PREPARATŲ SU DVISKIAUČIŲ GINKMEDŽIŲ LAPŲ EKSTRAKTU TYRIMAS IR VERTINIMAS

LIETUVOS SVEIKATOS MOKSLŲ UNIVERSITETAS FARMACIJOS FAKULTETAS

VAISTŲ TECHNOLOGIJOS IR SOCIALINĖS FARMACIJOS KATEDRA

KRISTINA MACKONYTĖ

PREPARATŲ SU DVISKIAUČIŲ GINKMEDŽIŲ LAPŲ

EKSTRAKTU TYRIMAS IR VERTINIMAS

Magistro baigiamasis darbas

Darbo vadovas : Doc. dr. Giedrė Kasparavičienė

LIETUVOS SVEIKATOS MOKSLŲ UNIVERSITETAS FARMACIJOS FAKULTETAS

VAISTŲ TECHNOLOGIJOS IR SOCIALINĖS FARMACIJOS KATEDRA TVIRTINU:

Farmacijos fakulteto dekanas prof. Vitalis Briedis Data

PREPARATŲ SU DVISKIAUČIŲ GINKMEDŽIŲ LAPŲ

EKSTRAKTU TYRIMAS IR VERTINIMAS

Magistro baigiamasis darbas

Darbo vadovas

Doc. dr. Giedrė Kasparavičienė Data

Recenzentas

(vardas, pavardė, parašas) Data

Darbą atliko Magistrantė

Kristina Mackonytė Data (metai, mėnuo, diena)

TURINYS

DARBO TIKSLAS IR UŽDAVINIAI ... 12

1. LITERATŪROS APŽVALGA ... 13

1.1. Istorinės žinios apie dviskiautį ginkmedį ... 13

1.2. Dviskiaučio ginkmedžio botaninis apibūdinimas ... 13

1.3. Dviskiaučių ginkmedžių lapų pagrindinės veikliosios medžiagos ... 13

1.4. Flavonoidų klasifikacija ir struktūros ypatybės ... 14

1.5. Terpenoidų klasifikacija ir struktūros ypatybės ... 18

1.6. Ginkolinės rūgšties klasifikacija ir struktūros ypatybės ... 19

1.7. Pagrindinių veikliųjų medžiagų savybės ir poveikis organizmui ... 19

1.8. Dviskiaučių ginkmedžio preparatų vartojimo paskirtis ... 20

1.9. Dviskiaučių ginkmedžio lapų sausojo ekstrakto antioksidacinis poveikis ... 22

1.10. Dviskiaučių ginkmedžių preparatų dozavimas, vaistų sąveikos ir kontraindikacijos ... 23

1.11. Maisto papildų notifikavimas ... 24

2. TYRIMO METODIKA ... 25

2.1. Tyrimo objektai: ... 25

2.2. Naudoti reagentai ... 27

2.3. Naudoti prietaisai ... 27

2.4. Tyrimo metodai ... 28

2.4.1. Literatūros analizės metodas ... 28

2.4.2. UV – VIS spektrofotometrija ... 28

2.4.3. Statistinis duomenų vertinimas ... 29

3. REZULTATAI IR JŲ APTARIMAS ... 30

3.1. Preparatų sudėčių ir technologijų teorinė analizė ... 30

3.1.1. Lietuvoje registruotų dviskiaučių ginkmedžių lapų sausojo ekstrakto preparatų pasiūlos analizė ... 30

3.1.2. Lietuvoje registruotų dviskiaučių ginkmedžių lapų sausojo ekstrakto preparatų pasiskirstymas ... 30

3.1.3. Standartizuotų ir nestandartizuotų dviskiaučių ginkmedžių lapų ekstraktų pasiskirstymas tiriamuose preparatuose ... 31

3.1.4. Maisto papildų pasiskirstymas pagal notifikaciją ... 32

3.1.5. Preparatų su dviskiaučių ginkmedžių lapų sausuoju ekstraktu sudėčių analizė ... 33

3.1.6. Dviskiaučių ginkmedžių lapų sausojo ekstrakto preparatų pasiskirstymas Lietuvos rinkoje pagal vaisto formą ... 34

3.1.7. Dviskiaučių ginkmedžių preparatų maksimalus farmacinių formų tablečių/kapsulių kiekis rekomenduojamas vartoti gamintojų paroje ... 35

3.1.8. Mineralinių medžiagų kiekio pasiskirstymas daugiakomponentiniuose maisto papilduose su dviskiaučių ginkmedžių lapų sausuoju ekstraktu ... 36

3.1.9. Antioksidantų Vit. A, C, E kiekio pasiskirstymas daugiakomponenčių maisto papildų su dviskiaučių ginkmedžių lapų sausuoju ekstraktu ... 37

3.1.10. B grupės vitaminų kiekio pasiskirstymas kompleksiniuose maisto papilduose su dviskiaučių ginkmedžių lapų sausuoju ekstraktu ... 38

3.2. Tirpumo tyrimo preparatų sudėčių eksperimentinė analizė ... 39

3.2.1. Fenolinių junginių kiekis nustatytas tiriamuosiuose preparatuose ... 39

3.2.2. Fenolinių junginių kiekis nustatytas tiriamuose preparatuose su 40 mg ir 120 mg santykiu 1:3 ... 40

3.2.3. Nustatyto fenolinių junginių kiekių ryšis su nurodytu flavonoidų kiekiu preparatuose ... 41

3.2.4. Antioksidacinio aktyvumo nustatymas tiriamiems preparatams ... 42

3.2.5. Preparatų antioksidacinio aktyvumo ir fenolinių junginių kiekio 1 tab./kaps. ryšis ... 43

3.3. Tirpimo tyrimo preparatų sudėčių eksperimentinė analizė ... 44

3.3.1. Fenolinių junginių kiekis tiriamuosiuose preparatuose po 15 min.; 30 min.; 45 min.; 60 min. tirpinimo ... 44

3.3.2. Antioksidacinio aktyvumo nustatymas tiriamuosiuose preparatuose po 15 min.; 30 min.; 45 min.; 60 min. tirpinimo ... 45

3.3.3. Bendras fenolinių junginių kiekio palyginimas taikant tirpumo ir tirpimo testus ... 46

3.3.4. Bendras antioksidacinio aktyvumo palyginimas DPPH metodu taikant tirpumo ir tirpimo testus ... 47

IŠVADOS ... 49

LITERATŪROS SĄRAŠAS ... 52

SANTRAUKA

K. Mackonytės baigiamasis darbas/mokslinė vadovė doc. dr. G. Kasparavičienė; Lietuvos sveikatos mokslų universiteto, Farmacijos fakulteto, Vaistų technologijos ir socialinės farmacijos katedra.- Kaunas.

Darbo tikslas: atlikti Lietuvoje registruotų dviskiaučių ginkmedžių preparatų sudėčių ir farmacinių formų palyginamąją analizę, įvertinti pasirinktus preparatus kiekybiškai, nustatant bendrą fenolinių junginių kiekį ir antioksidacinį aktyvumą. Darbo uždaviniai: Ištirti Lietuvos vaistinėse esančių preparatų su dviskiaučių ginkmedžių ekstraktu pasiūlą. Atlikti šių preparatų palyginamąją analizę vertinant sudėtis ir farmacines formas. Pasirinktuose preparatuose nustatyti bendrą fenolinių junginių kiekį spektrofotometriniu metodu. Nustatyti pasirinktų preparatų antioksidacinį aktyvumą DPPH metodu. Tyrimo objektai ir metodai: tirti preparatai su dviskiaučių ginkmedžių lapų sausuoju ekstraktu. Atlikti skirtingų preparatų tirpumo ir tirpimo tyrimai. Analizei naudotas spektrofotometrinis metodas. Tirtas bendras fenolinių junginių kiekis – pagal Galo rūgšties kalibracinę kreivę ir išreikštas mg/ml GRE; antioksidacinis aktyvumas – pagal DPPH laisvojo radikalo inaktyvavimo spalvinę reakciją. Tyrimo rezultatai ir išvados: Tyrimo metu, 2015 metų vasario mėn. 1 d. duomenimis, Lietuvoje buvo registruoti 40 dviskiaučių ginkmedžių lapų sausojo ekstrakto preparatai. Iš jų 14 registruoti vaistai ir 26 - maisto papildai. Atlikus pasirinktų preparatų farmacinių formų analizę, nustatyta, kad didesnę maisto papildų dalį 60 proc. sudaro kapsuliuota forma. Visų registruotų vaistų sudėtyse yra standartizuotas dviskiaučių ginkmedžių lapų sausasis ekstraktas. 40 proc. maisto papildų sudėtyse yra nestandartizuoti dviskiaučių ginkmedžių ekstraktai. Notifikuoti maisto papildai sudaro 56 proc., nenotifikuoti 44 proc. visų tirtų maisto papildų su dviskiaučių ginkmedžių lapų sausuoju ekstraktu. 86 proc. visų tiriamųjų vaistų sudaro vienkomponenčiai preparatai. 14 proc. – daugiakomponenčiai. Tiriamųjų maisto papildų 64 proc. sudaro daugiakomponenčiai preparatai, o mažesnę – 36 proc. vienkomponenčiai preparatai. Populiariausios sudedamosios medžiagos kompleksiniuose maisto papilduose: vit. C ir E, magnis, cinkas, B grupės vitaminai. Tirpumo teste vaistuose „Tanakan 40 mg“ tabletėse („Ipsen Pharma“ Prancūzija), „Bilobil 40 mg“ kapsulėse („KRKA“, Slovėnija) ir maisto papilduose: „Ginko Biloba Princeps 40 mg“ kapsulėse („Labatoarele Remedia“, Rumunija), „GinkoPrim 40 mg“ tabletėse („Walmark“, Čekija) bendras fenolinių junginių kiekis buvo panašus (p>0,05). Maisto papilduose: „Ginko max 120 mg“ kapsulėse („PAR PAK“, Serbija), „Ginko Biloba Princeps 120 mg“ kapsulėse („Labatoarele Remedia“, Rumunija) bendras fenolinių junginių kiekis svyravo nuo 3,65 mg iki 11,14 mg. Tirpumo teste preparatų antioksidacinis aktyvumas tirtas taikant spektrofotometrinį DPPH metodą. Iš tirtų preparatų didžiausiu antioksidaciniu aktyvumu 88,34 % pasižymėjo vaistas „Bilobil 40 mg“ kapsulės („KRKA“, Slovėnija), mažiausiu –

18,6 % maisto papildas „Ginko max 120 mg“ kapsulės („PAR PAK“, Serbija). Nustatytas vidutinio stiprumo ryšys tarp bendro fenolinių junginių kiekių ir antioksidacinio aktyvumo (R= 0,64). Atliktame tirpimo teste, visuose tirtuose preparatuose, po 45 min, daugiau nei 75% veikliųjų medžiagų atsipalaidavo. Po 60 min. spektrofotometriškai nustačius fenolinių junginių išsiskyrimą tirtuose preparatuose, didžiausias jų išsiskyręs kiekis 6,51 mg nustatytas vaiste „Bilobil 40 mg“ kapsulėse („KRKA“, Slovėnija), mažiausias 3,1 mg - maisto papilde „GinkoPrim 40 mg“ tabletėse („Walmark“, Čekija). Tirpimo teste, po 60 min., taikant spektrofotometrinį DPPH metodą tiriamuose preparatuose didžiausiu antioksidaciniu aktyvumu 85,07% pasižymėjo vaistas „Bilobil 40 mg“ kapsulės („KRKA“, Slovėnija), mažiausiu 25,34% - maisto papildas „GinkoPrim 40 mg“ tabletės („Walmark“, Čekija). Rezultatus lyginant su tirpumo rezultatais didesnis antioksidacinis aktyvumas nustatytas kai medžiagos tirpinamos be kapsulės. Todėl galima teigti, kad kapsulės apvalkalas turėjo įtakos veikliųjų medžiagų išsiskyrimui.

