FARMACIJOS FAKULTETAS
VAISTŲ TECHNOLOGIJOS IR SOCIALINĖS FARMACIJOS KATEDRA
GODA VAITKEVIČIŪTĖ
VILGIKLIO MASTITO PREVENCIJAI SUDĖTIES PAIEŠKA,
TECHNOLOGIJA IR VERTINIMAS
Magistro baigiamasis darbas Studijų programa: 601B20001
Darbo vadovas
Doc. Gailutė Drakšienė
Darbo konsultantai
Prof. Alvydas Pavilonis
LIETUVOS SVEIKATOS MOKSLŲ UNIVERSITETAS
FARMACIJOS FAKULTETAS
VAISTŲ TECHNOLOGIJOS IR SOCIALINĖS FARMACIJOS KATEDRA
TVIRTINU:
Farmacijos fakulteto dekanas Vitalis Briedis Data 2017
VILGIKLIO MASTITO PREVENCIJAI SUDĖTIES PAIEŠKA,
TECHNOLOGIJA IR VERTINIMAS
Magistro baigiamasis darbas
Konsultantas Darbo vadovas
Prof. Alvydas Pavilonis Doc. Gailutė Drakšienė Data 2017Data 2017
Recenzentas Darbą atliko
Magistrantė Goda Vaitkevičiūtė Data 2017 Data 2017
TURINYS
TURINYS 3 SANTRAUKA ... 5 SUMMARY ... 6 SANTRUMPOS... 9 SĄVOKOS ... 10 ĮVADAS ... 11DARBO TIKSLAS IR UŽDAVINIAI ... 12
1.1 Mastito keliama žala, problemos aktualumas ... 13
1.2 Mastitas. Ligos apibrėžimas ... 14
1.3 Mastito priežastys ... 14
1.4 Mastitą sukeliantys mikroorganizmai ... 14
1.5 Rizikos faktoriai... 15
1.6 Prevencija ... 16
1.7 Spenių dezinfekcija ... 18
1.8 Vilgikliai po melžimo ... 18
1.9 Vilgiklių nuo mastito sudėtys ... 19
1.10 Klampą suteikiančios medžiagos ... 20
1.10.1 Carbopol ® Ultrez 21 ... 20 1.10.2 Carbopol ® Ultrez 30 ... 20 1.10.3 Ksantano lipai ... 21 1.11 Drėkinančios medžiagos ... 21 1.11.1 Glicerolis ... 21 1.11.2 Propilenglikolis ... 22 1.12 pH reguliuojančios medžiagos ... 22 1.12.1 Natrio hidroksidas ... 22
1.13 Paviršinio aktyvumo medžiagos ... 22
1.13.1 Polisorbatas 20 ... 22
1.14.1 Povidono jodas ... 23
1. 15 Literatūros apibendrinimas ... 23
2. TYRIMŲ METODIKA ... 25
2.1 Tyrime naudotos medžiagos ... 25
2.2 Tyrime naudota įranga ... 25
2.4 Vilgiklių su povidono jodu ir Iodophor AE 20 % koncentratu juslinių savybių vertinimas ... 26
2.5 Jodo kiekio nustatymo tyrimas Jodometrijos metodu, vilgikliuose su povidono jodu ir Iodophor AE 20 % koncentratu ... 27
2.6 Vilgiklių su povidono jodu ir Iodophor AE 20 % koncentratu pH reikšmių matavimas ... 27
2.7 Vilgiklių su povidono jodu ir Iodophor AE 20 % koncentratu viskozimetrinis klampos nustatymas ... 28
2.8 Vilgiklių su povidono jodu ir Iodophor AE 20 % koncentratu stabilumo tyrimas centrifugavimo metodu 28 2.9 Vilgiklių su povidono jodu ir Iodophor AE 20 % koncentratu šildymo – šaldymo tyrimas ... 29
2.10 Vilgiklių su povidono jodu ir Iodophor AE 20 % koncentratu antimikrobinio aktyvumo nustatymas ... 29
2.10.1 Etaloninių mikroorganizmų kultūrų paruošimas ... 29
2.10.2 Antimikrobinio aktyvumo nustatymo metodika ... 30
2.10.3 Tyrimo eiga ... 31
2.10.4 Vertinimas ... 31
2.11 Vilgiklių su povidono jodu ir Iodophor AE 20 % koncentratu tekstūros analizė... 32
2.12 Statistinė analizė ... 32
3. REZULTATAI IR JŲ APTARIMAS ... 33
3.1 Vilgiklių su povidono jodu ir Iodophor AE 20 % koncentratu gamyba ... 33
3.2 Vilgiklių su povidono jodu ir Iodophor AE 20 % koncentratu juslinių savybių vertinimas ... 34
3.3 Vilgiklių su povidono jodo ir Iodophor AE 20 % koncentratu stabilumo vertinimas atliekant centrifugavimą... 35
3.4 Jodo kiekio nustatymo tyrimo rezultatai vilgikliuose su povidono jodu ir Iodophor AE 20 % koncentratu 36 3.5 Vilgiklių su povidono jodu ir Iodophor AE 20 % koncentratu pH reikšmių matavimo rezultatai ... 37
3.6 Vilgiklių su povidono jodu ir Iodophor AE 20 % koncentratu klampos tyrimo rezutatai ... 39
3.7 Vilgiklių su povidono jodu ir Iodophor AE 20 % koncentratu stabilumo tyrimas atliekant šildymo – šaldymo testą ... 41
3.8 Vilgiklių su povidono jodu ir Iodophor AE 20 % koncentratu antimikrobinio aktyvumo tyrimas ... 42
3.9 Vilgiklių su Iodophor AE 20 % koncentratu tekstūros analizė ... 45
3.10 Rezultatų apibendrinimas ... 46
4. IŠVADOS ... 49
5. PRAKTINĖS REKOMENDACIJOS ... 51
SANTRAUKA
Godos Vaitkevičiūtės magistro baigiamasis darbas ,,Vilgiklio mastito prevencijai sudėties paieška, technologija ir vertinimas„„, mokslinio darbo vadovė doc.Gailutė Drakšienė. Darbas atliktas Lietuvos Sveikatos mokslų universitete, Medicijos akademijoje, Farmacijos Fakultete, Vaistų technologijos ir Socialinės farmacijos katedroje, Kaune.
Tyrimo tikslas: pagaminti vilgiklį mastito prevencijai su jodo junginiais, ištirti ir įvertinti
vilgiklio gamybai naudotų medţiagų įtaką preparato kokybei.
Darbo uţdaviniai: remiantis moksline literatūra parengti ir pagaminti vilgiklio su jodo
junginiais mastito prevencijai mėginius; nustatyti jodo kiekį pagamintuose mėginiuose; pagamintų mėginių pH reikšmę ir jos kitimą laiko atţvilgiu; nustatyti pagamintų mėginių dinaminę klampą ir įvertinti jos kitimą laiko atţvilgiu; atlikti preparato fizikinius stabilumo tyrimus (centrifugavimą, šildymo – šaldymo ciklo testą, juslinių savybių vertinimą); įvertinti pagamintų vilgiklių antimikrobinį aktyvumą; įvertinti pagalbinių medţiagų įtaką preparato tekstūrai.
Metodikos: vilgiklių su jodo junginiais stabilumui įvertinti atliktas centrifugavimo testas,
šildymo – šaldymo testas, juslinių savybių vertinimas, pH reikšmių matavimas, tekstūros analizės tyrimas. Klampa vertinta viskozimetriniu metodu. Jodo kiekis vilgikliuose buvo nustatytas Jodometrijos metodu. Antimikrobinis aktyvumas nustatytas mikrobiologniais tyrimais.
Rezultatai: pagaminti 10 skirtingų mėginių su povidono jodu ir Iodophor AE 20 %
koncentratu. Pagrindo gamybai buvo naudojami Carbopol®Ultrez 30 ir Carbopol®Ultrez 21 polimerai, taip pat ksantano lipai bei jų mišiniai su minėtais polimerais. Atlikus fizikinio stabilumo tyrimą centrifugavimo metodu, visi mėginiai išliko stabilūs tiek pagaminus, tiek po 3 mėnesių. Visi vilgikliai pasiţymėjo geromis juslinėmis savybėmis, išskyrus vilgiklius, kurių pagrindą sudarė ksantano lipai – šie mėginiai buvo drumsti. Šildymo – šaldymo testo metu visi mėginiai išliko stabilūs. Įvertinus jodo kiekį vilgikliuose nustatyta, kad jodo kiekis vilgikliuose priklauso nuo jodo junginio savybių. Didţiausias jodo kiekis nustatytas tuose vilgiklių mėginiuose, kurie buvo pagaminti naudojant Iodophor AE 20 % koncentratą ir Carbopol®Ultrez 30, Carbopol®Ultrez 21 polimerus bei ksantano lipus. Atlikus pH reikšmės vertinimą, didţiausias pokytis nustatytas vilgikliuose su povidono jodu ir vilgiklyje (KVILG4) su Iodophor AE 20 % koncentratu ir ksantano lipais (p<0.05).Viskozimetrinio tyrimo duomenys ir tekstūros analizė parodė, kad ksantano lipai pagerina vilgiklių fizikines – chemines, juslines ir funkcionalumo savybes.Didţiausiu antimikrobiniu aktyvumu pasiţymėjo vilgikliai, kurių sudėtyje buvo jodo junginys - Iodophor AE 20 % koncentratas.
Išvados: vilgiklio mastito prevencijai sudėčiai rekomenduojama kaip antimikrobinę medţiagą
SUMMARY
Goda Vaitkevičiūtė. Search for Composition of Post-Milking Teat Dips to Prevent Mastitis, Composition Assessment and Production Technology. Thesis for the Master„s Degree. Scientific Supervisor: Ass. Prof.Gailutė Drakšienė. Department of Medicine Technology and Social Pharmacy, Faculty of Pharmacy at Lithuanian University of Health Sciences. Kaunas.
