Indice
Indice
Riassunto V
Abstract VIII
1. Introduzione 2
1.1 Lo sviluppo della testa 3
1.2 La famiglia otd/otx 5
1.2.a La struttura delle proteine della famiglia otd/otx 11
1.2.b La famiglia otd/otx nell’evoluzione 14
1.2.c I geni Xotx in Xenopus laevis 19
1.3 I geni Xotx e la Gastrulazione in Xenopus laevis 22
1.3.a Convergenza ed estensione 26
1.4 I geni Xotx e la ghiandola del cemento 33
1.5 La famiglia otd/otx e lo sviluppo dell’occhio 36
1.6 Scopo della Tesi 42
Indice
2. Materiali e Metodi 44
2.1 Clonaggio 45
2.2 Trasformazione di cellule batteriche e 48 amplificazione del DNA plasmidico
2.2.a Trasformazione 48
2.2.b Estrazione di DNA plasmidico su piccola scala mediante 50 lisi alcalina (mini-prep)
2.2.c Estrazione di DNA plasmidico su media scala mediante 52 colonne NUCLEOBOND (midi-prep)
2.3 Digestione di plasmidi con enzimi di restrizione 55
2.3.a Estrazione fenolica 56
2.3.b Precipitazione alcolica 57
2.3.c Elettroforesi su gel di agarosio 57
2.3.d Estrazione di DNA da gel di agarosio 59 2.4 Polymerase Chain Reaction (PCR) 60
2.4.a Generazione dei costrutti deleti 62
2.4.b Mutagenesi in vitro 64
2.4.c Screening di colonie tramite PCR 65
2.4.d Costrutti generati 68
2.5 Embrioni di Xenopus laevis 72
2.5.a Microiniezioni 74
2.5.b Sintesi in vitro dei trascritti da microiniettare 75 2.5.b Reazione cromogenica della β-galattosidasi 77
2.5.c Ibridazione in situ “whole-mount” 78
Indice
3. Risultati 84
3.1 Saggio di inibizione dell’estensione convergente 85 3.2 Saggio di induzione della ghiandola del cemento 95
4. Discussione
103
4.1 Analisi dell’inibizione dell’estensione convergente
e dell’induzione della ghiandola del cemento 104
5. Riferimenti Bibliografici 117