SUMMARY

K. Mackonytė‘s thesis/ research supervisor Assoc. Prof. Dr. G. Kasparavičienė; Lithuanian University of Health Sciences, Faculty of Pharmacy, Pharmaceutical Technology and Social Pharmacy departament.- Kaunas.

The aim: to perform benchmarking on Ginkgo biloba extract product compositions and formulations registered in Lithuania, to quantify selected products, determining the total phenolic compounds and antioxidant activity.

Goals: To research the supply of products with Ginkgo biloba extract in Lithuanian pharmacies. To perform benchmarking, while assessing structure and pharmaceutical forms. To determine the total phenolic combinations quantity by spectrophotometry in selected products. To identify antioxidant activity of selected products with DPPH method.

Materials and methods: Examined products with ginkgo biloba dry extract. Performed different products solubility and dissolution research. Spectrophotometric method was used for analysis. The research was made in overall phenolic compounds - by Gallic acid calibration curve and expressed in mg/ml GRE; The antioxidant activity - by DPPH free radical inactivation color reaction.

Results and conclusions: 2015 February first day data, during research Lithuania has registered 40 Ginkgo biloba dry extract products, of which, 14 were registered drugs and 26 – food supplements. After selected products pharmaceutical form analysis, it was found that a higher nutritional supplements part (60 percent) comprises an encapsulated form. All registered medicines contain standardized Ginkgo biloba dry extract. 40 percent of food supplements contain not standardized extracts of Ginkgo biloba extract. Notified dietary supplements accounted for 56 percent of all tested food supplements with Ginkgo biloba leaves dry extract, not notified 44 percent. 86 percent of all researched drugs consists of a one-component products, 14 percent - multi-component. 64 percent of researched food supplements consist of Multi-component products and smaller part - 36 percent, one-component products. The most popular ingredients in a complex food supplements are vitamins C and E, magnesium, zinc, B group vitamins. In solubility tests medications „Tanaka 40 mg“ tablets („Ipsen Pharma“, France), „Bilobil 40 mg“ capsules („KRKA“, Slovenia) and food supplements: „Ginko Biloba Princeps 40 mg“ capsules („Labatoarele Remedia“, Romania) „GinkoPrim 40 mg" tablets („Walmark“, Czech Republic) overall phenolic compounds were similar (p> 0.05). In food supplements: „Ginkgo max 120 mg“ capsules („PAR PAK“, Serbia), „Ginko Biloba Princeps 120 mg“ capsules („Labatoarele Remedia“, Romania), overall phenolic compounds ranged from 3.65 mg to 11.14 mg. Products antioxidant activity was evaluated using DPPH spectrophotometric method for solubility test. Of the tested products, the highest antioxidant activity of

88.34% was noted in medicine „Bilobil 40 mg“ capsules („KRKA“, Slovenia), the lowest - 18.6% in food supplement „Ginko max 120 mg“ capsules („PAR PAK“, Serbia). Moderate correlation was set between the total phenolic compounds and antioxidant activity (R = 0.64). Carried out the dissolution test in all tested products, after 45 minutes, more than 75% of the active material's got loose. After 60 minutes setting phenolic compounds with spectrophotometrical method in tested products, the biggest of them divorced 6.51 mg of the prescribed dose „Bilobil 40 mg“ capsules („KRKA“, Slovenia) and the lowest 3.1 mg – in food supplement „GinkoPrim 40 mg" tablets („Walmark“, Czech Republic). In solubility test, after 60 min., using spectrophotometric DPPH method in tested products, the highest antioxidant activity of 85.07% was noted in medicine „Bilobil 40 mg“ capsules („KRKA“, Slovenia), the lowest 25.34% - in food supplement „GinkoPrim 40 mg" tablets („Walmark“, Czech Republic). Comparing the results with solubility results higher antioxidant activity is detected when the substances are dissolved without capsules. This suggests that the capsule shells had an impact on release of active substances.

SANTRUMPOS

AKS – arterinis kraujo spaudimas

DPPH – 2,2-difenil-1-pikrilhidrazilas (angl. 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl) EFSA – Europos maisto ir saugos tarnyba (angl. European Food Safety Authority) EGb 761 – standartizuotas dviskiaučių ginkmedžių lapų ekstraktas

GRE – galo rūgšties ekvivalentas RMV – referencinė maistinė vertė RNS – reaktyvi azoto forma ROS – reaktyvi deguonies forma

SOD – mitochondrijų superoksiddismutazė UV – ultravioletiniai spinduliai

NMVRVI – nacionalinis maisto ir veterinarijos rizikos vertinimo institutas VMVT - Valstybinė maisto ir veterinarijos tarnyba

SĄVOKOS

Augalinis vaistinis preparatas - vaistinis preparatas, kurio veiklioji(-iosios) medžiaga(-os) yra arba augalinė(-ės) medžiaga(-os), arba augalinis(-iai) ruošinys(-iai), arba tokios(-ių) augalinės(-ių) medžiagos(-ų) ir tokio(-ių) augalinio(-ių) ruošinio(-ių) mišinys [5].

Maisto papildas – tai maisto produktas, skirtas papildyti įprastą maisto racioną ir kuris vienas arba derinyje su kitomis medžiagomis yra koncentruotas maistinių ar kitų medžiagų, turinčių mitybinį arba fiziologinį poveikį, šaltinis [7].

Vaistas (vaistinis preparatas) – vaistinė medžiaga arba jų derinys, pagaminti ir teikiami vartoti, kadangi atitinka bent vieną šių kriterijų: 1) pasižymi savybėmis, dėl kurių tinka žmogaus ligoms gydyti arba jų profilaktikai; 2) dėl farmakologinio, imuninio ar metabolinio poveikio gali būti vartojamas ar skiriamas atkurti, koreguoti ar modifikuoti žmogaus fiziologines funkcijas arba diagnozuoti žmogaus ligas [5].

ĮVADAS

Augalinės kilmės vaistiniai preparatai ir maisto papildai plačiai vartojami esant širdies ir kraujotakos, nervų sistemos, kvėpavimo takų sutrikimams ir kitiems negalavimams gydyti. Viena populiariausių augalinių vaistinių žaliavų yra dviskiaučių ginkmedžių (Ginkgo biloba L.) lapai [28]. Lengviau prieinami pacientams ir daugiau reklamuojami dviskiaučių ginkmedžių preparatai, kurie registruoti kaip maisto papildai. Šiuo metu dviskiaučių ginkmedžio preparatų pasirinkimas yra didelis. Tačiau žinoma, kad jų veiksmingumas klinikiniais tyrimais yra mažai ištirtas. Vartojimo saugumas ir veiksmingumas abejotinas. Maisto papildų notifikacijai gauti Lietuvoje, tereikia, kad pakuotės ženklinimas atitiktų keliamus reikalavimus. Pasirodo, rinkoje vis dar yra ir tie, kurių notifikacija yra nagrinėjama. Lietuvoje yra registruotų ir vaistinių preparatų savo sudėtyje turinčių dviskiaučių ginkmedžių sausojo lapų ekstrakto. Vaistų veiksmingumas ir saugumas yra pagrįstas klinikiniais tyrimais. Už jų sukeliamą farmakologinį poveikį atsakingi sudėtyje esantys terpenolaktonai, flavonodai ir jų glikozidai. Renkantis preparatus reikėtų žiūrėti į šių medžiagų kiekius, atkreipti dėmesį į dviskiaučių ginkmedžių preparatų standartizaciją. Rekomenduojama vartoti tik standartizuotą dviskiaučių ginkmedžio ekstraktą. Nes jų sudėtyje yra pašalintos medžiagos (ginkolinė ir anakardinė rūgštys), kurios gali sukelti alergines reakcijas. Ginkolinės rūgšties kiekis preparate negali viršyti 5 mg/kg (5 ppm) [20].

Darbo teorinė ir praktinė reikšmė: buvo ištirtas Lietuvoje registruotų vaistų, bei maisto papildų asortimentas, savo sudėtyje turinčių dviskiaučių ginkmedžių lapų sausojo ekstrakto, nustatytas fenolinių junginių kiekis ir antioksidacinis aktyvumas spektrofotometriniu metodu. Šis metodas buvo pasirinktas, dėl savo tikslumo bei lengvai modifikuojamos ir automatizuojamos tyrimo metodikos.

Tyrimo problema: Maisto papildų kokybinė sudėtis nurodoma pakuotės ženklinime. Pagal galiojančius reikalavimus sudėties kokybinė analizė nepateikiama, tad pasitikima tik gamintojo pateikiama informacija. Valstybinė maisto ir veterinarijos tarnyba, notifikuojanti maisto papildus Lietuvoje, kasmet užsako kokybinę analizę keletui preparatų. Dažnai šių vertinimų rezultatai nepatvirtina pakuotės ženklinime nurodytos informacijos. Todėl yra aktualu tirti ir žinoti ar veikliosios medžiagos kiekis yra toks koks nurodomas pakuotės ženklinime.