The Aim of the Research: to produce a post-milking teat dip with iodine compounds for
prevention of mastitis, investigate and assess the impact of materials, which have been used for production of the post-milking teat dip, on the quality of this medicinal preparation.
The Objectives of the Study: with reference to scientific literature, to prepare and
manufacture samples of post-milking teat dips with iodine compounds for prevention of mastitis; to determine iodine content in the samples produced, establish the pH value in the samples produced and its change over time, determine the dynamic viscosity of the samples produced and evaluate its change over time; conduct physical investigation of this product stability (through centrifuging, heating – freezing cycle test, assessment of sensory properties); to evaluate antimicrobial activeness of the post-milking teat dips produced; assess the impact of excipients on the texture of this medicinal product.
The Methods: to assess the stability of post-milking teat dips with iodine compounds,
centrifuging test was conducted, as well as heating – freezing test, assessment of sensory properties, pH value measuring and analysis of texture. The viscosity was assessed applying the viscometric method. Iodine content in the post-milking teat dips was established applying the Iodometry method. Applying the microbiological tests, antimicrobial activeness was established.
The Results: 10 different samples with povidone iodine and Iodophor AE 20 % concentrate
gums improve physical – chemical, sensory and functionality properties of the post-milking teat dips. The post-milking teat dips, the composition of which contained iodine compound Iodophor AE 20 % concentrate demonstrated the highest antimicrobial activeness.
Conclusions: To prevent mastitis, it is recommended to include into the composition of
PADĖKA
SANTRUMPOS
°C– laipsniai Celsijaus
pH – vandenilio potencialas, vandenilio jonų (H+) koncentracijos tirpale matas
m. – metai pav. – paveikslas % - procentai cm – centimetrai
q.s. – quantum satis. Receptuose reiškia – kiek reikia, pagal reikalą aps./min. – apsisukimai per minutę
ml – mililitrai g – gramai T – titras
mPa*s – milipaskaliai per sekundę PVP jodas – povidono jodas
MSK – maţiausia slopinanti koncentracija mm – milimetrai
SĄVOKOS
Karbopolio polimeras – didelės molekulinės masės poilakrilo rūgšties polimerai, kurie yra
sujungti skersiniai ryšiais su cukrų polialkenilo eteriais arba polialkoholiais.
Adhezija – dviejų skirtingų kietųjų kūnų, kietojo kūno ir skysčio arba nesimaišančių skysčių
susiliečiančių paviršių sukibimas dėl kūnų dalelių sąveikos.
Kohezija–medţiagos dalelių (molekulių, jonų, atomų) sukibimas dėl molekulių sąveikos ir
cheminio ryšio jėgų.
Karbopolis – gamintojo firminis pavadinimas, skirtas visai poliakrilo rūgšties polimerų
serijai.
ĮVADAS
Pieno produktai uţima svarbią vietą mūsų maisto racione, todėl pienas turi būti aukščiausios kokybės. Įmonės uţsiimančios pieno perdirbimu, pieno produktų gamyba, taip pat ūkininkai besiverčiantys galvijų auginimu, susiduria su daug nuostolių sukeliančia problema – mastitu. Mastitas yra laikomas daţniausiai pasitaikančia ir brangiausiai kainuojančia liga pieno pramonėje. Mastitas veikia pieno kokybę tiesiogiai per technologinius ir higieninius pokyčius bei netiesiogiai per vidinius pieno pokyčius. Ekonomikai ţala daroma dėl pieno gamybos nuostolių, išlaidų vaistams, išmetamo pieno, išlaidų veterinarijos gydytojams, dėl naujų mastito atvejų atsiradimo (išpitimo) [24].
Beveik visi autoriai sutinka, kad ne maţiau kaip 70 % ekonominių nuostolių pieno pramonėje yra patiriama kai yra išmetamas/sunaikinamas pienas, kuris buvo gaunamas iš sergančių gyvūnų [5]. Norint išvengti nuostolių labai svarbu ţinoti kas sukelia ligą, kokie yra rizikos faktoriai ir kaip tam uţkirsti kelią. Pagrindiniai mastito sukėlėjai yra patogeniški mikroorganizmai, kurie skirstomi aplinkos ir uţkrečiamuosius mikroorganizmus. Tam, kad mikroorganizmai neatsirastų ir negalėtų daugintis labai svarbu pasirūpinti galvijo aplinkos švara, temperatūra, drėgme, taip pat svarbi mityba [3]. Rizikos faktoriai – galvijų amţius, veislė, ţindymo laikotarpis, melţimo intervalai ir naudojama technika, galvijo imunitetas, paţeidimai ant tešmens, taip pat metų sezonas [41].
DARBO TIKSLAS IR UŢDAVINIAI
Darbo tikslas – pagaminti vilgiklį mastito prevencijai su jodo junginiais, ištirti ir įvertinti
vilgiklio gamybai naudotų medţiagų įtaką preparato kokybei.
Darbo uţdaviniai:
1. Remiantis moksline literatūra parengti ir pagaminti vilgiklio su jodo junginiais mastito prevencijai mėginius.
2. Nustatyti jodo kiekį pagamintuose mėginiuose.
3. Nustatyti pagamintų mėginių pH reikšmę ir jos kitimą laiko atţvilgiu.
4. Nustatyti pagamintų mėginių dinaminę klampą ir įvertinti jos kitimą laiko atţvilgiu.
5. Atlikti preparato fizikinius stabilumo tyrimus (centrifugavimą, šildymo – šaldymo ciklo testą, juslinių savybių vertinimą).
1. LITERATŪROS APŢVALGA
1.1 Mastito keliama ţala, problemos aktualumas
Mastito atvejai aprašomi jau seniai (1942 m.), tačiau didelio masto problema ši infekcija imta laikyti tik po dešimtmečių (⁓1982-1983 m.). Pasauliniu mastu ši liga buvo dokumentuota keliuose leidiniuose Šiaurės Amerikoje, Europoje, Naujojoje Zelandijoje, Japonijoje ir Pietų Amerikoje [6]. Nuo 1990 metų vidurio, dėl gyventojų skaičiaus augimo ir didėjančių gyventojų pajamų, pieno suvartojimas vidutiniškai augo 10-15 tonų per metus. Karvių pieno gamyba padidėjo nuo 460 iki 550 milijonų tonų 2009 metais. Kiekvienoje šalyje pieno ir jo produktų vartojimas yra skirtingas. Europos sąjunga ir Šiaurės Amerika yra didţiausi pieno vartotojai, o nuo 1980 metų pieno produktų vartojimas gerokai išaugo ir kitose šalyse, ypač Kinijoje, Indijoje ir kitose Azijos šalyse. Tikimasi, kad 2007 – 2020 metais pieno paklausa padidės dar 25 procentais. Keletas Jungtinėse Amerikos valstijose atliktų tyrimų parodė, kad dėl mastito pieno pramonė per metus praranda maţdaug apie 2 milijardus dolerių. Beveik visi autoriai sutinka, kad ne maţiau kaip 70 % ekonominių nuostolių pieno pramonėje yra patiriama kai yra išmetamas/sunaikinamas pienas, kuris buvo gaunamas iš sergančių gyvūnų [5].
Lietuvoje mastito atvejai taip pat buvo tiriami ir nagrinėjami. Lietuvos valstybinės maisto ir veterinarijos tarybos 1997 – 2003 metų ataskaitose (jos yra sudaromos pagal praktikuojančių veterinarijos gydytojų pranešimus) aprašyta, kad kasmet galvijų mastitu šalyje suserga nuo 16,7 iki 27 tūkstančių karvių – vidutiniškai 23,1 tūkstančiai karvių kasmet [1].
1.2 Mastitas. Ligos apibrėţimas
Galvijų mastitas – tešmens ( jame esančių pieno liaukų, arba vienos liaukos) uţdegimas. Kartais ūkininkai mastitą susieja su tešmens ketvirčio uţdegimu ir matomais pieno išvaizdos pokyčiais – tai klinikinis mastitas. Tačiau kartais gali būti infekcija ir uţdegimas, nors nėra jokių akivaizdţiai matomų išorinių pokyčių – ši mastito rūšis vadinama slaptuoju mastitu [11]. Klinikinio mastito simptomai – krešuliai arba dribsniai piene, tinimas ir karštis uţkrėstame tešmenyje arba jo ketvirtyje, sutrikusi sekrecija, daţnas pulsas, karvė gali karščiuoti, prarasti apetitą, galima dehidratacija, depresija ir netgi mirtis. Slaptasis mastitas – jokių išoriškai matomų poţymių nėra [40]. Pagrindinis rodiklis vertinant pieno kokybę yra somatinių ląstelių skaičius, nes jų kiekis padidėja esant šiam susirgimui. Sveikų karvių piene somatinių ląstelių skaičius yra maţesnis nei 100x103
/cm3. Somatinės pieno ląstelės – tai pieno liaukos epitelinės ląstelės, baltieji kraujo kūneliai. Reikia atkrepti dėmesį, kad sveikų karvių piene tarp leukocitų vyrauja monocitai ir makrofagai, o sergančių karvių piene – padaugėja neutrofilų kiekis [2].
1.3Mastito prieţastys
Mastitą gali sukelti įvairūs ţalingi išoriniai ir vidiniai veiksniai. Pagrindinė mastito prieţastis yra infekcinė – mikroorganizmai. Tam, kad mikroorganizmai patektų į organizmą, prisitaikytų prie jame esančios aplinkos, galėtų daugintis ir sukeltų infekciją yra reikalingi šie veiksniai: klimatas (drėgmė, oro temperatūra, slėgis), higiena, patalpos (tos, kuriose laikomi gyvuliai), melţimo aparatai, pašaras, genetika, galvijų amţius ir kiti. Galvijų atsivesti jaunikliai būna sterilūs ir jau pirmosiomis gyvenimo minutėmis uţsikrečia įvairiais mikroorganizmais, kurie ilgainiui sudaro pastovią gyvūno mikroflorą. Tie mikroorganizmai, kurie neprisitaiko - sudaro atsitiktinę mikroflorą. Patogeniški mikroorganizmai į pieno liauką patenka per spenio kanalą, kraują arba limfą [3].
