Pusiau kietų vaisto formų vartojamų ant odos su propolio ekstraktais technologija ir kokybės vertinimas

LIETUVOS SVEIKATOS MOKSLŲ UNIVERSITETAS

MEDICINOS AKADEMIJA

FARMACIJOS FAKULTETAS

KLINIKINĖS FARMACIJOS KATEDRA

Birutė Pockevičiūtė

Pusiau kietų vaisto formų vartojamų ant odos su propolio

ekstraktais technologija ir kokybės vertinimas

Farmacijos magistro diplominis darbas

Darbo vadovė:

Prof. K. Ramanauskienė

LIETUVOS SVEIKATOS MOKSLŲ UNIVERSITETAS

MEDICINOS AKADEMIJA

FARMACIJOS FAKULTETAS

KLINIKINĖS FARMACIJOS KATEDRA

TVIRTINU:

Farmacijos fakulteto dekanas Vitalis Briedis

Data

Pusiau kietų vaisto formų vartojamų ant odos su propolio

ekstraktais technologija ir kokybės vertinimas

Magistro baigiamasis darbas

Darbo vadovas

Prof. dr. Kristina Ramanauskienė

Recenzentas Darbą atliko

Magistrantė

Birutė Pockevičiūtė

SANTRAUKA

Birutės Pockevičiūtės magistro baigiamasis darbas. Darbo vadovė prof. Kristina Ramanauskienė. Lietuvos sveikatos mokslų universitetas, Farmacijos fakultetas, Klinikinės farmacijos katedra. Kaunas.

Ńiuo metu Lietuvoje tampa populiaru gydytis natūraliomis priemonėmis, todėl yra aktualu sumodeliuoti puskietę formą su propolio ekstraktais, kuri pasiņymėtų odos apsauginiu, antiuņdegiminiu ir antimikrobiniu poveikiu bei būtų tinkama vartoti pakankamai ilgą laiką.

Tyrimo objektas: pusiau kieti preparatai su etanoliniais propolio ekstraktais.

Darbo tikslas: Sumodeliuoti puskietes formas su propolio ekstraktais ir įvertinti jų kokybę biofarmaciniais tyrimais.

Uždaviniai: 1. Įvertinti propolio ņaliavos ir ekstrakcinio tirpiklio įtaką skystųjų propolio ekstraktų

kokybei; 2. Atlikti etnofarmacinį tyrimą apie laukinio kińkio taukų gydomąsias savybes ir numatyti jų pritaikymo galimybes vietinio poveikio puskiečių preparatų modeliavime; 3. Parinkti tinkamus pagrindus (neńiklius) ir sumodeliuoti kokybińkus puskiečius preparatus su propolio ekstraktais; 4. Atlikti pusiau kietų preparatų biofarmacinius tyrimus – veikliųjų junginių atpalaidavimą in vitro.

Metodika. Pagamintų propolio ekstraktų analizei pasirinkti fenolinių junginių nustatymas

spektrofotometriniu (kiekybińkai) ir efektyviosios skysčių chromatografijos (kiekybińkai ir kokybińkai) metodais. Sumodeliuotų pusiau kietų vaisto formų kokybės analizė atlikta nustatant pH reikńmę potenciometriniu metodu ir atliekant fenolinių junginių atpalaidavimo tyrimą in vitro.

Tyrimo rezultatai. Nustatyta, jog bevandenis lanolinas sulėtina fenolinių junginių atpalaidavimą iń

puskiečių preparatų, nes po 5 valandų tyrimo, atpalaiduojamas maņesnis kiekis veikliųjų junginių. Biofarmacinio tyrimo metu nustatyta, jog didņiausias veikliųjų junginių kiekis atsipalaiduoja, kai sudėtyje nėra bevandenio lanolino. Taip pat in vitro tyrimas parodė, kad skystasis propolio ekstraktas nėra tinkamas įvedimui į hidrofobinius ir emulsinius V/A tipo pagrindus. Tinkamas veikliųjų junginių kiekis atpalaiduojamas iń puskiečių kompozicijų, kai veiklioji medņiaga įvedama tirńtojo propolio ekstrakto forma.

Išvados. Didņiausias fenoliniu junginių kiekis (20,12 proc.), atpalaiduojamaas iń puskietės formos,

SUMMARY

Birutė Pockevičiūtė‘s Master‘s Thesis. Work advisor – prof. Kristina Ramanauskienė. Department of Clinical Pharmacy in Pharmacy Faculty, Medicine Academy of Lithuanian University of Health Sciences, Kaunas.

Currently, a treatment by natural means is becoming in Lithuania, therefore it is important to model the semi-hard form with extracts of propolis which would have the skin protective, anti-inflammatory and antimicrobial effects and would be suitable for a sufficiently long time use.

The subject: semi-solid preparations with ethanolic extracts of propolis.

Aim: to model the semi - hard forms with extracts of propolis and evaluate the quality by

biopharmaceutical research.

Objectives: 1. Evaluate the influence of propolis raw and extractive solvent to the quality of liquid

propolis extracts; 2. Perform an etnopharmatical study on the therapeutic features of wild rabbit oil and foresee the possibilities of their adaptation in modelling the local effect semi- solid preparations; 3. Select the suitable basics (carriers) and model the high - quality semi-soft products with propolis extracts; 4. Carry out the biopharmaceutical researches of semi - solid preparations, the release of the active compounds in vitro.

Methods. Phenolic compounds detection spectrophotometric (quantitatively) and efficient liquid

chromatography (quantitatively and qualitatively) methods were chosen in the analysis of produced propolis extracts. The analysis of modelled semi - solid pharmaceutical forms quality was done by determining the pH significance in the potentiometric method and by doing the research of phenol compounds release in vitro.

Results. It was found that anhydrous lanolin slows down the release of phenolic compounds from

semi-hard products, because after 5 hours of study, smaller amount of active compounds is released. Biopharmaceutical research has shown that the greatest amount of active compound is released when no anhydrous lanolin is in the content. Also, in vitro study showed that liquid propolis extract is not suitable for introduction to a hydrophobic and W/O type emulsion basics. The suitable amount of active compounds is released from the semi-hard compositions when the active substance is introduced in the form of thick extract of propolis.

Conclutions. The maximum amount of phenol compounds (20.12 percent.) Is released from the semi -

hard form which is based on the wild - rabbit fat, and the active substance introduced as the thick extract form.

PADĖKA

Uņ suteiktas kokybińkas darbo sąlygas, teorinę ir praktinę pagalbą bei materialinę bazę atlikti mokslinį tiriamąjį darbą tema „Pusiau kietų vaisto formų vartojamų ant odos su propolio ekstraktais technologija ir kokybės vertinimas“, dėkoju LSMU MA, Klinikinės farmacijos katedros prof. K. Ramanauskienei, prof. V. Briedņui, dr. M. Ņiliui ir kolektyvui.

SANTRUMPOS

o

C – laipsniai Celsijaus

ESC – efektyvioji skysčių chromatografija HSV – Herpes simplex virusas

MVA – JAV maisto ir vaistų administracija

p - duomenims patikrinti taikomas statistinio reikńmingumo lygmuo pH – vandenilio potencialas

proc. – procentai

SPSS - Statistical Package for the Social Science –Statistinių duomenų apdorojimo kompiuterinė programa

TURINYS

ĮVADAS ... 9

DARBO TIKSLAS IR UŅDAVINIAI ... 10

Temos naujumas ... 11

Praktinė reikńmė ... 11

1.LITERATŪROS APŅVALGA ... 12

1.1.Propolis, jo cheminė sudėtis ... 13

1.2.Propolio farmakologinės savybės ... 14

1.3.Lietuvińki propolio preparatai ... 15

1.4.Propolis profilaktikoje ir gydymo praktikoje ... 18

1.5.Tepalų charakteristika ir jų klasifikacija ... 20

1.6.Baltasis vazelinis ... 21

1.7.Laukinio kińkio taukai ... 21

1.8.Bevandenis lanolinas ... 23

1.9.Reikalavimai tirpikliams ... 23

2.TYRIMŲ OBJEKTAS IR METODAI ... 25

2.1. Tyrimų objektas ... 25

2.2. Tyrimo reagentai ir medņiagos ... 25

2.3. Tyrime naudota įranga ... 25

2.4. Preparatų technologijų metodikos ... 26

2.4.1. Skystųjų etanolinių propolio ekstraktų gamyba ... 26

2.4.2. I grupės eksperimentinių puskiečių formų su propolio produktais modeliavimas įterpiant laukinio kińkio taukus ... 26

2.4.3. II grupės eksperimentinių propolio produktų puskiečių formų modeliavimas ... 27

2.4.4. III grupės eksperimentinių puskiečių formų su propolio produktais modeliavimas įterpiant skystąjį propolio ekstraktą ... 28

3.1.Bendro fenolinių junginių kiekio nustatymas skystuosiuose propolio ekstraktuose ... 30

3.2. Propolio produktų analizė efektyviąja skysčių chromatografija ... 30

3.3. I, II ir III grupių puskiečių preparatų pH nustatymas ... 31

3.4. Propolio fenolinių junginių atpalaidavimo iń eksperimentinių puskiečių formų in vitro tyrimai ... 31

3.5.Bendro fenolinių junginių kiekio nustatymas eksperimentinėse puskietėse formose su propoliu ... 31

3.6.Statistinis tyrimų rezultatų vertinimas ... 32

3.7.Sociologinio tyrimo metodas ... 32

4.TYRIMŲ REZULTATAI IR JŲ APTARIMAS ... 34

4.1.Propolio produktų kokybinės ir kiekybinės sudėties įvertinimas ... 34

4.2. Propolio produktų veikliųjų junginių kiekio nustatymas efektyviosios skysčių chromatografijos metodu...36

4.3.Pusiau kietų vaisto formų su propolio produktais pagrindo komponentų parinkimas ... 38

4.3.1. Laukinio kińkio taukų paplitimas Dzūkijos regione ... 40

4.3.2. Laukinio kińkio taukų vartojimas Dzūkijos regione ... 40

4.3.3. Bedradarbiavimas su visuomenės sveikatos specialistais dėl laukinio kińkio taukų vartojimo .... 42

4.4.Puskiečių formų su propolio produktais pH reikńmės vertinimas ... 43

4.5.Puskiečių formų su propolio produktais biofarmacinis tyrimas ... 44

4.5.1. I grupės puskiečių formų biofarmacinis tyrimas ... 44

4.5.2. II grupės sumodeliuotų puskiečių formų biofarmacinis tyrimas ... 45

4.5.3. III grupės puskiečių formų biofarmacinis vertinimas ... 46

IŃVADOS ... 49

REKOMENDACIJOS ... 50

LITERATŪROS SĄRAŃAS ... 51

PUBLIKACIJOS DARBO TEMA ... 57

PRIEDAS NR. 1 ... 58

PRIEDAS NR. 2 ... 59

PRIEDAS NR. 4 ... 67

9

ĮVADAS

Ņmogaus oda pasiņymi mechaninėmis bei apsauginėmis funkcijomis. Odos elastingumas ir lankstumas priklauso nuo lipidų, vandens balanso, tirpstančių vandenyje higroskopinių medņiagų. Neigiamos aplinkos sąlygos – UV spinduliai, patalpų mikrobinė tarńa, oro uņterńtumas, skatina kurti naujus apsauginius odą tausojančius, natūralios kilmės kosmetinius preparatus, į kurių sudėtį įeina propolio veiklieji junginiai.