Tyrimo tikslas: Siekiama įvertinti Lietuvoje registruotų vaistų ir maisto papildų savo sudėtyje turinčių dviskiaučių ginkmedžių lapų sausojo ekstrakto pasirinktų preparatų sudėties kokybę, nustatant veikliųjų medžiagų kiekį – bendrą fenolinių junginių kiekį ir įvertinant antioksidacinį aktyvumą.

DARBO TIKSLAS IR UŽDAVINIAI

Darbo tikslas: atlikti Lietuvoje registruotų dviskiaučių ginkmedžių preparatų sudėčių ir farmacinių formų palyginamąją analizę, įvertinti pasirinktus preparatus kiekybiškai, nustatant bendrą fenolinių junginių kiekį ir antioksidacinį aktyvumą.

Darbo uždaviniai:

1. Ištirti Lietuvos vaistinėse esančių preparatų su dviskiaučių ginkmedžių ekstraktu pasiūlą. 2. Atlikti šių preparatų palyginamąją analizę vertinant sudėtis ir farmacines formas.

3. Pasirinktuose preparatuose nustatyti bendrą fenolinių junginių kiekį spektrofotometriniu metodu.

1. LITERATŪROS APŽVALGA

1.1. Istorinės žinios apie dviskiautį ginkmedį

Dviskiautis ginkmedis (Ginkgo biloba L.) priklauso ginkmedainių (Ginkoopsida L.) klasei, Ginkmedinių (Ginkgoaceae L.) šeimai. Šį augalą Darvinas dar kitaip vadino „gyvąja iškasena“, nes tai rūšis, kuri gyvavo senaisiais laikais ir išliko iki šiol. Jam daugiau kaip 250 milijonų metų. Kadaise ši klasė buvo gausi, tačiau šiandien jai teliko tik šis atstovas. Pirmasis dviskiaučio ginkmedžio vardas buvo kiniškas „YaChio“, kuris reiškė anties pėda. Šis pavadinimas dar išliko Japonijoje iki šiandien. Taip pat jį vadino „YinHsing“ (auksinis persikas) ar „KungSunShu“ (senelio-anūko medis). 1712 m. Englbert Kaempfer pirmasis panaudojo pavadinimą „Ginko“. 1771 m. Linėjus jį pavadino „Ginkobiloba“ (bi – du, loba – skiautės). Šešioliktame amžiuje Kinijos farmakopėjoje minimi vaistinio dviskiaučių ginkmedžio lapai ir vaisiai [3]. Tėvynė laikoma rytų Azija (Kinija, Japonija, Korėja). Apie 1730 m. atvežtas į Europą [9].

1.2. Dviskiaučio ginkmedžio botaninis apibūdinimas

Dviskiautis ginkmedis yra trijų metrų skersmens, iki 40 m aukščio dvinamis medis. Vyriškieji augalai nuo moteriškųjų skiriasi siauromis medžio lajomis. Žievė gali būti nuo šviesiai iki tamsiai pilkos spalvos, su stambiomis raukšlėmis, kurios turi tinklą sudarančius plyšimus. Lapai dviskiaučiai, ilgakočiai, vėduoklės formos. Gyslotumas dichotominis. Pavasarį ir vasarą lapai žali, rudenį geltoni, prieš žiemą nukrenta. Dviskiaučio ginkmedžio vaisius – baltos spalvos, tribriaunis kaulavaisis [9].

1.3. Dviskiaučių ginkmedžių lapų pagrindinės veikliosios medžiagos

Dviskiaučio ginkmedžio sudėtyje yra pagrindinės dvi junginių klasės: flavonoidai, kurie skirtomi į: flavonus, flavononus, izoflavonus, antocianus, katechinus ir terpenoidai, kuriuos sudaro: diterpenoidai - ginkolidai A, B, C, J, M, triterpenoidai (steroliai), bilobalidai. Didelę reikšmę turi ir organinės rūgštys, benzoinės rūgšties dariniai, tai ginkolinės rūgštys. Jos gali pasižymėti toksinėmis savybėmis atsižvelgiant į kiekį preparate. Taip pat yra ir kitų junginių: maži kiekiai vaškų, cukrų, steroidų ir kt. [1].

1.4. Flavonoidų klasifikacija ir struktūros ypatybės

Flavonoidai priskiriami polifenoliniams junginiams. Jų struktūrinė formulė sudaryta iš 15 anglies atomų ir dviejų benzeno žiedų (A ir B), kurie yra sujungti heterocikliniu pirano žiedu. Ši struktūra dar gali būti vaizduojama kaip C6 – C3 – C6 sistema, kurią sujungia trijų C atomų linijinė grandinė [22,40,42].

(C6 – C3 – C6 sistema)

1 pav. Pagrindinės favonoidų aglikono struktūrinės formulės [22;40]

Flavonoidai gali būti klasifikuojami pagal biosintezės kilmę ir cheminės struktūros sandarą.

Pagal biosintezės kilmę yra išskiriami: a. tarpiniai ir galutiniai produktai,

b. galutiniai produktai.

Tarpiniams ir galutiniams produktams priskiriami: flavononai, chalkonai, katechinai ir leukoantocianidinai. Galutiniams produktams priskiriami: antocianai, flavonoliai ir flavonai [27].

Pagal cheminės struktūros sandarą skirstomi į:

1. Flavonus, kuriems priskiriami: apigeninas, luteolinas, flavonas, viteksinas. Jie ketvirtoje padėtyje turi keto grupę. Taip pat tarp antro ir trečio C atomo yra dviguba jungtis. Penktoje, septintoje, ketvirtoje padėtyje yra hidroksi grupė.

2. Flavonolius. kuriems priklauso: rutinas, flavonolis, kvercetinas, kemferolis, hiperozidas. Panašūs į flavonus, tačiau trečioje padėtyje turi hidroksi grupę.

3 pav. Flavonolio struktūrinė formulė [22]

3. Flavononus, kuriems priskiriami: hesperidinas, flavononas, likviritigeninas, eriodiktinas. Nuo flavonų skiriasi, kad prie antros ir trečios padėties vienguba jungtis.

4 pav. Flavonono struktūrinė formulė [22]

4. Flavan-3-olius, kuriems priskiriamas: katechinas. Panašūs į flavonus, tačiau tarp antros ir trečios padėties vienguba jungtis. Ketvirtoje padėtyje nėra keto grupės.

5. Leukoantocianidinus, kuriems priskiriami: leukoantocianidinas ir leukopianidinas. Dar kitaip jie vadinami flavan 3,4- dioliai. Todėl, kad prie trečios ir ketvirtos padėties yra dvi hidroksi grupės. Tuo ir skiriasi nuo flavan 3 - olių. Nuo flavonų skiriasi antros ir trečios viengubos padėties jungtimi ir vietoj keto grupės yra hidroksi grupė.

6 pav. Leukoantocianidinų struktūrinė formulė [14]

6. Antocianus, kuriems priskiriami: antocianas, malvidinas, cianidinas, pelargonidinas. Nuo flavonų struktūros skiriasi trim aspektais. Jie neturi keto grupės, prie antros ir trečios padėties vienguba jungtis, bei prie trečios padėties yra hidroksi grupė.

7 pav. Antocianų struktūrinė formulė [22]

7. Chalkonus, kuriems priskiriami: chalkonas, izolikviritinas, 3,4- dihidroksichalkonas. Jie turi atvirą struktūrą, tai pirono žiedas.

8. Auronus, kuriems priskiriami: auronas ir 3,4- dihidroksiauronas.skiriasi tuo, kad aromatinis žiedas (B) prisijungęs per vieną anglies atomo tiltelį, prie antros padėties.

9 pav. Auronų struktūrinė formulė [22]

9. Izoflavonoidus, kuriems priklauso: izoflavonas, ononinas, genistinas. Jie skiriasi nuo flavonų B žiedo prisijungimu trečioje padėtyje ir tarp antros ir trečios padėties vienguba jungtimi.

10 pav. Izoflavonoidų struktūrinė formulė [22]

10. Neoflavanoidus. Jų struktūra nuo flavonų skiriasi B žiedo prisijungimu ketvirtoje padėtyje.

11 pav. Neoflavanoidų struktūrinė formulė [22]

11. Biflavonoidus, kuriems priskiriamas ginkgetinas. Jis aptinkamas dviskiaučio ginkmedžio lapuose. Šie junginiai tai susijungusios dvi flavonoidų molekulės. Jos nuo flavonų skiriasi trečia padėtimi, kurioje yra hidroksi grupė ir septinta padėtimi, kurioje yra keto grupė.

12 pav. Biflavonoidų struktūrinė formulė [18]

1.5. Terpenoidų klasifikacija ir struktūros ypatybės

 Bilobalidus;

 Ginkolidus A, B, C, J, M.

13 pav. Ginkolidų ir Bilobalidų struktūrinės formulės [37]

Ginkolidų struktūra sudaryta iš: šešių penkianarių žiedų, spiro–4,4-nonanokarboksilinio žiedo, tetrahidrofurano ir trijų laktonų. Tai vieninteliai natūralūs produktai, kurie turi tetrabutil grupę. Ji prisijungusi prie B žiedo. Ginkolidai A, B, C, J, M skiriasi tarpusavyje hidroksi grupių padėtimis ir jų skaičiumi. Bilobalidai glaudžiai susiję su ginkolidais. Skiriasi nuo ginkolidų tik tetrafurano žiedu [37].

1.6. Ginkolinės rūgšties klasifikacija ir struktūros ypatybės

Ginkolinės rūgšties struktūra yra paprastesnė. Ją sudaro karboksi rūgštis (salicilo rūgštis) ir hidrooksilo grupė (ilga grandinė anglies pakaitų). Taip pat turi dvigubą jungtį alkilo grandinėje.

