MEDICINOS AKADEMIJA FARMACIJOS FAKULTETAS
VAISTŲ TECHNOLOGIJOS IR SOCIALINĖS FARMACIJOS KATEDRA
EGLĖ KRIVICKIENĖ
MĖLYNIŲ UOGŲ PREPARATŲ TYRIMAS IR VERTINIMAS
Magistro baigiamasis darbas
Darbo vadovas Doc., dr. Giedrė Kasparavičienė
LIETUVOS SVEIKATOS MOKSLŲ UNIVERSITETAS FARMACIJOS FAKULTETAS
VAISTŲ TECHNOLOGIJOS IR SOCIALINĖS FARMACIJOS KATEDRA TVIRTINU
Farmacijos fakulteto dekanas (vardas, pavardė, parašas) Vitalis Briedis Data
MĖLYNIŲ UOGŲ PREPARATŲ TYRIMAS IR VERTINIMAS
Magistro baigiamasis darbas
Darbo vadovas
(vardas, pavardė, parašas) Giedrė Kasparavičienė Data
Recenzentas
(vardas, pavardė, parašas) Data
Darbą atliko Magistrantė
(vardas, pavardė, parašas) Eglė Krivickienė Data
TURINYS
SANTRAUKA ... 5
SUMMARY ... 6
SANTRUMPOS ... 7
ĮVADAS ... 8
DARBO TIKSLAS IR UŢDAVINIAI ... 9
1.LITERATŪROS APŢVALGA ... 10
1.1.Mėlynė (Vaccinium myrtillus L.) ... 10
1.2.Mėlynių uogų cheminė sudėtis ... 10
1.3.Laisvieji radikalai, antioksidacinis poveikis ... 13
1.4.Mėlynių uogų preparatų klinikinis pritaikymas oftalmologijoje ... 14
1.5.Mėlynių uogų preparatai - maisto papildai ... 17
1.6.Mėlynių uogų preparatų dozavimas ir toksinis poveikis ... 18
2. TYRIMO METODIKA ... 19
2.1. Tyrimo medţiaga, obejktų paruošimas ir metodai ... 19
2.1.1. Tyrimo objektai ... 19
2.1.2. Naudoti reagentai ... 19
2.1.4. Objektų paruošimas ... 20
2.1.5. Metodai ... 21
3. REZULTATAI IR JŲ APTARIMAS ... 26
3.1. Preparatų sudėčių ir technologijų teorinė analizė ... 26
3.1.1. Lietuvoje registruotų mėlynių uogų preparatų pasiūlos analizė ... 26
3.1.2. Mėlynės vaisių ţaliavos formos pasiskirstymas Lietuvoje registruotų preparatų sudėtyse ... 26
3.1.3. Tablečių ir kapsulių pasiskirstymas tiriamuosiuose preparatuose ... 27
3.1.4. Preparatų tabletės/kapsulės rekomenduojami suvartojamumo kartai paroje ... 28
3.1.5. Komplekinių ir vienkomponenčių preparatų pasiskirstymas tiriamųjų Lietuvoje registruotų mėlynių uogų preparatų tarpe ... 29
3.1.6. Mėlynių uogų ekstrakto kiekis tiriamuosiuose preparatuose ... 30
3.1.7. Vaistinės akišveitės ţolės ekstrakto kiekio pasiskirstymas kompleksinių preparatų su mėlynių uogų ekstraktu RPD ... 32
3.1.8. Vitaminų A, C, E kiekio pasiskirstymas kompleksinių preparatų su mėlynių uogų ekstraktu RPD . 33 3.1.9. Seleno kiekio pasiskirstymas kompleksinių preparatų su mėlynių uogų ekstraktu RPD ... 37
3.1.10. Liuteino kiekio pasiskirstymas kompleksinių preparatų su mėlynių uogų ekstraktu RPD ... 39
3.1.11. Metalų kiekio pasiskirstymas kompleksinių preparatų su mėlynių uogų ekstraktu RPD ... 40
3.2. Preparatų sudėčių eksperimentinė analizė ... 41
3.2.1. Fenolinių junginių kiekis tiriamųjų preparatų rekomenduojamoje paros dozėje ... 41
3.2.2. Antocianinų kiekis tiriamųjų preparatų rekomenduojamoje paros dozėje ... 44
3.2.3. Preparatų antioksidacinio aktyvumo ir fenolinių junginių bei antocianinų kiekio sąryšis ... 46
IŠVADOS ... 51
LITERATŪROS SĄRAŠAS ... 52
SANTRAUKA
MĖLYNIŲ UOGŲ PREPARATŲ TYRIMAS IR VERTINIMAS
E.Krivickienė. Magistro baigiamasis darbas/mokslinis vadovas prof. dr. G. Kasparavičienė; Lietuvos Sveikatos mokslų universiteto, Medicinos akademijos, Farmacijos fakulteto, Vaistų technologijos ir socialinės farmacijos katedra. – Kaunas.
