LIETUVOS SVEIKATOS MOKSLŲ UNIVERSITETAS MEDICINOS AKADEMIJA
MEDICINOS FAKULTETAS BIOCHEMIJOS KATEDRA
MAŽO TANKIO LIPOPROTEINŲ, PLAZMOS ANTIOKSIDACINĖS TALPOS
IR TROMBOCITŲ AKTYVUMO SĄSAJOS
BAIGIAMIASIS MAGISTRO DARBAS
Autorius: Evelina Sabeckytė Darbo vadovas: prof. Aušra Mongirdienė
Kaunas 2018
2
TURINYS
1. Santrauka (lietuvių ir anglų kalbomis) ...3psl. 2. Interesai...5psl. 3. Etikos komiteto leidimas ...5psl. 4. Santrumpos ...6psl. 5. Įvadas ...7psl. 6. Darbo tikslai ir uždaviniai ...7psl. 7. Literatūros apžvalga...8psl.
o Antioksidacinė talpa ir laisvieji radikalai...8psl o Kraujo lipoproteinai...9psl o MTL reikšmė vystantis širdies ir kraujagyslių ligoms...10psl o Širdies nepakankamumas ir trombozinės komplikacijos...11psl o Oksiduoti MTL ir trombocitai...12psl 8. Tyrimo metodika ir metodai ...13psl. 9. Rezultatai ...14psl. 10. Rezultatų aptarimas ...24psl. 11. Išvados ...25psl. 12. Literatūros sąrašas ...26psl.
3
SANTRAUKA
Evelina Sabeckytė. Mažo tankio lipoproteinų, plazmos antioksidacinės talpos ir trombocitų aktyvumo sąsajos, magistro baigiamasis darbas/ darbo vadovas prof. Aušra Mongirdienė; Lietuvos sveikatos universiteto, Medicinos fakulteto, Biochemijos katedra.
Tyrimo tikslas. Nustatyti mažo tankio lipoproteinų ir plazmos antioksidacinės talpos sąsajas su trombocitų aktyvumu sergantiems lėtiniu širdies nepakankamumu.
Uždaviniai:
1. Ištirti MTL koncentraciją ir antioksidacinę talpą sergančiųjų lėtiniu širdies nepakankamumu kraujyje.
2. Ištirti trombocitų agregacijos intensyvumą sergančiųjų lėtiniu širdies nepakankamumu kraujyje.
3. Nustatyti sąsajas tarp MTL koncentracijos, antioksidacinės talpos ir trombocitų aktyvumo. Tyrimo metodai. 2017-2018 m. LSMU KK Širdies nepakankamumo ir ydų skyriuje besigydžiusiems ir tyrime sutikusiems dalyvauti 60 pacientų ištirta MTL koncentracija, antioksidacinė talpa bei trombocitų agregacijos intensyvumas. Tyrimo metodai: trombocitų funkcija – turbidimetrinis metodas, plazmos antioksidacinė talpa – imunofermentinis metodas, mažo tankio lipoproteinų koncentracija – spektrofotometrinis metodas.
Tyrimo dalyviai. LSMU KK pacientai, sergantys II-IV NYHA funkcinės klasės lėtiniu širdies nepakankamumu.
Tyrimo rezultatai:
MTL koncentracijos mediana II NYHA f. kl. – 2,8 mmol/l, III NYHA f. kl – 2,9 mmol/l, IV NYHA f. kl. – 2,9 mmol/l. Antioksidacinės talpos mediana II NYHA f. kl. – 0,66 U/ml, III NYHA f. kl. – 0,795 U/ml, IV NYHA f. kl. – 0,450 U/ml. Didėjant funkcinei klasei, MTL padidėja 0,357 mmol/l (p = 0,047), o antioksidacinė talpa sumažėja 0.223 U/ml (p=0,139).
Trombocitų agregacijos intensyvumas: ADP mediana II NYHA f. kl – 75,0%, III NYHA f. kl. – 78%, IV NYHA f. kl. – 71,5%. ADR mediana II NYHA f. kl. – 80,5%, III NYHA f. kl. – 87,0%, IV NYHA f. kl – 83,5%.
Tarp MTL koncentracijos, antioksidacinės talpos ir trombocitų aktyvumo koreliacijos nerasta. Beta blokatoriai didina MTL koncentraciją.
4
Tyrimo išvados:
1. Rasta tendencija, kad, sunkėjant ligonių būklei, MTL-C koncentracija didėja, o antioksidacinė talpa mažėja.
2. Trombocitų agregacijos intensyvumas rastas didžiausias III NYHA funkcinės klasės ligonių grupėje.
3. Koreliacija tarp MTL koncentracijos, antioksidacinės talpos ir trombocitų aktyvumo nerasta.
SUMMARY
Evelina Sabeckytė. Connection between low-density lipoprotein, plasma antioxidant capacity and platelet activation, Master‘s thesis / Research supervisor prof. Aušra Mongirdienė, Lithuanian health science university, Faculty of Medicine, Department of biochemistry.
The aim of the study is to evaluate the connection between low-density lipoprotein, plasma antioxidant capacity and platelet activation in patients with chronic heart failure.
Objectives:
1. To measure LDL concentration and plasma antioxidant capacity in patients with chronic heart failure.
2. To measure platelet aggregation in patients with chronic heart failure.
3. To evaluate the connection between low-density lipoprotein, plasma antioxidant capacity and platelet activation in patients with chronic heart failure.
Methods. LDL concentration and plasma antioxidant capacity was measured in patients (n = 60) that were treated in LHSU Kaunas clinics department of cardiology in 2017-2018 and agreed to participate in the study. Methods: platelet function was assessed by turbidimetric method,
immunoferment analysis method was used to evaluate plasma antioxidant capacity and the concentration of low-density lipoprotein was measured by spectrophotometric method.
The participants of research. Patients of LHSU Kaunas clinics with NYHA II-IV class heart failure.
Results of research. Median of LDL concentration in NYHA II class – 2,8 mmol/l, NYHA III class– 2,9 mmol/l, NYHA IV class – 2,9 mmol/l. Madian of plasma antioxidant capacity in NYHA II class – 0,66 U/ml, NYHA III class – 0,795 U/ml, NYHA IV class – 0,450 U/ml. With higher NYHA class LDL concentration increased 0,357 mmol/l (p = 0,047) and plasma antioxidant capacity decreased 0.223 U/ml (p=0,139).
5
Platelets aggregation: median of ADP NYHA II class – 75,0%, NYHA III class – 78%, NYHA IV class – 71,5%. Median of ADR NYHA II class – 80,5%, NYHA III class – 87,0%, NYHA IV class – 83,5%.
Correlation between low-density lipoprotein, plasma antioxidant capacity and platelets aggregation was not found.
We found that beta blockers are associated with higher LDL concentration.
Conclusions.
1. With higher severity of heart failure LDL concentration increase and plasma antioxidant capacity decrease
2. The most intensive platelets aggregation was found in NYHA III class.
3. Correlation between low-density lipoprotein, plasma antioxidant capacity and platelets aggregation was not found.
INTERESAI
Padėka. Labiausiai norėčiau padėkoti savo tiriamojo mokslinio darbo vadovei doc. Aušrai Mongirdienei už puikias idėjas, pastabas, skirtą savo laiką bei kantrybę.
Taip pat noriu padėkoti LSMU KK kardiologijos klinikos Širdies nepakankamumo ir ydų skyriaus slaugytojoms už darbą renkant pacientų kraujo mėginius.
Interesų konfliktas. Interesų konflikto nebuvo.