14 pav. Ginkolinės rūgšties struktūrinės formulės [31]

1.7. Pagrindinių veikliųjų medžiagų savybės ir poveikis organizmui

Flavonoidai (lot. flavus – geltonas) tai nėra tikri vitaminai, tai augalų pigmentai. Istorijoje vadinami vitaminu P. Augalus jie apsaugo nuo saulės ultravioletinių spindulių (UV), juos sugerdami [2]. Iš visų flavonoidų daugiausiai išanalizuoti ir dažniausiai sutinkami yra: rutinas (vitaminas P1), hisperidinas (vitaminas P2), kvercetinas, sojų izoflavonoidai, antocianai (iš dviskiaučių ginkmedžių ir vynuogių), proantocianidinai (iš spanguolių), flavanai (iš arbatos ir obuolių). Flavonoidus būtina gauti su maistu, nes žmogaus organizme jie nesigamina. Jiems būdingos priešuždegiminės [11], priešalerginės, priešvirusinės [40], priešvėžinės savybės [8]. Pagerina vitamino C įsisavinimą, todėl dažnai sutinkame vitamino C preparatuose. Flavonoidai pasižymi antioksidacinėmis savybėmis[11], sujungia laisvuosius radikalus [40], apsaugo vitaminus nuo oksidacijos. Jie svarbūs kraujagyslių sienelėms. Kartu su vitaminu C, mažina jų trapumą, pralaidumą bei gerina kraujotaką. Todėl vartojami lėtinio venų nepakankamumo atveju, bei profilaktikai. Dalyvauja kremzlių medžiagų apykaitoje, skatina kolageno sintezę, stiprina jungiamuosius audinius. Kvercetinas, dihidrokvercetinas, rutinas, leukocianidinas, katechinas pasižymi antivirusiniu poveikiu herpes ir kitų šešių tipų virusams [14]. Žinoma, kad antihistaminį poveikį turi hisperidinas bei kvercetinas, nes jie mažina histamino išsiskyrimą organizme, taip slopindami alergines reakcijas. Antocianinai ir proantocianidinai reikalingi akims. Stiprina tinklainės kapiliarus, vartojami esant geltonosios dėmės degeneracijai, padeda sergant

katarakta. Taninai ir katechinai dalyvauja organizmo detoksikacijoje, ją skatina [8]. Dviskiautyje ginkmedyje esantys terpenoidai (ginkolidai) pasižymi trombocitų agregaciją slopinančiu poveikiu [11], stiprina insulino gamybą [34].

Toksikologijos tyrimai rodo, kad ginkolinė rūgštis esanti dviskiaučio ginkmedžio lapuose, yra toksiška. Sukelia alergines reakcijas, toksiškos imuninėms ląstelėms, embrionui. Patekusios ant odos sukelia uždegimą, o prarijus, sutrikdo virškinamo trakto veiklą. Pagal farmakopėjos standartus Europoje, JAV, Japonijoje ir Kinijoje ginkolinės rūgštys dviskiaučio ginkmedžio ekstraktuose yra griežtai ribojamos. Europos ir Amerikos farmakopėjose ginkolinės rūgšties kiekis negali viršyti 5 ppm. Kinijos farmakopėjoje leistina iki 10 ppm [32].

1.8. Dviskiaučių ginkmedžio preparatų vartojimo paskirtis

Dviskiaučių ginkmedžių preparatai gaminami iš standartizuoto dviskiaučių ginkmedžių lapų sausojo ekstrakto (EGb 761) (35-67:1), kuriame yra 24 proc. flavonoidų glikozidų ir 6 proc. terpenoidų [33]. Vokietijos ir Prancūzijos sveikatos ekspertai yra patvirtinę EGB 761 sudėtį: 22–27 proc. flavanoidų, 5–7 proc. terpenoidų, iš kurių: 2,8–3,4 proc. ginkgolidų A, B ir C ir 2,6–3,2 proc. bilobalido ir mažiau nei 5 ppm ginkolinių rūgščių [2]. Gaminant vaistinius preparatus su dviskiaučiu ginkmedžiu, svarbiausia pašalinti neaktyvias ir nuodingąsias medžiagas (pvz. ginkolinę rūgštį) ir išlaikyti bei praturtinti veikliąsias medžiagas preparate, tačiau maisto papilduose dažnai yra nestandartizuoti ekstraktai. EGb 761 turi platų farmakologinį poveikį. Vartojamas esant kognityvinei disfunkcijai [13], smegenų nepakankamumui, kuris pasireiškia sutrikusia atmintimi [36], koncentracija, taip pat kai jaučiamas išsiblaškymas, nuovargis, sumišimas, sumažėjęs fizinis darbingumas, bloga nuotaika [44], galvos svaigimas [35], spengimas ausyse, galvos skausmas ir jaučiamas nerimas. Dviskiautis ginkmedis turi funkciją plėsti kraujagysles [39], todėl jis šiek tiek gali mažinti kraujo spaudimą. Pagerina kraujo tekėjimą [12], todėl vartojamas esant periferinių kraujagyslių sutrikimams, pvz. esant galūnių šalimui, protarpiniam šlubavimui [29, 35], akių kraujotakai gerinti [38]. Dviskiaučio ginkmedžio lapų sausasis ekstraktas pasižymi trombocitų agregaciją slopinančiu poveikiu, taip sumažindamas kraujo klampumą [15]. Tai natūralus antioksidantas, surišantis laisvuosius radikalus ir vartojamas esant oksidaciniam stresui [23].

Dviskiautis ginkmedis yra plačiai vartojamas dėl savo galimo poveikio atminčiai ir pažinimo funkcijai. Tačiau klinikinių tyrimų nepakanka įrodyti farmakologinei indikacijai. Būta kontraversiškų nuomonių apie dviskiaučio ginkmedžio poveikį demensijai, jos profilaktikai.

Buvo atliktas atsitiktinių imčių tyrimas. Dvigubai aklas, placebo kontroliuojamas. Dalyvavo 216 pacientų sergančių Alzhaimerio liga. Vienai grupei duodama placebo, kitai 240 mg sausojo

dviskiaučio ginkmedžio ekstrakto per dieną, 24 savaites. Tyrimą baigė 156 pacientai. Rezultatai reikšmingai skyrėsi tos grupės, kuri vartojo dviskiaučio ginkmedžio ekstraktą. Šį tyrimą atlikę autoriai padarė išvadą, kad dviskiaučio ginkmedžio ekstraktas yra naudingas demensijai ir Alzhaimerio ligai [46].

2010 metais atliktais tyrimais Weinmanno publikacijoje nustatyta, kad dviskiautis ginkmedis turi poveikį lengvai ir vidutiniai demencijai, ypač buvo matomas progresas sergant Alzhaimerio liga [47].

2014 metų publikacijoje skelbiama, kad atlikti klinikiniai tyrimai parodė dviskiaučio ginkmedžio sausojo ekstrakto EGb 761 klinikinį veiksmingumą, saugumą ir vaisto toleravimą gydant demensiją 240 mg paros doze. Šie gauti rezultatai buvo įvertinti atliekant atsitiktinių imčių, placebo kontroliuojamų, dvigubai aklų tyrimų serijoje [24].

Tačiau yra atliktų tyrimų, kurių rezultatai neparodė jokio poveikio demensijos profilaktikai ir yra priešingi Weinmanno gautiems rezultatams.

Nuo 2000 iki 2008 metų buvo atliktas tyrimas, penkiose akademinės medicinos centruose Jungtinėse Valstijose. Tyrimas buvo atsitiktinių imčių, dvigubai aklas, placebo kontroliuojamas. Jame dalyvavo trys tūkstančiai šešiasdešimt devyni bendruomenės savanoriai nuo 75 metų ir vyresni. Jie turėjo lengvus pažinimo funkcijos sutrikimus. Buvo atliekamas tyrimas norint sumažinti sergamumą demensija ir Alzhaimerio liga. 1545 tiriamiesiems buvo duodami 120 mg dviskiaučių ginkmedžių ekstrakto preparatai du kartus per dieną. Likusiems 1524 tiriamiesiems – placebas. Tyrimo rezultatai teigiamo poveikio neparodė. Demensijos susirgimų abiejuose grupėse buvo panašūs. Šio tyrimo išvadose nurodoma, kad dviskiautis ginkmedis yra neveiksmingas demensijos profilaktikai, sutrikusiam pažinimui ar Alzheimerio ligai [17].

Todėl negalima tvirtinti apie dviskiaučio ginkmedžio veiksmingumą demencijai, nes atliktų tyrimų rezultatai skirtingi. Tačiau remiantis 2014 metų Monografijos projektu, kuriame skelbiama dviskiaučių ginkmedžių lapų indikacijos, teigiama, kad dviskiautis ginkmedis turi poveikį su amžiumi susijusiam pažinimo sutrikimui ir gerina gyvenimo kokybę esant švelniai demensijai [19].

Europos maisto ir saugos tarnybos (EFSA) duomenimis maisto papilduose, turinčiuose dviskiaučių ginkmedžių lapų yra patvirtinta indikacija: padeda organizmą apsaugoti nuo oksidacinio streso, nes sudėtyje esantys polifenoliai, katechinai, flavonoliai pasižymi antioksidacinėmis savybėmis. Daugelis teiginių yra svarstomi: ar pagerina pažintinius gebėjimus, kognityvines funkcijas, atmintį, kraujo mikrocirkuliaciją, skatina periferinę kraujotaką, kuri yra naudinga akims ir ausims, ar turi poveikį kojų kraujotakai ir palaiko normalų venų tonusą, ar turi poveikį širdies ir kraujagyslių sistemai, lengvo ar vidutinio smegenų kraujotakos nepakankamumui, nervų sistemai, demensijai, nervinei ir dvasinei pusiausvyrai palaikyti. Maisto papilduose turinčiuose dviskiaučių ginkmedžių lapų sausojo ekstrakto svarstomos indikacijos: kraujotakos, pažinimo ir kognityvinių funkcijų gerinimas [21].

