ESERCITAZIONE n° 3: Acetilazione del Colesterolo
HO AcO
Materiali:
colesterolo (MW: 546),
4-dimetilammino-piridina (TOSSICA, MW: 122)
Anidride acetica (Corrosiva, lacrimogena, MW: 102, d=1.08 g /mL)
Diclorometano Dry
Vial 8 mL
Soluzione acquosa 2 N di HCl, Soluzione acquosa di NaHCO3 al 10%
Capillari
una siringa da 50 µL TLC
Camera cromatografica (eluente: etere di petrolio / acetato d’etile 9 / 1) Soluzione di solfato di cerio ed acido solforico (rivelatore per TLC)
Riferimento di colesterolo per TLC (in una provetta dissolvere pochi milligrammi di prodotto in poche gocce di CH2Cl2)
Proporzioni
0.1 grammi di colesterolo, 3.3 equivalenti di 4-dimetilammino-piridina, 3.3 equivalenti di anidride acetica.
Procedura
In una vial da 8 mL, sciogli il colesterolo in 1 mL di diclorometano. Aggiungere, in sequenza, la 4-dimetilammino-piridina e l’anidride acetica al pallone di reazione.
Dopo aver controllato che tutto si sia perfettamente disciolto lascia reagire la miscela di reazione per 10 minuti (l’agitazione non è necessaria). Controllare se la reazione è avvenuta con una cromatografia su strato sottile (TLC; fase stazionaria: silice; eluente: etere di petrolio / acetato
d’etile (5 mL, in un beaker da 50 mL) in rapporto 9 a 1, segnare sulla TLC, con matita, il fronte
Reaz. Mix Rif.
X X X
Almeno1 cm
Reaz. = Contenuto del pallone di reazione
Mix = miscela tra Reaz. e Rif. Rif. = Prodotto di partenza (pochi mg sciolti in qualche goccia di Et2O)
Se la reazione è avvenuta (scomparsa del prodotto di partenza dalla TLC) versare cautamente il contenuto della vial nell’imbuto separatore, aggiungere 10 mL di diclorometano (usare alcuni di questi per lavare la vial) e 5 della soluzione 2 N di HCl nello stesso imbuto separatore. Estrarre nel modo consueto (ricordare che il solvente alogenato ha una densità maggiore di quella della fasa acquosa quindi rappresenterà la fase INFERIORE!). Lavare la fase organica con la soluzione di bicarbonato (5 mL, per neutralizzare l’acidità). Separare la fase inferiore, anidrificarla con Na2SO4 e, dopo filtrazione, portare a secco al rotavapor in PALLONE DA 50 mL
prepesato. Riportare la quantità di prodotto ottenuto. La resa verrà calcolata dopo colonna
cromatografica. Calcola gli Rf dei prodotti.
Colonna Cromatografica
Pesare 5 g di silice ed impaccare la colonna ad umido utilizzando una miscela di etere di petrolio / acetato d’etile in rapporto 9 a 1. Per il caricamento in colonna sciogliere il prodotto nella minima quantità della miscela eluente (etere di petrolio / acetato d’etile in rapporto 9 a 1, la stessa che avete usato per impaccare la colonna), e procedete con l’eluizione utilizzando la stessa miscela (etere di petrolio/acetato d’etile 9/1).