ETIKOS KOMITETO LEIDIMAS
6
SANTRUMPOS
LP – lipoproteinai CM – chilomikronai
VTL – vidutinio tankio lipoproteinai LMTL – labai mažo tankio lipoproteinai MTL - mažo tankio lipoproteinai
DTL – didelio tankio lipoproteinai LŠN - lėtinis širdies nepakankamumas ROS – reaktyvios deguonies formos IŠL – išeminė širdies liga
NYHA – New York Heart Association BB – beta blokatoriai
KSIF – kairiojo skilvelio išmetimo frakcija
AKFi – angiotenziną konvertuojančio fermento inhibitoriai MMMH – mažos molekulinės masės heparinas
7
ĮVADAS
Širdies nepakankamumas yra greitai besiplečianti visuomenės sveikatos problema. Daugiau nei 37,7% individų pasaulyje yra diagnozuotas širdies nepakankamumas[1]. Trombozinės komplikacijos yra dažnos sergančiųjų širdies ir kraujagyslių ligomis pacientų tarpe. Kiekvienais metais Europoje apie 500 000 asmenų miršta nuo veninės trombozės.[2] Manoma, kad viena iš šių komplikacijų priežasčių gali būti susidarančios reaktyvios O2 formos. Jos oksiduoja lipoproteinus, aktyvuoja trombocitus, o oksidacinis stresas yra svarbi besivystančio širdies nepakankamumo patogenezės dalis [3]. Didelė mažo tankio lipoproteinų (MTL) koncentracija siejama su didesne širdies ir kraujagyslių ligų rizika [4], ir yra įrodyta, kad trombocitai sąveikauja su oksiduotais MTL[5] bei dalyvauja lokaliose kraujagyslių sienelės uždegiminėse reakcijose [6]. Kokia yra MTL reikšmė trombocitų funkcijai ir hemostazei, tebėra aiškinamasi, tačiau remiantis literatūros duomenimis, galime daryti prielaidą, kad mažesnė antioksidacinė talpa bei didesnė MTL koncentracija yra svarbios aktyvinant trombocitus. Atradus sąsajų tarp MTL koncentracijos bei trombocitų agregacijos rodmenų galima būtų patvirtinti MTL protrombotinį poveikį, o nustatyta plazmos antioksidacinės talpos pokyčių reikšmė trombocitų aktyvumui papildytų žinias, kodėl sergantiesiems širdies ir kraujagyslių ligomis vystosi trombozės. Tai galėtų keisti ir gydymo strategiją mažinant trombozinių komplikacijų riziką.
DARBO TIKSLAS IR UŽDAVINIAI
Darbo tikslas. Nustatyti mažo tankio lipoproteinų ir plazmos antioksidacinės talpos sąsajas su trombocitų aktyvumu sergantiems lėtiniu širdies nepakankamumu.
Uždaviniai:
1. Ištirti MTL koncentraciją ir antioksidacinę talpą sergančiųjų lėtiniu širdies nepakankamumu kraujyje.
2. Ištirti trombocitų agregacijos intensyvumą sergančiųjų lėtiniu širdies nepakankamumu kraujyje.
8
LITERATŪROS APŽVALGA
Antioksidacinė talpa ir laisvieji radikalaiVystantis uždegiminėms ligoms organizme vyksta oksidaciniai procesai [7]. Organizmą nuo žalingo oksidacinių procesų poveikio saugo antioksidacinė sistema. Antioksidantai skirstomi į tris pagrindines klases: antioksidaciniai fermentai, kurie specifiškai naikina aktyvias deguonies formas, kurios gali inicijuoti oksidaciją (kaip superoksido dismutazė, kuri panaikina superoksidą,versdama jį vandenilio peroksidu, su kuriuo susitvarko kiti antioksidaciniai fermentai - katalazė ir glutationo peroksidazė[8]). Kita klasė yra biologiniai metalų chelatai, kurie užkerta kelią pereinamųjų metalų (geležis, varis) jonams dalyvauti hidroksilo radikalų ir kitų reaktyvių oksidantų formavimesi [9].Tačiau kai oksidacijos reakcija prasideda nepaisant šitų specifinių antioksidantų buvimo, ar kai susiformavęs oksidantas yra toks, prieš kurį nėra specifinio makromolekulinio apsaugos mechanizmo, tada pagrindinę rolę atlieka mažiau specifiniai antioksidantai. Šiai klasei priklauso įvairios vandenyje tirpios ir vandenyje netirpios mažos molekulinės masės medžiagos: glutationas, vitaminas C, šlapimo rūgštis, vitaminas E, karotenoidai, koenzimas Q, bilirubinas ir kai kurios amino rūgštys (cisteinas, metioninas, tirozinas). Daugybė nepageidaujamų biologinių oksidacijos procesų įvyksta per laisvų radikalų kelią, dėl to šios klasės pagrindinė veiklos rūšis yra reaguoti su reaktyviais laisvaisiais radikalais ir suformuoti mažiau reaktyvų radikalą, t,y. sustabdyti grandininę laisvųjų radikalų reakciją, arba reaguoti su žalojančiais oksiduojančiais agentais vietoje jų reakcijos su svarbiom molekulėm, pavyzdžiui DNR ar baltymais. Todėl ši klasė dar dažnai apibūdinama kaip „laisvų radikalų gaudyklės”[7].
Ekstraląsteliniuose skysčiuose (kraujo plazmoje, audinių skystyje, sinoviniame skystyje ar cerebrospinaliniame skystyje) yra nedaug antioksidancinių fermentų (katalazė, glutationo peroksidazė ar superoksido dismutazė). Juose yra mažos molekulinės masės antioksidantų (askorbo rūkštis, vit.E, B-karotenoidai, šlapimo rūgštis, bilirubinas, tioliai.) [10]. Vienas iš svarbesnių plazmos antioksidantų yra askorbo rūgštis. Ji gali neutralizuoti beveik visus laisvuosius radikalus. ~ 60% laisvų radikalų kraujyje sujungia šlapimo rūgštis [11]. Kraujo plazmoje esančios tiolio grupės taip pat sujungia daug laisvųjų radikalų [9]. Visi šie minėti antioksidantai sudaro antioksidacinę sistemą, o laisvųjų radikalų kiekis, kurį geba kraujyje esantys antioksidantai neutralizuoti, vadinamas bendra antioksidacine talpa (atitinkamai serumo, plazmos ar viduląstelinių antioksidantų) [12].
Reaktyvios deguonies formos organizme susidaryti gali dviem būdais: fermentiniu ir nefermentiniu. Fermentiniu būdu laisvieji radikalai susidaro kvėpavimo grandinėje, fagocituojant, sintetinant prostaglandinus ir veikiant citochromo P450 sistemai. Superoksido anijono radikalas (O2-) susidaro dalyvaujant kelioms ląstelės oksidazių sistemoms, pvz. NADPH oksidazės, ksantino
9
oksidazės, peroksidazės. Susidaręs superoksidas dalyvauja įvairių reaktyvių deguonies formų susidaryme (vandenilio peroksido, hidroksilo radikalo, hipochloro rūgšties ir t.t.). Hipochloro rūgštis (HOCL) yra sintetinama dalyvaujant neutrofilų fermentui mieloperoksidazei, kuri oksiduoja chlorido jonus esant H2O2. Hidroksilo radikalas, vienas reaktyviausių in vivo, susidaro O2- reakcijos su H2O2 metu[13]. Laisvieji radikalai gali susidaryti ir nefermentiniu būdu, per deguonies reakcijas su organinias junginias, kai šios inicijuojamos jonizuojančios spinduliuotės.
Endogeniniai laisvieji radikalai susidaro aktyvuojantis imuninėms ląstelėms, uždegiminiams procesams, esant psichologiniam stresui, pernelyg didelio fizinio krūvio metu, esant infekcijai, išemijai, vėžiniams susirgimams, senstant [14].