Puskiečių preparatų modeliavime plačiai taikomi emulsiniai pagrindai, baltasis vazelinas, bevandenis lanolinas. Mokslinėje literatūroje taip pat randama apie gyvūninės kilmės puskiečių preparatų pagrindus: kiaulų, ņąsų taukus [50,51]. Aktualu panagrinėti ir kitas medņiagos kosmetinių preparatų gamyboje, kurios naudojamsos liaudies medicinoje. Viena iń medņiagų gali būti laukinio kińkio taukai [19], kurie taikomi kaip priemonė ńunvočių, furunkulų, įtrūkimų, pūlingų ir negyjančių ņaizdų gydymui. Taip pat aktualu įvertinti jų kokybę biofarmaciniais tyrimais.

Daņniausiai puskiečių preparatų kokybė nustatoma vertinant tapatybę, kiekybinę analizę, homogenińkumą, reologinias savybes. Svarbią vietą naujai modeliuojamų pusiau kietų preparatų kokybės vertinime uņima biofarmaciniai tyrimai – veikliųjų junginių atpalaidavimo tyrimas in vitro ir skarbos į/pro odą ex vivo tyrimai [42]. Biofarmaciniai tyrimai leidņia įvertinti farmacinių veiksnių - vaisto formos, pagalbinių medņiagų, technologijos bei veikliosios medņiagos savybių, daromą įtaką modeliuojamo preparato kokybei. Todėl aktualu atliekant naujų pagalbinių medņiagų paieńką puskiečių pagrindų gamybai, jų tinkamumą pagrįsti atliekant veikliųjų medņiagų atpalaidavimo tyrimą iń puskiečių sistemų in vitro. Svarbu naujų pagrindų kompozicijų tinkamumą palyginti biofarmacinio tyrimo rezultatais su nuo seno ņinomais pagrindais, kurių pagrindiniai komponentai yra baltasis vazelinas, bevandenis lanolinas, ir įvertinti jų kaip neńiklių tinkamumą vaistinių medņiagų atpalaidavimui iń puskiečių preparatų.

Vertinant pagrindų įtaką veikliųjų medņiagų atpalaidavimui kaip veiklioji medņiaga pasirinki propolio ekstraktai dėl plačiai mokslinėje literatūroje aprańomo biologinio poveikio: antimikrobinio, antivirusinio, antigrybelinio, prieńvėņinio, antioksidacinio, hepatotoksinio, analgetinio [3,8,10,23,24,48]. Tyrimais siekiama sumodeliuoti preparatą tinkamą vartoti ant odos.

10

DARBO TIKSLAS IR UŢDAVINIAI

Tyrimo problema: Apņvelgus mokslinę literatūrą randama daug duomenų apie įvairių ńalių

propolio kokybę, veikliųjų junginių įvairovę [6,10]. Tačiau nėra daug palyginamųjų duomenų tarp lietuvińko propolio ir kitų ńalių propolio ņaliavų. Be to trūksta liaudies medicinoje plačiai taikomų medņiagų kokybės pagrindimo moksliniais tyrimais.

Aktualu sprendņiant problemą ińplėsti lietuvińko propolio ekstraktų kokybės palyginamuosius tyrimus su kitų ńalių propolio ekstraktais ir ińvystyti naujas puskietes kompozicijas su propoliu bei atlikti jų biofarmacinius tyrimus in vitro. Mokslinėje literatūroje yra tyrimų duomenų apie propolio puskiečius preparatus, kurių pagrindus sudaro bičių vańkas, bevandenis lanolinas, baltasis vazelinas, taukmedņio sviestas, tačiau yra maņai duomenų apie natūralios kilmės medņiagas plačiai taikomas liaudies medicinoje bei puskiečių preparatų gamyboje [34,35]. Tyrimo problemai spręsti sudarytas veiklos planas (1 pav).

1 pav. Planuojamų vykdyti tyrimų planas

Tyrimo objektas: pusiau kieti preparatai su etanoliniais propolio ekstraktais.

Darbo tikslas: Sumodeliuoti puskietes formas su propolio ekstraktais ir įvertinti jų kokybę

biofarmaciniais tyrimais in vitro.

Uţdaviniai:

1. Įvertinti propolio ņaliavos ir ekstrakcinio tirpiklio įtaką skystųjų propolio ekstraktų kokybei ir atrinkti tinkamą ekstraktą kaip veikliąją medņiagą propolio puskiečių preparatų modeliavimui.

11

2. Atlikti sociologinį tyrimą apie laukinio kińkio taukų gydomąsias savybes ir numatyti jų pritaikymo galimybes vietinio poveikio puskiečių formų modeliavime.

3. Parinkti tinkamus pagrindus (neńiklius) ir sumodeliuoti kokybińkus puskiečius preparatus su propolio ekstraktais.

4. Atlikti puskiečių kompozicijų biofarmacinius tyrimus – veikliųjų junginių atpalaidavimą

in vitro.

Temos naujumas

Plačiai taikomi puskiečiai propolio preparatai, turi gausią pritaikymo sritį kosmetinėse priemonėse, odos ligų gydyme. Juose visuose dominuoja ferulo ir p - kumaro rūgńtys, kurios gali būti vertinamos kaip kokybės ņymenys analizuojant propolio ekstraktų kokybę [35]. Propolio puskiečių kompozicijų sudėčių kokybė parenkama remiantis biofarmacinias tyrimais in vitro, nustatant veikliųjų junginių atpalaidavimą iń puskiečių preparatų pagrindų. Atlikus sociologinį etnofarmacinį tyrimą nustatyta, kad laukinio kińkio taukai plačiai taikomi Dzūkijos regione. Pagaminti puskiečių preparatų pagrindai, kuriuose vienas iń komponentų yra laukinio kińkio taukai, o veiklioji medņiaga – propolio ekstraktas. Remiantis atliktais biofarmacinais tyrimais galima teigti, jog laukinio kińkio taukai yra tinkamas komponentas sumodeliuotoje kompozicijose, nes nesustabdo veikliųjų junginių atsipalaidavimo iń puskiečių formų.

Praktinė reikšmė

Mokslinėje literatūroje pateikta maņai duomenų apie kazachstanietińkų etanolinių propolio ekstraktų cheminias sudėtis. Palyginimui, iń įvairių Kazachstano ńalies vietovių surinktų ņaliavų pagamintais skystaisiais propolio ekstraktais, imti lietuvińki etanoliniai propolio ekstraktai. Ekstraktų tyrimai atlikti ESC, spektrofotometrinės analizės metodais. Geriausi etanoliniai propolio ekstraktai įterpiami į ńiuos komponentus: baltajį vezeliną, laukinio kińkio taukus, bevandenį lanoliną ir ińgrynintąjį vandenį. Sumodeliuotos kompozicijos analizuotos in vitro tyrimais, tiriant fenolinius junginius spektrofotometriniu analizės metodu.

12

1. LITERATŪROS APŢVALGA

1.1. Propolis, jo cheminė sudėtis

Viena vertingiausių propolio sudedamųjų dalių yra dervos, kuriose vyrauja polifenoliniai junginiai (fenolinės rūgńtys bei jų esteriai, flavonoidai), alifatinės ir aromatinės rūgńtys bei jų esteriai, terpenoidai. Kitą dalį sudaro vańkas, eteriniai aliejai, ņiedadulkės. Dauguma terpenoidų yra mono-terpenai ir seskvimono-terpenai, kurių esama įvairių augalų eterinių aliejų sudėtyje, pvz., azulenas, α-bizabololis, citralis. Propolio sudėtis nėra pastovi ir tiesiogiai priklauso nuo augalų, iń kurių bitės surenka dervas, įvairovės. Nustatyta, jog propolio ņaliavoje yra 30% vańko, 50% dervų, 10% eterinių aliejų, 5% ņiedadulkių ir 5% mineralinių medņiagų (Zn, Cu, Mn, Ni, K, Ca, Se), taip pat biologińkai aktyvių vitaminų (A, C, E, B1, B2, B3, B6) [1,2,4,5,6,8,23].

Laisvų alifatinių ir aromatinių rūgńčių propolyje sutinkama retai. Vyrauja ńių rūgńčių esteriai – fenilmetilacetatas, etillauratas, etiloleatas, etilstearatas, benzilcinamatas, benzilbenzoatas, dibutilftalatas ir kt. Terpenoidų klasės junginių randama augalų eterinių aliejų sudėtyje (pavyzdņiui, azulenas ir α - bizabololis būdingi Chamomila officinalis (Koch.), citralis – Melisa officinalis (L.), o α - farnezenas, α - amorfenas, kariofilenas ir kt. randami daugelio augalų (Mentha piperita (L.), Melisa

officinalis (L.), Origanum vulgare (L.), Juniperus communis(L.), Salvia officinalis (L.), Ocimum basilicum(L.), Rosmarinus officinalis (L.) eterinių aliejų sudėtyje. Suņeisti augalai ińskiria balzmus –

dervingas medņiagas su eteriniais aliejais, kuriuos bitės panaudoja propolio gamybai. Pagal terpeninių junginių gausumą propolio sudėtyje, galima spręsti apie augalų, iń kurių bitės surinko medņiagas propolio gamybai, įvairovę [9,23]. 1 lentelėje pateiktos iń įvairių pasaulio krańtų surinktos propolio ņaliavos ir jų cheminės sudėtys.

