Indice
Riassunto
………pag. VIIAbstract
………...pag. IXElenco abbreviazioni
………pag. XIICapitolo1 – Introduzione
………pag. 11.1.
La morte cellulare programmata: apoptosi………pag. 2
1.1.1. Apoptosi: un importante equilibrio cellulare……….
pag. 2
1.1.1.1. La scoperta e le diferenne con la necrosi….………pag. 2
1.1.1.2. Apoptosi: signifcato biologico………pag. 7
1.1.1.3. L’apoptosi nel sistema nervoso………pag. 8
1.1.2. Le fasi dell’apoptosi………pag. 9
1.1.2.1. Indunione……….pag. 9
1.1.2.2. Esecunione……….. pag. 10
1.1.2.3. Riconoscimento e fagocitosi……….pag. 10 1.1.3. Le proteine coinvolte……….pag. 12
1.1.3.1. Le caspasi ………pag. 12
1.1.3.2. Le Bcl-2……….pag. 16 III
1.1.4. Vie apoptotiche………pag. 18 1.1.4.1. Via estrinseca…… ………pag. 25 1.1.4.2. Via intrinseca o mitocondriale………. pag. 21 1.1.4.3. Via dipendente da caspasi-2……….pag. 24
1.1.4.4. Via del reticolo endoplasmatico………pag. 24
1.1.4.5. Via indipendente da caspasi……….pag. 25
1.2. AICA riboside……….pag. 28
1.3. La proteina chinasi ativata dall’AAM AAMPK………pag. 31
1.3.1. Strutura di AAMP………pag. 31 1.3.2. Ativanione di AAMP………...pag. 32 1.3.3. Bersagli e funnioni di AAMP………..pag. 36 1.3.4. Regolanione di AAMP……….pag. 40 1.3 4.1. Stress cellulare… ……….pag. 42 pag. 1.3.4.2. Esercinio muscolare….………pag. 42 1.3.4.3. Ormonale……… ……….pag. 43 1.3.4.4. Farmaci antidiabetici………pag. 45
1.3.5. AAMP e controllo della crescita cellulari……….………..pag. 47
Scopo della Tesi………..pag. 53
Capitolo 2 - Materiali e Metodi
………pag. 542.1. Reagenti utilinnati ………pag. 55
2.2. Colture cellulari……….pag. 56 2.2.1. Condinioni di crescita pag. 59 2.2.2. Congelamento-scongelamento pag. 572.3. Saggio dell’ATT
pag. 582.4. Caraterinnanione di apoptosi
pag. 592.5. Mreparanione degli estrati citosolici pag. 60
2.5.1. Citocromo c pag. 60 2.5.2. Caspasi-9 pag. 602.5.3. AAMP-M………pag. 61
2.6. Aisuranione delle proteine………pag. 61
2.7. SDS-MAGE ed immunobloting………pag. 62
2.7.1. Composinione dei gel eletroforetici……….. pag. 62
2.7..2. Separanione eletroforetica e trasferimento………..pag. 62 2.7.3. Immunobloting……….pag. 63 2.7.3.1. Citocromo c………..pag. 63 2.7.3.2. Caspasi-9………..pag. 64 2.7.3.3. AAMP ativata………..pag. 64
2.8. Chemioluminescenna………pag. 65
2.9. Analisi statistica……….
pag. 65Capitolo 3 – Risultati…
………pag. 663.1.
Effetti di AICA riboside su cellule SH-SY5Y
………pag. 67
3.1.1. Infuenna sulla vitalitt……….pag. 67 3.1.2. AICA riboside induce rilascio di citocromo c………..pag. 68 3.1.3. AICA riboside produce l’idrolisi della caspasi-9……….pag. 70
3.2. Efeti di metformina sulle cellule di neuroblastoma…pag. 71
3.2.1. Ativanione di AAMP………...pag. 71 3.2.2. Efeti di metformina sulla vitalitt cellulare……….pag. 72
3.2.3. Aetformina induce apoptosi in SH-SY5Y……….…pag. 74