Kadangi literatūros duomenys byloja apie oksidacinį stresą sergantiems lėtiniu širdies nepakankamumu, mes savo darbe pasirinkome įvertinti sergančiųjų LŠN antioksidacinę talpą.
Kraujo lipoproteinai
Pagal lipoproteinų tankį (LP) jie yra skirstomi į klases: chilomikronai (CM), labai mažo tankio lipoproteinai (LMTL), vidutinio tankio lipoproteinai (VTL), kurie dar vadinami tarpinio tankio lipoproteinais (TTL), mažo tankio lipoproteinai (MTL) ir didelio tankio lipoproteinai (DTL). Visi lipoproteinai skiriasi tankumu, dydžiu, elektroforetiniu mobilumu, sudėtimi ir atliekamomis funkcijomis [15]. Chilomikronai yra sintetinami plonųjų žarnų endoteliocituose. Tai didžiausi lipoproteinai žmogaus organizme (>100 nm diametras) [16]. Pagrindinė jų funkcija yra trigliceridų ir cholesterolio, kuris rezorbuojamas iš maisto, pernaša į kitus audinius. Prieš patekdami į kraujo apytaką, trigliceridai esantys chilomikronuose yra hidrolizuojami į laisvąsias riebalų rūgštis fermento lipoproteinlipazės, dėl ko susiformuoja cholesterolio esteriai ir apoE-turinčios chilomikronų liekanos. LMTL yra sintetinami kepenyse. Jų funkcija yra trigliceridų pernaša iš kepenų į kitus audinius. Plazmoje LMTL trigliceridai yra hidrolizuojami į laisvas riebalų rūgštis lipoproteinlipazės ir kepenų lipoproteinlipazės, sukuriant eilę mažesnių, cholesterolio priturtintų lipoproteinų įskaitant VTL ir MTL. Kitaip nei LMTL ir CM, kurie perneša trigliceridus, pagrindiniai lipidai DTL ir MTL yra cholesterolis ir cholesterilio esteriai, o MTL yra pagrindinis cholesterolio pernašos lipoproteinas plazmoje [17]. DTL yra mažiausi iš lipoproteinų (8-12 nm diametras) [16] ir dalyvauja atgalinėje cholesterolio pernašoje, surinkdami cholesterolį iš periferinių audinių ir pernešdami jį (tiesiogiai ar netiesiogiai) į kepenis, kad butų pašalintas [15].
10
MTL reikšmė vystantis širdies ir kraujagyslių ligoms
Aterosklerozė, būdama miokardo infarkto, insulto ar ischeminės gangrenos priežastis, yra uždegiminė liga. Oksidacinė MTL modifikacija yra vienas svarbiausių žingsnių formuojantis aterosklerozinei plokštelei [18]. Oksiduoti MTL pradeda kauptis intimoje, tai aktyvuoja endotelį. Leukocitų adhezija ir chemokinai iššaukia monocitų ir T ląstelių telkimąsi. Monocitai virsta makrofagais, padidėja receptorių „gaudyklių“, atsakingų už lipoproteinų fagocitavimą, skaičius. Oksiduotų MTL prisifagocitavę ir po endoteliu susikaupę makrofagai vadinami putotosiomis ląstelėmis. Dėl išskiriamų citokinų (tumoro nekrozės faktorius, IL-1, IL-6 ir IL-12 [19]) vystosi vietinis uždegimas ir aterosklerozinė plokštelė auga. Intensyvesnis uždegimas gali lemti plokštelės atplyšimą, trombo formavimąsi, kas gali sukelti ischemiją [20]. Ateroskerozė yra nenormalaus lipoproteinų metabolizmo, oksidacinio streso, lėtinio uždegimo ir polinkio trombozėms rezultatas. Visi šie procesai pasireiškia kliniškai ir priskiriami širdies ir kraujagyslių ligoms.
Oksiduoti MTL svarbūs atsirandant ir vystantis aterosklerozei.[21][22] Manoma, jog MTL oksiduojami arterinėje sienoje, mikroaplinkoje, kurioje išsekę antioksidaciniai mechanizmai. Visos arterinės sienelės ląstelės (endotelio ląstelės, lygiųjų raumenų, makrofagai ir limfocitai) gali modifikuoti MTL in vitro. Oksidantų kraujyje atsiranda veikiant neutrofilų fermentams mieloperoksidazei ir lipoksigenazei. [18] Manoma, kad MTL oksiduojami dviem etapais. [23] Per pradines MTL oksidacijos iniciacijos stadijas in vitro, oksidacijos sukeltos modifikacijos MTL pasireiškia nedideliu pakitimu apolipoproteine B100. Tokie MTL vadinami minimaliai oksiduotais MTL, kuriuos atpažįsta MTL receptoriai. Šie LP yra neigiamo krūvio. Jie skatina uždegiminius pokyčius. Kartu daugėja chemokinų ir citokinų. Kraujagyslės sienelėje besitelkiančios uždegimo procese dalyvaujančios ląstelės išskiria čia daug citokinų, kurie skatina dar labiau oksiduotis MTL. MTL yra toliau oksiduojami, MTL proteinai modifikuojami, todėl jų nebeatpažįsta MTL receptoriai. Oksiduotus MTL atpažįsta makrofagai. Tai veda į putotų ląstelių formavimąsi ir aterosklerozinį pažeidimą. [23] Oksiduoti MTL skatina aterosklerozę ir kraujagyslių pažeidimą ir kitais būdais – oksiduotos MTL formos yra chemotaksinės cirkuliuojantiems makrofagams ir lygiųjų raumenų ląstelėms, todėl palengvina monocitų adheziją prie endotelio bei patekimą į subendotelinį tarpą. Be to, oksiduoti MTL yra toksiški endotelio ląstelėms ir inhibuoja NO išsiskyrimą, taigi galimai prisideda prie vazospazmo kraujagyslių ligose. [18]
MTL svarbūs ir trombozių formavimesi. Paprastieji MTL yra silpni trombocitų aktyvatoriai. Aktyvacija įvyksta tarpininkaujant specifiniams MTL receptoriams , kurie skiriasi nuo klasikinių apoB receptorių – apo ER2. Esant normaliai koncentracijai, MTL padidina trombocitų jautrumą α-trombinui, kolagenui ir ADP, bet tiesiogiai neveikia trombocitų funkcijos. Didesnės MTL koncentracijos tampa nepriklausomu trombocitų aktyvatoriumi, iššaukiančiu agregaciją ir jų granulėse esančių junginių
11
sekreciją. MTL prisijungę prie trombocitų receptorių ER2, aktyvina proteinkinazę, kuri aktyvina fermentą fosfolipazę A2, o ši katalizuoja arachidono rūgšties atskėlimą iš trombocitų plazminės membranos. Iš arachidono rūgšties sintetinamas tromboksanas A2- trombocitų granulėse kaupiamas ir išskiriamas į kraujotaką aktyvinantis trombocitus junginys. MTL gebėjimas funkcionuoti kaip
trombocitų aktyvatoriui padidėja oksidacijos metu. Oksiduotų MTL trombocitus aktyvuojanti savybė siejama su lizofosfatidine rūgštim, susidariusia oksidacijos metu [24] bei tapatumu receptoriams „gaudyklėms“[25]. Lizofosfatidinė rūgštis kaupiasi aterosklerozinėse plokštelėse ir aktyvuoja trombocitus bei endotelio ląsteles per su G baltymu susijusius lizofosfatidinės rūgšties receptorius [24].
