3. MATERIALI E METODI p.33 2. SCOPO DELLA TESI p.31 1. INTRODUZIONE p.1 INDICE

INDICE

1. INTRODUZIONE

p.1

1.1 RISPOSTE INNATE E RISPOSTE CONDIZIONATE p.1

1.2 RISPOSTE CONDIZIONATE ALLA PAURA p.6

1.3 SUBSTRATI NEURALI DEL CONDIZIONAMENTO ALLA

PAURA O “FEAR CONDITIONING” p.10

1.4 “CONTEXTUAL FEAR CONDITIONING” (CFC) E

MODIFICAZIONE DELL’ESPRESSIONE GENICA p.23

2. SCOPO DELLA TESI

p.31

3.

MATERIALI

E

METODI

p.33

3.1 SOGGETTI SPERIMENTALI p.33 3.2 PROCEDURE SPERIMENTALI p.33 3.2.1 APPARECCHIATURA SPERIMENTALE p.34 3.2.2 PROCEDURA DI CONDIZIONAMENTO p.35 3.3 MANIPOLAZIONI CHIRURGICHE p.35

3.3.1 ESTRAZIONE DEI CERVELLI p.35

3.3.2 SEZIONI DEI CERVELLI p.35

3.4 ESTRAZIONE DELL’ RNA p.36

3.5 ISOLAMENTO DELL’ mRNA Poly A+ p.38

3.6 CONTROLLO DELLA QUALITÀ DELL’mRNA PolyA+ p.39

3.7 COSTRUZIONE DELLE LIBRERIE SOTTRATTIVE SOPPRESSIVE p.39

3.8 SCREENING PRIMARIO DELLE LIBRERIE DI CDNA p.44

3.8.1. AMPLIFICAZIONE DELLE SEQUENZE DIFFERENZIALI p.44

3.8.2 SPOT BLOT DEL PRODOTTO DI PCR p.45

3.8.3. MARCATURA DELLE SONDE p.45

3.9 PREPARAZIONE DEL DNA PLASMIDICO SU PICCOLA SCALA

(MINIPREP) p.49

3.10ANALISI DELLE SEQUENZE p.50

3.11 ANALISI DI ESPRESSIONE TRAMITE RT-PCR RELATIVA p.51

3.11.1 ANALISI STATISTICHE p.53

4. RISULTATI

p.55

4.1 RISULTATI SCREENING PRIMARIO p.55

4.2 ANALISI DELLE SEQUENZE p.59

4.2.1 CLONE 1VA11 p.61

4.2.2 CLONE 1VB12 p.62

4.2.3 CLONE 1VC10 p.64

4.3 RISULTATI DELL’ANALISI DI ESPRESSIONE

TRAMITE RT-PCR RELATIVA p.66

5. DISCUSSIONE

p.70 5.1 CLONE 1VA11 p.70 5.2 CLONE 1VB12 p.75 5.3 CLONE 1VC10 p.83

6. CONCLUSIONI

p.87

7. BIBLIOGRAFIA

p.89