INDICE
Riassunto pag. I
Abstract pag.IV
1. INTRODUZIONE
1.1 L’ematopoiesi e la gerarchia ematopoietica pag. 1
1.2 Le cellule staminali ematopoietiche pag. 5
1.2.1 Sistemi di isolamento e caratterizzazione pag. 5 1.2.2 La nicchia ematopoietica pag. 12
1.2.3 La plasticità pag. 17
1.3 Ontogenesi del sistema ematopoietico pag. 23
1.4 I fattori di crescita pag. 34
1.5 I fattori di trascrizione pag. 44
1.5.1 Il fattore di trascrizione mieloide PU.1 pag. 48 1.5.2 Il fattore di trascrizione mieloide C/EBP
α
pag. 55 1.5.3 Il fattore di trascrizione eritroide GATA-1 pag. 571.5.4 Il fattore di trascrizione Scl pag. 60
1.5.5 Gli omeogeni pag. 66
1.5.5.1 I geni Hox pag. 67
1.5.5.2 I geni paired pag. 73
1.5.5.3 I geni Otx pag. 75
2. SCOPO DELLA TESI pag. 85
3. MATERIALI E METODI
3.1 Generazione dei topi Otx1-/-,pSil/Scl pag. 87
3.2.1 Protocollo del saggio clonogenico pag. 88
3.3 Congelamento delle cellule pag. 89
3.4 Scongelamento delle cellule pag. 89
3.5 Reagenti pag. 90
3.5.1 IMDM (Iscove’s modified Dulbecco’s medium) pag. 90
3.5.2Preparazione della metilcellulosa pag. 90
3.6 Estrazione dell’RNA totale da cellule di midollo pag. 91
3.7 Estrazione dell’mRNA da pools di colonie CFU-GM pag. 92
3.8 Trattamento dell’RNA totale con DNasiI pag. 93
3.9 Retrotrascrizione classica pag. 94
3.10 Amplificazione tramite PCR semiquantitativa pag. 94
4. RISULTATI
4.1 Analisi comparativa dei precursori mielo-monocitari di topi
wild type e Otx1-/- pag. 98
4.2 Effetto dell’espressione costitutiva di Scl nei topi Otx-/- pag. 101
4.3 Analisi comparativa dell’espressione di candidati targets
molecolari di Otx1 in midolli wild type e Otx1-/- pag. 103
5. DISCUSSIONE pag. 108 6. CONCLUSIONI pag. 116 7. RIFERIMENTI BIBLIOGRAFICI pag. 117