Dėl literatūroje pateikiamų hipotezių apie MTL reikšmę aktyvinant trombocitus, mes savo darbe pasirinkome ieškoti sąsajų tarp MTL-C koncentracijos ir trombocitų agregacijos intensyvumo.
Širdies nepakankamumas ir trombozinės komplikacijos
Kiekvienais metais Europoje apie 500 000 asmenų miršta nuo veninės trombozės. Epidemiologinės studijos patvirtina sąsajas tarp veninės trombozės (kas apima giliųjų venų trombozę ir plaučių emboliją) ir širdies nepakankamumo [2]. Veninė tromboembolizacija, kardioembolizacija ir staigi mirtis įvyksta 30% širdies nepakankamumu sergančių pacientų ir didina mirštamumą ir sergamumą. Širdies nepakankamumas yra antra pagal dažnumą su širdimi susijusi būklė, kuriai esant išsivysto 9% trombozinių komplikacijų. Nors prieširdžių virpėjimas žymiai padidina trombozių riziką, pacientams su širdies nepakankamumu padidėjusi tromboembolizacijos rizika yra nepriklausoma nuo prieširdžių virpėjimo [6]. Rasta, kad ligoniams pirmą kartą diagnozavus širdies nepakankamumą ir nesant priširdžių virpėjimo, yra didesnė išeminio insulto rizika, negu nesergantiems širdies nepakankamumu [26].
Apytiksliai 70% pacientų sergančių širdies nepakankamumu ir esant kairiojo skilvelio sistolinei disfunkcijai serga išemine širdies liga. Trombozių formavimesi, kai pažeista arterinė sienelė, svarbiausi yra trombocitai. Plyšus aterosklerozinei plokštelei pažeidžiama kraujagyslės siena. Iš jos išsiskiria audinių faktorius ir trombinas – stipriausi trombocitų agonistai. Jie skatina trombocitų adheziją, aktyvaciją ir galiausiai trombo formavimąsi. Trombocitų aktyvinimas veda prie svarbių antrinių agonistų atpalaidavimo- tromboksano A2 ir ADP. Tromboksanas A2 susidaro iš trombocitų membranos fosfolipido arachidono rūgšties, o ADP išskiriamas iš tankiųjų granulių. Autokrininiu ir parakininiu būdais šie du antriniai agonistai aktyvina αIIbβ3 receptorius, todėl yra svarbūs skatinant trombocitų agregaciją [6].
12
Kai kraujagyslės siena yra pažeista ar suardytas endotelis, kolagenas ir audinių faktorius susisiekia su tekančiu krauju ir inicijuoja trombo formavimąsi. Kolagenas sukelia trombocitų akumuliaciją ir aktyvaciją per trombocitų glikoproteiną VI, tuo tarpu audinių faktorius inicijuoja trombino gamybą, kuris ne tik verčia fibrinogeną fibrinu, bet ir taip pat aktyvuoja trombocitus. [27] Aktyvuojantis trombocitams greitai keičiasi jų morfologija, agregacija ir granulių sekrecija. Trombocitai iš lygaus disko formos ląstelių virsta netaisyklingos formos ląstelėmis. Miozinas IIa yra pagrindinis trombocitų baltymas, dalyvaujantis keičiantis aktyvuotų trombocitų formai.Šis baltymas valdomas fosforilinant reguliacines lengvąsias grandis[28]. Aktyvuoti trombocitai taip pat išskiria į kraują granulėse esančius junginius: trombospondiną, fibrinogeną, fibronektiną, von Willebrand faktorių [29].
Dėl neabejotinos trombocitų reikšmės formuojantis trombozinėms komplikacijoms, savo darbe pasirinkome įvertinti trombocitų agregacijos intensyvumą sergantiems LŠN.
Oksiduoti MTL ir trombocitai
Oksiduoti MTL trombocitus aktyvina per kelias antrinio signalo perdavimo grandis. Tai yra yra plačiai tyrinėjama. Oksiduoti MTL aktyvina trombocitus prisijungdami prie trombocitų CD36 receptorių. Taip padidina trombocitų reaktyvių deguonies formų (ROS) ir superoksido susidarymą katalizuojant NADPH oksidazei 2. Reaktyvios deguonies formos dalyvauja aktyvinant trombocitus [30][25]. Oksiduoti MTL stimuliuoja trombocitų aktyvaciją skatindami miozino IIa reguliacinių lengvųjų grandinių fosforilinimą. Būtent oksiduoti MTL prisijungę prie trombocitų receptorių (36 gaudyklių) skatina reguliacinių miozino IIa lengvųjų grandinių fosforilinimą. Oksiduoti MTL reguliuoja trombocitų kontraktilinį signalą per nuo tirozino kinazės priklausomą kelią, kuris sukelia lengvųjų reguliacinių miozino IIa grandinių fosforilinimą dvejopai: aktyvuoja lengvųjų reguliacinių miozino IIa grandinių kinazę bei inhibuoja lengvųjų reguliacinių miozino IIa grandinių fosfatazę [5].
Kiek susidarys oksiduotų MTL, priklauso nuo kiekvieno paciento individualios oksidacinės gebos neutralizuoti susidariusius laisvuosius radikalus. Todėl antioksidacinės talpos sumažėjimas gali būti rizikos faktorius širdies ir kraujagyslių ligoms [18] bei su oksiduotais MTL susijusioms trombozinėms komplikacijoms atsirasti. Šiuo metu nėra atliktų tyrimų šia tema, todėl savo darbe pasirinkome ieškoti sąsajų tarp MTL koncentracijos, plazmos antioksidacinės talpos ir trombocitų agregacijos.
13
TYRIMO METODIKA
Tyrimui buvo atrinkti tik tie pacientai, gydyti LSMU Kauno Klinikų Kardiologijos klinikoje dėl paūmėjusio LŠN (II‒IV pagal NYHA), kurie paskutines 2 savaites nevartojo antiagregantų, ir nebuvo kitų veiksnių, darančių įtaką trombocitų agregacijai. Lėtinis širdies nepakankamumas pacientams buvo diagnozuotas pagal širdies nepakankamumo diagnostikos ir gydymo gaires, kurias patvirtino Europos kardiologų draugija [31]. Kriterijai tyriamiesiems buvo: 48-78 metų amžiaus pacientai, kurie sutiko dalyvauti tyrime; II-IV širdies nepakankamumo pagal NYHA klasės su išemine, dilatacine ar hipertenzine kardiomiopatija. Klinikinė būklė buvo vertinama kaip stabili, jei nesikeitė pastarąsias 3-4 savaites funkcinė klasė pagal NYHA, svoris ir medikamentų vartojimas. Pagal šiuos kriterijus buvo atrinkta po 20 II, III ir IV NYHA f. kl. pacientų.
Kraujas lipidų koncentracijos tyrimui buvo imamas nevalgius, į vakuuminius mėgintuvėlius su koaguliacijos aktyvatoriais ir po 15min centrifuguojamas 20min 1000xg (3000 rpm). Lipidų koncentracijai matuoti buvo naudojami standartiniai metodai su Synchron DxC 800 (Beckman Coulter). Naudoti reagentai: mažo tankio lipoproteinų cholesterolio koncentracijai - SYNCHRON SYSTEMS direct LDLD Cholesterol reagent REF969706.
Trombocitų agregacijos tyrimams kraujo mėginiai buvo imami iš dilbio venos į 5ml vakuuminius mėgintuvėlius su 3,8% natrio citratu. Siekiant paruošti trombocitų prisotintą plazmą, kraujas buvo centrifuguojamas 1000 rpm (100g) 15min kambario temperatūroje. Plazma be trombocitų gauta, kai likęs kraujas buvo centrifuguojamas 3000 rpm (1000g) 30min. Trombocitų agregacija buvo tiriama vertinant trombocitų prisotintą plazmą naudojant agregometrą (Chrono-Log, USA) pagal standartinį Borno metodą [32]. ADP (3.8 mmol/l, Chrono-log P/N 384) ir ADR (4,5mmol/l) buvo naudojamas agregacijos indukcijai. Spontaniška agregacija buvo registruojama nenaudojant induktoriaus.