Darbo tikslas: atlikti Lietuvoje registruotų mėlynių uogų pasirinktų preparatų sudėčių ir
technologijos palyginamąją analizę, įvertinti kiekybiškai ir nustatyti antioksidacinį aktyvumą. Darbo uţdaviniai: Ištirti Lietuvoje registruotų mėlynių uogų preparatų pasiūlą. Atlikti šių preparatų palyginamąją analizę vertinant sudėtis. Pasirinktuose preparatuose nustatyti fenolinių junginių ir antocianinų kiekį spektrofotometriniu metodu. Nustatyti pasirinktų preparatų antioksidacinį aktyvumą DPPH metodu. Tyrimo objektai ir metodai: Preparatai su mėlynių uogų ekstraktu ir mėlynių uogų milteliais. Spektrofotometrinis metodas naudotas analizei: bendras fenolinių junginių kiekis – pagal Galo rūgšties kalibracinę kreivę; bendras antocianinų kiekis – pH diferenciniu metodu; antioksidacinis aktyvumas – DPPH laisvojo radikalo inaktyvavimo kreivė. Tyrimo rezultatai ir išvados: Iki 2013 m. birţelio mėn. nustatyti 47 Lietuvoje registruoti mėlynių uogų preparatai. Į 97 proc. šių preparatų sudėtį įeinančių mėlynių uogų ţaliavos forma – ekstraktas. 19 proc. visų tirtųjų sudaro kompleksiniai ir 9 proc. vienkomponenčiai preparatai. Populiariausios sudedamosios dalys kompleksiniuose preparatuose: akišveičių (Euphrasia rostkoviana L.) ekstraktas, vitaminai A, C, E, metalai cinkas ir varis, liuteinas, selenas. Spektrofotometriškai nustačius fenolinius junginius, didţiausias jų kiekis yra ,,Mėlynių ekstraktas“, kapsulėse (,,Vitaforce“, Jungtinė Karalystė), maţiausias - ,,Visioblue strong“, kapsulėse (,,Hankintatukku Oy“, Suomija). Preparatas ,,Mėlynių uogų ekstrakto tabletės su cinku forte 0,25 g”, („Elit-farm", Ukraina) eksperimentinio tyrimo metu nedavė apčiuopiamo rezultato. Spektrofotometriškai nustačius antocianinus, didţiausias jų kiekis yra ,,Visioblue strong“, kapsulėse (,,Hankintatukku Oy“, Suomija) , maţiausias - ,,Mėlynių ekstraktas“, kapsulėse (,,Vitaforce“, Jungtinė Karalystė). Preparatų antioksidacinis aktyvumas tirtas taikant spektrofotometrinį DPPH metodą. Didţiausiu antioksidaciniu aktyvumu pasiţymėjo preparatas ,,Matyk! Su liuteinu“, tabletės (,,Medicata Filia“, Lietuva), maţiausias aktyvumas nustatytas ,,Bilberrin 160 mg“, kapsulės (,,Aconitum“, Lietuva). Atlikus daugybinę tiesinę analizę, paaiškėjo, kad kuo didesnis antocianinų kiekis, tuo didesnis antioksidacinis preparato aktyvumas, ir priešingai, kuo didesnis fenolinių junginių kiekis, tuo maţesnis preparato antioksidacinis aktyvumas. Antocianinų kiekio dinamika turi daugiau įtakos antioksidaciniam aktyvumui negu fenolinių junginių kiekis.
SUMMARY
THE RESEARCH AND EVALUATION OF BLUEBERRY PREPARATION
KRIVICKIENĖ Eglė. Master thesis/ supervisor prof. dr. G. Kasparavičiėnė; Lithuanian University of Health Sciences, Medical academy, the Faculty of Pharmacy, Department of Drug Technology and Social Pharmacy - Kaunas.
Purpose of the work: To make the comparable ingredients and technology analysis of selected blueberry preparations registered in Lithuania, evaluate quantitatively and determine the antioxidant activity. Tasks: to investigate the supply of blueberry preparations registered in Lithuania. To make the comparable ingredients analysis of preparations mentioned above. Determine the phenolic compounds and anthocyanins quantity using the spectrophotometry method. Measure the antioxidant activity of selected preparation using DPPH method. Research objects and methodology: Preparations with blueberry extract and blueberry powder. Spectrophotometric methods were used for analysis: total phenolic content according calibration curve of galic acid; total anthocyanins - pH differential method; antioxidant activity - DPPH free radical inhibition. Results and conclusions: Until June, 2013 y. Lithuania set 47 record Blueberry fruit preparations. There was noticed that in 97 percent composition of the preparation, blueberry raw material shape - extract. 91 percent of explored preparations are multicomponent and just 9 percent - one-component. The most popular components in multicomponent preparations: Euphrasia rostkoviana L. extract, vitamins A, C, E, zinc and copper metals, lutein and selenium. Determined by spectrophotometry, that the highest levels of the phenolic compounds are in ”Mėlynių ekstraktas“, capsules of (“Vitaforce”, United Kingdom) and the lowest – “Visioblue strong’’, capsules of (”Hankintatukku Oy’’, Finland). The quantity of Anthocyanins per recommended daily dose in the preparation was studied by spectrophotometry method. The highest level of these compounds determined in “Visioblue strong”, capsules (“Hankintatukku Oy”, Finland) and the lowest – “Bilberry extract, capsules (“Vitaforce”, United Kingdom). Antioxidant activity of preparations was evaluated using DPPH spectrophotometric method. The highest antioxidant activity was produced by “Matyk! Su liuteinu“, tablets (“Medicata Filia“, Lithuania) and the lowest activity was determined “Bilberry 160 mg“, capsules (“Aconitum“, Lithuania). After multiple linear analysis, the result showed when quantity of antocianins is bigger, then bigger activity of antioxidant preparations. Opposite, when quantity of phenolic compounds is bigger, then activity of antioxidant preparations is lower. The dynamics of anthocyanins quantity has bigger influence for antioxidant activity then phenolic compounds quantity.
SANTRUMPOS
AA – antioksidacinis aktyvumas ATP - Adenozin 5' trifosfatas
Dph-3-glu – delfinidin 3-gliukozidas DPPH - 2,2-difneilo-2-pikrylhidrazyl
LED (angliškaiLight - emitting diode) – šviesos diodas PSO – Pasaulio sveikatos organizacija
RNS – reaktyvi azoto rūgštis ROS – reaktyvusis deguonis
ĮVADAS
Šiuo metu vis daţniau stengiamasi išvengti cheminių vaistų norint pagerinti sveikatą, o kartu ir labiau susirūpinama ligų profilaktika, gyvenimo kokybės gerinimu natūraliais preparatais. Tikima, kad su maistu ţmogus negauna ir nepasisavina tiek reikalingų maistingųjų medţiagų, kurios saugo organizmą nuo aplinkos poveikio, padeda išlaikyti tvirtą imunitetą. Kadangi augaliniai preparatai yra lengviau įsisavinami, turi maţiau šalutinių poveikių lyginant su cheminiais, veikia švelniau bei saugiau, dėl tokių prieţasčių vis aktualesnis tampa vaistingųjų augalų panaudojimas medicinoje, farmacijos pramonėje.
Mėlynė (Vaccinium myrtillus L.) - gamtoje plačiai paplitęs Erikinių šeimos augalas. Spaudoje, moksliniuose šaltiniuose plačiai kalbama apie mėlynių uogų naudą ţmogaus sveikatai. Mokslininkų susidomėjimas šiais vaisiais išaugęs nuo Antrojo Pasaulinio karo, kuomet britų karališkųjų oro pajėgų pilotai galėjo pasigirti geresniu regėjimu po mėlynių uogienės valgymo prieš naktines misijas [57]. Nuo to laiko atliekami įvairūs tyrinėjimai atskleidė daug faktų apie šiose uogose randamų veikliųjų medţiagų poveikį. Nustatyta mėlynių vaisių kokybė ir kiekybė daro prielaidą įvairioms indikacijoms, kurios ne tik patvirtina, bet ir papildo liaudies medicinos gydymo receptus įvairiems sveikatos sutrikimams gydyti.