Pagal VVKT duomenis informaciniuose vaistų pakuotės lapeliuose dviskiaučių ginkmedžių preparatų indikacijos įvardijamos: senatvinių kraujo apytakos smegenyse bei smegenų funkcijos sutrikimų (demencijos sindromo, sergant pirmine degeneracine demencija, kraujagysline demencija arba mišria jų forma) simptominis gydymas. Periferinių arterijų ligos pradinių stadijų (protarpinio šlubumo) simptomų lengvinimas. Homeopatiniam preparate: kraujotakai gerinti. Dėl kraujotakos sutrikimų atsiradusiam sunkumo kojose ir šąlančių plaštakų bei pėdų pojūčiui mažinti. Lengvo ir vidutinio vyresnio amžiaus žmonių smegenų kraujotakos nepakankamumo, pasireiškiančio susilpnėjusia atmintimi ir dėmesio koncentracija, bloga nuotaika, spengimu ar ūžimu ausyse, svaiguliu ar galvos skausmu, simptominis gydymas. Organinės smegenų ligos sukelto atminties ir dėmesio susilpnėjimo bei senyvų žmonių nuovargio simptominis gydymas. Periferinių kraujagyslių ligos (protarpinio šlubumo) simptominis gydymas. Simptominis kognityvinių sutrikimų gydymas pacientams, sergantiems lengva ir vidutine demencija (pirmine degeneracine Alzheimerio tipo, kraujagysline arba mišria demencija). Kraujagyslinės kilmės galvos svaigimo gretutinis gydymas kartu su vestibuline reabilitacija. Papildomas ūžesio ausyse gydymas. [10]

1.9. Dviskiaučių ginkmedžio lapų sausojo ekstrakto antioksidacinis poveikis

Atioksidacinis poveikis mūsų organizmui yra labai svarbus. Ši apsaugos sistema palaiko ląstelių homeostazę. Kai kuriuos antioksidantus organizmas pasigamina pats, kitus gauna su maistu. Vieni iš jų - augalinės kilmės antioksidantai. Neleidžia susidaryti laisviesiems radikalams, dalyvauja suardymo procese bei juos slopina. Vienas iš dažniausiai vartojamų augalinių antioksidantų yra standartizuotas dviskiaučių ginkmedžių (Ginkgo biloba L.) lapų sausasis ekstraktas (EGB 761). Nustatyta, kad standartizuotam dviskiaučių ginkmedžių lapų ekstraktui antioksidacines savybes suteikia jame esantys flavanoidai (glikozidai) ir terpenoidai (ginkolidai, bilobalidai) [1]. Pagal antioksidacinio aktyvumo mechanizmą flavanoidai priskiriami egzogeniniems, riebaluose tirpiems antioksidantams [27]. Flavanoidų antioksidacinis aktyvumas turi 4 mechanizmus. 1) Tiesiogiai prisijungiant laisvuosius radikalus. 2) Surišant pereinamųjų metalų jonus 3) Veikiant antioksidacinę ląstelės sistemą 4) Sąveikaujant su lipidų biosluoksniu biomembranose. Tyrimai parodė, kad pats svarbiausias antioksidacinis flavanoidų mechanizmas yra tiesiogiai prisijungti ir neutralizuoti susidariusius laisvuosius radikalus. Ištirta, kad laisvųjų radikalų sujungimas vyksta fenoliniams junginiams atiduodant laisvos hidroksilo grupės vandenilio 21 atomą. Flavonoidų dariniai, turintys savo struktūros žieduose daug -OH grupių, turi stiprų afinitetą peroksido radikalams ir geba inaktyvinti superoksido anijoną (O2.-), alkoksilo (RO·) hidroksilo (OH·), radikalus [41]. Tyrimu metu nustatyta, kad EGB 761 flavonoidai pasižymi žymiai stipresniu antioksidaciniu poveikiu prieš hidroksilo

radikalus nei terpenoidai. Dažniausiai prisijungiami yra hidroksilinimo ir peroksidacijos metu susidarę laisvieji radikalai [46]. Padidėjęs laisvųjų radikalų kiekis organizme gali būti vėžio, miokardo infarkto, aterosklerozės, uždegimų priežastis [45]. Flavonoidai gali netiesiogiai dalyvauti oksidacinių pažaidų mažinime. Tyrimai parodė, kad šie junginiai veikia slopindami fermentus, dalyvaujančius RNS (reaktyvių azoto formų) ir ROS (reaktyvių deguonies formų) susidaryme. Flavonoidai gali sąveikauti su kitais antioksidacinės sistemos komponentais: veikia fermentų SOD (mitochondrijų superoksiddismutazę), katalazės ekspresiją, didina redukuoto glutationo sintezę, bei II fazės fermento glutationo S-Transferazės ekspresiją [35]. Antioksidacinis flavonoidų poveikis priklauso nuo struktūros, OH grupės bei 2,3-dvigubos jungties B–žiede, taip pat 3 ir 5-OH grupių A, C – žieduose [16].

1.10. Dviskiaučių ginkmedžių preparatų dozavimas, vaistų sąveikos ir

kontraindikacijos

Didesnė veikliųjų medžiagų koncentracija yra dviskiaučių ginkmedžių lapų sausuose ekstraktuose, o ne lapų miltelių preparatuose [19]. Dviskiaučių ginkmedžių lapų preparatų stiprumas vertinamas pagal sudėtyje esančių aktyvių medžiagų: flavonoidų, glikozidų ir terpenolaktonų kiekį. 2014 metų monografijoje skelbiama, kad leista prekiauti dviskiaučių ginkmedžių lapų sausuoju ekstraktu santykiu 35-67:1, kurio ekstrahentas: acetonas 60% m/m. Patvirtinta suaugusiems vienkartinė dozė yra 120-240 mg, paros dozė 240 mg. Gydymo trukmė: mažiausiai 8 savaitės. Lietuvos rinkoje registruotuose dviskiaučių ginkmedžių lapų sausojo ekstrakto preparatuose yra nuo 40 mg iki 240 mg vienoje kapsulėje ar tabletėje. Pagal šį kiekį atitinkamai rekomenduojamas ir vartojimo dažnis. Dažniausiai ant preparatų pakuotės nurodomi šie ekstrakto kiekiai: 40, 60, 80, 120 mg.

Žinant, kad dviskiautis ginkmedis slopina trombocitų agregaciją, nederėtų jo vartoti kartu su antikoaguliantais pvz. varfarinu, aspirinu, klopidrogeliu ir kitais kraują skystinančiais preparatais, taip pat ir žuvų taukais. Juos vartojant kartu pastebėtas šalutinis poveikis: pacientams atsiranda kraujosruvos. Nustojus vartoti kraujavimo laikas žymiai sutrumpėja [15]. Taip pat likus trims ar keturioms dienoms iki chirurginės intervencijos, pacientai turėtų nutraukti dviskiaučio ginkmedžio vartojimą, kad nekiltų kraujavimas. Nėštumo ir žindymo metu dviskiaučių ginkmedžių preparatai neturėtų būti vartojami, nes atliktų klinikinių tyrimų nėra, jų saugumas nėra žinomas [19]. Atliekant klinikinius tyrimus buvo pastebėta, kad dviskiautis ginkmedis turi poveikį į virškinimo traktą (būdingi simptomai: viduriavimai, pilvo skausmai, pykinimai, vėmimai). Gali sukelti galvos skausmą, svaigimą, imuninės sistemos sutrikimus, alergines odos reakcijas: paraudimą, niežulį, bėrimą. Gali pasireikšti alerginis šokas [19].

1.11. Maisto papildų notifikavimas

Kaip skelbia valstybinė maisto ir veterinarijos tarnyba maisto papildas tai yra maisto produktas, kurio paskirtis yra papildyti kasdieniškas maisto porcijas koncentruotomis maisto medžiagomis, turinčiomis mitybinį ar fiziologinį poveikį. Naudotini vienetai ženklinant vitaminus ir mineralines medžiagas yra nurodyti Komisijos reglamento (EB) Nr. 1170/2099 1 priede. Maisto papildai, į rinką, tiekiami įvairiomis dozuotomis formomis: kapsulėmis, tabletėmis, pastilėmis, piliulėmis, miltelių maišeliais, taip pat ampulėmis, buteliukais, kurie turi lašų dozatorius ir kitomis panašiomis formomis [7].

Kad maisto papildas patektų į Lietuvos rinką turi atitikti tam tikrus reikalavimus. Pagal Lietuvos higienos normos HN 17:2010 „Maisto papildų ženklinimo reikalavimai“ 6 punkto reikalavimus ženklinant, maisto papildo etiketėje turi būti užrašas „maisto papildas“. Ant maisto papildo dėžutės negali būti nurodyta gydomosios ar profilaktinės savybės ar nuorodos į jas. Pagrindiniai dalykai, kurie turėtų būti maisto papildo etiketėje yra: pavadinimas, sudedamosios dalys, maistinių ar kitų medžiagų kiekiai, kurie turi mitybinį ar fiziologinį poveikį, medžiagų kiekių referencinė maistinė vertė (RMV). Taip pat turi nurodyti kokį RMV procentą tai sudaro. Tai gali būti nurodoma ir grafine forma. Privalomi perspėjimai, kaip: neviršyti nustatytos rekomenduojamos dozės, maisto papildas turi būti laikomas vaikams nepasiekiamoje vietoje, ir privalomas paaiškinimas: maisto papildas neturėtų būti vartojamas kaip maisto pakaitalas. Jei sudėtyje yra kofeino, tai įvardinti: „Sudėtyje yra kofeino. Nerekomenduojama vaikams ir nėščioms moterims.“ Ženklinant maisto papildus būtina nurodyti: tinkamumo vartoti terminą, specialias laikymo sąlygas ir vartojimą, bei Europos sąjungoje įsisteigusio gamintojo, pakuotojo ar pardavėjo pavadinimą ar firmos vardą ir adresą [6].

Nacionalinis maisto ir veterinarijos rizikos vertinimo institutas (NMVRVI) vertina gautą maisto papildo pakuotės ženklinimo tekstą, ar atitinka teisės aktų reikalavimus, per 20 darbo dienų. Jei maisto papildas neatitinka reikalavimų, apie tai informuojama Lietuvos Respublikos valstybinė maisto ir veterinarijos tarnyba (VMVT).

Pagal 2015.03.16 dienos Valstybinės maisto ir veterinarijos tarnybos duomenis, Lietuvos maisto papildų rinkoje yra 14 notifikuotų maisto papildų, sudėtyje turinčių dviskiaučių ginkmedžių sausojo ekstrakto. Taip pat 12 maisto papildų esančių Lietuvos maisto papildų rinkoje ir sudėtyje turinčių dviskiaučių ginkmedžių lapų sausojo ekstrakto, kurių notifikacija yra nagrinėjama.

2. TYRIMO METODIKA

2.1. Tyrimo objektai:

Eksperimentinį tyrimą sudarė dvi dalys. Pirma dalis- tirpumo testas. Jame buvo pasirinkti du vaistai ir keturi maisto papildai. Antra tyrimo dalis - tirpimo testas. Jame buvo pasirinkti du vaistai ir du maisto papildai iš pirmosios tyrimo dalies, savo sudėtyje turintys dviskiaučių ginkmedžių lapų sausąjį ekstraktą.