Bendra plazmos antioksidacinė talpa buvo tiriama serume imunofermentiniu metodu naudojant reagentų rinkinį: Human total antioxidant capacity ELISA Kit abx053643 (abbexa, Jungtinė karalystė).
Buvo tiriami 60 pacientų, iš kurių 34 vyrai ir 26 moterys. Pacientų amžiaus vidurkis: vyrų - 58,7m. (SD - 16,35), moterų - 70,15m. (SD - 12,49 ). Tiriami po 20 pacientų iš kiekvienos II, III ir IV širdies nepakankamumo klasių pagal NYHA. Pacientų amžiaus vidurkis pagal NYHA klases: II klasė - 59.60m. (SD – 19,1), III – 64m. (SD – 14,4), IV – 67,45m. (SD - 12,78) (žr. 1 lentelė). Širdies echoskopijos tyrimų rezultatai ir informacija apie vartojamus vaistus buvo paimti iš pacientų ligos istorijų.
14
Tiriamųjų pacientų duomenys analizuoti naudojant statistinį duomenų analizės paketą SPSS (Statistical Package for Social Sciences) 20.0 for Windows. Gautiems duomenims vertinti pritaikyta daugialypė tiesinė regresija, modelių tinkamumui įvertinti naudoti Q-Q grafikai. Rezultatų patikimumui patvirtinti buvo naudotas p<0,05 reikšmingumo lygmuo.
1 lentelė.Tirtų pacientų charakteristika.
II NYHA kl. III NYHA kl. IV NYHA kl. p reikšmė Amžiaus vidurkis (metai) 59,6 (SD – 19,1) 64 (SD – 14,4) 67,45 (SD - 12,78) 0,2921 KSIF (%) vidurkis 44,3 (SD-8,053113) 36,45 (SD-13,41042) 27,85 (SD-12,64193) 0,002 sistolinio AKS vidurkis (mmHg) (SD - 14,03) 131,15 130 (SD-14,61434) 129,35 (SD-21,44829) 0,9544 diastolinio AKS vidurkis (mmHg) 83,1 (SD - 10,32575) 79,1 (SD-12,59031) 79,75 (SD-10,3001) 0,4955 BB (metoprololis) 11 10 7 Diuretikai 4 7 Nitratai 1 2 1 Heparinas 0 0 1 KKB 1 1 3 Digoksinas 0 5 2 MMH 1 3 1 Tiroksinas 0 3 0 Insulinas 1 0 2 Varfarinas 3 7 3 AKFi 13 8 6
REZULTATAI
Buvo ištirti 60 pacientų, iš kurių 34 vyrai ir 26 moterys. Pacientų amžiaus vidurkis: vyrų - 58,7m., moterų - 70,15m. Tiriami po 20 pacientų iš kiekvienos II, III ir IV širdies nepakankamumo klasių pagal NYHA. Pacientų amžiaus vidurkis pagal NYHA klases: II klasė - 59.60m., III – 64m., IV
15
– 67,45m. (p=0,29). KSIF tarp pacientų grupių skyrėsi statistiškai reikšmingai (p=0,002), sistolinis ir diastolinis arterinis kraujo spaudimas tarp grupių nesiskyrė (žr. 1 lentelė).
MTL koncentracija ir antioksidacinė talpa sergančiųjų lėtiniu širdies nepakankamumu kraujyje
MTL koncentracija kraujyje nesiskyrė tarp skirtingų pacientų grupių (II, III ir IV klasės pagal NYHA) (žr.1 pav). IV klasės pacientų serume rasta šiek tiek didesnė MTL koncentracija (žr. 2 lentelė), bet ji nėra statistiškai reikšmingai didesnė už II ir III f.kl. (žr. 2 pav)
2 lentelė. Pacientų serumo MTL-C koncentracija pagal NYHA funkcines klases
NYHAf.kl Pacientai Vidurkis Mediana SD Minimumas Maksimumas
2 20 2.9945 2.845 0.6552177 1.71 4.19
3 20 3.0030 2.935 0.9501197 1.63 5.41
4 20 3.1570 2.935 1.1723395 1.52 5.84
1pav. Pacientų serumo MTL-C koncentracijos (mmol/l) pasiskirstymas skirtingose pacientų grupėse (2 - II NYHA klasė, 3 – III NYHA klasė, 4 – IV NYHA klasė)
16
2pav. MTL koncentracijos skirtumas tarp grupių (p=0,3661)
Pacientų kraujo plazmos antioksidacinė talpa taip pat statistiškai reikšmingai nesiskyrė tarp tirtų pacientų grupių (žr. 3,4 pav., 3 lentelė).
3 lentelė. Pacientų kraujo plazmos antioksidacinė talpa pagal NYHA funkcines klases
NYHAf.kl Pacientai Vidurkis Mediana St. nuokrypis Minimumas Maksimumas
2 20 0.7735 0.660 0.6907911 0.08 2.72
3 20 1.0160 0.795 0.8384660 0.07 3.08
4 20 0.7710 0.450 0.9153596 0.06 3.85
3pav. Pacientų kraujo plazmos antioksidacinės talpos (U/ml) pasiskirstymas skirtingose pacientų grupėse (2 - II NYHA klasė, 3 – III NYHA klasė, 4 – IV NYHA klasė)
M T L m m ol /l N YH A 2 N YH A 3 N YH A 4 0 1 2 3 4
17
4pav. Antioksidacinės talpos skirtumas tarp grupių (p=0,3887)
Naudojome tiesinę regresiją, jog nustatytume, ar yra ryšys tarp NYHA funkcinių klasių ir MTL bei serumo antioksidacinės talpos. Priklausomas kintamasis yra MTL-C ir antioksidacinė talpa, o nepriklausomi kintamieji yra NYHA funkcinė klasė, KSIF. Pirmasis modelis, kurį taikėme buvo tik su NYHA funkcine klase. Tikrinome su QQ grafikais modelio tinkamumą. Panašu, jog tiesinė regresija ir ANOVA dispersinė analizė idealiai nenuspėja MTL ir antioksidacinės talpos reikšmių esant didelėms reikšmėms. Tai yra dažna problema ir įprastai ji yra susijusi su tuo, jog arba yra kitų parametrų, nuo kurių priklauso MTL-C, arba santykis tarp NYHA funkcinės klasės ir šių parametrų yra netiesiškas (žr. 4 lentelė).
4 lentelė. Tiesinės regresijos modelio rezultatai skaičiuojant MTL ryšį su NYHA f. klase
Kintamasis koeficientas St. nuokrypis p reikšmė konstanta 2.80775 0.4631977 0.0000001 NYHA f. kl 0.08125 0.1489800 0.5875868
5lentelė. Tiesinės regresijos modelio rezultatai skaičiuojant antioksidacinės talpos ryšį su NYHA f. klase
Kintamasis koeficientas St. nuokrypis P reikšmė konstanta 0.85725 0.4038157 0.0380437 NYHA f. kl -0.00125 0.1298808 0.9923541
Matome, jog su kiekvienos klasės padidėjimu MTL-C padidėja 0,081 vienetu (p = 0,588), o antioksidacinė talpa mažėja 0,001 vienetais (p = 0,9924) (žr. 4,5 lentelės). Bet tikėtina, jog yra kitų kintamųjų, kurie yra svarbūs, todėl į juos turime atsižvelgti konstruodami modelį. Tam įtraukėme į tiesinės regresijos modelį KSIF ir visus vartojamus vaistus.