Pagrindinė cheminių junginių grupė, randama mėlynių uogose - antocianinai. Tai gausiausia flavanoidų grupė, randama visuose vaisiuose ir darţovėse. Jų struktūros, sugeriančios šviesą maţdaug prie 500 nm bangos ilgio, duoda ryškiai raudoną, mėlyną ar violetinį pagrindą vaisių ar uogų luobelėms, taip praturtindami lapuočių augalijos spalvas [63].
Maisto papildų populiarumas, jų vartojiškumas visuomenėje auga, tačiau šių preparatų kokybė, o kartu ir nauda, nedaug moksliškai tyrinėjama ir iki galo įrodoma. Tarp maţai tyrinėjamų augalinių ţaliavų maisto papildų įeina ir preparatai, kurių sudėtyje viena pagrindinių sudedamųjų dalių yra minėtoji mėlynių uogų ţaliava. Įdomu įsitikinti, ar gamintojas pateisina vartotojo lūkesčius, nurodydamas ant pakuotės veikliosios medţiagos kiekius, dozuotes. Šiuo darbu siekta nustatyti ir įvertinti Lietuvoje registruotų mėlynių uogų preparatų sudėties ir technologijos kokybę.
Darbo reikšmė: bus ištirtas Lietuvoje registruotų mėlynių uogų preparatų asortimentas, nustatytas antioksidacinis aktyvumas.
Tyrimo problema: preparatų, ypatingai maisto papildų, kokybės neatitikimas lyginant su ant pakuotės vartotojui pateikiama sudėties informacija.
DARBO TIKSLAS IR UŢDAVINIAI
Darbo tikslas: atlikti Lietuvoje registruotų pasirinktų mėlynių uogų preparatų sudėčių ir technologijos palyginamąją analizę, įvertinti kiekybiškai ir nustatyti antioksidacinį aktyvumą.
Darbo uţdaviniai:
1. Ištirti Lietuvoje registruotų mėlynių uogų preparatų pasiūlą. 2. Atlikti šių preparatų palyginamąją analizę vertinant sudėtis.
3. Pasirinktuose preparatuose nustatyti fenolinių junginių ir antocianinų kiekį spektrofotometriniu metodu.
1. LITERATŪROS APŢVALGA
1.1.
Mėlynė (Vaccinium myrtillus L.)
Mėlynė (Vaccinium myrtillus L.) - Erikinių šeimos (Ericaceae) augalas, kuris geografiškai daugiausiai paplitęs šiaurės ir vakarų Europoje, Šiaurės Amerikoje ir vakarų Azijoje. Daţniausiai auga vidutinio drėgnumo ir drėgnuose, nelabai ūksminguose miškuose, rūgščiuose, puveninguose dirvoţemiuose, kartais ir kimininėse pelkėse, aukštesnėse vietose [17]. Tai daugiametis krūmokšnis ar puskrūmis, ţolinis augalas, apatinėje dalyje sumedėjęs. Uţauga iki 50 cm aukščio. Lapai ovalūs, elipsiški arba kiaušiniški, kraštai smulkiai dantyti. Ţiedai pavieniai, rausvai ţalios spalvos, išsidėstę lapų paţastyse. Vaisius – juoda su mėlynu apnašu, sultinga, saldţiarūgštė, malonaus kvapo uoga, kuri prinoksta liepos – rugpjūčio mėnesiais [18]. Gydymo tikslais naudojami paprastųjų mėlynių lapai ir uogos [6].
Mėlynių vaisiai yra vieni iš turtingiausių natūralių antocianinų šaltinių. Šie fenoliniai komponentai suteikia uogai sodriai mėlynai juodą spalvą ir turi didelį antioksidacinį poveikį. Manoma, kad tai bioaktyvūs cheminiai komponentai, įtakojantys augalo panaudojimą sveikatos gerinimui, ligų profilaktikai [30]. Mėlynių uogos – vitamininga medţiaga, maţinanti akių nuovargį ir sustiprinanti regėjimo aštrumą, todėl jų ekstraktai įeina į įvairių preparatų sudėtį . Šiuose vaisiuose esantis labai didelis bioflavanoidų kiekis gerina naktinį matymą, trumparegystę, uţkerta kelią glaukomos ir kataraktos progresavimui [34], todėl mėlynių ekstraktas – vienas daţniausių komponentų regėjimui gerinti skirtuose maisto papilduose.
1.2.
Mėlynių uogų cheminė sudėtis
Fenoliniai junginiai, nustatomi mėlynių vaisiuose, yra heterogeninė grupė, randama natūralioje gamtoje, kurios pagrindą sudaro fenolis C6H5OH (vienas ar daugiau ţiedų su viena ar daugiau hidroksilo
grupių) [22] . Dauguma polifenolių augaluose randami ne kaip laisvieji junginiai, o esterių, metilesterių arba glikozidų, konjuguotų su mono ar polisacharidais, prisijungusių vieną ar kelias fenolines grupes, pavidale [26]. Jie plačiai pasiskirsto augalų karalystėje, kurioje daţniausiai atlieka antrinio metabolito vaidmenį. Pagal molekulės struktūrą, fenoliniai junginiai yra skirstomi į penkias klases: 1. fenolinės rūgštys, 2. flavonoidai, 3. stilbenai, 4. kumarinai ir 5. taninai. Jie randami augaliniame maiste ir įvairios kilmės augaliniuose skysčiuose, aptinkami visų aukštesniųjų augalų audiniuose. Šie junginiai yra
antriniai augalų metabolitai, apsaugantys juos nuo ultravioletinės spinduliuotės, patogenų ar biologinio bei aplinkos streso [29]. Atlikti tyrimai in vitro parodė, kad fenoliniai junginiai pasiţymi stipresnėmis antioksidacinėmis savybėmis uţ vitaminus C ir E, bei karotinoidus [32].
Fenoliniai junginiai yra neatsiejami nuo augalų vystymosi ir dauginimosi, nes jie yra viena iš grandţių tarpląsteliniame fiziologinių procesų valdyme. Kadangi ši junginių grupė turi savybę suteikti augalui, jo ţiedui ar vaisiui spalvą, kaip vaizdiniai signalai privilioja apdulkinančius vabzdţius [47].