Šių preparatų atrankumas grindžiamas:

1. Dviskiaučių ginkmedžių lapų sausojo ekstrakto kiekiu preparate: 40 mg ir 120 mg; 2. Vaistai (VVKT) ir maisto papildai (VMVT);

3. Farmacinė forma (kapsulės ir tabletės).

4. Sudėtimi. Tyrimui buvo pasirinkta Lietuvoje registruoti vienkomponenčiai dviskiaučių ginkmedžių lapų sausojo ekstrakto preparatai, taip pat dvikomponentis preparatas, kurio sudėtyje esančią dviskiaučių ginkmedžių lapų ekstraktą papildo magnis.

1 lentelė. Tirpumo testui pasirinkti preparatai

Eil. Nr. Preparato registracija Preparato pavadinimas

Veiklioji medžiaga Preparato pagalbinės medžiagos 1. Vaistas Tanakan 40 mg, tabletės („Ipsen Pharma“, Prancūzija) EGb 761 (35-67:1), atitinkančio: - 8,80 mg – 10,80 mg flavonoidų, išreikštų pagal flavonų glikozidus, - 1,12 mg – 1,36 mg ginkgolidų A, B ir C, - 1,04 mg – 1,28 mg bilobalido.

Tabletės branduolys: laktozės monohidratas, mikrokristalinė celiuliozė, kukurūzų krakmolas,

bevandenis koloidinis silicio dioksidas, talkas, magnio stearatas.

Tabletės plėvelė: hipromeliozė, makrogolis 400, makrogolis 6000, titano dioksidas (E171), raudonasis geležies oksidas (E172).

2. Vaistas Bilobil 40 mg, kapsulės („KRKA“ Slovėnija) EGb 761 Sausojo ekstrakto (35-67:1), atitinkančio: -8,8-10,8 mg flavonoidų (išreikštų flavonų glikozidais); -1,12-1,36 mg ginkgolidų A,B ir C; -1,04-1,28 mg bilobalido.

Kapsulės turinys: laktozės monohidratas, kukurūzų

krakmolas,talkas (E553b), koloidinis silicio dioksidas, bevandenis magnio stearatas (E572).

Kapsulės apvalkalas: titano dioksidas (E171), indigotinas (E132), azorubinas (E122),raudonasis geležies oksidas (E172),juodasis geležies oksidas (E172), želatina (E441), žolinio preparato pagalbinė medžiaga:

3. Maisto papildas, notifikuotas Ginko Biloba Princeps 40 mg, kapsulės („Laboratoarel e Remedia“ Rumunija) EGb 761, kuriame yra 24% flavoninių glikozidų ir 6% terpenlaktonų

Kapsulės turinys: laktozė.

Kapsulės apvalkalas: želatina, lipnumą reguliuojančios medžiagos talkas, magnio stearatas. 4. Maisto papildas, notifikuotas Ginko Biloba Princeps 120 mg, kapsulės („Laboratoarel e Remedia“ Rumunija) EGb 761, kuriame yra 24% flavoninių glikozidų ir 6% terpenlaktonų

Kapsulės turinys: laktozės monohidratas.

Kapsulės apvalkalas: želatina, lipnumą reguliuojančios medžiagos stearino rūgšties magnio druska, talkas, silicio dioksidas. 5. Maisto papildas, notifikacija nagrinėjama Ginko max 120 mg, kapsulės („PAR PAK“ Serbija) EGb 761 kuriame yra 24% flavonoidų

Kapsulės turinys: maltodekstrinas, lipnumą reguliuojanti medžiaga silicio dioksidas, kalcio stearatas.

Kapsulės apvalkalas: želatina, dažikliai titano dioksidas ir geltonasis geležies oksidas. 6. Maisto papildas, notifikuotas GinkoPrim 40 mg, tabletės („Walmark“ Čekija) EGb 761, kuriame yra 24% flavono glikozidų ir 6% terpeninių laktonų; Magnio 150 mg

Tabletės sudėtis: lipnumą reguliuojančios medžiagos: mikrokristalinė celiuliozė, magnio stearatas, talkas; magnio oksidas, stabilizatorius:

hidroksipropilmetilceliuliozė; vidurinės grandies trigliceridai,

dažikliai: titano dioksidas, briliantinis mėlynasis FCF, dažinio dygmino koncentratas.

Tirpumo tyrime siekta, kad šis atrankumas parodytų ar skiriasi, ir kiek skiriasi tokio pačio stiprumo preparatų fenolinių junginių kiekis ir antioksidacinis aktyvumas vaistuose ir maisto papilduose.

2 lentelė. Tirpimo testui pasirinkti preparatai

Eil. Nr. Preparatai*

1. Vaistas Tanakan 40 mg, tabletės („Ipsen Pharma“, Prancūzija) 2. Vaistas Bilobil 40 mg, kapsulės („KRKA“ Slovėnija)

3. Maisto

papildas

Ginko Biloba Princeps 40 mg, kapsulės („Laboratoarele Remedia“ Rumunija)

4. Maisto

papildas

GinkoPrim 40 mg, tabletės („Walmark“ Čekija)

* Preparatų sudėtys nurodytos 1 lentelėje.

Tirpimo tyrime siekta išsiaiškinti: per kiek laiko iš preparatų išsiskiria maksimalus fenolinių junginių kiekis; kada antioksidacinis aktyvumas būna didžiausias; kaip skiriasi šių

medžiagų kiekio išsiskyrimas vaistuose ir maisto papilduose; ar magnis ir pagalbinės preparatų medžiagos turi įtakos fenolinių junginių išsiskyrimui ir antioksidaciniam aktyvumui.

Tirpumo tyrimui:

Vienos mechaniškai susmulkintos tabletės milteliai arba vienos kapsulės turinys tirpinamas 100 ml išgryninto vandens. Tirpalas filtruojamas pro 0,45 μm miliporų filtrą. Šis tirpalas buvo naudojamas bendro fenolinių junginių kiekio ir DPPH antioksidacinio aktyvumo nustatymui.

Tirpimo tyrimui:

Tabletė arba kapsulė įdedama į krepšelinį prietaisą. Tyrimas atliekamas 37°C temperatūroje 500 ml vandenyje. Kas penkiolika minučių keturis kartus paimama po 5 ml tirpalo. Tirpalas filtruojama pro 0,45 μm miliporų filtrą. Šis tirpalas buvo naudojamas bendro fenolinių junginių kiekio ir DPPH antioksidacinio aktyvumo nustatymui.

2.2. Naudoti reagentai

1. Išgrynintas vanduo (Ph.Eur. 01/2008:0008, LSMU Laboratorija); 2. Etilo alkoholis 96° (UAB „Stumbras“ Lietuva);

3. 2,2-difenil-1-pikrilhidrazyl reagentas (,,Sigma-Aldrich”, Vokietija); 4. Folin- Ciocalteu reagentas („Sigma“ Šveicarija);

5. Natrio karbonatas („Sigma“ Šveicarija); 6. Galo rūgštis („Sigma“ Šveicarija).

2.3. Naudoti prietaisai

1. Spektrofotometras (UNICOM UV/VIS; Didžioji Britanija); 2. Besisukančio krepšelio aparatas („ERWEKA“; Vokietija) Jis sudarytas iš:

 Cilindrinio indo, kuris turi 1 litro talpyklą. Kad sulėtintų garavimą, talpykla uždengiama dangteliu, kurio centre yra skylė maišyklės velenui, ir kitos skylės: termometrui, priemonėms skysčiui ištraukti [4].

 Maišiklis, sudarytas iš vertikalaus veleno, kurio apatinėje dalyje yra pritvirtintas cilindrinis krepšelis su dviem dalimis. Atliekant testą krepšelio dugnas turi būti 25± 2 mm atstumu nuo

vidinio indo dugno. Įjungus prietaisą maišiklis sukasi tolygiai, nes viršutinė veleno dalis yra sujungta su varikliu, kuris turi greičio reguliatorių [4]. Vandens vonia. Jos funkcija palaikyti tirpimo terpės temperatūrą prie 37±0,5ºC [4].

Tyrimas atliktas vandeninėje terpėje, 37±0,5ºC temperatūroje, naudotas 100 apsisukimų per minutę greitis. Tirpalo mėginiai po 5 ml buvo imami po 15, 30, 45 ir 60 min., pridedant vandens reikiamo tūrio išlaikymui.

3. Automatinės pipetės (Transferpette, Vokietija).

2.4. Tyrimo metodai

2.4.1. Literatūros analizės metodas

Šiuo metodu buvo atliekama Lietuvoje registruotų dviskiaučių ginkmedžių lapų sausojo ekstrakto preparatų sudėčių analizė. 2015 metų vasario 1 dienos duomenimis. Tyrimui naudoti internetiniai informacijos šaltiniai: www.vvkt.lt; http://vmvt.lt/maistopapildai/; < http://www.vaistai.lt/index.php?option=com_frontpage&menutype=vaistaimenu&current=941&Itemi d=941. 2.4.2. UV – VIS spektrofotometrija

2.4.2.1 Bendro fenolinių junginių kiekio nustatymas

Bendro fenolinių junginių kiekio nustatymui atliekama spalvinė reakcija su Folin-Ciocalteu reagentu [42]. Reakcija: prie 2,5 ml Folin - Folin-Ciocalteu (1:10) tirpalo pridedama 0,5 ml tiriamojo tirpalo ir 2 ml 7,5% natrio karbonato tirpalo. Tirpalas įgauna mėlynai žalią spalva. Praėjus 30 minučių, spektrofotometru matuojama tirpalo absorbcija 765 nm bangos ilgyje.

Kiekybiniam nustatymui sudaroma kalibravimo kreivė 0,02; 0,04; 0,06; 0,08; 0,1 mg/ml koncentracijos galo rūgšties tirpalams. Gauta koncentracija išreiškiama galo rūgšties ekvivalentais (GRE) mg/ml.

.4.2.2 Antioksidacinio aktyvumo nustatymas DPPH metodu

Fotometrinis 2,2-difenil-1-pikrilhidrazilo (DPPH) laisvojo radikalo sujungimo metodas. Antioksidacinis aktyvumas įvertinamas matuojant, kiek procentų stabilaus DPPH radikalo neutralizuoja tiriamoje medžiagoje esantys ir antioksidaciniu aktyvumu pasižymintys junginiai. Antioksidanto 0,1 ml tiriamojo tirpalo sumaišoma 1 cm pločio kiuvetėje su 2,9 ml 0.1 mM etaloninio DPPH tirpalo. Spektrofotometru išmatuojamas mėginių absorbcijos mažėjimas 515 nm bangos ilgyje kol pasiekiama absorbcijos pusiausvyra (apytiksliai po 30 min.). Antioksidacinis tirpalų aktyvumas išreiškiamas inaktyvuoto DPPH procentais:

%

Čia Ab- tuščiojo bandinio absorbcija (t = 0 min.);

Aa- bandinio su tiriamuoju tirpalu absorbcija po 30 minučių.

