: RISULTATI

...49

4.1 L’azione pro-infiammatoria delle MP nelle cellule A549 coinvolge l’attivazione del fattore di trascrizione NFκB (EMSA) ...49

4.2 Il Rosiglitazone inibisce la sintesi di IL-8 e MCP-1 indotta dalle MP sulla linea cellulare A549 ...50

4.3 Il Rosiglitazone inibisce la sintesi di mRNA per IL-8 e MCP-1 indotta dalle MP sulla linea cellulare A549 ( RT-PCR) ...53

4.4 Il Rosiglitazone inibisce la sintesi di mRNA per IL-8 e MCP-1 indotta dalle MP sulla linea cellulare A549 (REAL TIME) ...54

4.5 Il Rosiglitazone inibisce la sintesi di IL-8 indotta dalle MP sulla linea cellulare BEAS-2B ...55

4.6 IL 15dPGJ2 inibisce l’espressione di MCP-1 indotta dalle MP sulle cellule A549 ...57

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3

4.7 Nelle cellule A549 il Rosiglitazone e il 15d-PGJ2 esercitano l’ inibizione

della espressione di MCP-1 indotta dalle MP in maniera

dose-dipendente ...59

CAPITOLO 5 : DISCUSSIONE

...61

CAPITOLO 6 : CONCLUSIONI

...65

GLOSSARIO

...66

BIBLIOGRAFIA

...68

RINGRAZIAMENTI

...73