Moksliniuose šaltiniuose teigiama, kad mėlynės uogose randama apie 0,7-1,2 mg/g fenolinių junginių [62].
Fenolinių junginių grupės atstovai, pasiţymintys dideliu antioksidaciniu aktyvumu – flavanoidai. Pagrindinis flavanoidų struktūros elementas yra flavono branduolys, kuriame randama 15 anglies atomų išdėstytų trijų ţiedų sfera (C6-C3-C6), jie ţenklinami A, B ir C raidėmis. Šiame struktūriniame skelete
svarbu tai, jog yra chromano ţiedas (C), kurio antroje, trečioje ar ketvirtoje vietoje prisijungęs aromatinis ţiedas B (1 pav.) [4,30,49].
flavanoidų struktūros C6-C3-C6 sistema flavanoidų struktūra: C15 skeletas su chromano ţiedu
1 pav. Flavanoidų struktūros modeliai
(šaltinis: prieiga per internetą <http://vddb.laba.lt/fedora/get/LT-eLABa-0001:E.02~2007~D_20070803.090920-17778/DS.005.0.01.ETD>)
Antocianinai - tai didţiausia vandenyje tirpių polifenolinių flavanoidų grupė augalų karalystėje [37]. Struktūrinė schema pateikta 2 paveikslėlyje. Jie yra natūralūs pigmentai, atsakingi uţ daugelio vaisių ir darţovių (taip pat ir mėlynių uogų) mėlyną, violetinę, geltoną ir oranţinę spalvas [34]. Antocianinų suteikiama spalva vaisiui nuo roţinės iki mėlynai juodos priklauso nuo pH kaitos audinyje. Esant pH<2 raudona spalva po truputį kinta į mėlyną didėjant pH lygiui [49].
Mėlynių uogų ţaliavoje randama penkiolika skirtingų antocianinų, kurie sudaro apie 0,1-0,25% visos jų masės. Koncentruotame mėlynių ekstrakte jų gali būti apie 25%, šių junginių kiekis gali
svyruoti 0,7-5,2 mg/g ir tai sudaro apie 30-47% visų randamų fenolių [49] Kaip jau minėta, mėlynių uogose daţniausiai didţiausia koncentracija nustatoma antocianino - delfinidino (2 pav.).
2 pav. Antocianinų struktūrinė schema
(šaltinis: prieiga per internetą <http://www.mdpi.com/1422-0067/11/4/1679/htm>)
Mėlynėse gausu fenolio rūgščių, katechinų, flavonolų, antocianinų, proantocianidinų. Didţiausia antocianinų koncentracija, randama mėlynių uogų ţievelėje, didėja nokstant uogai ir keičiant savo spalvą.
Antocianinai, nustatyti mėlynės uogoje: malvidin 3-galaktozidas, delfinidin 3-galaktozidas, delfinidin 3-arabinozidas, petunidin 3-galaktozidas, petunidin 3-arabinozidas, malvidin 3-arabinozidas, cianidin 3-gliukozidas, cianidin 3-galatozidas, cianidin 3-arabinozidas, delfinidin 3-gliukozidas, malvidin 3-gliukozidas, peonidin 3-gliukozidas, peonidin 3-galaktozidas, peonidin 3-arabinozidas ir peonidin 3-gliukozidas. Kiekvienas iš šių junginių mėlynės uogoje yra atsakingas uţ skirtingą vaisiaus luobelės atspalvį ir turi skirtingus antioksidacinius efektus [42,46]. Kurio junginio mėlynės uogoje kaupiama daugiausiai, pasakyti yra sunku, nes atlikinėjami tyrimai rodo nevienareikšmius rezultatus. Moksliniai šaltiniai teigia, jog daugiausiai yra randama delfinidino ir cianidino junginių. Daţniausia jų cukrinė dalis – galaktozidas [3,38,42,54]. Uogų kiekybinė sudėtis priklauso nuo augalo augimo lokalizacijos, nokimo periodo.
Natūralios medicinos literatūroje nurodomas standartizuoto mėlynių uogų ekstrakto intervalas 80-160 mg vartojant tris kartus per dieną. Dabartiniai tyrimai parodė, kad suvartojama maksimali rekomenduojama dozė 480 mg per dieną 25% mėlynių uogų ekstrakto padidina tikimybę pagerinti naktinį matymą [49,51,53].
Antocianidinas R R'
Cianidinas OH H
Delfinidinas OH OH Malvidinas OCH3 OCH3
Peonidinas OCH3 H
1.3.
Laisvieji radikalai, antioksidacinis poveikis
Kuomet ląstelėje vyksta gyvybiniai procesai ar ją veikia aplinkos veiksniai, organizme susidaro laisvieji radikalai, kurių perteklius gali kelti pavojų sveikatai.
Laisvieji radikalai – aktyvios molekulės, kurios paţeidţia biologines membranas, kas iššaukia skirtingas ligas. Jie turi poveikį ląstelių dauginimuisi, jų senėjimui ir apoptozei, genomo nestabilumui ir reprodukciniams efektams [5].
Oksidacinių procesų sukeltų ligų gydymui tinka mokslininkų dėmesio centre atsidūręs, mėlynių uogose ir kituose augaluose randamų, fenolių veikimo modelis. Manoma, kad dėl savo struktūros antocianinai turi antioksidacinį poveikį in vivo, nes jie gali atiduoti vandenilio atomą. Jie turi savybę prisijungti azoto oksido ar peroksido (NO·, ONOO-) radikalus, maţina citotoksiškuma, sukeltą H2O2.
Taip pat turi savybę α-takoferoksido radikalą paversti α-takoferoliu [44]. Remiantis literatūros šaltiniais, teigiama, jog delfinidin 3-glikozidas (daţnai gausiausias antocianinas nustatomas mėlynių uogose) turi stipriausią poveikį prieš azoto oksido radikalus [66].
