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Riassunto
...Abstract
...1.
Introduzione... 1.1 Classificazione...... 1.2 Morfologia..... 1.3 Organizzazione genomica...... 1.4 Ciclo replicativo... 1.5 Patologia e patogenesi...... 1.6 Epidemiologia... 1.7 Terapia e profilassi... 1.8 Vettori virali... 1.8.1 Vettori Adenovirali... 1.8.2 Vettori AAV... 1.8.3 Vettori HSV... 1.8.4 Vettori retrovirali... 1.8.5 Vettori lentivirali...1.8.6 FIV e vettori derivati....
2. Scopo della Tesi
...1 1 2 3 4 6 7 10 13 15 16 17 18 19 21 25 I III
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3. Materiali e Metodi
……….. 263.1 Biologia Molecolare……….… 26
3.1.1 Trasformazione………
3.1.2 Screening mediante PCR………..
3.1.3 Estrazione del DNA plasmidico………....……
3.1.4 Sequenziamento………..……...
3.1.4.1 Metodo dei dideossinucleotidi marcati………… 29 3.1.4.2 Metodo dei primer marcati………
3.1.5 Estrazione dell’RNA virale………. 3.1.6 Retrotrascrizione………. 3.1.7 Quantificazione copie virali………..
3.1.8 Valutazione dell’espressione di gB………..……. 38 3.2 Biologia Cellulare………...…. 40 3.2.1 Linea cellulare……….. 3.2.2 Trasfezione………....… 3.2.3 Trasduzione………...… 3.2.4 Titolazione virale……… 3.2.5 Dosaggio immunoenzimatico della proteina p25.… 42 3.2.6 Lettura al citofluorimetro delle cellule esprimenti
GFP……… 3.2.6.1 Analisi al FACS dei campioni dell’
Intracellular stianing...
3.3 Esperimenti in vivo………..
3.3.1 Preparazione del vettore per l’inoculo………
3.3.2 Protocollo vaccinale……… 3.3.3 Intracellular staining………... 26 26 26 27 28 29 29 31 32 33 34 38 40 40 40 41 42 42 43 44 46 46 46 47
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4. Risultati
………... 514.1 Caratterizzazione in vitro………... 51
4.2 Quantificazione………... 54
4.3 Messa a punto del saggio intracellular staining….... 4.4 Prove preliminari di inoculo... 56
4.5 Protocollo di vaccinazione... 59
4.5.1 Intracellular staining... 4.5.2 Intracellular staining a 4 giorni...
