INDICE
Riassunto... 1
INTRODUZIONE... 3
1. Interazione luce organismi viventi ... 4
2. Risposte fotocomportamentali di microrganismi ... 6
3. Analisi dei fotomovimenti ... 9
4. Biologia di Blepahrisma japonicum... 10
4.1. Classificazione... 10
4.2. Morfologia ... 11
4.3. Il pigmento “fotodinamico” di B. japonicum... 14
4.4. Ipotesi di fototrasduzione ... 18
4.5. Identificazione della cromoproteina fotorecettrice in B. japonicum ... 21
MATERIALI E METODI... 25
1. Coltura di B. japonicum ... 26
2. Irraggiamento delle cellule di B. japonicum ... 27
3. Metodi di estrazione del complesso fotorecettore... 27
3.1. Estrazione con sodio colato... 28
3.2. Estrazione con CHAPS... 29
3.3. Metodo della sonicazione e del congelamento ... 29
4. Metodi di purificazione della cromoproteina ... 30
4.1. Cromatografia di adsorbimento su idrossiapatite... 32
4.2. Cromatografia di esclusione su Sephadex G-200... 33
5. Metodi di analisi del complesso fotorecettore... 34
5.1. Elettroforesi monodimensionale SDS-PAGE... 34
RISULTATI E DISCUSSIONE... 39
1. Ruolo del detergente nell’estrazione del complesso proteico fotorecettore ... 40
1.1 Effetto del detergente... 40
1.2 Estrazione per rottura cellulare ... 44
1.4 Effetti della variazione della concentrazione del tampone di eluizione ... 50
1.5 Effetto del β-mercaptoetanolo ... 50
1.6 Cromatografia di esclusione Sephadex G-200... 52
CONCLUSIONI E PROSPETTIVE... 55
RINGRAZIAMENTI ... 57
