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INDICE
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1ELENCO DELLE ABBREVIAZIONI
4RIASSUNTO
6ABSTRACT
8SEZIONE I: INTRODUZIONE
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1. TTV 11
1.1 La scoperta del virus 11
1.2 Tassonomia e nomenclatura 15 1.3 La particella virale 23
1.4 Organizzazione del genoma e 25
proteine codificate 1.5 Eterogeneità genetica 35 1.6 Replicazione 39 1.7 Metodi per la rivelazione diagnostica di TTV 42 1.8 Epidemiologia 45
1.9 Interazioni con l’ospite infettato 51 1.10 Associazione con la malattia 57
1.11 Sensibilità ai farmaci antivirali 63
2. Patologie respiratorie croniche 65
2.1 Bronchiectasia 65
2.2 Asma 68
2
3. Scopo della tesi 71
SEZIONE II: MATERIALI E METODI
72 1. Popolazione 73 2. Raccolta e processamento dei campioni 772.1 Plasma 77
2.2 Tamponi nasali 78
3. Estrazione del DNA virale 79 4. Saggi di PCR 81 4.1 Caratteristiche della PCR 81 4.2 Real-Time PCR: quantificazione del 86
genoma di TTV 4.3 PCR genogruppo-specifiche 96
5.Corsa elettroforetica su gel di agarosio 100
6. Estrazione di DNA dal gel di agarosio 103
7. Sequenziamento 105
7.1 Descrizione della metodica 105
7.2 Reazione di sequenza 111
7.3 Purificazione della reazione di sequenza 113 7.4 Elettroforesi 114
8. Valutazione della severità delle bronchiectasie 117
9. Prove di funzionalità respiratoria 120
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11. Altre indagini di valutazione 125
11.1 Indagini di malattie congenite 125
12. Analisi statistica 127
SEZIONE III: RISULTATI
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1. Studio dello status d’infezione da TTV in 130
bambini affetti da bronchiectasie e in bambini asmatici 1.1 Prevalenza e titoli di TTV in soggetti affetti 130
da bronchiectasie, negli asmatici e in un gruppo di controllo 1.2 Titoli di TTV e grado di severità delle 135
bronchiectasie 1.3 Titoli di TTV e funzionalità respiratoria 140
nei soggetti con bronchiectasie 1.4 Titoli di TTV e funzionalità respiratoria 146
nei soggetti asmatici 1.5 Titoli di TTV e funzionalità respiratoria 151
nei soggetti sani di controllo 1.6 Genogruppi di TTV nei soggetti affetti da 158
patologie respiratorie croniche