Antocianinų antioksdiacinis poveikis priklauso nuo molekulės struktūros (3 pav.): hidroksilo grupių skaičiaus didėjimas junginyje stiprina antioksidacinį poveikį;
lyginant su flavanoidų aglikonų veikimo stiprumu, jų glikozidinimas sumaţina jų aktyvumą;
antocianinų A, B ţieduose esančios 3- ir 5- OH grupės reikalingos maksimaliai stipriam antioksidaciniam poveikiui;
antocianinų ţiede C esanti O-hidroksi struktūra dalyvauja elektrono pasidalijime, suteikia junginiui stabilumą. 3'
ir 5' padėčių dihidrokslinimas šiame ţiede turi įtakos antioksdiaciniam poveikiui;
dvigubos jungtys antocianino B ţiede sukuria elektrono delokalizaciją molekulėje. Taip siekiama stabilizuoti ariloksi radikalus dėl ţiedo konjugacijų [66].
Deguonis (ROS) ir reaktyvios azoto rūgštys (RNS) paprastai yra grieţtai reguliuojami fermentų, tokių kaip atitinkamai NO sintazės, NAD(P)H oksidazės izoformomis. ROS perprodukcija, atsirandanti dėl ATP gamybos mitochondrijose ar pernelyg didelio NAD(P)H skatinimo, sukuria ţalingą procesą, kuris gali būti svarbus tarpininkas ląstelių struktūroje, įskaitant ląstelių membranų lipidus, baltymų DNR. Paradoksalu, tačiau teigiama, kad tikrieji ROS veiksmai yra apsaugoti ląsteles nuo ROS oksidacinio streso, atkurti ir išlaikyti ,,redokso balansą“, vadinamą ,,redokso homeostaze“. Pavyzdţiui, atsiranda vis daugiau įrodymų, kad ROS siunčia kaskadinius signalus, sukelia ir išlaiko onkogeninį fenotipą vėţinėse ląstelėse, tačiau tas pats ROS gali sukelti ląstelių apoptozę, todėl veikia kaip antinavikinė rūšis [64].
Fenolinių junginių antioksidantinės savybės siejamos su trimis mechanizmais: 1) laisvųjų radikalų surišimas (ROS/RNS); 2) ROS/RNS formavimosi slopinimas kai kurių fermentų, kai kurių kompleksoninių mikroelementų dalyvaujančių laisvųjų radikalų gamyboje; 3) antioksidacinės gynybos sureguliavimas ir apsauga [13].
Vienas svarbiausių mūsų prisitaikymo prie aplinkos organų - akis – neįtikėtinai sudėtingas, gausus nervų ir kraujagyslinio tinklo, regėjmo organas. Ji ypač jautri minėtiems oksidaciniams paţeidimams ir tai yra viena iš kliūčių šio organo pilnavertiškam funkcionavimui. Akies membranose gausu oksiduojamų polinesočiųjų riebalų rūgščių. Tiek tinklainė, tiek lęšiukas labai jautrūs laisvųjų radikalų poveikiui, kurių susidarymą skatina minėti aplinkos paveikiai [8]. Organizmui senstant, tinklainės pigmentinio epitelio ląstelėse kaupiasi autofluorescenciniai pigmentai, kurie turi didelę įtaką geltonosios dėmės degeneracijos vystymuisi. Pagrindiniai tinklainės pigmentai fluorofortas A2E ir piridino bisretinoidas. Šviesos veikiamas A2E dalyvauja tinklainės pigmentinio epitelio apoptozėje mėlynos šviesos spektre. Būtent tokia ląstelių apoptozė siejama su pačio A2E pagaminamo aktyvaus deguonies švitinimo metu (430 nm), kuris reaguodamas su A2E sudaro epoksidus. Atlikta tyrimas nustatė, kad šie epoksidai, nekreipiant dėmesio į reaktyviojo deguonies kiekį, veikia ląstelių DNR su pakitusiomis bazėmis. Šiuo atveju mėlynių ekstrakto antocianinai maţina A2E epoksidaciją tuo pačiu slopindami aktyvųjį deguonį [60].
1.4.
Mėlynių uogų preparatų klinikinis pritaikymas oftalmologijoje
Atlikti moksliniai tyrimai rodo, kad mėlynių uogos ir jų ekstraktai stiprina kraujagyslių sieneles, sumaţina vėţio, širdies ir kraujagyslių ligų riziką. Vaisių antocianinai maţina trombocitų agregaciją, maţina uţdegimines reakcijas, saugo kraujagyslių pralaidumą. Šie natūralūs cheminiai junginiai gerina
regėjimą, didina tinklainės pigmento gamybą, maţina diabetinę retinopatiją, gerina tinklainės kapiliarų kraujotaką, uţkerta kelią vystyti pigmentiniam retinitui, glaukomai ar kataraktai [57,46]. Kadangi šio darbo pagrindinis tikslas yra išsiaiškinti Lietuvoje registruotų mėlynių uogų ekstrakto preparatų, skirtų regėjimui gerinti, sudėties kokybę, privalu aptarti regėjimo patologijas, kurių profilaktikai ar gydymui būtų pravartu būtent šie augaliniai preparatai.
PSO duomenimis statistika rodo, jog pasaulyje, tuo tarpu ir Lietuvoje, sparčiai plečiasi neinfekcinėmis akių ligomis susirgusiųjų ratas. Šiuo metu 60 mln. ţmonių pasaulyje yra palietusi glaukoma, organizacijos prognozėmis, 2020 m. šis skaičius turėtų išaugti iki 80 mln. sergančiųjų. Maţdaug dešimtadalis iš jų turi didelę riziką netekti regėjimo funkcijos. Lietuvoje kasmet glaukoma naujai diagnozuojama 10 000 suaugusiųjų ir 300 vaikų. Glaukoma - tai regos nervo neuropatija, kurios metu vyksta didelis audinių remodeliavimas, paţeidţiami nervų ganglijai ir aksonai, prastėja kraujotaka. Sutrinka regos nervo funkcija, prastėja regėjimas [52]. Tyrimai su gyvūnais parodė, kad mėlynių vaisių antocianinai gerina kraujagyslių tonusą ir kraujo srauto pasiskirstymą akies obuolyje. 1979-1985 metais iš atliktų tyrimų su mėlynių ekstraktu, kuomet pacientams, sergantiems glaukoma, venų sutrikimo ligomis, kasdien buvo duodama vartoti po 480 mg mėlynių ekstrakto, 30 tyrimų parodė, jog mėlynių antocianinai gali pagerinti akių kraujotaką, o tuo pačiu ir glaukomos prevenciją [58].