Kiekvienas mėginys analizuotas tris kartus, apskaičiuojamas vidurkis.

2.4.3. Statistinis duomenų vertinimas

3. REZULTATAI IR JŲ APTARIMAS

3.1. Preparatų sudėčių ir technologijų teorinė analizė

3.1.1. Lietuvoje registruotų dviskiaučių ginkmedžių lapų sausojo ekstrakto preparatų pasiūlos analizė

Tyrimas atliktas analizuojant Lietuvos rinkoje esantį asortimentą 2015 metų vasario 1 dienos duomenimis, atsižvelgiant į augalinių maisto papildų ir vaistų sudėtis, kurių pagrindinė sudėtinė dalis yra dviskiaučių ginkmedžių (Ginkgo biloba L.) lapų sausasis ekstraktas. Nustatyta 40 Lietuvoje registruotų dviskiaučių ginkmedžių lapų sausojo ekstrakto preparatų (1 priedas). Iš jų 14 vaistinių preparatų ir 26 maisto papildų.

3.1.2. Lietuvoje registruotų dviskiaučių ginkmedžių lapų sausojo ekstrakto preparatų pasiskirstymas

15 pav. Dviskiaučių ginkmedžių lapų ekstrakto pasiskirstymas Lietuvoje registruotuose preparatuose

Atlikus Lietuvoje registruotų dviskiaučių ginkmedžių lapų preparatų analizę, nustatyta, jog didžiąją rinkos dalį sudaro maisto papildai. Būtent jie sudaro 65 proc. visų analizuotų preparatų. Likusią dalį 35 proc. sudaro vaistai.

3.1.3. Standartizuotų ir nestandartizuotų dviskiaučių ginkmedžių lapų ekstraktų pasiskirstymas tiriamuose preparatuose

16 pav. Dviskiaučių ginkmedžių ekstrakto procentinis ir kiekinis pasiskirstymas preparatuose

Pagal VVKT duomenis visi registruoti vaistai savo sudėtyje turi standartizuotą dviskiaučių ginkmedžių lapų sausąjį ekstraktą. Maisto papildų sudėtyse yra ir standartizuoto ir nestandartizuoto ginkmedžių ekstrakto. Net 42% maisto papildų yra nestandartizuoti. Vartojant preparatus, kurių sudėtyje yra nestandartizuoti ekstraktai, tikslus aktyviųjų medžiagų kiekis nėra žinomas ir jo gali nepakakti norimam poveikiui pasiekti. Juose ginkolinės rūgšties kiekis gali būti didesnis nei 5 ppm (mg/kg), tai įtakoja šalutinio poveikio pasireiškimą. Todėl renkantis maisto papildus, vartotojai, turėtų atkreipti dėmesį į dviskiaučių ginkmedžių sausojo ekstrakto standartizaciją.

3.1.4. Maisto papildų pasiskirstymas pagal notifikaciją

56%

44% Notifikuoti

Nenotifikuoti

17 pav. Notifikuotų ir nenotifikuotų maisto papildų procentinis pasiskirstymas preparatuose

Procentinis pasiskirstymas notifikuotuose ir nenotifikuotuose maisto papilduose nėra didelis. 56 proc. visų maisto papildų turinčių dviskiaučių ginkmedžių sausąjį ekstraktą yra notifikuoti, o 44 proc. tiriamųjų maisto papildų yra nenotifikuoti. Maisto ir veterinarijos tarnyba nuo 2010.03.01 iki 2013.12.31 gavo 4454 pareiškimus dėl maisto papildų platinimo rinkoje. Su kiekvienais metais pareiškimų skaičius žymiai didėja. Nuo 2014.01.01 iki 2015.05.13 pareiškimų dėl notifikacijos maisto ir veterinarijos tarnyba gavo 10105 prašymus. Tai rodo, kad maisto ir veterinarijos tarnyba nespėja tikrinti, o platinti leidžia. Todėl reikia atsargiai rinktis maisto papildus, nes informacijos trūkumas ant preparatų pakuočių gali klaidinti vartotoją.

3.1.5. Preparatų su dviskiaučių ginkmedžių lapų sausuoju ekstraktu sudėčių analizė

18 pav. Vienkomponenčių ir daugiakomponenčių preparatų pasiskirstymas tirtuose preparatuose

Dauguma vaistų (12 preparatų) yra vienkomponenčiai, išskyrus „Cefavora“ tirpalą ir „Ginkor fort“ preparatą, į kurių sudėtį įeina papildomos medžiagos. Pastebėta, kad tarp maisto papildų daugiau yra daugiakomponenčių nei vienkomponenčių. Jų yra 16. Galima daryti hipotezę, kad taip bandoma vartotojo dėmesį patraukti įvairesne preparatų sudėtimi ar paskirtimi.

3.1.6. Dviskiaučių ginkmedžių lapų sausojo ekstrakto preparatų pasiskirstymas Lietuvos rinkoje pagal vaisto formą

19 pav. Tiriamųjų preparatų farmacinių formų procentinis pasiskirstymas

Atlikus pasirinktų preparatų farmacinių formų analizę, nustatyta, kad didesnę tirtų preparatų dalį 60 proc. sudaro kapsuliuota forma (19 pav.). Dviskiaučių ginkmedžių preparatų asortimente yra viena arbata, ir kelios tirpalų formos. Likusią dalį sudaro tabletės 27 proc.

Taigi, gamintojų mėgiama vaisto forma yra kapsulės. Turbūt todėl, kad ši vaisto forma turi daug privalumų:

 Maskuoja nemalonų vaistinių medžiagų kvapą ir skonį [26];

 Kapsulė plūduriuoja, yra lengvesnė už vandenį, todėl patogu ir lengva ją nuryti, neprilimpa prie virškinimo trakto sienelių lyginant su nedengta tabletės forma;

 Į kapsulės vidų dedama mažiau pagalbinių medžiagų, todėl telpa didesnis kiekis veikliosios medžiagos, nei į tabletes. Jos yra didesnės;

 Kapsulių gamyba yra pakankamai paprasta [26];  Tikslus dozavimas, lyginant su lašų forma;

 Kapsulės apsaugo viduje esančias medžiagas nuo deguonies, lakių skysčių ar dujų poveikio [26];

 Gydomosios turinio savybės pasireiškia po 5-10 min;

 Kapsulių apvalkalas gali būti nudažomas, siekiant apsaugoti veikliąją medžiagą nuo saulės šviesos;

 Kapsulėms kaip ir dengtoms tabletėms galima suteikti vaisto veikimą prailginančias savybes;

 Tačiau tik kietą kapsulę galima išardyti ir turinį berti į maistą ar sumaišyti su vandeniu, jeigu žmogui sunku ryti;

 Kapsulės apvalkalas, kuris yra su specialiu apvalkalu apsaugo nuo skrandžio rūgščios terpės. Todėl geriau nei tabletėse esantys fenoliniai junginiai ir antocianinai yra pasisavinami, nes absorbuojami žarnyne [43].

3.1.7. Dviskiaučių ginkmedžių preparatų maksimalus farmacinių formų tablečių/kapsulių kiekis rekomenduojamas vartoti gamintojų paroje

0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20

Vaistai Maisto papildai

Tab le či ų /kap su lių ki e ki s p ar o je Preparatų registracija 1 tab./kaps. 2 tab./kaps. 3 tab./kaps. 4 tab./kaps. 6 tab./kaps.

20 pav. Dviskiaučių ginkmedžių preparatų kietų vaisto formų tablečių/kapsulių maksimalus kiekis rekomenduojamas vartoti gamintojų paroje

Rezultatai 20 pav. rodo, kad rekomenduoja gerti vieną tabletę per parą tik maisto papildų gamintojai. Vaistų informacijos lapeliuose tokio nurodymo nėra. Vaistus dažniausiai rekomenduoja vartoti du arba tris kartus per parą. Nors sutinkame kelis preparatus, kuriuos reikia vartoti 4 tabletes per dieną, tai „Ginkgo Biloba Pharma Nord“ 60 mg (Danija) tabletės N30 ir „Ginkor fort 14 mg“ („Ipsen Pharma“, Prancūzija) kietos kapsulės N30, ar net 6 tabletes paroje rekomenduoja vartoti „Ginkobil 40 mg“ („Aurantijus“, Lietuva) kietos kapsulės N40. Visi dviskiaučių ginkmedžių lapų sausojo ekstrakto preparatai atitinka monografijoje nustatytą 240 mg preparato dozę, kurią leistina suvartoti per parą.

3.1.8. Mineralinių medžiagų kiekio pasiskirstymas daugiakomponentiniuose maisto papilduose su dviskiaučių ginkmedžių lapų sausuoju ekstraktu

21 pav. Magnio, cinko, seleno ir vario kiekio pasiskirstymas dviskiaučių ginkmedžių lapų sausojo ekstrakto daugiakomponentiniuose maisto papilduose1

Remiantis pirmu priedu, daugiakomponenčių dviskiaučių ginkmedžių preparatų sudėtyse, dažniausiai kartu su dviskiaučių ginkmedžių ekstraktu kaip papildoma medžiaga yra įdedamas mineralas magnis. Savo sudėtyje jo turi 9 daugiakomponenčiai preparatai. Magnis yra būtinas mineralas žmogaus organizmui. Jo trūkumas siejamas su įvairiomis ligomis, tokiomis kaip: širdies ir kraujagyslių ligos – hipertenzija, aritmijos, širdies nepapkankamumas, taip pat aterosklerozė, cukrinis diabetas, migrena, galvos skausmas, osteoporozė, gali būti lėtinių uždegimų priežastimi [25].

Magnis į preparatus dedamas, nes jis turi funkciją plėsti kraujagysles, taip gerina kraujotaką ir mažina arterinį kraujo spaudimą (AKS) [30]. Tokį poveikį turi ir dviskiautis ginkmedis [39]. Taigi magnis papildo dviskiaučio ginkmedžio veikimą.