A n tio k s id a c in ë ta lp a U /m l N YH A 2 N YH A 3 N YH A 4 0 .0 0 .5 1 .0 1 .5
18
6 lentelė. Pacientų serume esančio MTL-C ryšys su vartotais vaistais, KSIF ir funkcine klase
Kintamasis Koeficientas St. nuokrypis p reikšmė (konstanta) 1.0368397 0.8442302 0.2257764 NYHAf.kl 0.3566029 0.1744298 0.0467920 KSIFproc 0.0204515 0.0107141 0.0626738 BB 0.8607864 0.3180735 0.0095795 AKFi -0.2188749 0.3160167 0.4921161 D -0.5421504 0.3025378 0.0798568 Nitratai 0.5944293 0.5080588 0.2481601 Heparinas -0.8894013 1.0330602 0.3938361 KKB 0.6959953 0.5096215 0.1788177 CD vaistai -0.6250143 0.9670905 0.5213786 Digoksinas -0.2710123 0.3996078 0.5011203 MMMH 0.2481954 0.4425311 0.5776791 Tiroksinas -0.3087166 0.5911409 0.6040657 Insulinas -0.5467020 0.5792892 0.3503389 Varfarinas 0.2605456 0.3494828 0.4598354
Tarp NYHA funkcinės klasės ir MTL-C rastas ryšys. Jeigu laikome, jog pacientai vartoja tuos pačius vaistus ir turi tokį patį KSIF, tuomet su kiekviena NYHA klase MTL-C padidėja 0,357
vienetais (p = 0,047). Su kiekvienu IF procentu MTL-C didėja per 0,02, tačiau rezultatas gana ribinis (SE = 0,0107, p = 0,0627) (žr. 6 lentelė). Beta blokatoriai turėjo reikšmingą ryšį su MTL-C
koncentracija: vartojantys beta blokatorius turėjo 0,8607 vienetais didesnę MTL-C koncentraciją negu nevartojantys (p = 0,0096) (žr. 5 pav.).
19
5 pav. Beta blokatorių vartojimas ir MTL-C koncentracijos vidurkis (mmol/l) pagal NYHA f. klases (2 - II NYHA klasė, 3 – III NYHA klasė, 4 – IV NYHA klasė)
Kiti vaistai neturėjo statistiškai reikšmingo poveikio MTL-C koncentracijai. Modelio tinkamumą patikrinome QQ grafikais.
Ryšio tarp antioksidacinės talpos ir NYHA funkcinės klasės ar išstūmimo frakcijos nepavyko nustatyti (žr. 7 lentelė).
7 lentelė.Pacientų plazmos antioksidacinės talpos ryšys su vartotais vaistais, KSIF ir funkcine klase
Kintamasis Koeficientas St. nuokrypis p reikšmė (konstanta) 1.7852218 0.7182472 0.0167183 NYHAf.kl -0.2233184 0.1484000 0.1393522 KSIFproc -0.0095413 0.0091153 0.3008099 BB -0.1600490 0.2706080 0.5571837 AKFi -0.0483675 0.2688581 0.8580391 D -0.0082679 0.2573906 0.9745168 Nitratai 0.5537102 0.4322421 0.2067498 Heparinas 2.8589348 0.8788985 0.0021699 KKB 0.3383108 0.4335716 0.4393065 CD vaistai -0.1212583 0.8227734 0.8834924 Digoksinas 0.1878864 0.3399750 0.5832396 MMMH 0.0970776 0.3764930 0.7977005
20
Tiroksinas -0.2282089 0.5029260 0.6521807 Insulinas 0.6507099 0.4928429 0.1934050 Varfarinas 0.1043288 0.2973301 0.7273117
Trombocitų agregacijos intensyvumas sergančiųjų lėtiniu širdies nepakankamumu kraujyje
Trombocitų agregacijos rodmenys tiriant su ADP tarp skirtingų pacientų grupių nesiskyrė (žr. 8 lentelė, 6, 7 pav.). Nors matosi tendencija, kad NYHA III f. kl. pacientų trombocitų agregacija intensyviausia.
8 lentelė. Trombocitų agregacijos, tirtos su ADP, rodmenų pasiskirstymas pagal NYHA f.klases
NYHAf.kl Pacientai Vidurkis Mediana St. nuokrypis Minimumas Maksimumas
2 20 74.80 75.0 9.758128 52 90
3 20 77.05 78.0 7.930454 61 92
4 20 71.60 71.5 11.222159 51 91
6pav. Trombocitų agregacijos, tirtos su ADP (%), rodmenų pasiskirstymas pagal NYHA f.klases (2 - II NYHA klasė, 3 – III NYHA klasė, 4 – IV NYHA klasė)
21
7 pav. Trombocitų agregacijos, tirtos su ADP, rodmenų skirtumas tarp grupių (p=0,214),
Trombocitų agregacijos rodmenys, tiriant su ADR, statistiškai reikšmingai nesiskyrė tarp skirtingų pacientų grupių (žr. 9 lentelė, 8, 9 pav.). Bet lyginant skaitines vertes, III NYHA f. kl. pacientų trombocitų agregacija irgi yra intensyviausia.
9 lentelė. Trombocitų agregacijos, tirtos su ADR, rodmenų pasiskirstymas pagal NYHA f.klases
NYHAf.kl Pacientai Vidurkis Mediana St. nuokrypis Minimumas Maksimumas
2 20 81.55 80.5 10.20565 60 100
3 20 85.20 87.0 10.50614 58 102
4 20 81.20 83.5 12.39100 51 99
8 pav. Trombocitų agregacijos, tirtos su ADR (%), rodmenų pasiskirstymas pagal NYHA f.klases (2-II NYHA klasė, 3 – (2-III NYHA klasė, 4 – IV NYHA klasė)
% N YH A 2 N YH A 3 N YH A 4 0 2 0 4 0 6 0 8 0 1 0 0
22
9 pav. Trombocitų agregacijos, tirtos su ADR, rodmenų skirtumas tarp grupių (p=0,454)
Taikant tiesinės regresijos modelį, ADP sumažėja 1,6 % didėjant NYHA f. klasei (p=0,307). ADR didėjant NYHA f. klasei sumažėja 0,175% (p=0,92). Skirtumas nėra statistiškai reikšmingas (žr. 10, 11 lentelės).