1.4 Mastitą sukeliantys mikroorganizmai
nepriskiriami mikroorganizmai: Pseudomona aeruginosa, Nocardia asteroides, Prototheca species,Candida species [41].
Aplinkos mikroorganizmai gyvena ir dauginasi aplinkoje, kuri supa karves. Pagrindinis sukėlėjas aplinkoje yra Escherichia coli,šie mikroorganizmai gyvena uţterštoje aplinkoje: išmatose, kraike, nešvariame vandenyje. Uţsikrėsti jomis nėra sunku tiek melţimo metu, tiek tarp melţimų arba ramybės būsenoje. Reikalinga nepriekaištinga aplinkos ir spenių prieš melţimą higiena, nes šie mikroorganizmai nėra jautrūs antibiotikams. Kitas aplinkos mikroorganizmas sukeliantis mastitą yra Streptococcus uberis,egzistuoja beveik visur – priešskrandyje, išmatose, ant tešmens. Uţsikrėtimas šia bakterija gali būti kontroliuojamas palaikant tinkamas sanitarines sąlygas ir melţiant kai tešmuo yra švarus ir sausas [9]. Aplinkos mikroorganizmams priskiriama ir Klebsiella, kai aplinkos mikroorganizmai sukeliantys infekciją atsiranda dėl antisanitarinių aplinkos sąlygų, tai Klebsiella randama pjuvenose, kurios sudarytos iš medţio ţievės ir dirvoţemio [27]. Prie mastitą sukeliančių aplinkos mikroorganizmų taip pat galima priskirti: Streptococcus bovis, Enterobacter aerogenes, Citrobacter species, Serratia species [41].
Uţkrečiami mikroorganizmai plinta per nešvarias rankas, nešvarią melţimo įrangą, audinį arba rankšluosčius naudojamus karvių speniams šluostyti (ypač jeigu jie yra naudojami keliems galvijams), taip pat gali būti pernešami musių [27]. Tokiems mikroorganizmams priskiriama: Staphylococcus aureus, Streptococcus agalactiae, Streptococcus dysgalactiae[9], Corynebacteriumbovis, Mycoplasma species [41].Streptococcus agalactiae gyvena tešmenyje ir negali egzistuoti uţ jo ribų. Šios bakterijos bakterijos yra jautrios penicilinui, todėl kai yra išnaikinamos, daugiau bandos nekankina, nebent būtų įsigytas naujas infekuotas galvijas. Staphylococcus aureusgyvena ant uţkrėstos karvės odos, taip pat tešmenyje. Infekcijos gydymas gali būti kontroliuojamas, jeigu infekcija nėra įsisenėjusi ir apima tik liauką. Kai liga įsisenėjusi, gydymas daţnai tampa neefektyvus, sunkiais atvejais galima galvijų mirtis. Streptococcus dysgalactiaetaip pat gyvena beveik visur: ant tešmens, prieskrandyje, išmatose, tvarte. Šios bakterijos vidutiniškai jautrios antibiotikams ir jų dauginimasis ir egzistavimas gali būti kontroliuojamas palaikant tinkamas sanitarines sąlygas [9].
1.5 Rizikos faktoriai
karvės (>10 metų) turi didesnę riziką susirgti (44,6%), ypač slaptuoju mastitu (38,6%), nei jaunesnės karvės (23,6%), tarp jų susirgimų vyravo klinikinis mastitas. Karvės, kurios turėjo daugiau veršelių (>7) turi 13 kartų didesnę riziką susirgti mastitu, nei tos, kurios atsivedė maţiau veršelių.
2. Veislė ir primelţiamo pieno kiekis. Didelio produktyvumo karvės linkusios daţniau sirgti mastitu. Rizika kinta tarp skirtingų veislių karvių.
3. Ţindymo laikotarpio etapas.Mastito rizika padidėja po apsiveršiavimo pirmus 2 mėnesius. Diţiausias klinikinių atvejų skaičius pirmąją laktacijos savaitę.
4. Technika naudojama melţimui. Techniškai netvarkingos melţimo mašinos, gali suţaloti tešmenį ir spenius, atsiradus įtūkimams ir ţaizdelėms padidėja rizika uţsikrėsti.
5. Melţimo intervalas. Patartina melţyti karves nustatytu laiku, per ilgi melţimo intervalai gali turėti įtakos mastito atsiradimui.
6. Melţimo aplinka. Drėgmė, purvas ir mėšlas sukelia didelę riziką uţsikrėsti aplinkos patogenais sukeliančiais mastitą.
7. Tešmens imunitetas. Spenio kanalas tai pirmas kelias patogeniškiems mikroorganizmams patekti į vidų ir sukelti infekciją. Spenio apačioje yra raumuo, kuris uţdaro spenio kanalą ir trukdo šiems organizmams patekti į vidų. Manoma, kad spenio anga gali išlikti atvira po melţimo 2 valandas ir taip mikroorganizmai patenka į vidų (norint to išvengti naudojami pomelţiminiai vilgikliai uţdarantys spenio kanalą).
8. Spenių ir tešmens paţeidimai. Atveriamas naujas kelias mikroorganizmams.
9. Metų sezonas. Mikroorganizmų augimas ir dauginimasis priklauso nuo oro temperatūros ir drėgmės. Netinkamas patalpų vėdinimas, karštis ir drėgmė sudaro palankias sąlygas mikroorganizmams daugintis. Taip pat labai didelė oro temperatūra gali sukelti stresą galvijams, pakeisti imunines funkcijas ir tešmens atsparumą, taip padidinant infekcijos riziką. Mastito atvejų daugiausia vasarą ir drėgnuoju metų periodu, maţiau ţiemos metu [41].
1.6 Prevencija
Escherichia coliir Streptococcus uberis. Visos šios bakterijų rūšys tapo pagrindiniu taikiniu kovojant su mastitu [39].
Kadangi mastitą sukelia daug skirtingų patogenų yra labai svarbu tinkamai pritaikyti prevencijos programą. Kuo daugiau bakterijų yra ant tešmens ir spenių, tuo didesnė tikimybė joms patekti į spenio kanalą ir sukelti infekciją. Labai svarbu laikytis visų mastito kontrolės programos etapų, ypač stengiantis išlaikyti švarią ir sausą galvijų gyvenamąją aplinką, ir tešmens higieną, naudoti dezinfekcines priemones prieš ir po melţimo. Norint tinkamai uţkirsi kelią infekcijai reikia laikytis visų šių punktų [39]:
1. Melţti švarioje aplinkoje, kurioje nebūtų streso.
2. Kiekvieną kartą patikrinti priešpienį ir tešmenį ar nėra akivaizdţiai matomų mastito poţymių. 3. Sumaţinti vandens naudojimą patalpose, kuriose yra melţiamos karvės.
4. Plauti spenius, jeigu reikia panaudojant dezinfekuojantį skystį. 5. Taikyti spenių dezinfekciją prieš melţimą.
6. Nusausinti spenius, po priešmelţiminės dezinfekcijos.
7. Iškart po dezinfekavimo ir nusausinimo, prijungti melţimui naudojamą techniką.
8. Melţimui skirtus aparatus kas kartą dezinfekuoti ir uţtikrinti, kad jie būtų techniškai tvarkingi. 9. Po melţimo atikti spenių dezinfekciją.
10. Naudoti pomelţiminius vilgiklius, apsaugai nuo mastito [39].
Norint apsaugoti galvijus nuo mastito svarbu pasirūpinti tinkama jų mityba. Atilikus tyrimus nustatyta, kad mityba daro įtaką infekcijos atsiradimui. Maitinimas šienu, silosu, kukurūzų silosu, cukriniais runkeliais iki veršiavimosi gali padidinti mastito riziką. Selenas ir vitaminas E, sumaţina klinikinio mastito riziką. Varis ir cinkas, kurie turi antioksidacinių savybių, taip pat sumaţina klinikinio mastito riziką. Vitaminas A ir β-karotenas, padeda išlaikyti odos ir geivinės paviršių sveiką (kai oda sveika ir nėra įtrūkimų bei ţaizdelių, maţesnė rizika patogenams patekti į organizmą ir sukelti infekciją), taip pat turi antioksidacinių savybių. Todėl norint uţkirsti kelią mastitui yra svarbu atsiţvelgti į tai, kad galvijų pašaras būtų praturtintas vitaminais ir mineralais [14].
1.7 Spenių dezinfekcija
Spenių dezinfekcija yra pagrindinis punktas mastito prevencijos programose. Dezinfenkcija gali būti vykdoma keliais etapas ir būdais: priešmelţiminė dezinfekcija, pomelţiminė dezinfekcija ir spenių vilgymas. Priešmelţiminė dezinfekcija – apima greitą spenių dezinfekavimą prieš pat melţimą taip sumaţinant patogeniškus organizmus aplink spenio angą ir ant tešmens.Tokie produktai nėra skirti spenių būklės prieţiūrai, todėl į jų sudėtį emolientai neįtraukiami. Naudojant priešmelţiminę dezinfekciją 50 % sumaţinama streptokokinių ir E. coli sukeltų infekcijų. Pomelţiminių priemonių naudojimo tikslas – uţkirsti kelią mastitui ir uţtikrinti gerą spenių būklę.Šios priemonės (vilgikiai arba purškikliai) pašalina patogeniškus organizmuis nuo spenių, kadangi spenių kanalai būna kurį laiką atviri po melţimo, yra uţtikrinama apsauga, kad spenio kanalas bus apsaugotas nuo uţkrėtimo. Taip pat speniai yra drėkinami, greičiau uţgija ţaizdelės ir įtrūkimai [30].