1 lentelė. Propolio rūšys ir cheminė sudėtis [6,10,11,39]

Propolio rūńis Geografinė padėtis Pagrindiniai augalai Pagrindinės biolgińkai aktyvios medņiagos Europos (,,tuopų‘‘)

tipas

Europa, Ńiaurės Amerika, vidutinės klimato juostos Azijos regionai, Naujoji Zelandija Tuopos (Populus spp., daņniausiai P. Nigra L.) Fenolinės rūgńtys ir jų esteriai, flavonai, flavononai

13

Ņaliasis propolis Brazilija Varva (Bccharis spp., daņniausiai B. Dracunculifolia) Diterpeninės rūgńys, preniluotos p – kumaro rūgńtys ,,Kanarų‘‘ tipo propolis

Kanarų salos neņinoma flurofurano lignanai

,,Ramiojo vandenyno‘‘ tipo proplis Ramiojo vandenyno regionas (Taivanas, Okinava)

neņinoma Preniluoti flavanonai

Raudonasis (,,kluzijos‘‘ tipo)

propolis

Venesuela, Kuba Kluzija (Clusia spp., Kuboje daņniausia C. Rosea, o Venesueloje – C. Major ir V. Minor) Polipreniluoti benzofenonai Rusijos (,,berņų‘‘) tipo propolis

Rusija Berņai (daņniausia

Betula verrucosa)

Flavonai, flavonoliai

Argentinos tipo propolis

Argentina neņinoma Fenolinės rūgńtys ir flavanoidai

Propolio rūńių klasifikacijoje minimos tik labiausiai ińtirtos jo rūńys. Lietuvińkas propolis priskiriamas prie Europos (,,tuopų‘‘) tipo. Jame daugiausia randama ńių fenolinių junginių: flavonoidų (chrizinas, galanginas, kempferolis, kvercetinas, ramnetinas, pinostrobinas ir kt.), fenolinių rūgńčių (p - kumaro, ferulo, kavos, vanilo rūgńčių ir kt.), fenolinių rūgńčių esterių (benzilkofeatų, fenetikofeatų ir kt.), fenolinio aldehido vanilino [9,11,12,35].

Pastaruosius deńimtmečius pradėta vis labiau tyrinėti propolio ņaliavą įvairiais naujos kartos analizės metodais – masių spektrometrija, kolorimetrija, kapiliarinė elektroforezė, kapiliarine skysčių chromatografija ir kt. Kadangi, senesnės analizės metodai, kuriais buvo nustatomi propolio fenoliniai junginiai, nėra informatyvūs [36,37].

14

1.2. Propolio farmakologinės savybės

Propolio veikimo spektras dėl kokybinės ir kiekybinės sudėties, kurioje vyrauja biologińkai aktyvūs junginiai yra gana platus [6,9,11,12,35,39]: antimikrobinis (ņudančiai veikia daugiau nei 100 mikrobų), antivirusinis, antigrybelinis [8,23,24,38,42,52], prieńuņdegiminis, vietińkai anestezuojantis, antioksidacinis ir biostimuliuojantis [3]. Propolis taip pat pasiņymi skausmą malńinančiu ir audinių regeneraciją skatinančiu poveikiu. Bičių pikis naikindamas mikroorganizmus, maņina arba visai panaikina uņdegimus bei skausmą [23,38]. Be to, jis naikina kai kuriuos grybelius ir virusus, didina imunologinį organizmo reaktyvumą [24,52]. Farmakologinės propolio savybės priklauso nuo jo sudėties.

Mokslinių tyrimų dėka nustatytas propolio itin stiprus antimikrobinis poveikis [38]. Būtent dėl to, bičių pikis liaudies medicinoje vadinamas natūraliu gamtiniu antibiotiku, kuris inhibuoja (slopina) daugumą mikroorganizmų, virusų ir grybelių [8,23,24,38,52]. Antimikrobiniu poveikiu ypatingai pasiņymi gausioje bičių pikio sudėtyje esantys flavanoidai: pinacembrinas, galanginas ir pinostobrinas [23,38,42]. Ńie flavanoidai veikia įvairaus tipo bakterijas. Stipriau veikia gramteigiamas bakterijas: Staphylococcus aureus, Streptococus faecalis, Enterococcus faecalis [42], silpnesniu poveikiu pasiņymi veikdami gramneigiamas bakterijas (Escherichia coli) [25,38]. Moksliniais tyrimais nustatyta, kad naudojant kompleksińkai propolio preparatus kartu su kitomis gydymo priemonėmis, pavyzdņiui, antibiotikais, antinavikiniais vaistais, įvairių ligų gydymas sutrumpėja, o atsparumas mikroorganizmams padidėja, dėl to organizme sumaņėja nepageidaujamų reakcijų [42]. Be to vartojant propolio preparatus nesunaikinama skrandņio bei ņarnyno mikroflora. Taip pat neińsivysto mikroorganizmų rezistentińkumas [23].

Propolio sudėtyje esančios aktyvios medņiagos (kavos rūgńtis, kvercetinas, feniletilkofeatas, kempferolis) pasiņymi stipriu antioksidaciniu aktyvumu, tačiau ņaliavoje esantys fenoliniai junginiai veikia nevienodai. Propolio antioksidacinis aktyvumas pasireińkia sąveikaujant fermentams, tuomet sujungiami laisvieji radikalai su aktyviomis medņiagomis. Laisvosios alifatinės rūgńtys, pasiņyminčios laisvųjų radikalų surińimu, maņina viduląstelinių riebalų oksidacijos procesus. Dėl ńios prieņasties ląstelėje lėtėja senėjimo procesai [8,23,26,38].

Imunomoduliacinis poveikis priklauso nuo propolio ņaliavos geografinės vietovės ir augalų įvairovės. Imunomoduliaciniams procesams organizmo ląstelėse reikalingi fenetilkofeatas, artepilinas C, pinocembrinas, izoflavanoidai, kurių randama propolio sudėtyje [47]. Jie pasiņymi stipriu poveikiu, be to dalyvauja T limfocitų, antikūnų produkcijos, citokinų ir periferinio kraujo leukocitų reguliavimo procesuose. Bičių pikis efektyviai kovoja prień grybelius, bakterijas bei virusus [23,47,52].Mokslinėje

15

literatūroje plačiai aprańomas propolio veikliųjų junginių poveikis stiprinantis komplementinį ir fagocitinį aktyvumą. Taip pat jis padidina baltymo properdino kiekį kraujyje, kuris stiprinančiai veikia komplemento susidarymo procesus ir agliutininų biosintezę, imunizuojant bakteriniais kūneliais. Be to aktyvina uņkrūčio liaukos veikimą [23].

Propolyje esantis flavanoidas galanginas pasiņymi ne tik oksidacinėmis, bet ir prieńvėņinėmis savybėmis bei vartojamas chemoterapijos profilaktikoje [29]. Diterpenas klerodonas slopina vėņinių kepenų, plaučių ląstelių augimą [23]. Etanolinis propolio ekstraktas kartu su prieńvėņiniais preparatais sustiprina glioblastomų, gaubtinės ir tiesiosios ņarnos melonomų, krūties vėņio gydymo poveikį [27,30]. Propolio sudėtyje esantis artepilinas C - bioaktyvus komponentas, pasiņymintis citotoksiniu poveikiu virńkinamojo trakto ir prostatos vėņinėms ląstelėms, plaučių, storosios ņarnos karcinomoms [23,28]. Propolis nėra toksińkas ir nepasiņymi kancerogeninėmis savybėmis.

Taip pat propolis veikia anestezuojančiai, dėl savo sudėtyje esančių monoterpenoidų (lakių junginių), kurie sudaro 80 – 100 proc. eterinių aliejų [23,39].

Propolis pasiņymi antiuņdegiminiu aktyvumu ir gali būti naudojamas lėtiniais bei ūminiais ligos atvejais [23]. Jame esančios fenolinės rūgńtys inhibuoja COX – 1 ir COX – 2 izofermentus ir taip slopina prastaglandinų ir leukotrienų aktyvumą, to pasekoje lėtėja uņdegiminis procesas [41].

Taip pat įrodytas antivirusinis poveikis. Propolio veiklieji junginiai (chrizinas, kemferolis) geba suaktyvinti virusų inhibitorius, kurių veikimas analogińkas interferonui. Propolyje esantys flavonoidai inhibuoja HSV, A ir B tipo gripo virusus bei rotovirusus [8,23].

Propolio hepatoprotekcinis veikimas siejamas su radikalus naikinančiu aktyvumu. Dėl to apsaugomi hepatocitų DNR, kiti komponentai nuo ņalingo radikalų poveikio. Taip pat saugomi baltymai, su kuriais gali jungtis hepatoksinės medņiagos. Atlikus ińsamią mokslinę literatūros analizę, nustatyta, kad hepatoprotekcinėmis savybėmis pasiņymi etanoliniai, metanoliniai ir vandeniniai propolio ekstraktai [23]. Propolio sudėtyje esančios metil 3,4 – di – O kafeolikvinatų, 3,4 – di O -kafeolikvininų rūgńtys ir metil - 4,5 – di – O - kafeoilkvinatų, 3,5 – di – O - kefeoilkvininų rūgńtys yra aktyvios medņiagos, maņinančios alkoholio sukeltus kepenų paņeidimus (maņėja aspartato aminotransferazės kiekis), taip pat sumaņina acetaminofeno citotoksinį poveikį kepenims, gerina kepenų funkcijos apsinuodijus gyvsidabriu, aliuminio (III) chloridu, anglies (IV) chloridu, 2,3,7,8 – tetrachlorodibenzo – p - dioksinu [10,23,48].