10 lentelė. ADP ryšys su NYHA f. klase
Kintamasis Koeficientas St. nuokrypis p reikšmė konstanta 79.28333 4.828122 0.0000000 NYHAf.kl -1.60000 1.552887 0.3071285
11 lentelė. ADR ryšys su NYHA f. klase
Kintamasis Koeficientas St. nuokrypis p reikšmė konstanta 83.175 5.472821 0.0000000
NYHAf.kl -0.175 1.760244 0.9211492
ADP (žr.12 lentelė) ir ADR (žr.13 lentelė) rodikliai statistiškai reikšmingai nesikeičia ir skaičiuojant su vartotais vaistais, NYHA f. kl. bei į skaičiavimus įtraukiant MTL-C ir antioksidacinę talpą. % N YH A 2 N YH A 3 N YH A 4 0 2 0 4 0 6 0 8 0 1 0 0
23
12 lentelė. Trombocitų agregacijos, tirtos su ADP, ryšys su vartotais vaistais, NYHA f. kl., MTL, antioksidacine talpa
Kintamasis Koeficientas St. nuokrypis p reikšmė (konstanta) 83.9121064 7.468631 0.0000000 NYHAf.kl -2.5055690 1.838745 0.1799264 BB -3.6124121 4.018434 0.3735673 AKFi 0.3166976 3.702767 0.9322281 D 1.4830834 3.648708 0.6863690 Nitratai 0.2570807 6.134130 0.9667601 Heparinas 18.7737248 13.628718 0.1753209 KKB -2.8007839 6.113165 0.6490951 CD vaistai 9.9174758 11.381046 0.3882642 digoksinas 4.0422506 4.666419 0.3910564 MMMH 2.6553836 5.200435 0.6121779 tiroxinas 5.6295598 6.961573 0.4230606 insulinas -5.7974685 6.992394 0.4115172 Varfarinas -2.7268769 4.119324 0.5114415 MTLch -0.0430285 1.683054 0.9797193 Antioksidacinėtalpa -1.3178231 2.032207 0.5200518
13 lentelė. Trombocitų agregacijos, tirtos su ADR, ryšys su vartotais vaistais, NYHA f. kl., MTL, antioksidacine talpa
Kintamasis Koeficientas St.nuokrypis p reikšmė (Intercept) 85.7531847 8.254179 0.0000000 NYHAf.kl -1.4661584 2.032144 0.4744286 BB -1.7206570 4.441092 0.7002983 AKFi -5.9947022 4.092222 0.1500572 D -0.9669708 4.032478 0.8116023 Nitratai 8.1207616 6.779316 0.2373794 Heparinas 17.6758931 15.062181 0.2468975 KKB -3.8613993 6.756145 0.5705427 CDvaistai -2.2546171 12.578100 0.8585648 Digoksinas -0.4634830 5.157232 0.9287980 MMMH 3.6802929 5.747414 0.5252731 Tiroksinas 12.0611708 7.693789 0.1241272 Insulinas 5.0008659 7.727851 0.5209147 Varfarinas 3.0362121 4.552593 0.5083062 MTL-C 1.6653389 1.860077 0.3754952 Antioksidacinė talpa -1.7675523 2.245954 0.4355040
24
Koreliacijos tarp rodiklių
Koreliacijų tarp MTL, antioksidacinės talpos ir trombocitų agregacijos intensyvumo (ADP ir ADR) nustatyti nepavyko (žr. 14 lentelė).
14 lentelė. Koreliacijos tarp MTL-C, antioksidacinės talpos bei ADP ir ADR
Rodiklis 1 Rodiklis 2 Pearson koreliacijos koeficientas p reikšmė
MTL-C Antioksidacinė talpa -0.0243881 0.8532580
MTL-C ADP -0.1138172 0.3865467
MTL-C ADR 0.0998534 0.4477985
Antioksidacinė talpa ADP -0.0038152 0.9769195
Antioksidacinė talpa ADR -0.0221068 0.8668534
ADP ADR 0.4837775 0.0000901
REZULTATŲ APTARIMAS
Mūsų atlikto tyrimo metu nustatėme, kad beta blokatoriai turi reikšmingą ryšį su MTL-C koncentracija: vartojančiųjų beta blokatorius MTL-C koncentracija buvo 0,8607 vienetais didesnė negu nevartojančiųjų (p = 0,0096). Tirti pacientai vartojo metoprololį. Literatūros duomenys byloja, jog senosios kartos beta blokatoriams (metoprololiui, atenololiui) būdinga didinti MTL bei trigliceridų koncentraciją. Tačiau naujieji beta blokatoriai (karvedilolis, nebivololis), kuriems būdingas
vazodilatacinis poveikis, nėra siejami su padidėjusia MTL koncentracija [33].
Mūsų atlikto tyrimo metu pastebėtas ryšis tarp NYHA klasės ir MTL-C. Didėjant NYHA funkcinei klasei, MTL-C padidėja 0,357 vienetais (p = 0,047). Didelė MTL-C dažnai siejama su didele rizika išsivystyti širdies ir kraujagyslių ligoms, tačiau MTL koncentracija labai priklauso nuo priežasties, dėl kurios išsivystė širdies nepakankamumas, todėl negalima būtų teigti, kad MTL-C gali priklausyti nuo NYHA klasės. Platesnių tyrimų šia tema nepavyko rasti.
MTL koncentracijos mediana II NYHA f. kl. – 2,8 mmol/l, III NYHA f. kl – 2,9 mmol/l, IV NYHA f. kl. – 2,9 mmol/l. Antioksidacinės talpos mediana II NYHA f. kl. – 0,66 U/ml, III NYHA f. kl. – 0,795 U/ml, IV NYHA f. kl. – 0,450 U/ml. Didėjant funkcinei klasei, MTL padidėja 0,357 mmol/l (p = 0,047), o antioksidacinė talpa sumažėja 0.223 U/ml (p=0,139). Matome tendenciją, kad
25
sunkėjant pacientų būklei, didėja MTL, o antioksidacinė talpa mažėja. Remiantis anksčiau pasaulyje atliktais tyrimais, buvo pastebėta tendencija, kad pacientams, sergantiems LŠN reguliariai atliekant fizinius pratimus gerėja tiriamųjų būklė bei didėja antioksidacinė plazmos talpa. Didėjant antioksidacinei talpai buvo stebima mažėjanti MTL koncentracija [34]. Tai sutampa su mūsų rezultatais, kad geresnė LŠN pacientų būklė susijusi su didesne antioksidacine talpa. Mūsų tyrimo rezultatų tarp grupių skirtumai nėra statistiškai reikšmingi. Tam galimai turėjo įtakos nedidelė tiriamųjų imti, gretutinės pacientų ligos, vartoti medikamentai, bet tendencija matosi.
ADP mediana II NYHA f. kl – 75,0%, III NYHA f. kl. – 78%, IV NYHA f. kl. – 71,5%. ADR mediana II NYHA f. kl. – 80,5%, III NYHA f. kl. – 87,0%, IV NYHA f. kl – 83,5%. Lyginant skaitines vertes, III NYHA f. kl. pacientų trombocitų agregacija yra intensyviausia. IV NYHA f. kl. trombocitų agregacija gauta mažesnė, nei III NYHA f. kl., tam galimai turėjo įtakos nedidelė tiriamųjų imtis, gretutinės pacientų ligos, vartoti medikamentai. Gauti rezultatai panašūs į anksčiau pasaulyje atliktų tyrimų su žiurkėmis, kuriuose buvo nustatyta, kad ADP indukuota trombocitų agregacija mažėja didėjant plazmos antioksidacinei talpai [35].
Sąsajų tarp MTL koncentracijos, atioksidacinės talpos bei trombocitų agregacijos nustatyti nepavyko. Rezultatams galimai įtakos turėjo ribota tiriamųjų imtis.
IŠVADOS
1. Rasta tendencija, kad, sunkėjant ligonių būklei, MTL-C koncentracija didėja, o antioksidacinė talpa mažėja.
2. Trombocitų agregacijos intensyvumas rastas didžiausias III NYHA funkcinės klasės ligonių grupėje.
3. Koreliacija tarp MTL koncentracijos, antioksidacinės talpos ir trombocitų aktyvumo nerasta.
26
LITERATŪROS SĄRAŠAS
[1] B. Ziaeian and G. C. Fonarow, “Epidemiology and aetiology of heart failure,” Nat. Rev.
Cardiol., vol. 13, no. 6, pp. 368–378, 2016.
[2] L. Tang, Y.-Y. Wu, G. Y. H. Lip, P. Yin, and Y. Hu, “Heart failure and risk of venous
thromboembolism: a systematic review and meta-analysis,” Lancet Haematol., vol. 3, no. 1, pp. e30–e44, 2016.
[3] M. Seddon, Y. H. Looi, and A. M. Shah, “Oxidative stress and redox signalling in cardiac hypertrophy and heart failure,” Heart, vol. 93, no. 8, pp. 903–907, 2007.