1.8 Vilgikliai po melţimo
Manoma, kad po melţimo spenio anga gali būti atvira apie 2 valandas, tuo metu patogeniški mikroorganizmai gali patekti į spenio kanalą ir sukelti infekciją. Norint uţkirsti tam kelią yra naudojami pomelţiminiai vilgikliai, kurie uţdaro spenio kanalą ir neleidţia patogeniškiems mikroorganizmais patekti į spenį. Vilgiklis turi pasiţymėti tam tikromis savybėmis, kad būtų tinkamas naudoti mastito prevencijai. Pageidaujamos savybės vilgikliui:
1. Turi turėti antimikrobinį aktyvumą;
2. Turi būti tinkamos klampos, adheziškas, gerai išsilaikyti ant spenio paviršiaus ir lengvai jį padengti;
3. Plėvelė turi būti lengvai ir greitai pašalinama nuo spenio (pvz., pries sekantį melţimą);
4. Vilgiklis turi uţdaryti spenio kanalą ir sudaryti barjerinę plėvelę, kad patogeniški mikroorganizmai nepatektų į spenį;
5. Tinkamas pH, kad nedirgintų odos;
6. Drėminamasis poveikis, kad oda būtų minkšta, netrūkinėtų, greičiau gytų ţaizdelės;
1.9 Vilgiklių nuo mastito sudėtys
Norint, kad vilgiklis būtų veiksmingas, reikia parinkti tinkamą sudėtį, medţiagų proporcijas ir įvertinti kokybės parametrus. Pagrindiniai komponentai vyrauja daugumoje vilgiklių nuo mastito sudėtyse pateikiami 1 lentelėje.
1 lentelė. Vilgiklio sudėtiniai komponentai
KOMPONENTAS PAGEIDAUTINAS KIEKIS
Plėvelę sudaranti medţiaga 0,25-6 %
Antimikrobinė medţiaga 0.1-0.75 %
Drėkinanti medţiaga 2-12 %
Daţikliai 0.05- 0.1 %
Klampą reguliuojanti medţiaga 0.01-0.3 %
Vanduo q.s. 100 %
Buferinė medţiaga iki pH 4.5-6.6
ksantano lipai, karbopolio polimerai - Carbopol ®Ultrez 30 ir Carbopol ® Ultrez 21 ir kiti. Taip pat produkte gali būti naudojamos paviršiaus aktyvumo medţiagos, kurios produktui suteikia homogeniškumą, pavyzdţiui, polisorbatas 20, polisorbatas 10, polisorbatas 80 ar kitos [32,33,34,35].
1.10 Klampą suteikiančios medţiagos
1.10.1 Carbopol
®Ultrez 21
Carbopol ® Ultrez 21 – tai hidrofobiškai modifikuotas, poliakrilato polimeras, turintis tinklinę struktūrą. Tai balti, turintys silpną akrilo kvapą milteliai. Ištirpinto vandenyje polimero pH reikšmė3. Šis polimeras gerai ir greitai drėksta (brinksta), tai pasiekiama per kelias minutes be jokio papildomo maišymo. Carbopol ® Ultrez 21 efektyviai suteikia didelę klampą gaminamies produktams. Dar vienas privalumas – pagerinta tolerancija elektrolitams. Polimeras suteikia puikias tekstūrines savybes ir gerą estetinę išvaizdą ir gali būti plačiai taikomas. Drėkimo laikas ir klampa priklauso nuo polimero kiekio, indo, kuriame brinkinamas polimeras ir nuo vandens temperatūros. Neutralizavimui gali būti naudojama diizopropanolaminas, natrio šarmas, trietanolaminas [12].
1.10.2Carbopol
®Ultrez 30
1 pav. Gelių su glikolio rūgštimi klampos matavimo duomenys. Lyginami mėginiai, kurių sudėtyje yra karbopolio polimerai vs mėginiai, kurių sudėtyje papildomai naudojama ksantano lipai [13].
1.10.3 Ksantano lipai
Ksanto lipai – nejoninis tirštiklis. Tai didelės molekulinės masės polisacharidas, gaminamasXanthomonas campestrisbakterijų, naudojant specialią mitybinę terpę, pH, deguonies tiekimo sistemą, palaikant reikiamą temperatūrinį rėţimą. Tuomet išgryninus, išdţiovinus ir susmulkinama iki baltų arba gelsvų birių miltelių. Tirpsta tiek šaltame tiek karštame vandenyje, o kai ištirpsta, tirpalas lieka skaidrus. Pasiţymi pakankamai maţu klampos pokyčiu plačiose temperatūrinėse ribose. Stabili plačiose pH ribose. Tinkama naudoti, kai yra dideli druskų ir paviršinio aktyvumo medţiagų kiekiai. Gaminant produktus reikalingi maţi kiekiai 0,2 – 1 % [28, 10].
1.11 Drėkinančios medţiagos
1.11.1 Glicerolis
1.11.2 Propilenglikolis
Cheminis pavadinimas – 1,2 – propandiolis. Tai klampus, skaidrus, bespalvis, sasvo, aitraus skonio, higroskopiškas skystis, maišosi su vandeniu ir 96 % etanoliu. Praktiškai netirpsta vandenyje, tirpsta alkoholyje, metanolyje ir metileno chloride. Tai pagalbinė medţiaga, kuri gali atlikti šias funkcijas produkte: antimikrobinis konservantas, dezinfektantas, minštiklis, drėkiklis, tirpiklis, stabilizuojanti medţiaga [37, 17].
1.12 pH reguliuojančios medţiagos
1.12.1Natrio hidroksidas
Balti arba beveik balti kristalai, plokštelės arba granulės, lazdelės, lengvai sugeria anglies dioksidą. Labai gerai tirpsta vandenyje, 96 % etanolyje. Naudojamas kaip pagalbinė medţiaga atliekanti šias funkcijas: šarminanti medţiaga, buferinė medţiaga [37, 18].
1.13 Paviršinio aktyvumo medţiagos
1.13.1 Polisorbatas 20
Polisorbatas 20 yra naudojamas farmacijoje, kaip paviršinio aktyvumo medţiaga, norint uţkirsti kelią paviršiaus adsorbcijai ir sumaţinti baltymų agregaciją [8].Polisorbatas 20 tai amfipatinė, nejoninė paviršinio aktyvumo medţiaga, sudaryta iš riebalų rūgščių esterių (daugiausia iš lauro rūgšties), sorbitolio ir etileno oksido [8, 19]. Tai aliejingas, geltonas arba rudai geltonas, skaidrus tirpalas.Tirpsta vandenyje, bevandeniame etanolyje, etilo acetate ir metanolyje, praktiškai netirpsa riebaliniuose aliejuose, skystame parafine [19]. Tai pagalbnė medţiaga, kuri farmaciniuose produktuose gali atlikti šias funkcijas: disperguojanti medţiaga, emulsiklis, nejoninė paviršinio aktyvumo medţiaga, stabilizuojanti ir drėkinanti medţiaga [37].
1.14 Antimikrobinį poveikį turinčios medţiagos
nes suardo nukleino rūgščių ir baltymų sruktūrą bei sintezę.Yra duomenų, kad in vitro jodas turi baktericinį, mikobaktericidinį, antivirusinį poveikį,o vartojant ilgesnį laiką sunaikina grybelį ir bakterijų sporas. Maţiausia antimikrobinė koncentracija yra 1:100 (1 %)[38].
1.14.1 Povidono jodas
Povidono jodas -tai povidono ir jodo kompleksas, kurio sudėtyje yra ne maţiau kaip 9 % ir ne daugiau kaip 12 % jodo. Cheminis pavadinimas: 2- pirolidino - 1 - etinilo homopolimero ir jodo junginys. Kuoment preparate povidono jodo komplekso koncentracija yra didesnė nei 0,5 % pastebimas antivirusinis poveikis. Jungtinių Valstijų farmakopėjoje ir Europos farmakopėjoje yra paţymima, kad tai yra platų bakterijų spektrą veikiantis kompleksas. Povidono jodas naudojamas medicinoje kaip antiseptikas, nuo paprasto jodo skiriasi tuo, kad šį kompleksą paprasčiau naudoti, maţiau toksiškas taip stipriai nedirgina odos, nereikia jodidų ar alkoholio, kad ištirptų. Taip pat yra stabilus kompleksas, gali sudaryti plėvelę[15, 36].
Povidono jodo kompleksas – gelsvai rudos arba rausvai rudos spalvos, amorfiniai milteliai. Tirpsta vandenyje ir 96 % etanolyje, praktiškai netirpsta acetone [20].
1.14.2 Iodophor AE 20 % koncentratas
Cheminis pavadinimas – etoksietanolio jodo kompleksas.Tai tamsiai rudas ar beveik juodas klampus skystis, kurio sudėtyje yra ne maţiau 20 % jodo ir etoksietanolis. Turi specifinį jodo kvapą. Šio komplekso pH < 1. Koncentratas skirtas naudoti kaip ţaliava gaminant dezinfekcinius purškalus, spenių ploviklius ir vilgiklius, gyvūnų šampūnus, kanopų prieţiūros produktus ir kitų veterinarinių produktų gamyboje [26].