16

Lietuvoje vis labiau populiarėja preparatai, kurių sudėtyje yra propolio. Ńie preparatai naudojami kvėpavimo takų funkcijai bei atsikosėjimui gerinti, pasiņymi audinių regeneraciją skatinančiu ir imunitetą stiprinančiu poveikiu. Taip pat vartojami burnos gleivinės paņeidimų ir gerklės uņdegimų profilaktikoje bei gydyme. Lietuvos vaistinėse randamų preparatų su propoliu asortimentas nėra platus.

Maisto papildai:

 Bronchos pastilės su medumi N12 – maisto papildo kompozicijoje yra 20 ņolelių

ekstraktų ir propolio ņaliavos. Preparato gamintojas - ,,Acorus calamus‘‘. Ńios pastilės vartojamos kvėpavimo takų funkcinjai palengvinti, burnos gleivinės ir gerklės sudirginimui malńinti.

 Maisto papildas Propolio kapsulės 290mg N40 – preparato sudėtyje yra 290 mg sauso

propolio ekstrakto. Gamintojas - UAB „Medicata Filia“. Maisto papildas skirtas imunitetui stiprinti, infekcinių ligų, gripo, kvėpavimo takų, virńkinamojo trakto, ginekologinių, ńirdies ir kraujagyslių ligų profilaktikai. Propolio fenolinės rūgńtys skatina tulņies ir ńlapimo gamybą bei ińsiskyrimą, stiprina kapiliarų sieneles, pasiņymi uņdegimą maņinančiu poveikiu.

 Promentolis plius čiobrelis N60 – sudėtyje yra standartizuoto propolio ekstrakto, turinčio

ne maņiau 10 % fenolinių junginių. Gamintojas – UAB ,,Medicata filia‘‘. Vartojamas papildyti mitybą propolio fenoliniais junginiais ir vitaminu C. Pasiņymi antiuņdegiminiu, antivirusiniu, antibakteriniu poveikiu. Taip pat naudojamas atsikosėjimui gerinti.

 Čiobrelių ekstraktas plius propolis ir vitaminas C N20 – sudėtyje 200 mg propolio (4

tabletėse). Gamintojas - ,,Medigate‘‘. Vartojimas gerklės gleivinės sudirginimui malńinti bei gerinti atsikosėjimą. Be to ńi kompozicija pasiņymi skatinančiu audinių regeneraciją bei imunitetą stiprinančiu poveikiu.

 Aprotusinas 100 ml – sudėtyje yra nestandartizuoto propolio vandeninio ekstrakto.

Gamintojas UAB ,,Medicata filia‘‘. Vartojamas atsikosėjimui palengvinti, gerklės uņdegimo gydymui, burnos gleivinės prieņiūros profilaktikoje, dezinfekuoti kvėpavimo takus.

 Imunomoss mikstūra 100 ml – sudėtyje yra 30 proc. etanolinio propolio ekstrakto.

Gamintojas - UAB „Innovative Pharma Baltics“. Mikstūra vartojamui imuniteto stiprinimui, organizmą papildyti mineralinėmis medņiagomis bei vitaminais.

 Propolio lašai 30 ml – sudėtyje yra etanolinio propolio ekstrakto. Gamintojas - UAB

,,Medicata Filia‘‘. Propolio lańus galima vartoti infekcijų profilaktikai. Taip pat esant ińsausėjusiai

17

 Propolis meduje 140 g – maisto papildo sudėtyje yra skysto propolio ekstrakto.

Gamintojas – UAB ,,Medicata Filia‘‘. Vartojamas organizmą papildyti biolgińkai aktyviomis medņiagomis.

 Bičių duonelė su propoliu ir medumi 140 g – sudėtyje yra skystojo propolio ekstrakto.

Gamintojas – UAB ,,Medicata Filia‘‘. Preparatas naudojamas imuniteto stiprinimui, cholesterolio maņinimui, aterosklerozės profilaktikai, audinių regeneracijai, kraujospūdņio reguliavimui, ńirdies ir kraujagysklių veiklai gerinti.

 Bičių surinktos žiedadulkės su propoliu ir medumi 140 g - sudėtyje yra skystojo

propolio ekstrakto. Gamintojas – UAB ,,Medicata Filia‘‘. Ńi kompozicija skatina odos įtrūkimų, paraudimų, negyjančių ņaizdų, opų gyjimą. Pasiņymi antibakteriniu, antivirusiniu, antiuņdegiminiu, imunomoduliaciniu poveikiu.

 Propolio aliejus 15 ml – sudėtyje yra aliejinio propolio ekstrakto. Gamintojas – UAB ,,

Medicata Filia‘‘. Vartojamas pragulų, įbrėņimų, sunkiai gyjančių ņaizdų, opų gydymui. Taip pat

faringito, laringito, rinito profilaktikoje.

Arbatos:

 Medaus arbata su propoliu ir žolelėmis. Peršalus 140 g. Gamintojas – UAB ,,Medicata

Filia‘‘. Arbata dezinfekuoja kvėpavimo takus, lengvina atsikosėjomą, malńina gerklės skausmus. Ji

veikia antiuņdegimińkai, antibakterińkai prień mikroorganizmus. Liepų ir ńeivamedņio ņiedų preparatai pasiņymi raminančiu, prakaitavimą skatinančiu, karńčiavimą maņinančiu, atsikosėjimą gerinančiu poveikiu.

 Medaus arbata su propoliu ir žolelėmis. Vakaras 140 g. Gamintojas – UAB ,,Medicata

Filia‘‘. Preparatas pasiņymi raminančiu, nuskausminančiu poveikiu. Be to tinka vartoti esant miego

sutrikimams, nerimui.

 Medaus arbata su propoliu ir žolelėmis. Imunitetui 140 g. Gamintojas – UAB

,,Medicata Filia‘‘. Vartojama imunitetui stiprinti, gerinti medņiagų apykaitą. Taip pat ńi kompozicija

papildo organizmą biologińkai aktyviomis medņiagomis. Saugo organizmą nuo bakterijų bei virusų sukeltų susirgimų.

Kosmetiniai preparatai

 Kamparolis (šaldantis propolio ekstraktas) 20 g – sudėtyje yra propolio ekstrakto.

Gamintojas – UAB ,,Medicata Filia‘‘. Balzamas vartojamas higieninei odos prieņiūrai, perńalimų, odos nudegimų, sumuńimų gydymui.

 Propolio medetkų tepalas 20 g - sudėtyje yra propolio ekstrakto. Gamintojas – UAB

,,Medicata Filia‘‘. Vartojamas suskirdusios odos prieņiūrai. Preparate esantys komponentai skatina

18

 Propolio tepalas 20 g – sudėtyje yra propolio. Gamintojas - UAB ,,Medicata Filia‘‘.

Tepalas vartojamas higieninei odos prieņiūrai: pleiskanojimui, nieņuliui, odos sustoręjimui.

 Propolio tepalas su cinku 20 g – sudėtyje yra propolio. Gamintojas – UAB ,,Medicata

Filia‘‘. Tepalas naudojamas suaugusiųjų ir vaikų suskirdusios odos prieņiūrai. Esant ińńutimam,

spuogams. Taip pat skatina audinių atsinaujinimą bei apsaugo nuo infekcinių susirgimų. Ypatingai ńi kompozicija tinka odos ńlapiavimui, sustorėjimui, įtrūkimams gydyti.

 Raminta (Raminamasis propolio ekstraktas) 20 g – dermatoloinio preparato sudėtyje yra

propolio, ramunėlių, triskiaučių lakińių, berņų lapų ekstraktų bei kokoso aliejaus. Gamintojas - UAB

,,Medicata Filia‘‘. Tepalas pasiņymi antiuņdegiminiu, antimikrobiniu, antivirusiniu poveikiu.

Vartojamas suskirdusiai, raustančiai, pleiskanojančiai odai. Be to ńį preparatą galima naudoti psoriazės, atopinio bei seborėjinio dermatito, egzemos, nieņų profilaktokoje ir gydymo praktikoje.

Nereceptiniai vaistiniai preparatai:

 Propolis MDF 300 mg/ml – sudėtyje yra propolio spiritinio tirpalo. Gamintojas – UAB

,,Medicata Filia‘‘. Tirpalas vartojmas burnos gleivinės uņdegimui, faringitui, tonzilitui, ūminiam ir

lėtiniam periodontitui gydyti. Taip pat naudojamas dezinfekuoti kvėpavimo takus, gydyti burnos gleivinės įtrūkimus.

Akių lašai

 Oculocin Propo 5 ml (0,5ml N10) – sudėtyje yra propolio, alavijų, ramunėlių.

Gamintojas – Origmed. Sterilūs akių lańai pasiņymi antiseptiniu ir prieńuņdegiminiu poveikiu. Maņina nuovargį bei sudirgimą. Pasiņymi drėkinamuoju poveikiu.

Apņvelgus vaistinėse lietuvińkų preparatų su propoliu asortimentą galima teigti, kad dauguma preparatų su tiriamąja medņiaga vartojami per os. Itin maņai sutinkama preparatų, kurie vartojami vietińkai. Todėl yra aktualu sumodeliuoti naujų sudėčių puskietes formas, kurios pasiņymėtų antiuņdegiminiu, prieńvirusiniu, antigrybeliniu, apsauginiu poveikiu bei įvertinti jų kokybę biofarmaciniais tyrimais [46].