2012 metais aprašytame tyrime buvo nustatoma mėlynių uogų ekstrakto antocianinų antioksidacinio poveikio nauda glaukoma sergantiems pacientams. Kasdien japoniškos šešių savaičių pelės, kurioms dirbtinai buvo sukeltas pernelyg didelis akispūdis, buvo maitinamos 480 mg standartizuotu mėlynių uogų ekstraktu keturias savaites. Tyrimo finale buvo padarytos išvados, kad mėlynių uogų antocianinai slopina maţo tankio lipoproteinų peroksidaciją, apsaugo mitochondrijas nuo oksidacijos, gerina tinklainės jautrumą, gali pagerinti regėjimo funkciją glaukoma sergantiems pacientams [58].
Kita neinfekcinė akių liga - katarakta – šiandien yra atėmusi regėjimą 20 mln. ţmonių visame pasaulyje. Pasaulinė sveikatos organizacija prognozuoja, kad iki 2050 metų vyresnių nei 85 metai ţmonių, turinčių amţinės geltonosios dėmės degeneracijos poţymių, patrigubės iki 30 proc. [14].
Senatvinė katarakta - tai viena daţniausia ekonomiškai išsivysčiusių šalių, tame tarpe ir Lietuvos, vyresniojo amţiaus ţmonių blogėjančios regos prieţastis [14], o aktyvūs mėlynių uogų komponentai yra stiprūs antioksidantai, turintys polinkį į akių kraujagyslinių audinių stiprinimą. Reikiamas kiekis antocianozidų paprastai koncentruojasi 25 proc. standartizuotame ekstrakte. Tokio ekstrakto (180 mg per parą) ir vitamino E derinys kartu su papildomu vaistų kiekiu buvo duodamas 50 tyrime dalyvavusių pacientų sergančių senatvine katarakta. Po keturių mėnesių tokio gydymo tyrimo
rezultatai parodė, jog 96 proc. pacientams (n=25) sustojo kataraktos progresavimas, tuo tarpu kontrolinėje grupėje taip įvyko tik 76 proc. pacientų (n=25) [25].
Manoma, kad mėlynės uogose randami aktyvūs junginiai turi poveikį ţmogaus naktinio matymo pagerinimui. Taip pat manoma, kad šis ekstraktas gali padėti išvengi kataraktos ar glaukomos, retinopatijos, ar su šiomis ligomis susijusio regėjimo praradimo, stabdo geltonosios dėmės degeneraciją. Tokioms prielaidoms įrodyti yra atliekama nemaţai klinikinių tyrimų, tačiau tikslus ekstrakto veikimo mechanizmas vis dar neišaiškintas [32,51].
Dar liaudies medicinoje buvo tikima, kad mėlynių uogų vartojimas gerina regėjimo funkciją. Pagrindiniai in vitro ir in vivo tyrimai šiam sutrikimui gerinti buvo atlikti 1960-1980 metais. Neseniai buvo padaryta išvada, jog mėlynių uogų ekstraktas teigiamai veikia rodopsino - tinklainės pigmento - regeneraciją, o tuo pačiu ir gerina naktinį matymą. Taip pat prisideda prie trumparegystės sutrikimo gerinimo [62].
Atliktas tyrimas, kuriame dalyvavo 30 trumparegystę turinčių įvairaus amţiaus pacientų. Jie kasdien privalėjo vartoti po 400 mg fermentuoto mėlynių ekstrakto. Po mėnesio gydymo stebėti kriterijai buvo pasislinkę teigiama kryptimi lyginant su pradinio vertinimo rodikliais [45].
2005-2010 m. Pietų Korėjoje atliktas tyrimas su glaukoma sergančiais pacientais, siekiant įrodyti mėlynių uogų ekstrakto antiokidacinių savybių naudą kraujagyslinėms akių ligoms gydyti. Rezultatai parodė, kad antocianinai gali būti veiksmingi kovojant su glaukoma, gerina akies kraujotaką, stiprina regėjimą [58].
Diabetinė retinopatija - pavojinga lėtinė kraujagyslių liga, kuri pasiekusi akies kraujotaką sukelia patologinius tinklainės pakitimus [41]. Kadangi yra įrodyta, jog mėlynių uogų ekstraktas padeda kovoti su pernelyg dideliu cukraus kiekiu kraujyje, netgi didindamas hipoglikemijos tikimybę organizme [28], tuo pačiu maţina tikimybę atsirasti diabetinei retinopatijai. Atliktas tyrimas su pacientais, sergančiais retinopatija, 2 mėnesius vartojant mėlynių uogų ekstraktą, pastebėta, jog sumaţėja su liga susijusių tinklainės kraujavimų tikimybė [59].
Japonijoje atliktas tyrimas (aprašytas 2014 m.) su pelėmis, kurios buvo veikiamos mėlyna LED šviesa. Pelės buvo maitinamos aukštos kokybės mėlynių uogų ekstraktu. Po tyrimo rezultatai parodė, jog šios ţaliavos ekstraktas daro apsauginį poveikį prieš LED mėlynosios šviesos sukeltą tinklainės fotoreceptorinių ląstelių paţeidimą, slopina ROS susidarymą [54].
1.5.
Mėlynių uogų preparatai - maisto papildai
Pasak Vilniaus universiteto Medicinos fakulteto akademinių reikalų prodekano, Visuomenės sveikatos instituto direktoriaus, profesoriaus, medicinos mokslų daktaro Rimanto Stuko: ,, Įvairių medţiagų, kurių su maistu negauname arba gauname per maţai, stygių galima kompensuoti maisto papildais ir vitaminais. Tačiau, prieš pradedant vartoti kokį nors preparatą, nereikėtų uţmiršti, kad maisto papildas nėra maisto pakaitalas“ [16].
Lietuvos Respublikos ministro įsakyme Lietuvos higienos normoje HN17:2003 maisto papildai apibrėţiami kaip maisto produktai, skiriami papildyti įprastą maisto racioną, kurie vienas arba derinyje su kitomis medţiagomis yra koncentruoti maistinių ar kitų medţiagų šaltiniai, turintys mitybinį ar fiziologinį poveikį. Į rinką jie tiekiami dozuotomis formomis, ţenklinime neuţsimenant ar nenurodant apie gydomąsias ir nuo ligų saugančias savybes [12]. Vis dėlto pasitaiko ne vienas šios nuostatos paţeidimas, kai reklamoje maisto papildams priskiriamos vaistų funkcijos, pavyzdţiui, nurodant sveikatinimo poveikį ar konkrečią ligą, kurios galima išvengti vartojant nurodomą preparatą [13]. Tai vienas iš veiksnių, įtakojantis ţmonių patiklumą bei maisto papildų vartojamumo didelį paplitimą, nors jų gydomasis ar profilaktinis poveikis, kitaip nei registruotų vaistų, daţniausiai vis dar iki galo neįrodytas klinikiniais tyrimais [9].