1. 15 Literatūros apibendrinimas
2. TYRIMŲ METODIKA
2.1 Tyrime naudotos medţiagos
Carbopol® Ultrez 30 (Lubrizol, JAV) Carbopol® Ultrez 21 (Lubrizol, JAV)
Ksantano lipai (KELTROL® CG – SFT, Gruzija) Tween ®20 (Sigma – Aldrich Chemie GmbH, Vokietija) Išgrynintas vanduo (Ph.Eur. 01/2008:0008)
Glicerolis (Dow Deutschland GmbH & Co. Vokietija) Propilenglikolis (Dow Deutschland GmbH & Co. Vokietija) Povidono jodas (Sigma – Aldrich Chemie GmbH, Vokietija) Iodophor AE 20 % koncentratas (IodiTech ®, JAV)
Natrio hidroksidas (LabChem, JAV)
Mitybinis agaras (Mueller – Hinton II Agar, BBL, Cockeysville, JAV)
2.2 Tyrime naudota įranga
Svarstyklės SCALTEC (Scaltec Instruments GmbH, Vokietija) pH – metras (InoLab pH/ION 7320, Vokietija)
Centrifuga (Sigma 3 – 18 KS, Vokietija)
Viskozimetras (Sine – wave Vibro Viscometer SV – 10, A&D Company Itd, Japonija) Tekstūros analizatorius (Stable micro systems manual TA.XT plus, Jungtinės valstijos) Automatinė maišyklė (IKA® Eurostar 200 digital, Kinija)
2.3 Vilgiklių su povidono jodu ir Iodophor AE 20 % koncentratu, skirtų mastito
prevencijai gamyba
Pagrindo su Carbopol®Ultrez 30 gamyba – ant reikiamo išgryninto vandens kiekio išbarstomas polimeras, 10-15 minučių brinkinama. Lašinama natrio hidroksido, kad susidarytų reikiama klampa. Maišymui naudojama automatinė maišyklė, 600 aps./min. Taip gaminamas ir pagrindas su Carbopol® Ultrez 21.
Pagrindo su ksantano lipais gamyba – ksantano lipai disperguojami su gliceroliu, tuomet tirpinama vandenyje. Maišoma naudojant automatinę maišyklę, 800 aps./min., kol pasiekiama reikiama klampa.
Pagrindo su Carbopol® Ultrez 30 ir ksantano lipais gamyba – polimeras brinkinamas ant išgryninto vandens paviršiaus, tuomet lašinamas natrio hidroksido tirpalas ir maišoma automatine maišykle 700 aps./min. kol susidarys reikiama klampa. Taip gaminamas ir pagrindas su Carbopol® Ultrez 21. Pagrindo dalis su ksantano lipais gaminama atskirai, ksantano lipai disperguojami su gliceroliu, tuomet tirpinama vandenyje ir naudojant automatinę maišyklę, 800 aps./min., maišoma kol pasiekiama reikiama klampa. Gauti pagrindai sumaišomi.
Povidono jodo paruošimas – prieš įterpiant povidono jodą į vilgiklį, reikiamą kiekį ištirpiname išgrynintame vandenyje.Tirpalas filtruojamas.
Visi pagaminti preparatai yra laikomi sandariai uţdarytuoseindeliuose, uţdoris yra apsukamas plėvele Parafilm M® All-Purpose Laboratory Film, kurinepraleidţiančia oro, vandens, taip siekiama apsaugoti preparatą nuo jodo išgaravimo. Mėginiai laikomi tamsioje vietoje, kambario temperatūroje(25 ± 2 ͦ C).
2.4 Vilgikliųsu povidono jodu ir Iodophor AE 20 % koncentratu juslinių savybių
vertinimas
2.5 Jodo kiekio nustatymo tyrimas Jodometrijos metodu, vilgikliuose su povidono
jodu ir Iodophor AE 20 % koncentratu
Cheminis tyrimas atliekamas Jodometrijos metodu. 5g vilgiklio atsveriama ir tirpinama 100 ml išgrynintojo vandens. Pilame 1-2 ml indikatoriaus – krakmolo kleisterio tirpalo. Titruojame natrio tiosulfato (Na2S2O3) 0,02N tirpalu (pagaminamas tirpinant 3,16g Na2S2O3 kristalus 1000 ml distiliuoto
vandens). Titruojama tol, kol išnyksta spalva [4,21,22]. Jodo koncentracija apskaičiuojama pagal formulę:
𝐶 =𝑇 𝑥 𝑉𝑥100 𝑎
C – koncentracija (%) T – 0.002538
V – nutitruoto tirpalo tūris (ml)
a – analizei atsverto mėginio kiekis (g)
2.6Vilgiklių su povidono jodu ir Iodophor AE 20 % koncentratupH reikšmių
matavimas
2.7Vilgiklių su povidono jodu ir Iodophor AE 20 % koncentratu viskozimetrinis
klampos nustatymas
Pagamintų vilgiklių klampa buvo matuojama tam tikrais laiko intervalais: pagaminus vilgiklius, praėjus 1 mėnesiui nuo pagaminimo ir praėjus 3 mėnesiams po pagaminimo.Pagamintų preparatų dinaminė klampa buvo matuojamaviskozimetruSine – wave Vibro Viscometer SV – 10. Mėginys perkeliamas į aukštą 50 ml stiklinėlę, prieš tai gerai išmaišius stikline lazdele. Matavimui buvo pasirinktas viskozimetro antgalis L3, kuris panardinamas į tiriamąjį vilgiklį iki ţymos, esančios ant antgalio. Viskozimetras nustatomas pasirenkant tam tikrus parametrus. Viskozimetro L3 antgalio apsisukimų 100.0 rmp (kartų per minutę).Matavimai atliekami esant kambario temperatūrai (25 ± 2 ͦ C). Vieno tyrimo metu kiekvieno vilgiklio klampa matuojama 3 kartus, o iš viso buvo atlikti trys tokie visų gelių klampos tyrimai.
2.8Vilgiklių su povidono jodu ir Iodophor AE 20 % koncentratustabilumo tyrimas
centrifugavimo metodu
Centrifugavimo metodu buvo vertinamas pagamintų vilgiklių stabilumas tam tikrais laiko intervalais: pagaminus vilgiklius, praėjus 1 mėnesiui po pagaminimo ir praėjus trims mėnesiams po pagaminimo. Į mėgintuvėlius po 2 ml tūrio dedamas vienodas tiriamųjų vilgiklių kiekis.Centrifuguojama 5000 apsisukimų per minute greičiu 5 minutes. Siekiant įvertinti gelių stabilumą buvo stebimas vandeninės fazes atsiskyrimas, drumstumas. Prieš dedant į mėgintuvėlius mėginiai buvo pasveriami.Centrifugavimas atliekamas ,,Sigma 3- 18KS‟‟ centrifuga. Vandeninės fazes atsiskyrimas apskaičiuojamas pagal formulę:
C = 𝑎 𝑥 100 𝑚 C – stabilumas
2.9 Vilgiklių su povidono jodu ir Iodophor AE 20 % koncentratušildymo –
šaldymo tyrimas
Šildymo – šaldymo tyrimas buvo atliekamas švieţiai pagaminus vilgiklius.Tiriami trys mėginiai, kurie vienodais kiekiais yra talpinami į mėgintuvėlius po 2ml tūrio.Vieną ciklą sudaro mėginių laikymas šaldytuve 5 ͦ C temperatūroje , parą laiko .Tuomet mėginiai laikomi parą laiko kambario temperatūroje 25 ± 2 ͦ C. Tai sudaro vieną ciklą.Iš viso buvo atliekami 5 šildymo – šaldymo ciklai.Vizualiai buvo vertinama ar nepakito mėginių spalva, kvapas, skaidrumas. Atsiskyrusios vandeninės fazes kiekis apskaičiuojamas pagal formulę:
C = 𝑎 𝑥 100 𝑚 C – stabilumas
a – vandeninės fazės kiekis (g) m – tyrimui paimto mėginio masė
2.10 Vilgikliųsu povidono jodu ir Iodophor AE 20 % koncentratu antimikrobinio
aktyvumo nustatymas
2.10.1 Etaloninių mikroorganizmų kultūrų paruošimas
Etaloninės nesporinių bakterijų Staphylococcus aureus,Staphylococcus epidermidis, Enterococcus faecalis, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa, Proteus vulgaris kultūros auginamos 20–24 val. 35–37 ºC temperatūroje ant Miulerio-Hintono agaro (Mueller-Hinton II Agar, BBL, Cockeysville, JAV). Bakterijų suspensija gaminama iš išaugintų bakterijų kultūrų fiziologiniame natrio chlorido (0,9 %) tirpale, standartizuojama McFarland‟o standartiniu indikatoriumi (“Standart indikator McFarland”), kuris matuoja mėgintuvėlyje esančios suspensijos drumstumą. Bakterijų suspensija laikoma standartizuota, kai indikatoriaus reikšmė lygi 0,5 (tai reiškia, kad 1 ml bakterijų suspensijos yra1,5 x 108
bakterijų ląstelių).
x 106 iki 100 x 106. Tokią pagamintą sporų suspensiją galima laikyti ilgą laiką ţemesnėje nei 4 C temperatūroje.
Etaloninėsgrybų kultūros: Candida albicans auginamos 20–24 val. 30 ºC temperatūroje ant Saburo agaro. Grybų suspensija gaminama iš uţaugintų grybų kultūrų fiziologiniame tirpale, standartizuojama McFarland‟o standartiniu indikatoriumi.
2 lentelė. Etaloninės mikroorganizmų kultūros
EN Etaloninės mikroorganizmų kultūros
1 S. aureus Staphylococcus aureus ATCC 25923
2 S. epidermidis Staphylococcus epidermidis ATCC 12228
3 E. faecalis Enterococcus faecalis ATCC 29212
4 E. coli Escherichia coli ATCC 25922
5 K. pneumoniae Klebsiella pneumoniae ATCC 13883
6 Ps. Aeruginosa Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853
7 P. vulgaris Proteus vulgaris ATCC 8427
8 B. cereus Bacillus cereus ATCC 11778
9 B. subtilis Bacillus subtilis ATCC 6633
10 C. albicans Candida albicans ATCC 10231
2.10.2 Antimikrobinio aktyvumo nustatymo metodika
Antimikrobinis aktyvumas nustatomas difuzijos į standųjį mitybinį agarą metodu.Naudojamas Miulerio-Hintono agaras (Mueller-Hinton Agar, Becton, Dickinson and Company).Antimikrobinis aktyvumas nustatomas10 etaloninių skirtingas biologines savybes turinčių mikroorganizmų atţvilgiu (2 lentelė).