1.4. Propolis profilaktikoje ir gydymo praktikoje

Atlikus ińsamią literatūros analizę galima teigti, jog propolis ņmogaus organizmui turi itin teigiamą poveikį. Jis gali būti plačiai taikomas profilaktikoje bei gydymo praktikoje [23]. Moksliniais tyrimais nustatyta, kad propolio farmakologinis poveikis pasireińkia dėl cheminėje sudėtyje esančių

19

Propolis profilaktikos ir gydymo praktikoje

biologińkai aktyvių junginių: fenolinių rūgńčių – vanilo, kavos, p – kumaro, ferulo, flavanoidų, eterinių aliejų, mineralinių medņiagų, vitaminų [1,2,4,5,6,8,23]. Mokslinės literatūros apņvalga pateikiama sudarytoje schemoje:

2 pav. Mokslinės literatūros apžvalgos schema

Propolio produktai naudojami kartu su antibiotikais, cheminiais preparatais kaip kompleksinė priemonė gydant literatūros apņvalgos schemoje pateiktas ligas [23,42]. Propolis sustiprina gydomąjį poveikį bei maņina vaistų ńalutinius reińkinius [23]. Mokslinėje literatūroje nėra duomenų apie

Akių ligos

 Akių nudegimams

 Ragenos opoms

 Mikrobiniams ir

virusiniams keratitams

Ausų nosies gerklės gydyme

 Ūminis vidurinės ausies uņdegimamas  Ūminis rinosinusitas  Faringotonzilitas Chirurginės ligos  Sunkiai gyjančioms ņaizdos  Nudegimai Infekcinės ligos  Slopina ŅIV – 1 replikaciją ir moduliuoja in vivo imuninį atsaką  Tymai  Juostinė pūslelinė  Herpes simplex virusas  Makńties ir gimdos paņeidimai  A ir B gripo virusas

Kvėpavimo takų ligos

 Plaučių tuberkuliozė  Pleuritas  Plaučių uņdegimas  Sinusitas  Faringitas Neurodegeneracinės ligos  Alzhaimerio liga  Reumatoidinis artritas  Degeneracinė stuburo liga Odos ligos  Seborėjinis, atopinis dermatitas  Epidermiofitija  Piodernija  Egzema  Neurodermitas  Psoriazė  Nuńalimai  Nudegimai  Odos įtrūkimai  Pūlingos ņaizdos

 Trofinės blauzdų opos

 Spindulinės terapijos paņeistas pavirńius

 Odos grybelis

Onkologiniai susirgimai

 Įvairių rūńių vėņiai

 Piktybiniai ir nepiktybiniai navikai Urologinės ligos  Lėtinis prostatitas  Prostatos adenoma Ginekologinės ligos  Gimdos kaklelio erozijos  Bakteriniai, grybeliniai, trichomonų sukelti vaginitai  Kolpitai

Širdies ir kraujagyslių sistemos ligos  Aterosklerozė  Arterinė hipertenzija  Miokardo infarktas  Makroangiopatija   Vaikų ligos  Kataralinis sindromas  Virńkinamojo trakto, ņarnyno infekcija

Virškinamojo trakto ligos

 Ūminis ir lėtinis kolitas

 Enteritai  Skrandņio ir dvylikapirńtės ņarnos opaligė Odontologiniai susirgimai  Kariesas  Periodontitas  Perikornitas  Gingivitas  Paradontozė  Gomurio opos

20

propolio sukeliamą toksinį poveikį. Todėl propolio produktai saugūs vartoti ligų profilaktikoje ir gydymo praktikoje.

1.5. Tepalų charakteristika ir jų klasifikacija

Tepalai – pusiau kieti odos preparatai, vartojami ant odos. Puskiečių preparatų kompozicijos yra homogenińkos bei minkńtos konsistencijos. Tepalai sudaryti iń vienfazio pagrindo, kuriame disperguotos skystos arba kietos medņiagos. Gaminant tepalų kompozicijas reikalingas optimalus dalelių dydis, kad veiklioji medņiaga tolygiai pasiskirstytų tepalo pagrinde. Puskiečiai preparatai turi pasiņymėti ńiomis savybėmis:

Fizinės savybės:

 minkńtos konsistencijos;

 kietosios medņiagos turi būti otimalaus smulkumo ir vienodai pasiskirstyti tepalo pagrinde (vienalytis);

 ińlikti stabilūs saugojimo metu;

 ne higroskopińki;

 ne dņiovinantys;

 ne riebūs;

 neturi būti mechaninių dalelių;

 turi nekisti sudėtis saugojimo ir vartojimo metu;

 turi būti reikiamas kiekis veikliosios medņiagos tepale;

 pakankamos mikrobiologinės kokybės gamybos, saugojimo ir vartojimo metu;

 jeigu gaminami sterilūs tepalai, jie turi tenkinti sterilių vaistų reikalavimus.

Fiziologinės savybės:

 Turi nesukelti alergijų;

 Turi būti reikiamas kiekis veikliosios medņiagos;

 Turi lengvai nusiplauti nuo odos;

 Turi nesukelti neigiamo poveikio odos funkcijoms;

 Turi susimaińyti su odos sekretu.

Tepalai gali būti klasifikuojami:

Klasifikacija pagal poveikio mechanizmą:  vietinio poveikio;

21

Klasifikacija pagal vartojimo būdą:  Dermatologiniai tepalai;

 Akių tepalai;

 Nosies tepalai;

 Ausų tepalai;

 Tiesiosios ņarnos tepalai;

 Makńties tepalai;

Klasifikacija pagal dispersinės sistemą:

 Homogeniniai tepalai:

 Tepalai lydiniai;

 Tepalai tirpalai;

 Ekstrakciniai tepalai.

 Heterogeniniai tepalai:

 Suspensiniai (yra netirpių kietų vaistinių medņiagų);

 Emulsiniai (pagrindas yra emulsinio tipo A – V arba V – A );

 Deriniai (daugiafaziai) [13].

1.6. Baltasis vazelinis

Baltasis vazelinas – angliavandenilinis pagrindas, gaunamas iń naftos. Puskiečių preparatų pagrindų komponentas pasiņymi klampumu, yra bekvapis, gali būti nuo geltonos iki baltos spalvos [32,33]. Baltasis vazelinas sudarytas iń skystų ir kietų mikrokristalinių angliavandenilių – izoparafinų, alifatinių junginių, parafinų. Lydymosi temperatūra 30 - 50 °C, netirpsta vandenyje, 96 % etanolyje, maņai tirpus eteryje, tirpus benzene ir chloroforme. Maińosi su gliceroliu, riebalų aliejais, nesimaińo su ricinos aliejumi. Baltasis vazelinas gerai tepasi, yra stabilus laikymo metu, chemińkai indiferentińkas. Jis nesusigeria į odą bei pakankamai tepus ant odos pavirńiaus. MVA bevandenį vazeliną reglamentuoja kaip saugią priemonę vartojamą ant odos apsauginiuose preparatuose [14].

22

Lietuvos gamta turtinga vaistinių augalų įvairove ir gyvenančiais gyvūnais. Liaudies medicinoje be ne geriausiai ņinoma gyvūninės kilmės vaistinė ņaliava - laukinio kińkio taukai. Pasak senolių liaudies medicinoje paplitę gydomojieji taukai teikia didelę naudą ņmogaus sveikatai. Tai įpatingi vaistiniai taukai, kurie vartojami odos, ausų, nosies, gerklės, kvėpavimo takų, sąnarių, raumenų ligoms bei odontologiniams susirgimams gydyti. 2 lentelėje nurodytos ligos, kurios liaudies medicinoje gydomos laukinio kińkio taukais.

2 lentelė. Laukinio kiškio taukų vartojimas ligų gydyme

Pastaba. Lentelėje pateikti duomenys remiantis atliktu Dzūkijos regione etnofarmaciniu tyrimu. LSMU Bioetikos centro išduoto leidimo nr.: BEC – FF - 86

Remiantis etnofarmacinio tyrimo duomenis iń lentelėje pateiktų duomenų matyti, jog liaudies medicinoje paplitusi ņaliava yra veiksminga, naudojant įvairių ligų gydyme bei jų profilaktikoje. Mokslinėje literatūroje yra maņai duomenų apie ńią ņaliavą, kurią planuojama puskiečių preparatų gamyboje naudoti kaip pagrindo komponentą.

Remiantis moksline literatūra gyvūninės kilmės taukai yra homogenińki, baltos arba gelsvos spalvos, lydosi 25 – 29 ºC [19,56]. Taip pat mokslinėje literatūroje pateikta keletas laukinio kińkio taukų paruońimo būdų. Pirmuoju metodu taukai sumaińomi su ińgrynintuoju vandeniu (2 dalys taukų, 1 dalis ińgryninto vandens). Ińtirpę taukai plaukia į pavirńių. Jie surenkami ir garinami netiesiogiai ant ugnies. Antruoju paruońimo būdu, taukai patalpinami į konteinerį, verdančiame vandenyje ir periodińkai maińomi. Iń konteinerio taukai perpilami į ńvarų indą. Pirmuoju būdu yra tikimybė pasilikti daliai ińgryninto vandens ņaliavoje, tai įtakotų laukinio kińkio taukų kokybę. Todėl tinkamesnis antrasis paruońimo metodas [54].

Sinusitas Seborėjinis, atopinis dermatitas Nuńalimai Nudegimai Odos įtrūkimai Pūlingos ņaizdos Trofinės blauzdų opos

Ūminis vidurinės ausies uņdegimas Odos grybelis Juostinė pūslelinė Herpes simplex Tymai Egzema Paradontozė Reumatoidinis artritas Laukinio kiškio taukai ligų gydyme

23

Gyvūninės kilmės taukų cheminėje sudėtyje randama sočiūjų riebalų rūgńčių: palmitino, stearino ir nesočiųjų riebalų rūgńčių: arachidono, oleino (nuo 19,8% iki 28,6%). Ńių rūgńčių suma gali būti daugiau nei trys ketvirtadaliai bendros sumos riebiųjų rūgńčių. Didesnė koncentracija veikliųjų junginių randama laukinių gyvūnų taukuose dėl mitybinės terpės, kurioje gausu augmenijos įvairovės. Mokslinių tyrimų metu nustatyta, jog gyvūninės kilmės ņaliavoje vyrauja didelis kiekis omega 3 (alfa linoleno rūgńties), omega 6 (linolo rūgńties) bei omega 9 (oleino rūgńties) [53,55]. Vizualiai laboratorijoje atlikus pirminę apņiūrą ņaliava pasiņymėjo specifiniu kvapu, minkńta konsistencija. Taukuose priemaińų nebuvo rasta. Iń Kapčiamiesčio medņiotojų būrelio (Lazdijų raj.), gautos ņaliavos laikymo sąlygos nepasikeitė: ji laikyta vėsioje vietoje, plastmasiniame inde, sandariai uņdaryta uņdoriu.