Atliekant Lietuvoje registruotų preparatų teorinį tyrimą, įsitikinau, kad visi preparatai, kurių sudėtyje randama mėlynių uogos ţaliava – registruoti kaip maisto papildai. Nustatyta, kad vienkomponenčių mėlynių uogų preparatų Lietuvos rinkoje sutinkama ypatingai retai. Kompleksiniuose - identiškų sudėčių nėra, vienas kitą preparatai papildo skirtingais augalinių ţaliavų ekstraktais ar dţiovintų augalų milteliais, vitaminais, metalais, mikro ir makroelemtais, stipriais natūraliaisiais antioksidantais. Kadangi mėlynių uogų ekstrakto preparatai daugiausiai yra orientuoti oftalmologinių sutrikimų prevencijai ir eigos stabdymui, pravartu ţinoti ką teigia Kauno medicinos universiteto Akių ligų klinikose tuometinė gydytoja rezidentė L.Armonaitė: ,,Regėjimo aštrumą įmanoma pagerinti tik vaizdą didinančiomis priemonėmis. Naudinga vartoti vitaminų su liuteinu [...] vitaminais A ir C, cinku..." [1]. Būtent visi šie ir daugiau komponentų yra randama labai didelėje dalyje šiame darbe tirtų maisto papildų.
Mėlynių uogų antioksidacinis aktyvumas susijęs su polifenolių kokybine ir kiekybine sudėtimi, kuri yra šiek tiek skirtinga dėl geografinių regionų ir klimato sąlygų ypatumų. Polifenolių turinčių produktų vertei įtakos turi jų gamybai taikyti technologiniai procesai. Gaminant dideliu antioksidaciniu aktyvumu pasiţyminčius produktus, svarbu parinkti tinkamus 22 polifenolių ekstrakcijos būdus, jų kiekio ir antioksidacinio aktyvumo įvertinimo metodus [20]. Todėl pasitaiko atvejų, kad iš natūralios ţaliavos
gamintų preparatų (maisto papildų) pakuotės informacija skelbia tikrovės neatitinkančius veikliųjų medţiagų kiekius, o tai keičia preparato poveikio stiprumą ir laukiamą rezultatą.
1.6.
Mėlynių uogų preparatų dozavimas ir toksinis poveikis
Rekomenduojama mėlynių ekstrakto, kuriame yra apie 25% antocianinų, dozė svyruoja nuo 40 mg/dieną iki 480 mg/dieną. Tai net 12 kartų didesnis skaičius uţ pirminį. Platus dozės kintamumas sukuria sąlygas į rinką leisti įvairios koncentracijos šių uogų ekstraktų preparatus ir kartu klaidina vartotoją dėl stabilios dozės nebuvimo [25]. Galima daryti prielaidą, kad toks didelis intervalas tarp rekomenduojamų dozių atspindi maţą vaistinio augalo toksiškumą organizmui. Tačiau pavartojus didesnę uţ rekomenduojamą paros dozę, pastebėta atvejų, jog didėja kraujavimų tikimybė (reikia atsargiai skirti prieš paciento laukiamas operacijas arba dantų taisymo procedūras), atsiranda skrandţio veiklos sutrikimai arba apsinuodijimas hidrochinonu. Remiantis tyrimais su gyvūnais, mėlynių uogų ekstrakto preparatai gali didinti hipoglikemijos tikimybę [28].
Vis dar moksliškai neįrodyta, ar nėščiosioms bei maitinančioms krūtimi moterims yra saugu vartoti mėlynių ekstraktą. Tačiau šiuo moters gyvenimo tarpsniu mėlynės uogas valgyti daktarai nedraudţia ir jau nuo seno jos yra vartojamos kaip maisto produktas tokiu laikotarpiu. Yra atliktas tyrimas, kuomet mėlynių ekstraktas buvo naudojamas kojų edemai gydyti nėštumo laikotarpiu. Šalutinių poveikių nepastebėta [28].
2. TYRIMO METODIKA
2.1. Tyrimo medţiaga, obejktų paruošimas ir metodai
2.1.1. Tyrimo objektai:
Eksperimentiniam tyrimui buvo atrankiai pasirinkti aštuoni skirtingi preparatai, kurių sudėtyje aptinkama mėlynių uogų ţaliava.
1 lentelė. Eksperimentiniam tyrimui pasinkti preparatai
Eil. Nr. Preparato pavadinimas
1. Mėlynių ekstraktas, kapsulės (,,Vitaforce”, Jungtinė Karalytė)
2. Mėlynių uogų ekstraktas 400 mg, kapsulės (,,Aptiekas Produkcija”, Latvija) 3. Bilberrin 160 mg, kapsulės (,,Aconitum”, Lietuva)
4. Visioblue strong, kapsulės (,,Hankintatukku Oy”, Suomija)
5. Vitaminai akims plius liuteinas VivaVit, kapsulės (UAB ,,Medigate”, Lenkija ) 6. Matyk! Mėlynių uogų su vit. A,C,E, tabletės (,,Medicata Filia”, Lietuva) 7. Matyk! Su liuteinu, tabletės (,,Medicata Filia”, Lietuva)
8. Mėlynių uogų ekstrakto tabletės su cinku forte 0,25 g („Elit-farm", Ukraina)
Papildų atrankumas grindţiamas jų sudėtimi. Tyrimui buvo pasirinkta Lietuvoje registruoti vienkomponenčiai mėlynių uogų ekstrakto preparatai, taip pat daugiakomponenčiai preparatai, kurių sudėtyje esančią mėlynių uogų ţaliavą papildo stiprūs antioksidantai: vitaminai A, C, E [28], natūralus antioksidantas - liuteinas [43], metalas - cinkas.
Siekta, kad toks atrankumas parodytų, kaip kinta preparato mėlynių uogų ţaliavos veikliųjų junginių kiekis bei antioksidacinis aktyvumas jį papildant kitomis sudėtinėmis dalimis.