1. Tiriamojo mėginio paruošimas: tiriamasis mėginys nėra papildomai tirpinamas jokiame tirpiklyje, tirpalas neruošiamas.Tiriamieji mėginiai pagal atitinkamas koncentracijas yra sveriam tiesiai į Petrio lėkšteles. Pagamintas preparatas yra tiriamas 1g ir 2 g koncentracijomis. Taip pat atskirai tiriamas preparato komponentų aktyvumas: propilenglikolis – 1; 0,5; 0,25; 0,1 g mėginiai; glicerolis – 2; 1; 0,5 g mėginiai; PVP – jodas – 1; 0,5; 0,25; 0,1 g mėginiai; polisorbatas 20 – 0,2; 0,1; 0,05 g mėginiai.
2.10.3 Tyrimo eiga
1. Mėginių paruošimas – atsveriami tikslūs kiekiai tiriamų mėginių, sveriama tiesiai į Petri lėkšteles.
2. MėginiaiPetri lėkštelėse maišomi su 10 ml 45C temperatūros skystu Miulerio-Hintono agaru. 3. Sustingus agarui Petri lėkštelėje, Petri lėkštelės dugnas paţymimas segmentais – viso 10. 4. Po to į kiekvieną segmentą sėjama etaloninė mikroorganizmų kultūra (sėjamos
mikroorganizmų kultūros suspensijos drumstumas 0,5 McFarland‟o) (2 paveikslas).
1 segmentas – Staphylococcus aureus ATCC 25923
2 segmentas – Staphylococcus epidermidis ATCC 12228 3 segmentas – Enterococcus faecalis ATCC 29212
4 segmentas – Escherichia coli ATCC 25922 5 segmentas – Klebsiella pneumoniae ATCC 13883
6 segmentas – Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 7 segmentas – Proteus vulgaris ATCC 8427
8 segmentas – Bacillus cereus ATCC 11778 9 segmentas – Bacillus subtilis ATCC 6633 10 segmentas – Candida albicans ATCC 10231
2 pav. Etaloninių mikroorganizmų kultūrų sėjimo metodika.
5. Kultivuojama (auginama) termostate 20-24 val. 35C temperatūroje.
2.10.4 Vertinimas
1. Augimas (A) - rodo, kad etaloninė kultūra yra nejautri tiriamajam preparatui tirtose jo koncentracijose.
2. Neaugimas (N) – rodo, kad etaloninė kultūra yra jautri tiriamojo preparato tam tikrai koncentracijai agare.
3. Silpnas augimas (±) – rodo, kad etaloninė kultūra yra jautri tiriamojo preparato tam tikrai koncentracijai agare.
Kontrolė:
1. Teigiama kontrolė – agare mikroorganizmų kultūros auga (įdedama tam tikros medţiagos, kurios neslopina mikroorganizmų augimo)
2. Neigiama kontrolė – agare mikroorganizmų kultūros neauga (įdedama tam tikros medţiagos, kurios slopiną mikroorganizmų augimą)
2.11 Vilgiklių su povidono jodu ir Iodophor AE 20 % koncentratu tekstūros
analizė
Tyrimui naudojamas tekstūros analizatorius TA.XT plus (Stable micro systems, Jungtinės valstijos). 50 gramų tiriamojo vilgiklio buvo patalpinama į standartinę 100ml stiklinėlę, vengiant oro patekimo į mėginį ir uţtikrinant, kad mėginio paviršius būtų lygus, be oro burbuliukų. 40 mm diskas spaudţiamas į mėginį ir atstatomas atgal. Pasirenkami metodo parametrai tokie kaip spaudimo greitis, spaudimo atstumas – gylis, kiek diskas bus spaudţiamas į mėginį (10mm), taip pat programoje pasirenkamas preparato tipas [25]. Atliekamas ,,Back extrusion„„ testas, kuris parodo mėginių srauto charakteristikas: kietumą, konsistenciją (tirštumą, tankumą), lipnumą, vientisumą.
2.12 Statistinė analizė
3. REZULTATAI IR JŲ APTARIMAS
3.1 Vilgiklių su povidono jodu ir Iodophor AE 20 % koncentratu gamyba
Buvo pagaminta 10 skirtingų vilgiklių mėginių. Kaip antimikrobinė medţiaga buvo pasirinktas povidono jodas, nes pasiţymi plačiu antimikrobiniu poveikiu, nedirgina odos, paprasta naudoti [15]. Kita antimikrobinė medţiaga buvo pasirinktas Iodophor AE 20 % koncentratas, nes šis koncentratas gamintojo rekomendacijomis yra skirtas veterinarinių preparatų gamybai, tame tarpe ir pomelţiminių vilgiklių [26]. Vilgiklių pagrindams gaminti buvo pasirinkti Carbopol® Ultrez 30 – vienas naujausių polimerų, su platesnėmis panaudojimo galimybėmis ir Carbopol® Ultrez 21, dėl gamintojo praktinių rekomendacijų. Taip pat pagrindų gamybai buvo naudojama ksantano lipai ir jų mišiniai su Carbopol® Ultrez 30 ir Carbopol® Ultrez 21, nes yra duomenų, kad nejoninis tirštiklis - ksantano lipai pagerina pagrindo tekstūrines ir klampos savybes [13]. Naudotas neutralizatorius – natrio hidroksido tirpalas. Kaip drėkinančios ir minkštinančios medţiagos buvo pasirinktas glicerolis ir propilenglikolis. Taip pat vilgikliams gaminti buvo naudojams polisorbatas 20 (Tween ®20), kaip stabilizuojanti, emusuojanti medţiaga [37]. Vilgiklių sudėtinių komponentų kiekispateikiamas 3 lentelėje, sudėčių skirtumai išryškinti geltona spalva.
3 lentelė. Vilgikliųsu povidono jodu ir Iodophor AE 20 % koncentratu receptūros
Preparato kodas* Sudėtis(g) PVILG 1 KVILG 2 PVILG 3 KVILG 4 PVILG 5 KVILG 6 PVILG 7 KVILG 8 PVILG 9 KVILG 10 Propilenglikolis 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 Glicerolis 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 Povidono jodas 1 1 1 1 1 Iodophor AE 20 % koncentratas 1 1 1 1 1 Tween®20 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 Carbopol®Ultrez 30 polimeras 0,3 0,3 0,2 0,2 Carbopol®Ultrez 21 polimeras 0,3 0,3 0,2 0,2 Ksantano lipai 0,5 0,5 0,05 0,05 0,05 0,05 Išgrynintas vanduo 88,2 88,2 88 88 88,15 88,15 88,2 88,2 88,15 88,15 Natrio hidroksidas q.s. q.s. q.s. q.s. q.s. q.s. q.s. q.s.
3.2 Vilgiklių su povidono jodu ir Iodophor AE 20 % koncentratu juslinių savybių
vertinimas
4 lentelė.Vilgiklių su povidono jodu ir Iodophor AE 20 % koncentratu juslinių savybių vertinimo kriterijų lentelė
Vertinimo kriterijus Vertinimo kriterijaus apibūdinimas
Spalva Tamsiai ruda spalva
Kvapas Aitrus, specifiškas, jodui būdingas kvapas Skaidrumas Vilgiklis skaidrus, nėra drumstumo
Vilgiklių su povidono jodu ir Iodophor AE 20 % koncentratu juslinių savybių vertinimo rezutatai pateikiami 5 lentelėje, atsiţvelgiant į vertinimo kriterijus pateiktus 4 lentelėje.
5 lentelė. Vilgiklių su povidono jodu ir Iodophor AE 20 % koncentratu juslinių savybių vertinimas Pagaminus vilgiklį Praėjus 1 mėnesiui nuo
pagaminimo
Praėjus 3 mėnesiams nuo pagaminimo
Vigiklio kodas
Spalva Kvapas Skaidrumas Spalva Kvapas Skaidrumas Spalva Kvapas Skaidrumas
PVILG1 + + + + + + + + + KVILG2 + + + + + + + + + PVILG3 + + + + + # + + # KVILG4 + + + + + # + + # PVILG5 + + + + + + + + + KVILG6 + + + + + + + + + PVILG7 + + + + + + + + + KVILG8 + + + + + + + + + PVILG9 + + + + + + + + + KVILG10 + + + + + + + + +
+ reiškia, kad vilgiklio mėginyje neatsirado pastebimų pokyčių ir vilgiklis atitiko vertinimo kriterijuose išsikeltus reikalavimus (4 lentelė).
# reiškia, kad vilgiklio mėginyje atsirado pokyčių , tačiau mėginiai nėra pakankamai informatyvūs, tyrimai tęsiami toliau(4 lentelė).
jodas ir Iodophor AE 20 % koncentratas yra maţiau stabilūs pagrinde, kuris sudarytas iš natūralių medţiagų - ksantano lipų.Jodo junginių įtaka vilgiklių juslinėms savybėms buvo reikšminga spalvos ir kvapo atţvilgiu. Junginiai su Iodophor AE 20 % koncentratu pasiţymėjo aitresniu kvapu ir tamsesne spalva, lyginant su vilgikliais, kurių sudėtyje buvo povidono jodas. Apibendrinus juslinių savybių tyrimo rezultatus, galima teigti, kad geriausiomis juslinėmis savybėmis pasiţymėjo vilgikliai pagaminti su Carbopol ®Ultrez 21 ir Carbopol ®Ultrez 30 polimerais bei ksantano lipais ir polimerų mišiniais.