[4] A. Trpkovic et al., “Oxidized low-density lipoprotein as a biomarker of cardiovascular diseases,” Crit. Rev. Clin. Lab. Sci., vol. 52, no. 2, pp. 70–85, 2015.
[5] K. S. Wraith, S. Magwenzi, A. Aburima, Y. Wen, D. Leake, and K. M. Naseem, “Oxidized low-density lipoproteins induce rapid platelet activation and shape change through tyrosine kinase and Rho kinase – signaling pathways,” vol. 122, no. 4, pp. 580–590, 2017.
[6] P. A. Gurbel and U. S. Tantry, “Antiplatelet and Anticoagulant Agents in Heart Failure. Current Status and Future Perspectives.,” JACC Hear. Fail., vol. 2, no. 1, pp. 1–14, 2014.
[7] M. Irshad and P. S. Chaudhuri, “Oxidant-antioxidant system: Role and significance in human body,” Indian J. Exp. Biol., vol. 40, no. 11, pp. 1233–1239, 2002.
[8] J. É. M. MatÉs, C. Pérez-Gómez, and I. N. De Castro, “Antioxidant enzymes and human diseases,” Clin. Biochem., vol. 32, no. 8, pp. 595–603, 1999.
[9] C. Biology, “TOTAL ANTIOXlDANT CAPACITY Grzegorz Bartosz Department of
Molecular Biophysics , University of L6di , L6di , Poland ; and Department of Biochemistry,” p. 2423, 2003.
[10] B. Halliwell and J. M. C. Gutteridge, “The antioxidants of human extracellular fluids,” Arch.
Biochem. Biophys., vol. 280, no. 1, pp. 1–8, 1990.
[11] E. Fabbrini, M. Serafini, I. Colic Baric, S. L. Hazen, and S. Klein, “Effect of plasma uric acid on antioxidant capacity, oxidative stress, and insulin sensitivity in obese subjects,” Diabetes, vol. 63, no. 3, pp. 976–981, 2014.
[12] C. P. Rubio, J. Hernández-Ruiz, S. Martinez-Subiela, A. Tvarijonaviciute, and J. J. Ceron, “Spectrophotometric assays for total antioxidant capacity (TAC) in dog serum: an update,”
BMC Vet. Res., vol. 12, no. 1, p. 166, 2016.
[13] B. Amir Aslani and S. Ghobadi, “Studies on oxidants and antioxidants with a brief glance at their relevance to the immune system,” Life Sci., vol. 146, pp. 163–173, 2016.
[14] L. A. Pham-Huy, H. He, and C. Pham-Huy, “Free radicals, antioxidants in disease and health.,”
27
[15] A. H. M. Smelt, “Triglycerides and gallstone formation,” Clin. Chim. Acta, vol. 411, no. 21–22, pp. 1625–1631, 2010.
[16] R. W. Mahley, T. L. Innerarity, S. C. Rall, and K. H. Weisgraber, “and function,” vol. 25, 1984. [17] A. N. Hoofnagle and J. W. Heinecke, “Lipoproteomics: using mass spectrometry-based
proteomics to explore the assembly, structure, and function of lipoproteins,” J. Lipid Res., vol. 50, no. 10, pp. 1967–1975, 2009.
[18] I. S. Young and J. V Woodside, “Antioxidants in health and disease Antioxidants in health and disease,” J. Clin. Pathol., pp. 176–186, 2001.
[19] G. A. Duque and A. Descoteaux, “Macrophage cytokines: Involvement in immunity and infectious diseases,” Front. Immunol., vol. 5, no. OCT, pp. 1–12, 2014.
[20] G. K. Hansson, A.-K. L. Robertson, and C. Söderberg-Nauclér, “Inflammation and Atherosclerosis,” Annu. Rev. Pathol. Mech. Dis., vol. 1, no. 1, pp. 297–329, 2006. [21] A. E. Fraley and S. Tsimikas, “Clinical applications of circulating oxidized low-density
lipoprotein biomarkers in cardiovascular disease.,” Curr. Opin. Lipidol., vol. 17, no. 5, pp. 502– 509, 2006.
[22] U. Förstermann, N. Xia, and H. Li, “Roles of vascular oxidative stress and nitric oxide in the pathogenesis of atherosclerosis,” Circ. Res., vol. 120, no. 4, pp. 713–735, 2017.
[23] H. Yoshida and R. Kisugi, “Mechanisms of LDL oxidation,” Clin. Chim. Acta, vol. 411, no. 23– 24, pp. 1875–1882, 2010.
[24] S. J. A. Korporaal, G. Gorter, H. J. M. Van Rijn, and J. W. N. Akkerman, “Effect of oxidation on the platelet-activating properties of low-density lipoprotein,” Arterioscler. Thromb. Vasc.
Biol., vol. 25, no. 4, pp. 867–872, 2005.
[25] S. Magwenzi et al., “Oxidized LDL activates blood platelets through CD36 / NOX2 – mediated inhibition of the cGMP / protein kinase G signaling cascade,” Platelets and Thrombopoiesis, vol. 125, no. 17, pp. 2693–2704, 2015.
[26] J. S. Berger et al., “Incremental Risk of Ischemic Stroke Over Time in Newly Diagnosed Heart Failure Patients Without Atrial Fibrillation,” J. Am. Coll. Cardiol., vol. 69, no. 11, Supplement, p. 739, 2017.
[27] B. Furie and B. C. Furie, “Mechanisms of Thrombus Formation,” N. Engl. J. Med., vol. 359, no. 9, pp. 938–949, 2008.
[28] T. M. Getz, C. A. Dangelmaier, J. Jin, J. L. Daniel, and S. P. Kunapuli, “Differential phosphorylation of myosin light chain (Thr)18 and (Ser)19 and functional implications in platelets,” J. Thromb. Haemost., vol. 8, no. 10, pp. 2283–2293, 2010.
[29] P. E. Stenberg, M. A. Shuman, S. P. Levine, and D. F. Bainton, “Redistribution of alpha
28
pp. 748–760, 1984.
[30] S. G. Magwenzi, C. McNeil, K. Wraith, and K. M. Naseem, “Oxidised LDL activates platelet NADPH oxidase through CD36 to promote thrombosis,” Atherosclerosis, vol. 232, no. 2, p. e6, 2014.
[31] K. Dickstein et al., “2010 Focused Update of ESC Guidelines on device therapy in heart failure: An update of the 2008 ESC Guidelines for the diagnosis and treatment of acute and chronic heart failure and the 2007 ESC Guidelines for cardiac and resynchronization therapy * Devel,”
Europace, vol. 12, no. 11, pp. 1526–1536, 2010.
[32] F. A. L. & R. R. J. Lowry O H, Rosebrough N J, “Citation Classics,” Stress Int. J. Biol. Stress, vol. 193, no. 13, p. 265, 1977.
[33] V. A. Fonseca, “Effects of β-blockers on glucose and lipid metabolism,” Curr. Med. Res. Opin., vol. 26, no. 3, pp. 615–629, 2010.
[34] K. Tsarouhas et al., “Study of insulin resistance, TNF-alpha, total antioxidant capacity and lipid profile in patients with chronic heart failure under exercise,” In Vivo (Brooklyn)., vol. 25, no. 6, pp. 1031–1037, 2011.
[35] H. Ficicilar, A. M. Zergeroglu, G. Ersoz, A. Erdogan, S. Ozdemir, and D. Tekin, “The effects of short-term training on platelet functions and total antioxidant capacity in rats,” Physiol. Res., vol. 55, no. 2, pp. 151–156, 2006.
