2. Risposta immune dell’ospite …………………….…………….. 1. Trichinella spp. …………………………………………………… INTRODUZIONE ……………………………………………………….... ABSTRACT ……………………………………………………………..... RIASSUNTO ……………………………………………………………… INDICE

I

INDICE

RIASSUNTO………

ABSTRACT………...

INTRODUZIONE………....

1. Trichinella spp.………

1.1 Storia del parassita Trichinella spp.………..…5

1.2 Tassonomia del genere Trichinella ……….6

1.2.1 Clade incapsulato………8

1.2.2 Clade non incapsulato………...11

1.3 Epidemiologia………...13

1.3.1 Trichinella nei vertebrati pecilotermi……….. 14

1.3.2 Il ruolo del ratto nell’epidemiologia di Trichinella: riserva, vettore o vittima?... 14

1.3.3 Infezione da Trichinella nei cavalli……….... 15

1.3.4 Immigrazione, turismo e importazione illegale di carne infetta……. 16

1.3.5 La sopravvivenza delle larve……….. 16

1.4 Biologia di Trichinella spp.………17

1.4.1 La morfologia della femmina adulta di Trichinella………...19

1.4.2 La morfologia del maschio adulto di Trichinella………..20

1.4.3 La morfologia della larva……….21

1.6 La cellula nutrice…….………...……….26

1.6.1 Formazione della nurse cell………28

1.6.2 De-differenziazione della cellula muscolare……….29

1.6.3 Re-differenziazione in nurse cell………30

1.6.4 Formazione della capsula di collagene ………31

1.6.5 Angiogenesi………...32

2. Risposta immune dell’ospite……….………..33

2.1 Antigeni di Trichinella………..33

2.1.1 Gli antigeni di superficie………..34

2.1.2 Le proteine escrete/secrete (E/S)……… 34

2.1.3 Gli antigeni somatici……….……35

II

2.2 Risposta immune dell’ospite………..…35

2.2.1 Risposta immunitaria a livello intestinale………35

2.2.2 Risposta immunitaria a livello muscolare…… ..………37

2.2.3 La memoria immunitaria dell’infezione………39

2.3 Le strategie immunoevasive adottate dal parassita………40

2.4 Patologia e clinica...47

2.5 Diagnostica………..………48

2.6 Trattamento………. …..……….49

2.7 Controllo dell’infezione e prevenzione………51

3. I sistemi antiossidanti negli elminti parassiti………

3.1 L’ossigeno e le sue specie reattive (ROS)……..………54

3.2 Formazione dei ROS……….………55

3.3 I sistemi antiossidanti……… .………56

3.4 Le glutatione transferasi Omega (GSTO) nei roditori e nell’uomo……….59

3.5 I sistemi antiossidanti enzimatici negli elminti parassiti………64

3.6 Gli enzimi antiossidanti di Trichinella spp.………. 67

4. Scopo della tesi………

MATERIALI E METODI………

1. Parassiti………..…

2. Animali………

3. Immunoistochimica…...……….…

3.1 Preparazione dei tessuti muscolari e delle larve isolate………72

3.2 Immunoistochimica sui muscoli e le larve fissate...74

4. Immunoblot ……….…79

4.1 Preparazione dei campioni……….…79

4.2 Elettroforesi su gel di acrilamide in condizioni denaturanti (SDS-PAGE)………81

III

4.3 Trasferimento su foglio di nitrocellulosa………83

4.4 Controllo del trasferimento……….………85

4.5 Incubazione con l’anticorpo primario e secondario …...………85

4.6 Rivelazione della reazione antigene-anticorpo…….………86

5. Ibridazione in situ………

5.1 Linearizzazione del plasmide………..87

5.2 Sintesi della sonda marcata..………..……92

5.3 Preparazione del tessuto muscolare………94

5.4 Ibridazione in situ su tessuto muscolare murino………….……94

6. Confronto della sequenza nucleotica ed amminoacidica

della GST di Trichinella spiralis in banca dati……….……

RISULTATI………

1. Immunoistochimica……….……

2. Immunoblot……….

3. Ibridazione in situ………..…

4. Blast………..….

DISCUSSIONE………

CONCLUSIONI………..….…

BIBLIOGRAFIA……….……….…