3.3 Vilgiklių su povidono jodo ir Iodophor AE 20 % koncentratu stabilumo
vertinimas atliekant centrifugavimą
6 lentelė. Vilgiklių su povidono jodu ir Iodophor AE 20 % koncentratu savybių vertinimo kriterijai atliekant centrifugavimo tyrimą
Vertinimo kriterijus Vertinimo kriterijaus apibūdinimas
Nuosėdų susidarymas Vilgiklis turi išlikti skaidrus, nesusidaryti nuosėdos
Vandeninės fazės atsiskyrimas Vandeninė fazė turi neatsiskirti
Vilgiklių su povidono jodu ir Iodophor AE 20 % koncentratu stabilumo vertinimo rezultatai cetrifugavimo metodu pateikiami 7 lentelėje, vertinimas atliekamas atsiţvelgiant į kriterijus pateiktus 6 lentelėje.
7 lentelė. Vilgiklių su povidono jodu ir Iodophor AE 20 % koncentratu stabilumo tyrimo, atliekant centrifugavimą rezultatai (25 ± 2 ͦ C) n =3
Pagaminus vilgiklį Praėjus 1 mėnesiui nuo pagaminimo
Praėjus 3 mėnesiams nuo pagaminimo Vigiklio kodas Vandeninės fazės atsiskyrimas Skaidrumas Vandeninės fazės atsiskyrimas Skaidrumas Vandeninės fazės atsiskyrimas Skaidrumas PVILG1 + + + + + + KVILG2 + + + + + + PVILG3 + + + # + # KVILG4 + + + # + # PVILG5 + + + + + + KVILG6 + + + + + + PVILG7 + + + + + + KVILG8 + + + + + + PVILG9 + + + + + + KVILG10 + + + + + +
# reiškia, kad vilgiklio mėginyje atsirado pokyčių, mėginiai nėra pakankamai informatyvūs, todėl tyrimai yra tęsiami toliau. (6 lentelė).
Apibendrinant gautus centrifugavimo tyrimo rezultatus, galima teigti, kad vilgikliai su povidono jodu ir Iodrophor AE 20 % koncentratu išliko stabilūs viso tyrimo metu. Mėginiai, kurių pagrindas pagamintas naudojant ksantano lipus(PVILG3 ir KVILG4) buvo drumsti praėjus 1 mėnesiui nuo pagaminimo ir praėjus 3 mėnesiams nuo pagaminimo.Daroma prielaida, kad gamybai naudoti jodo junginiai – povidono jodas ir Iodophor AE 20 % koncentratas yra maţiau stabilūs pagrinde, kuris sudarytas iš natūralių medţiagų ksantano lipų. Stabiliausi mėginiai buvo tie, kurių pagrindo gamybai buvo naudojami Carbopol ®Ultrez 30 ir Carbopol ®Ultrez 21 bei ksantano lipai ir polimerų mišiniai.
3.4 Jodo kiekio nustatymo tyrimo rezultatai vilgikliuose su povidono jodu ir
Iodophor AE 20 % koncentratu
Buvo siekiama nustatyti jodo kiekį pagamintuose vilgikliuose, gauti rezultatai pateikiami 8 ir 9 lentelėse, geltona spalva paryškinti tie rezultatai, kur atsirado statistiškai reikšmingas skirtumas tarp matavimų (p < 0,05).
8 lentelė.Vilgiklių su povidono jodu cheminio tyrimo rezultatai (n=3)
Vigiklių kodai Jodo koncentracija (%)
pagaminus mėginius
Jodo koncentracija (%) praėjus 1 mėnesiui nuo pagaminimo
PVILG1 91,45 ± 0,8 83,48 ± 0,8
PVILG3 98,6 ± 0,8 91,48 ± 0,8
PVILG5 95,61 ± 0,8 66, 81 ± 0,8
PVILG7 97,54 ± 0,8 95,14 ± 0,8
PVILG9 94, 30 ± 0,8 91,45 ± 0,8
9 lentelė.Vilgiklių su Iodophor AE 20% koncentratu cheminio tyrimo rezultatai (n =3)
Vigiklių kodai Jodo koncentracija
(%)pagaminus mėginius
Jodo koncentracija (%) praėjus 1 mėnesiui nuo pagaminimo
KVILG2 99,26 ± 0,8 97,51 ± 0,8
KVILG4 99,07 ± 0,8 98,53 ± 0,8
KVILG6 98,64 ± 0,8 97,89 ± 0,8
KVILG8 96,18 ± 0,8 91,38 ± 0,8
KVILG10 99,53 ± 0,8 97,60 ± 0,8
(KVIG2,KVILG4, KVILG6, KVILG10) (p > 0,05). Šių mėginių pagrindai buvo pagaminti naudojant Carbopol ®Ultrez 30, Carbopol ®Ultrez 21polimerus bei ksantano lipus. Mėginyje, kuris buvo pagamintas su povidono jodu(PVILG7), jodo kiekis taip pat pakito neţymiai (p > 0,05).Šis mėginys buvo pagamintas naudojant Carbopol ®Ultrez 21, galima daryti išvadą, kad šiame pagrinde povidono jodas buvo stabiliausias.Statistiškai reikšmingas skirtumas (p<0,05), pastebėtas vilgiklių mėginiuose, kurie buvo pagaminti naudojant povidono jodą. Jodo kiekis šiuose vilgiklių mėginiuose nuo pradinių koncentracijų vidutinškai skyrėsi ⁓ 12 %. Įtakos jodo kiekiui vilgikliuose galėjo turėti naudotų jodo kompleksų forma ir jų suderinamumas su pagrindo medţiagomis.
3.5 Vilgiklių su povidono jodu ir Iodophor AE 20 % koncentratu pH reikšmių
matavimo rezultatai
Gaminant vilgiklius buvo siekama, kad pH reikšmės ribos būtų nuo 3,0 iki 9,0. Nustatyta, kad visi vilgikliai atitiko jiems iškeltus reikalavimus, jų pH reikšmės buvo ribose tarp 5,72 ir 6,47pagaminus mėginius, praėjus 1 mėnesiui nuo pagaminimo pH reikšmė buvo ribose tarp 5,49 ir 6,27, o praėjus 3 mėnesiams nuo pagaminimo pH reikšmės buvo ribose tarp 5,34 – 6,36. Gauti duomenys pateikiami diagramose (3 ir 4 paveikslai).
3 pav.Vilgikių su povidono jodu pH reikšmių matavimų rezultatai. (n=3)
*Pokytis atsirado tarp matavimų pagaminus vilgiklį PVILG1 vs praėjus 3 mėnesiams nuo PVILG1 pagaminimo (p<0,05) ### * ** # ## *** 0 1 2 3 4 5 6 7
PVILG1 PVILG3 PVILG5 PVILG7 PVILG9
**Pokytis atsirado tarp matavimų - praėjus 1 mėnesiui nuo PVILG3 pagaminimo vs praėjus 3 mėnesiams nuo PVILG3 pagaminimo (p<0,05)
***Pokytis atsirado tarp matavimų pagaminus vilgiklį PVILG3 vs praėjus 3 mėnesiams nuo PVILG3 pagaminimo (p<0,05)
#Pokytis atsirado tarp matavimų – praėjus 1 mėnesiui nuo PVILG5 pagaminimo vs 3 mėnesiams nuo PVILG5 pagaminimo (p<0,05)
##Pokytis atsirado tarp matavimų pagaminus vilgiklį PVILG5 vs praėjus 3 mėnesiams nuo PVILG5 pagaminimo (p<0,05)
###Pokytis atsirado tarp matavimų pagaminus vilgiklį PVILG7 vs praėjus 3 mėnesiams nuo PVILG7 pagaminimo (p< 0,05)
Didţiausias pH reikšmės pokytis vilgikliuose su povidono jodu atsirado tuose mėginiuose, kurių pagrindas buvo pagamintas naudojant ksantano lipus (PVILG3) ir mėginyje, kurio pagrindo gamybai buvo naudojamas Carbopol ® Ultrez 30 polimero ir ksantano lipų mišinys (PVILG5) (p<0,05). Kituose mėginiuose statistiškai reikšmingas skirtumas nustatytas tik praėjus 3 mėnesiams nuo pagaminimo, tokie mėginiai buvo tie, kurių pagrindo gamybai buvo naudojamas Carbopol ® Ultrez 30 (PVILG1) ir vilgiklis (PVILG7), kurio gamybai buvo naudotas Carbopol ®Ultrez 21 (p<0,05). Stabilus pH reikšmių atţvilgiu buvo mėginys PVILG9, kurio gamybai buvo panaudotas Carbopol ®Ultrez 21 ir ksantano lipų mišinys (p>0,05).
4 pav. Vilgiklių su Iodophor AE 20 % koncentratu pH reikšmių matavimo rezultatai (n=3)
** * 0 1 2 3 4 5 6 7 8
KVILG2 KVILG4 KVILG6 KVILG8 KVILG10
*Pokytis atsirado tarp matavimų praėjus 1 mėnesiui nuo vilgiklio KVILG4 pagaminimo vs praėjus 3 mėnesiams nuo KVILG4 pagaminimo (p<0,05)
**Pokytis atsirado tarp matavimų –pagaminus vilgiklį KVILG 4 vs praėjus 3 mėnesiams nuo vilgiklio KVILG4 pagaminimo (p<0,05)
pH reikšmės pokytis vilgikliuose su Iodophor AE 20 % koncentratu atsirado tik mėginyje, kurio pagrindas buvo pagamintas naudojant ksantano lipus (KVILG4) (p<0,05). Kituose mėginiuose statistiškai reikšmingo pH reikšmių pokyčio neatsirado (p>0,05), visi mėginiai išliko stabilūs visą tyrimo laikotarpį.
Apibendrinus gautus tyrimo rezultatus, galima teigti, kad stabiliausi mėginiai tie, kurių gamyboje buvo naudotas Iodophor AE 20 % koncentratas. Rezultatamsįtakos galėjo turėti naudoto jodo junginio forma – etoksietanolio jodo kompleksas skystoje formoje ir jo suderinamumas su tyrime naudotais pagrindais.