1.8. Bevandenis lanolinas

Bevandenis lanolinas – riebalas, ńviesiai geltonos arba rudos spalvos, kuris gaunamas iń avių vilnos apdorojimo. Jis pasiņymi specifiniu kvapu, yra lipnus ir riebus [58,59]. Tepalo pagrindo medņiagos lydymosi temperatūra yra 36 ~ 42 ℃. Tirpus eteryje, toluene, chloroforme, acetone, eteryje, šiek tiek tirpsta etanolyje, netirpsta vandenyje. Puskiečio preparato – emulsijų, kremų, tepalų pagrindų komponentas naudojamas kaip minkńtiklis [57,59]. Tačiau jis gali sukelti alerginias reakcijas [59], uņkimńti poras, didina tikimybę susirgti spuogais, gali sukelti ińbėrimus.

1.9. Reikalavimai tirpikliams

Tirpikliai – medņiagos, kuriose gali ińtirpti kitos medņiagos. Tirpikliai gali būti organiniai (acetonas, toluenas ir kt.), poliniai (vanduo) bei nepoliniai.

Tirpikliams keliami atitinkami reikalavimai:

1. turi gerai tirpinti vaistines medņiagas; 2. turi būti gryni, netoksińki, maņai klampūs; 3. turi būti malonaus skonio, kvapo, spalvos; 4. turi būti ekonomińkai naudingi;

24

Labiausiai paplitęs tirpiklis naudojamas veikliųjų medņiagų ekstrakcijoje – ińgrynintas vanduo, kadangi atitinka daugiausiai kelemų reikalavimų tirpikliams. Ińgrynintas vanduo daņnai sumaińomas su kitu tirpikliu, pavyzdņiui, alkoholiu, propilenglikoliu, glicerinu ir kt. Pagalbinis ekstrahentas naudojamas pagerinti ińgryninto vandens funkciją, cheminį bei fizinį stabilumą. Yra ir daugiau tirpiklių: acetonas, izopropilo alkoholis, kurie naudojami sintetinių vaistų gamyboje, organinėje cheminoje, tačiau tokie tirpikliai yra labai toksińki, todėl nevartojami puskiečių preparatų gamyboje [20].

25

2. TYRIMŲ OBJEKTAS IR METODAI

2.1. Tyrimų objektas

Tyrimų objektas yra eksperimentinės puskietė forma – tepalai, į kuriuos buvo įterpti propolio produktai (skystas etanolinis propolio ekstraktas ir tirńtasis propolio ekstraktas).

2.2. Tyrimo reagentai ir medţiagos

Standartizuota propolio ņaliava gauta iń UAB „Medicata Filia“, Vilnius, Lietuva Tirńtasis propolio ekstraktas gautas iń UAB „Valentis“ , Kaunas, Lietuva

Etanolis (96,3 proc.) gautas iń AB „Stumbras“, Kaunas, Lietuva

Folin-Ciocalteu‘s reagentas Sigma – Aldrich® Chemie GmbH, Steinheim, Vokietija Natrio karbonatas, Na2CO3 – Sigma-Aldrich, Saint Luisas, JAV

Acetonitrilas ≥ 99,9 proc. grynumo, Sigma – Aldrich® Chemie GmbH, Steinheim, Vokietija Acto rūgńtis ≥ 99,9 proc. grynumo, Sigma – Aldrich® Chemie GmbH, Steinheim, Vokietija Baltasis vazelinas, Sigma-Aldrich Chemie GmbH, Steinheim, Vokietija

Bevandenis lanolinas įsigytas iń CPC W. M. GmbH, Saksamaa-Tootja, Vokietija Laukinio kińkio taukai – Kapčiamiesčio medņiotojų būrelis

2.3. Tyrime naudota įranga

 Kapiliarinis skysčių chromatorafas: Agilent echnologies Inc., Santa Clara, Jav

 Spektrofotometras: Agilent 8453 UV-Vis, Agilent Technologies, JAV

 pHmetras: ph-meter 766 su elektrodu Knick SE 104 N, Knick Elektronische Meßgeräte GmbH & Co, Vokietija

 Svarstyklės: Scaltec SBC 31, Scaltec Instruments GmbH, Vokietija

 Magnetinė maińyklė su kaitinamuoju pavirńiumi: IKAMAG C-MAG HS7, IKA-Werke GmbH & Co. KG, Vokietija

26

2.4. Preparatų technologijų metodikos

2.4.1. Skystųjų etanolinių propolio ekstraktų gamyba

Propolio etanoliniai ekstraktai gaminami maceracijos būdu, santykiu 1:10. Skystųjų propolio ekstraktų gaminama po 50 g. Kaip tirpikliai naudojami ińgrynintas vanduo ir 96,3 proc. etanolis. Iń jų paruońiami 60 proc., 70 proc. koncentracijos V/V etanoliniai tirpikliai. Propolio ekstraktų sudėtys pateiktos 3 lentelėje.

3 lentelė. Etanolinių propolio ekstraktų sudėtys

Susmulkinta lietuvińko ir kazachstanietińko propolio ņaliava uņpilama apskaičiuotu 60 proc. ir 70 proc. ekstrahento kiekiu. Maceruojama 7 dienas. Propolio veikliųjų junginių ekstrakcija vykdoma kambario temperatūroje. Po to mińiniai filtruojami pro popierinį filtrą su 20–25 μm porų dydņiu (DP 411, Albet® Filtration & Separation Technology, Ispanija) [35,49].

2.4.2. I grupės eksperimentinių puskiečių formų su propolio produktais modeliavimas įterpiant laukinio kiškio taukus

Propolio kilmė Propolio masė, g 70 proc., 60 proc. etanolio tūris, ml Lietuviškas propolis UAB

,,Medicata‘‘ 5 50 Kazachstanietiškas propolis Dţungarijos regiono propolis 5 50

Rytų Kazachstano srities propolis

5 50

Karbulako regiono propolis 5 50

Altajaus regiono propolis 5 50

27

Į puskietės formos sudėtį įvedami atitinkami kiekiai laukinio kińkio taukų. Įterpiamas į modeliuojamo tepalo pagrindą tirńtasis propolio ekstraktas. Gaminami 25 g tepalai. Modeliuojamų formų sudėtys pateikiamos 4 lentelėje.

4 lentelė. Puskiečių formų su tirštuoju propolio ekstraktu ir laukinio kiškio taukais sudėtys

Puskietės formos modeliavimas su laukinio kiškio taukais, tirštuoju propolio ekstraktu, bevandeniu lanolinu ir baltuoju vazelinu

Puskietės formos pagrindas modeliuojamas įdedant atitinkamą kiekį baltojo vazelino į porcelianinę lėkńtelę, įvedamas reikiamas kiekis bevandenio lanolino, įlańinami laukinio kińkio taukai ir įterpiama į pagrindą veiklioji medņiaga - tirńtasis propolio ekstraktas. Piestele maińoma iki vienalytės masės.

Tepalo modeliavimas į laukinio kiškio taukus įvedant tirštąjį propolio ekstraktą

Puskietės formos pagrindo modeliavimui pasirinkti laukinio kińkio taukai. Į pagrindą įterpiamas propolio ekstraktas. Tepalo komponentai sumaińomi iki vienalytės masės.

Puskietės formos modeliavimas iš trijų komponentų

Tepalo pagrindo modeliavimui naudojama kompozicija sudaryta iń atitinkamų kiekių baltojo vazelino ir laukinio kińkio taukų. Į pagrindą įvedamas reikiamas kiekis tirńtojo propolio ekstrakto. Visi trys komponentai maińomi iki vienalytės masės.

2.4.3. II grupės eksperimentinių propolio produktų puskiečių formų modeliavimas Tepalo nr. Baltasis vazelinas (g) Bevandenis lanolinas (g) Tirštasis propolio ekstraktas (g)

Laukinio kiškio taukai (g)

1 23,75 0,25 0,75 0,25

2 24,0 - 0,75 0,25

28

Puskiečių formų modeliavimui pasirinkti trys skirtingi pagrindai, į kurių sudėtis įeina baltasis vazelinas, bevandenis lanolinas, ińgrynintas vanduo. Į puskietės sistemos pagrindus įterpta 3 proc. veikliosios medņiagos – tirńtojo propolio ekstrakto. Modeliuojami 25 g tepalai. Gautų tepalų sudėtys pateikiamos 5 lentelėje.

5 lentelė. Puskiečių formų su tirštuoju propolio ekstraktu sudėtys

Tepalo gamyba su tirštuoju propolio ekstraktu, baltuoju vazelinu ir bevandeniu lanolinu

Puskietė forma modeliuojama porcelianinėje lėkńtelėje įdedant atitinkamus kiekius baltojo vazelino, bevandenio lanolino, tirńtojo propolio ekstrakto ir piestele maińant iki vienalytės masės.

Puskiečių formų modeliavimas su tirštuoju propolio ekstraktu, baltuoju vazelinu, bevandeniu lanolinu ir išgrynintu vandeniu

Tepalas gaminamas porcelianinėje lėkńtelėje įdedant atitinkamus kiekius baltojo vazelino, bevandenio lanolino, tirńtojo propolio ekstrakto ir ińgryninto vandens. Visi komponentai maińomi piestele iki vienalytės masės.

Tepalo gamyba su tirštuoju propolio ekstraktu ir baltuoju vazelinu

Puskietė forma modeliuojama į baltąjį vazeliną įvedant tirńtajį propolio ekstraktą. Įterpus veikliuosius junginius tepalas maińomas iki vienalytės masės.

