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INDICE
Elenco delle abbreviazioni
Abstract
Riassunto
1. INTRODUZIONE
1.1 Fattori innati e fattori ambientali del comportamento…………..pag.1 1.2 Apprendimento e memoria………...pag.3 1.3 Modelli sperimentali per lo studio dei meccanismi molecolari alla base dell’apprendimento e della memoria…………..…...……pag.10 1.4Condizionamento alla paura (fear conditioning)………....pag.18 1.5 Modificazione dell’espressione genica legata al fear
conditioning……….…pag.29
1.6 Analogie tra condizionamento al contesto e disturbi ansiosi...pag.34
2. SCOPO DELLA TESI
……….pag.403. MATERIALI E METODI
3.1 Soggetti sperimentali……….……….pag.42 3.2 Apparato di condizionamento……….……....pag.42 3.3 Protocollo di condizionamento alla paura……….…….…pag.43 3.4 Isolamento e conservazione dei tessuti….……….…….pag.44 3.5 Estrazione dell’RNA totale…….……….…...pag.46 3.6 Isolamento dell’mRNA poliA+ …….……….pag.47 3.7 Controllo della qualità dell’mRNA poliA+……….………pag.48
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3.8 Costruzione delle librerie soppressive sottrattive….…………..pag.49 3.9 Screening primario delle librerie….………...pag.52 3.9.1 PCR da colonia……….………...pag.52 3.9.2 Dot Blot del prodotto di PCR…….……….………pag.53 3.9.3 Marcatura delle sonde….……….pag.54 3.9.4 Ibridazione su filtro……….pag.54 3.10 Preparazione del DNA plasmidico su piccola scala……….…pag.57 3.11 Analisi delle sequenze……….……….pag.58 3.12 Analisi di espressione genica tramite RT-PCR real-time…....pag.59 3.13 Quantizzazione dei livelli di espressione genica: metodo
del 2-∆∆CT………..………pag.62
3.14 Analisi statistica……….………...pag.62
4. RISULTATI
4.1 Risultati dello screening primario di geni candidati a essere
differenzialmente espressi in seguito a CFC………..…..pag.63 4.2 Analisi delle sequenze………….………...pag.65 4.2.1 Sequenza del clone 5ND3………...pag.67 4.2.2 Sequenza del clone 5VD6………...pag.70 4.2.3 Sequenza del clone 5VF8………pag.72 4.2.4 Sequenza del clone 7NB6………pag.74 4.3 Risultati dell’analisi di espressione tramite RT-real-time
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