3.6 Vilgiklių su povidono jodu ir Iodophor AE 20 % koncentratu klampos tyrimo
rezutatai
Pomelţiminių vilgiklių pageidautina klampa yra nuo 100 mPa*s iki 1100 mPa*s, visų stabilių klampos atţvilgiu mėginių klampa atitiko nusistatytas ribas.Gauti rezultatai pateikiami 5 ir 6 paveiksluose.
5 pav.Vilgiklių, kurių gamybai buvo naudojamas povidono jodas, klampos tyrimo rezultatai(n = 3)
### ## * ** *** # 0 200 400 600 800 1000 1200 1400
PVILG1 PVILG3 PVILG5 PVILG7 PVILG9
*Pokytis atsirado lyginant matavimus pagaminus vilgiklį PVILG1 vs praėjus 3 mėnesiams nuo PVILG1 pagaminimo (p< 0,05)
**Pokytis atsirado lyginant matavimus praėjus 1 mėnesiui nuo PVILG1 pagaminimo vs praėjus 3 mėnesiams nuo PVILG1 pagaminimo (p<0,05)
***Pokytis atsirado lyginant matavimus – pagaminus PVIGL3 vs praėjus 1 mėnesiui nuo pagaminimo (p<0,05)
# Pokytis atsirado lyginant matavimus praėjus 1 mėnesiui nuo PVILG3 pagaminimo vs praėjus 3 mėnesiams nuo PVILG3 pagaminimo (p<0,05)
## Pokytis atsirado lyginant matavimus pagaminus vilgiklį PVILG3 vs praėjus 3 mėnesiams nuo vilgiklio PVILG3 pagaminimo (p<0,05)
### Pokytis atsirado lyginant matavimus pagaminus vilgiklį PVILG7 vs praėjus 3 mėnesiams nuo PVILG7 pagaminimo (p<0,05)
Atlikus vilgiklių, pagamintų su povidono jodu, klampos matavimus, nustatytas statistiškai reikšmingas skirtumas mėginiuose, kurių pagrindas buvo pagamintas naudojant Carbopol ®Ultrez 30 polimerą (PVILG1)(p<0,05) (klampa praėjus 3 mėnesiams nuo pagaminimo pasikeitė ⁓ 30 %), Carbopol ®Ultrez 21 polimerą (PVILG7) (p< 0,05) (klampa praėjus 3 mėnesiams nuo pagaminimo pasikeitė ⁓ 35 %) ir ksantano lipus (PVILG3) (p<0,05) (klampa praėjus 3 mėnesiams nuo pagaminimo pasikeitė ⁓ 60 %). Stabilūs vilgikliai klampos atţvilgiu buvo PVILG5, kurio pagrindas pagamintas naudojant Carbopol ®Ultrez 30 polimerą bei ksantano lipų mišinį (p>0,05) ir PVILG9, kurio gamybai naudotas Carbopol ®Ultrez 21 polimero ir ksantano lipų mišinys (p>0,05).
6 pav.Vilgiklių, kurių gamybai buvo naudojama Iodophor AE 20 % koncentratas, klampos matavimo duomenys (n = 3) * *** ** 0 200 400 600 800 1000 1200 1400
KVILG2 KVILG4 KVILG6 KVILG8 KVILG10
*Pokytis atsirado lyginant matavimus tarp pagaminto vilgiklio KVILG4 vs praėjus 1 mėnesiui nuo KVILG4 pagaminimo
**Pokytis atsirado lyginant matavimus tarp matavimo praėjus 1 mėnesiui nuo KVILG4 pagaminimo vs praėjus 3 mėnesiams nuo KVILG4 pagaminimo
***Pokytis atsirado lyginant matavimus tarp pagaminto vilgiklio KVILG4 vs praėjus 3 mėnesiams nuo KVILG4 pagaminimo
Tarp mėginių pagamintų su Iodophor AE 20 % koncentratu statistiškai reikšmingu skirtumu klampa kito vilgiklyje KVILG4, kurio gamybai buvo naudojami ksantano lipai (p<0,05) (klampa praėjus 3 mėnesiams nuo pagaminimo pasikeitė ⁓ 37 %). Kiti mėginiai išliko stabilūs klampos atţvilgiu (p>0,05). Šių mėginių pagrindų gamybai buvo naudojama: Carbopol ®Ultrez 30 (KVILG2) ir Carbopol ®Ultrez 21polimerai (KVILG8), bei jų mišiniai su ksantano lipais (KVILG6, KVILG10).
Apibendrinus klampos tyrimo rezultatus nustatyta, kad klampos atţvilgiu stabiliausi mėginiai tie, kurių pagrindo gamyboje buvo naudojamiCarbopol ®Ultrez 30 ir Carbopol ®Ultrez 21 polimerai. Pastebima, kad nejonogeninė derva – ksantano lipai, naudojant derinyje su polimerais pagerino pagrindo savybes ir mėginių stabilumą. Vilgiklių stabilumui įtakos galėjo turėti naudotų jodo junginių savybės ir forma, klampa maţiausiai pakito mėginiuose, kurių gamybai buvo naudojamas Iodophor AE 20 % koncentratas.
3.7Vilgiklių su povidono jodu ir Iodophor AE 20 % koncentratu stabilumo tyrimas
atliekant šildymo – šaldymo testą
10 lentelė. Vilgiklių su povidono jodu ir Iodophor AE 20 % koncentratu vertinimo kriterijai atliekant šildymo – šaldymo testą
Vertinimo kriterijus Vertinimo kriterijaus apibūdinimas
Spalva Tamsiai ruda spalva
Kvapas Aitrus, specifiškas, jodui būdingas kvapas Vandeninės fazės atsiskyrimas Vandeninė fazė neatsiskyrusi
Skaidrumas Vilgiklis skaidrus, nėra drumstumo
11 lentelė. Vilgiklių su povidono jodu ir Iodophor AE 20 % koncentratu stabilumo tyrimo atliekant šildymo – šaldymo testą rezutatai
1 ciklas 2 ciklas 3 ciklas 4 ciklas 5 ciklas
V il gikl ių kodai S palva K vapas V an de n in ės fazė s at sis ky rim as S kaidr u mas S palva K vapas V an de n in ės fazė s at sis ky rim as S kaidr u mas S palva K vapas V an de n in ės fazė s at sis ky rim as S kaidr u mas S palva K vapas V an de n in ės fazė s at sis ky rim as S kaidr u mas S palva K vapas V an de n in ės fazė s at sis ky rim as S kaidr u mas PVILG1 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + KVILG2 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + PVILG3 + + + + + + + # + + + # + + + # + + + # KVILG4 + + + + + + + # + + + # + + + # + + + # PVILG5 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + KVILG6 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + PVILG7 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + KVILG8 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + PVILG9 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + KVILG 10 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +
+ reiškia, kad vilgikliai atitiko 11 lentelėje pateiktus vertinimo kriterijus, pakitimų neatsirado # reiškia, kad vilgikliai neatitiko 11 lentelėje pateiktų vertinimo reikalavimų, tačiau mėginiai nėra
pakankamai informatyvūs, todėl mėginiai toliau tiriami.
Apibendrinant šildymo – šaldymo testo rezultatus, nustatyta, kad mėginiai atitiko nustatytus vertinimo kriterijus visus 5 šildymo – šaldymo testo ciklus, išskyrus vilgiklių mėginius PVILG3, kurio gamybai buvo naudojamas povidono jodas ir ksantano lipai bei KVILG4, kurio gamybai buvo naudojamas Iodophor AE 20 % koncentratas ir ksantano lipai. Vilgikliai neatitiko reikalavimų antrame, trečiame, ketvirtame ir penktame cikluose.
3.8 Vilgiklių su povidono jodu ir Iodophor AE 20 %koncentratu antimikrobinio
aktyvumo tyrimas
`12lentelė.Vilgiklių su povidono jodu ir Iodophor AE 20 %koncentratu antimikrobinio aktyvumo vertinimo rezultatai VI LGI KL IŲ KO DA I Konc entra cij a. G Staphyloc oc cus aureus ATCC 25923 Staphyloc oc cus epiderm idi s AT C C 12228 Ente rococ cus f ae cali s ATCC 29212 Esc he richia c oil i ATCC 25922 K lebsie ll a pne umoniae ATCC 33495 Pse udomonas ae rugi nosaAT C C 27853 Proteus v u lgari s AT C C 8427 Bac il lus ce re us ATC C 11778 Bac il lus s ubti li s A T C C 6633 andida al C bicans ATCC 60193 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 PVILG1 1 A A A A A A A A A A 2 N N N N N A N N N A KVILG2 1 N N ± A A A A N ± A 2 N N N N N N N N N A PVILG3 1 A A A A A A A A A A 2 N N A A N A A A A A KVILG4 1 N N A A A A A N A A 2 N N N N N A N N N A PVILG5 1 A A A A A A A A A A 2 N N A N ± A A N A A KVILG6 1 N N A A A A A N A A 2 N N N N N N N N N A PVILG7 1 A A A A A A A A A A 2 N N ± N N A N N N A KVILG8 1 N N A A A A A N A A 2 N N N N N N N N N A PVILG9 1 A A A A A A A A A A 2 N N A A N A A A A A KVILG10 1 N N A A A A A N A A 2 N N N ± N A N N N A
A* - etaloninė mikroorganizmų kultūra auga (neturi antimikrobinio aktyvumo) nurodytoje tiriamo preparato koncentracijoje
N* - etaloninė mikroorganizmų kultūra neauga (turi antimikrobinį aktyvumą) nurodytoje tiriamo preparato koncentracijoje
±*- etaloninė mikroorganizmų kultūra auga silpnai (turi silpną aktyvumą) nurodytoje tiriamo preparato koncentracijoje