2.4.4. III grupės eksperimentinių puskiečių formų su propolio produktais modeliavimas įterpiant skystąjį propolio ekstraktą

Tepalo nr. Baltasis vazelinas (g) Bevandenis lanolinas (g) Išgrynintas vanduo (ml) Tirštasis propolio ekstraktas (g) 4 24,25 - - 0,75 5 16,5 0,25 7,5 0,75 6 24 0,25 - 0,75

29

Į puskietės formos sudėtį įterpiamas atitinkamas kiekis skystojo propolio ekstrakto kaip veikliosios medņiagos. Modeliuojami 25 g tepalai. Puskiečių formų sudėtys pateikiamos 6 lentelėje.

6 lentelė. Puskiečių formų su skystuoju propolio ekstraktu sudėtys

Tepalo gamyba su skystuoju propolio ekstraktu ir baltuoju vazelinu

Puskietės formos kompozicija modeliuojama įvedant į baltąjį vazeliną skystąjį propolio ekstraktą. Įterpus veikliuosius junginius tepalas maińomas iki vienalytės masės.

Puskiečių formų modeliavimas su skystuoju propolio ekstraktu, baltuoju vazelinu, bevandeniu lanolinu ir išgrynintu vandeniu

Tepalas modeliuojamas porcelianinėje lėkńtelėje įvedant atitinkamus kiekius komponentų: bevandenio lanolino, baltojo vazelino, skystojo propolio ekstrakto ir įterpiant reikiamą tūrį ińgryninto vandens. Puskietė forma maińoma piestele iki vienalytės masės.

Preparato gamyba su skystuoju propolio ekstraktu, baltuoju vazelinu ir bevandeniu lanolinu

Puskietė forma modeliuojama porcelianinėje lėkńtelėje įterpiant atitinkamus kiekius baltojo vazelino, bevandenio lanolino bei įvedant skystojo propolio ekstrakto kaip veikliosios medņiagos į pagrindą ir piestele maińant iki vienalytės masės.

Tepalo nr. Baltasis vazelinas (g) Bevandenis lanolinas (g) Skystasis propolio ekstraktas (g) Išgrynintas vanduo (ml) 7 22,5 - 2,5 - 8 14,75 0,25 2,5 7,5 9 22,25 0,25 2,5 -

30

3. PREPARATŲ KOKYBĖS ANALIZĖS METODIKOS

3.1. Bendro fenolinių junginių kiekio nustatymas skystuosiuose propolio

ekstraktuose

Bendras fenolinių junginių kiekis propolio produktuose nustatytas spektrofotometrińkai, atliekant reakciją su Folin – Ciocalteu reagentu ir naudojant Agilent 8453 UV – Vis spektrofotomerą (Agilent Technologies Inc., Santa Clara, JAV) [35].

Reakcijai atlikti naudojama 10 ml kolbutė, į kurią įpilama 3 ml ińgryninto vandens, 3 ml 1:100 parskiesto propolio etanolinio ekstrakto, po to 1 ml Folin – Ciocalteu reagento. Mėginys kelis kartus supurtomas ir paliekamas stovėti kelias min. Tuomet įpilama į kolbutę 1,5 ml 20 proc. Na2CO3

vandeninio tirpalo. Mińinys skiedņiamas ińgrynintu vandeniu iki 10 ml ņymos. Kolbutė uņkemńama, tirpalai kolbutėse laikomi 30 min. kambario temperatūroje, tamsioje vietoje. Absorbcija matuojama prie 765 nm bangos ilgio.

Bendras fenolinių junginių kiekis ińreikńtas mikrogramais mililitre propolio ekstraktuose pagal p – kumaro rūgńties ekvivalentą. Kalibracinis grafikas sudarytas pagal p - kumaro rūgńtį [35,43].

3.2. Propolio produktų analizė efektyviąja skysčių chromatografija

Siekiant įvertinti ekstrahento įtaką propolio fenolinių junginių ekstrakcijai iń propolio ņaliavos, naudoti 60 proc. ir 70 proc. skystieji propolio ekstraktai. Jie ekstrahentu praskiesti 1:100 mg/ml. Mėginio paruońimui imtas 0,01 mg praskiesto skystojo propolio ekstrakto, kuris patalpinamas į 10 ml kolbutę ir ekstrahentu praskiedņiamas iki ņymos.

Skystųjų etanolinių propolio ekstraktų kiekybiniam ir kokybiniam fenolinių junginių nustatymui naudotas Agilent 1260 Infinity kapiliarinis skysčių chromatografas su diodų matricos detektoriumi. Fenolinių junginių iń propolio ekstrakto atskyrimui naudota ACE C18 kolonėlė (150 x 0,5 mm, 5 µm dydņio dalelėmis) su prieńkolone ACE C18 5 µm. Judri fazė sudaryta iń 0,5 proc. acto rūgńties (eliuentas A) bei acetonitrilo (eliuentas B). Fenolinių junginių smailių detekcija (ińsiskyrimas), atlikta esant 290 nm bangos ilgiui [35]. Visi analizei paruońti mėginiai filtruojami pro nailoninius membraninius ńvirkńtų filtrus, kurių porų dydis 0,20 μm [35].

31

3.3. I, II ir III grupių puskiečių preparatų pH nustatymas

Puskiečių formų pH reikńmės įvertintos potenciometriniu metodu naudojant pHmetrą (ph-meter 766 su elektrodu Knick SE 104 N, Knick Elektronische Meßgeräte GmbH & Co, Vokietija) [44].

3.4. Propolio fenolinių junginių atpalaidavimo iš eksperimentinių puskiečių formų

in vitro tyrimai

In vitro atpalaidavimo tyrimai atlikti naudojant modifikuotas Franz tipo difuzinės celes,

kurios sudarytos iń dviejų atskiriamų dalių – donorinės bei akceptorinės terpių. 1 g donorinės puskietės formos – tepalo, patalpinama kintamo tūrio cilindre, atviroji dalis, kurioje įvesta puskietė forma uņdengiama celiuliozine membrana ir uņrińama gumele. Prień eksperimentą celiuliozinės membranos laikytos ińgrynintame vandenyje 12 valandų. Difuzijos, kuri vyks ńioje celės dalyje per celiuliozinę membraną, plotas – 1,77 cm2. Akceptorinė terpė (15 ml) maińoma, naudojant IKAMAG® C – MAG HS7 magnetinę maińyklę su kaitinamuoju pavirńiumi [35].

Tyrimo metu palaikoma pastovi 32 ± 0,1 °C temperatūra. Akceptorinės terpės mėginiai fenolinių junginių kiekiui įvertinti imami po 3 ml. Mėginiai analizuoti po 0,5, 1, 2, 3, 5 val., įpilant tokį patį kiekį ińgryninto vandens (donorinės fazės). Bendras Fenolinių junginių kiekis nustatomas atliekant reakciją su Folin-Ciocalteu reagentu mėginius analizuojant spektrofotometriniu metodu pagal skyriuje 3.1. pateiktas metodikas [35,43].

3.5. Bendro fenolinių junginių kiekio nustatymas eksperimentinėse puskietėse

formose su propoliu

Bendras fenolinių junginių kiekis nustatomas Agilent 8453 UV-Vis spektrofotometru (Agilent Technologies Inc., Santa Clara, JAV), reakcijai atlikti naudojamas Folin – Ciocalteu‘s phenol reagentas. Reakcija atliekama 10 ml kolbutėse. Į 10 ml kolbutes įpilama po 3 ml ińgryninto vandens, 1 ml Folin-Ciocalteu‘s phenol reagento ir po 3 ml tiriamojo mėginio. Tuomet įpilama į kolbutes 1,5 ml paruońtas 20 proc. vandeninis Na2CO3 tirpalas. Mińinys praskiedņiamas iki 10 ml ņymos. Praskiedimui

32

laikoma 30 minučių tamsoje, kambario temperatūroje. Po to atliekama spektrofotometrinė analizė, esant 765 nm bangos ilgiui. Spektrofotometrinės analizės metu gautas kalibracinis grafikas sudarytas pagal p-kumaro rūgńtį.

3.6. Statistinis tyrimų rezultatų vertinimas

Rezultatų vidurkiai ir standartiniai nuokrypiai apskaičiuoti IBM SPSS statistics 20 ir Microsoft Office Excel 2007" programa, rezultatų skirtumų reikńmingumas nustatytas pagal Student’s t test. Skirtumai yra reikńmingi tuomet, kai p < 0,05. Tyrimai atlikti po 3 kartus.

3.7. Sociologinio tyrimo metodas

Siekiant įvertinti laukinio kińkio taukų vartojimo paplitimą Dzūkijos regione atliktas kiekybinis anoniminio anketavimo metodas. Tiriamieji – įvairaus amņiaus 297 Dzūkijos regiono gyventojai (96 vyrai ir 201 moteris). Rezultatai pateikti 4 paveiksle.

Empirinis tyrimo metodas. Pasirinktas vienas populiariausių sociologinio tyrimo metodų – anoniminio

anketavimo metodas [45]. Ńis tyrimas pagrindņiamas tiriamųjų stebėjimu, o surinkti apklausos metu duomenys laikomi faktais, kurie gali būti panaudojami praktinėje veikloje [45]. Respondentams buvo ińdalintos anoniminės anketos, kurios sudarytos iń 8 klausimų. Klausimai suskirstyti į 3 dalis pagal klausimų problematiką.

Pirmoje dalyje klausimai skirti ińsiaińkinti apie laukinio kińkio taukų vartojimo paplitimą Dzūkijos regione, antroje dalyje siekiama suņinoti kokiems ligoms simptomams ir kokiomis ligomis sergant vartojami laukinio kińkio taukai, trečioji klausimų dalis skirta ińsiaińkinti, ar tiriamieji respondentai konsultuojasi su visuomenės sveikatos specialistais dėl laukinio kińkio taukų vartojimo ligų profilaktikoje bei jų gydymo praktikoje.

Anoniminę anketą sudaro 8 klausimai, iń kurių 6 klausimai, skirti įvertinti laukinio kińkio taukų vartojimo paplitimą tarp respondentų. Sociologiniam tyrimui naudotas instrumentas – anketa (pateikiama 1 priede). Anketoje pateikiami klausimai ir galimi atsakymai, kuriuos respondentai galėjo pasirinkti vieną arba kelis atsakymų variantus bei parańyti savo atsakymą į pateiktą klausimą.