3.1.9. Antioksidantų Vit. A, C, E kiekio pasiskirstymas daugiakomponenčių maisto papildų su dviskiaučių ginkmedžių lapų sausuoju ekstraktu

22 pav. Vitaminų A, C, E referencinės maistinės vertės kiekis, daugiakomponentiniuose dviskiaučių ginkmedžių lapų sausojo ekstrakto preparatuose2

Ne visi daugiakomponenčiai dviskiaučių ginkmedžių lapų preparatai savo sudėtyje turi antioksidantų A, C, E vitaminų. Vitamino C savo sudėtyje turi: Ocutein Retin („Simply You Pharmaceuticals“, Čekija) kapsulės 100 mg, Ginko Plius Vivavit („Medigate“, Lietuva) kapsulės 60 mg, Memoril forte („Aurantijus“, Lietuva) kapsulės 50 mg, Live Well Memory („Santamed“, Didžioji Britanija) kapsulės N30, Ginkgo complex („Aurantijus“, Lietuva) kapsulės 50 mg.

Vitamino E turi: LIVE WELL Ginkgo Plus („Santamed“, Didžioji Britanija) kapsulės 10 mg, Highway Ginko Memory Complex („Pharmacal Corporation“, JAV) kapsulės 24 mg, Ginko Plius Vivavit („Medigate“, Lietuva) kapsulės 20 mg, Memoril forte („Aurantijus“, Lietuva) kapsulės 10 mg, Live Well Memory („Santamed“, Didžioji Britanija) kapsulės N30, Ginkgo complex („Aurantijus“, Lietuva), kapsulės 10 mg.

Tik vienas preparatas iš kompleksinių turi vitamino A, tai: Live Well Memory („Santamed“, Didžioji Britanija) kapsulės 333,3 µg.

Dviskiaučių ginkmedžių lapų sausojo ekstrakto preparatuose esantys flavonoidai pasižymi antioksidaciniu aktyvumu ir apsaugo vitaminus nuo oksidacinės pažaidos, bei pagerina vitamino C įsisavinimą. Flavonoidai vartojami kartu su vitaminu C, apsaugo kraujagyslių sieneles bei gerina kraujotaką [8].

3.1.10. B grupės vitaminų kiekio pasiskirstymas kompleksiniuose maisto papilduose su dviskiaučių ginkmedžių lapų sausuoju ekstraktu

23 pav. Vitaminų B grupės pasiskirstymas daugiakomponentiniuose dviskiaučių ginkmedžių lapų sausojo ekstrakto preparatuose3

Iš 23 paveiksle esančios diagramos matome, kad B grupės vitaminus savo sudėtyje turi tik penki daugiakomponenčiai dviskiaučių ginkmedžio lapų sausojo ekstrakto preparatai. Daugumoje iš jų yra ir magnio, neveltui, nes vitaminas B6 gerina magnio pasisavinimą. Patiriant stresą, jaučiant nerimą, depresinę nuotaiką sutrinka dėmesio koncentracija ir informacija įsimenama blogiau. Taip pat atmintis silpnėja senstant. Tam turi įtakos pakitusios kraujagyslės, prastėjanti smegenų kraujotaka, nervinių ląstelių senėjimas ir neuromediatorių apykaitos sulėtėjimas. B grupės vitaminai turi įtakos nervų sistemai, tad dviskiaučiui ginkmedžiui išplėtus kraujagysles, sumažina kraujo spaudimą, kartu ir stiprina nervinę sistemą., gerėja atmintis, žmogus gali lengviau susikaupti.

3 _{diagramos X ašies preparatų numeracija atitinka 1 priedo lentelės preparatų}

3.2. Tirpumo tyrimo preparatų sudėčių eksperimentinė analizė

24 pav. Fenolinių junginių kiekio pasiskirstymas tiriamuosiuose preparatuose, kuriuose yra dviskiaučių ginkmedžių lapų sausojo ekstrakto žaliava

Gauti rezultatai 24 pav. rodo, kad fenolinių junginių kiekis didžiausias maisto papilde „Ginko Biloba Princeps 120 mg” - 11,14 mg ± 0,32. Tačiau „Ginko max 120 mg“ maisto papilde fenolinių junginių kiekis nustatytas tik 3,65 mg ± 0,54. Šių maisto papildų sudėtyse nurodytas toks pats ekstraktas (EGb 761) ir kiekis kapsulėse vienodas po 120 mg, bet gauti rezultatai ženkliai skiriasi. Tai kelia įtarimus dėl šių maisto papildų kiekybinės sudėties.

Kitų preparatų rezultatai panašūs, svyruoja nuo 5,72 mg iki 6,32 mg fenolinių junginių kiekio. Pagal gautus rezultatus galima teigti, kad tirtų vaistų ir maisto papildų „GinkoPrim 40 mg“ ir „Ginko Biloba Princeps 40 mg“ sudėtyse, fenolinių junginių kiekis yra vienodas ir statistikai reikšmingo skirtumo nėra (p>0,05).

3.2.2. Fenolinių junginių kiekis nustatytas tiriamuose preparatuose su 40 mg ir 120 mg santykiu 1:3 5,86 6,32 _5,72 3,71 1,22 5,96 11.14 3.65 0 2 4 6 8 10 12 14 Tanakan 40 mg, tabletės Bilobil 40 mg, kapsulės Ginko Biloba Princeps 40 mg, kapsulės Ginko Biloba Princeps 120 mg, kapsulės Ginko max 120 mg, kapsulės GinkoPrim 40 mg, tabletės K iek is (m g) Preparatas Preparatuose su 120 mg dviskiaučių ginkmedžių ekstraktu Preparatuose su 40 mg dviskiaučių ginkmedžių ekstraktu

25 pav. Fenolinių junginių kiekio pasiskirstymas tiriamuosiuose preparatuose, esant 40 mg stiprumui

Lyginant maisto papildų „Ginko Biloba Princeps 120 mg” ir „Ginko Biloba Princeps 40 mg” bendrą fenolinių junginių kiekį galima teigti, kad vartojant 40 mg kapsules, turinčias 5,72 mg ± 0,12 tris kartus per dieną bendras fenolinių junginių kiekis nustatytas didesnis nei vartojant 120 mg kapsulę, turinčią 11,14 mg ± 0,32 vieną kartą per dieną.

Tarpusavyje lyginant maisto papildus „Ginko Biloba Princeps 120 mg” kapsules ir „Ginko max 120 mg“ kapsules, jų fenolinių jungių kiekis esant 40 mg stiprumui skiriasi 3 kartus.

3.2.3. Nustatyto fenolinių junginių kiekių ryšis su nurodytu flavonoidų kiekiu preparatuose 0 5 10 15 20 25 30 35 Tanakan 40 mg, tabletės (v.) Bilobil 40 mg, kapsulės (v.) Ginko Biloba Princeps 40 mg, kapsulės (m.p.) Ginko Biloba Princeps 120 mg, kapsulės (m.p.) Ginko max 120 mg, kapsulės (m.p.) GinkoPrim 40 mg, tabletės (m.p.) K ie k is ( m g ) Preparatas Nurodytas flavonoidų išreikštų pagal flavonų glikozidus kiekis

Nustatytas fenolinių junginių kiekis

26 pav. Nurodyto ir nustatyto fenolinių junginių kiekio palyginimas dviskiaučių ginkmedžių lapų sausojo ekstrakto preparatuose

Visų preparatų nustatytas fenolinių junginių kiekis yra mažesnis nei flavonoidų kiekis ekstrakte, kuris nurodytas preparato informaciniame lapelyje. Diagramoje pažymėtas vaistų flavonoidų kiekio vidurkis. O maisto papildų apskaičiuotas 24% flavonoidų kiekis preparatuose. Ypač didelis skirtumas matosi maisto papilde „Ginko max 120 mg“, kurio notifikcija yra nagrinėjama. Nustatytas fenolinių junginių kiekis skiriasi apytiksliai 8 kartus. Palyginus su preparatais, kurių teorinis flavonoidų kiekis yra 40 mg su maisto papildu „Ginko Biloba Princeps 120 mg“, matomas fenolinių junginių kiekio didėjimas, tačiau iki ženklinime nurodyto fenolinių junginių kiekio skiriasi ≈ 2,5 karto.

3.2.4. Antioksidacinio aktyvumo nustatymas tiriamiems preparatams

27 pav. Antioksidacinio aktyvumo DPPH inaktyvinimo procentai tiriamuosiuose preparatuose

Didžiausias antioksidacinis aktyvumas nustatytas vaistui „Bilobil 40 mg“ ir maisto papildui „Ginko Biloba Princeps 120 mg“. Mažiausias - maisto papilde „Ginko max 120 mg“ kapsulėse, kurio notifikacija yra nagrinėjama. Pastebėta, kad panašiu antioksidaciniu aktyvumu pasižymi tirti vaistai ir maisto papildai „Ginko Biloba Princeps 40 mg“ kapsulės ir „Ginko Biloba Princeps 120 mg“ kapsulės. O maisto papilduose: „Ginko max 120 mg“ kapsulėse ir „GinkoPrim 40 mg“ tabletėse rastas ~ 3-4 kartus mažesnis antioksidacinis aktyvumas.

3.2.5. Preparatų antioksidacinio aktyvumo ir fenolinių junginių kiekio 1 tab./kaps. ryšis

28 pav. Antioksidacinio preparatų aktyvumo priklausomybė nuo fenolinių junginių kiekio 1 tab./kaps.4

Matomas ryšis tarp gautų duomenų: fenolinių junginių kiekio ir antioksidacinio aktyvumo. Kuo didesnis fenolinių junginių kiekis preparatuose, tuo didesnis antioksidacinis aktyvumas. Didžiausi rezultatai nustatyti maisto papildo „Ginko Biloba Princeps 120 mg“ kapsulių tyrime, o mažiausi maisto papildo „Ginko max 120 mg“ kapsulių tyrime. Pagal šiuos nustatytus rezultatus galime teigti, kad šių maisto papildų pakuotės ženklinimas ir sudėties kokybė gali būti klaidinga.

Remiantis aukščiau pateikta diagrama (28 pav.) paskaičiuotas teigiamas koreliacijos koeficientas, kuris rodo, kad didėjant vienam rodikliui, didėja ir kitas. Koreliacijos koeficientas gautas skalėje tarp 0,5-0,7 (R= 0,64), tai rodo, kad koreliacija vidutiniškai stipri.