Siekiant įvertinti laukinio kińkio taukų vartojimo paplitimą Dzūkijos regione atliktas kiekybinis anoniminio anketavimo metodas. Sociologiniam tyrimui atlikti gautas LSMU Bioetikos centro

33

komisijos leidimas (pateikiamas 2 priede). Duomenų analizė atlikta naudojant SPSS (Statistical Package for Social Science) 20.0 programinį statistinės analizės paketą.

34

4. TYRIMŲ REZULTATAI IR JŲ APTARIMAS

4.1. Propolio produktų kokybinės ir kiekybinės sudėties įvertinimas

Skystieji propolio ekstraktai (santykiu 1:10) pagaminti Lietuvoje ir iń įvairių Kazachstano ńalies vietovių surinktų ņaliavų. Siekiant įvertinti etanolio įtaką fenolinių junginių ińskyrimui iń propolio ņaliavos, pasirinktas ekstrahentas 60 proc. ir 70 proc. koncentracijos etanolis. Skystųjų propolio ekstraktų kokybė įvertinta nustatant bendrą fenolinių junginių bei aldehido vanilino kiekį. Ekstraktus planuojama naudoti, kaip veikliąją medņiagą, dėl turimų gydomųjų savybių [25,23,12], modeliuojant puskietes formas – tepalus. Nustatyto bendro fenolinių junginių kiekio tyrimo rezultatai tirtuose skystuose ekstraktuose pateikti 3 ir 4 paveikslėliuose.

3 pav. Bendro fenolinių junginių kiekio tyrimų rezultatai propolio skystuose ekstraktuose, kai ekstrahentas 60 proc. etanolis

Statistinė tyrimų duomenų analizė parodė, kad nėra statistińkai reikńmingo skirtumo (p=0,059) tarp bendro fenolinių junginių kiekio nustatyto propolio ekstrakto pagaminto iń lietuvińkos ņaliavos lyginant su ekstraktu pagamintu iń Karbulako regiono. Taip pat nenustatytas statistińkai reikńmingas skirumas tarp ekstraktų N1 ir N2 esančių fenolinių junginių kiekio. Nustatytas statistińkai reikńmingas skirtumas lietuvińkame propolio ekstrakte N1, lyginant su fenolinių junginių kiekiu ekstraktuose N3, N5 ir N6. Tyrimo rezultatai parodė, jog propolio ņaliava, jo surinkimo vieta, turi įtakos gaminamų ekstraktų kokybei. Tyrimo rezultatai pagrindė literatūros duomenis, kad propolio

35

kokybę lemia surinkimo vietovėje dominuojanti augmenija [31]. Todėl rekomenduotina atlikti ateityje ińsamesnę analizę identifikuojant propolio surinkimo vietoje dominuojančius augalus, surinkimo laiką ir įvertinti jų įtaką ņaliavos kokybei. Sekančiame etape vertinta tirpiklio įtaka (70 proc. etanolis) fenolinių junginių ińekstrahavimui iń propolio ņaliavos. Rezultatai pateikti 4 paveiksle.

4 pav. Bendro fenolinių junginių kiekio tyrimų rezultatai propolio skystuose ekstraktuose, kai ekstrahentas 70 proc. etanolis

Didņiausias bendras fenolinių junginių kiekis atsipalaidavo iń Karbulako regiono propolio etanolinio ekstrakto N10, o maņiausias – iń Altajaus miesto N9. Statistinė tyrimų duomenų analizė parodė, kad yra statistińkai reikńmingas skirtumas tarp bendro fenolinių junginių kiekio nustatyto propolio ekstrakte N10 lyginant su ekstraktu N9. Taip pat nenustatytas statistińkai reikńmingas skirtumas tarp ekstraktų N7, N8, N11 ir N12 esančių fenolinių junginių kiekio.

Statistińkai reikńmingo skirtumo tarp ekstraktų pagamintų iń lietuvińkos ņaliavos ir Karbulako regiono nėra, tačiau pastebėta tendencija, kad didesnis kiekis veikliųjų junginių ińsiekstrahuoja naudojant 70 proc. etanolį. Galima teigti, kad kaip ekstrahentas tinkamas ir 60 proc. ir 70 proc. etanolis, tačiau apņvelgus mokslinę literatūrą daņniau sutinkamas ekstrahentas 70 proc. etanolis. Todėl tolimesniems tyrimams pasirinkti ekstraktai su tirpikliu – 70 proc. etanoliu.

36

4.2. Propolio produktų veikliųjų junginių kiekio nustatymas efektyviosios skysčių

chromatografijos metodu

Spektrofotometriniu metodu galima nustatyti bendrą fenolinių junginių kiekį, tačiau ńis metodas nesuteikia galimybių identifikuoti ir nustatyti atskirų veikliųjų junginių kiekių. Todėl tikslinga pritaikyti efektyvesnius metodus, kurie leistų nustatyti propolio ekstraktų sudėtį. Mokslinėje literatūroje yra duomenų apie lietuvińko propolio kiekinės sudėties vertinimą nustatant fenolinių rūgńčių ir vanilino kiekius [5]. Atlikus skystojo propolio ekstrakto veikliųjų junginių tyrimus ESC analitiniu metodu, nustatyta – p – kumaro rūgńties, ferulo rūgńties, vanilo rūgńties, kavos rūgńties ir vanilino atitinkami kiekiai. Fenolinių rūgńčių ir vanilino kiekiai skystąjame propolio ekstrakte pateikti 7 ir 8 lentelėse.

7 lentelė. Fenolinių rūgščių ir vanilino kiekis 60 proc. etanoliniuose propolio ekstraktuose

Pastaba. LPE – Lietuviškasis propolio ekstrakta; DRPE – Džungarijos regiono propolio ekstraktas; RKPE – Rytų Kazachstano propolio ekstrakas; KRPE – Karbulako regiono propolio ekstraktas; ARPE – Altajaus regiono propolio ekstraktas; PKPE – Pietinio Kazachstano propolio ekstraktas.

60 proc. etanoliniame lietuvińkame propolio ekstrakte (7 lentelė), vyrauja ferulo rūgńtis 920,47±2,7 mg/ml ), p – kumaro rūgńtis (1301,36±1,4 mg/ml ) ir vanilo rūgńtis (458,3±1,1 mg/ml ) ir vanilinas (781,5±10,1 mg/ml). Daugiausia kavos rūgńties ińsiskyrė Rytų Kazachstano, Altajaus miesto, Almatos srities, Karbulako ir Altajaus regionuose 60 proc. etanoliniuose propolio ekstraktuose. p – Kumaro rūgńties daugiausia ińsiskyrė lietuvińkame, pietinio Kazachstano, Almatos srities, Dņungarijos regiono skystuosiuose propolio ekstraktuose.

60 proc. etanoliniai propolio ekstraktai Veiklieji junginiai (μg/ml) Ferulo rūgštis p – kumaro rūgštis Vanilinas Kavos rūgštis Vanilo rūgštis LPE 920,47±2,7 1301,36±1,4 781,5±10,1 148,83±4,1 458,3±1,1 DRPE 101,31±1,5 510,96±2,3 48,62±4,5 273,27±5,6 46,1±0,2 RKPE 31,07±2,5 184,23±0,4 45,07±5,3 335,21±2,3 - KRPE 32,55±1,4 416,99±0,8 18,21±4,1 658,74±7,9 59,2±15,1 ARPE 102,31±1,8 42,88±2,3 59,43±3,5 1257,27±5,1 47,1±7,1 PKPE 269,28±0,1 457,22±1,6 171,08±4\7,4 87,57±6,8 134,5±2,3

37

Naudojant 70 proc. etanolį (8 lentelė), daugiausia fenolinių junginių ińsiskyrė lietuvińkame propolio ekstrakte. Nustatyta p – kumaro rūgńties (1273,25±0,2 mg/ml). Ńiek tiek maņiau vyrauja ferulo rūgńtis (1216,16±4,1 mg/ml ). Taip pat nustatyta lietuvińkame propolio ekstrakte 566,97±4,1 mg/ml aldehido vanilino ir vanilo rūgńties (320,04±0,2 mg/ml). Be minėtų fenolinių junginių taip pat nustatyta kavos rūgńties (101,64±1,3 mg/ml). 70 proc. propolio ekstrakte nustatytų fenolinių rūgńčių ir vanilino kiekiai pateikti 8 lentelėje.

8 lentelė. Fenolinių rūgščių ir vanilino kiekis 70 proc. etanoliniuose propolio ekstraktuose

Pastaba. LPE – Lietuviškasis propolio ekstrakta; DRPE – Džungarijos regiono propolio ekstraktas; RKPE – Rytų Kazachstano propolio ekstrakas; KRPE – Karbulako regiono propolio ekstraktas; ARPE – Altajaus regiono propolio ekstraktas; PKPE – Pietinio Kazachstano propolio ekstraktas.

Statistinė duomenų analizė parodė, kad statistińkai reikńmingo skirtumo (p > 0,05) nėra tarp 60 proc. ir 70 proc., koncentracijos etanolio, kuris naudotas fenolinių rūgńčių ir vanilino tirpinimui iń skystojo propolio ekstrakto. Dominuojantys fenolinių rūgńčių kiekiai pateikti 5 paveiksle.

70 proc. etanoliniai propolio ekstraktai Veiklieji junginiai (μg/ml) Ferulo rūgštis p – kumaro rūgštis

Vanilinas Kavos rūgštis Vanilo rūgštis

LPE 1273,25±0,2 1216,16±4,1 566,97±4,1 101,64±1,3 320,04±0,2 DRPE 128,26±2,6 584,44±9,3 42,95±0,2 219,79±14,1 50,25±0,6 RKPE 46,5±1,3 256,6±8,1 44,96±1,6 645,81±5,6 - KRPE 28,63±0,5 54,76±4,6 - 254,12±16,3 57,25±8,1 ARPE 105,19±2,9 78,86±0,5 56,94±7,6 1119,97±0,7 43,76±0,9 PKPE 334,53±0,6 588,51±1,3 205,75±4,9 42,34±1,9 165,4±4,1