2.1.2. Naudoti reagentai
1. Išgrynintas vanduo (Ph.Eur. 01/2008:0008, LSMU Laboratorija); 2. Etilo alkoholis 96° (UAB ,,Stumbras”, Lietuva);
3. Kalio chlorido 0,025 M (pH=1) buferinis tirpalas (LSMU laboratorija); 4. Natrio acetato 0,4 M (pH=4,5) buferinis tirpalas (LSMU laboratorija);
5. Folin-Ciocalteu reagentas (,,Sigma“, Šveicarija);
6. 2,2-difneilo-2-pikrylhidrazyl reagentas (,,Sigma-Aldrich”, Vokietija); 7. Natrio karbonatas (,,Sigma“, Šveicarija);
8. Galo rūgštis (,,Sigma“, Šveicarija).
2.1.3. Objektų paruošimas
2.1.3.1. ,,Mėlynių ekstraktas", kapsulės (,,Vitaforce”, Jungtinė Karalystė)
Fenolinių junginių kiekio nustatymo metodui: dviejų kapsulių turinys praskiestas 250 ml išgrnintame vandenyje; antocianinų kiekio nustatymo metodui: dviejų kapsulių turinys praskiestas po 250 ml pH=1 ir pH=4.5 buferiniais tirpalais; DPPH metodui – dviejų kapsulių turinys praskiestas 150 ml išgrynintame vandenyje.
2.1.3.2. ,,Mėlynių uogų ekstraktas 400mg", kapsulės (,,Aptiekas Produkcija”, Latvija)
Fenolinių junginių kiekio nustatymo metodui: dviejų kapsulių turinys praskiestas 800 ml išgrynintame vandenyje; antocianinų kiekio nustatymo metodui: dviejų kapsulių turinys praskiestas po 800 ml pH=1 ir pH=4.5 buferiniais tirpalais; DPPH – dviejų kapsulių turinys praskiestas 250 ml išgrynintame vandenyje.
2.1.3.3. ,,Bilberrin 160 mg”, kapsulės (,,Aconitum”, Lietuva)
Fenolinių junginių kiekio nustatymo metodui: dviejų kapsulių turinys praskiestas 210 ml išgrynintame vandenyje; antocianinų kiekio nustatymo metodui: dviejų kapsulių turinys praskiestas po 210 ml pH=1 ir pH=4.5 buferiniais tirpalais; DPPH – dviejų kapulių turinys praskiestas 100 ml išgrynintame vandenyje.
2.1.3.4. ,,Visioblue strong", kapsulės (,,Hankintatukku Oy”, Suomija)
Fenolinių junginių kiekio nustatymo metodui: dviejų kapsulių turinys praskiestas 80 ml išgrynintame vandenyje; antocianinų kiekio nustatymo metodui: dviejų kapsulių turinys praskiestas po 80 ml pH=1 ir pH=4.5 buferiniais tirpalais; DPPH – dviejų kapsulių turinys praskiestas 40 ml išgrynintame vandenyje.
2.1.3.5. ,,Vitaminai akims plius liuteinas VivaVit", kapulės (UAB ,,Medigate”, Lenkija)
Fenolinių junginių kiekio nustatymo metodui: vienos kapsulės turinys praskiestas 60 ml išgrynintame vandenyje; antocianinų kiekio nustatymo metodui: vienos kapsulės turinys praskiestas po 60 ml pH=1 ir pH=4.5 buferiniais tirpalais; DPPH – vienos kapsulės turinys praskiestas 40 ml išgrynintame vandenyje.
2.1.3.6. ,,Matyk! Mėlynių uogų su vit. A,C,E", tabletės (,,Medicata Filia”, Lietuva)
Fenolinių junginių kiekio nustatymo metodui: trijų sutrintų tablečių milteliai praskiesti 350 ml išgrynintame vandenyje; antocianinų kiekio nustatymo metodui: trijų sutrintų tablečių milteliai praskiesti po 350 ml pH=1 ir pH=4.5 buferiniais tirpalais; DPPH – trijų sutrintų tablečių milteliai praskiesti 230 ml išgrynintame vandenyje.
2.1.3.7. ,,Matyk! Su liuteinu", tabletės (,,Medicata Filia”, Lietuva)
Fenolinių junginių kiekio nustatymo metodams: dviejų sutrintų tablečių milteliai praskiesti 300 ml išgrynintame vandenyje; antocianinų kiekio nustatymo metodui: dviejų sutrintų tablečių milteliai praskiesti po 300 ml pH=1 buferiniu ir pH=4.5 buferiniais tirpalais; DPPH – dviejų sutrintų tablečių milteliai praskiesti 180 ml išgrynintame vandenyje.
2.1.3.8. ,,Mėlynių uogų ekstrakto tabletės su cinku forte 0,25 g" („Elit-farm", Ukraina)
Fenolinių junginių kiekio nustatymo metodui: nors šio preparato RPD yra 4 tabletės, net 1 tabletės praskiedimas 3 ml vandens nedavė apčiuopiamo rezultato, kas nulėmė fenolinių junginių ir DPPH metodo neatlikimą.
2.1.4. Metodai
2.1.4.1. Lietuvoje registruotų mėlynių uogų preparatų sudėčių analizė
Preparatų sudėtis tirta vadovaujantis literatūros analizės metodu.
Bendras fenolinių junginių kiekis buvo nustatomas spektrofotometru Agilent 8453 UV-Vis (Agilent Technologies Inc.. Santa Clara, JAV) , naudojant standartinį Folin-Ciocalteu reagentą. Tam sudaryta kalibravimo kreivė etaloniniams 0,02; 0,04; 0,06; 0,08; 0,1 mg/ml koncentracijos galo rūgšties tirpalams.
2,5 ml Folin-Ciocalteu (skiesto 1:10) tirpalo buvo maišoma su 0,5 ml tiriamojo tirpalo ir 2 ml 7,5% natrio karbonato tirpalo, kuris mišiniui suteikė mėlynai ţalią spalvą. Gautas tirpalas paliktas ramiai stovėti 30 minučių, po kurių spektrofotometriškai buvo matuojama absorbcija 765 nm bangos ilgyje. Galutinė fenolinių junginių koncentracija tirpale išreikšta galo rūgšties ekvivalentais - mg/ml GRE.
Kiekvienas mėginys analizuotas po tris kartus ir vestas vidurkis, turintis paklaidą.
2.1.4.3. Antocianinų kiekio nustatymas
Antocianinų kiekis vertintas naudojant Giusti ir Wrolstad aprašytą pH difirencinį metodą [21], nustatytas naudojant spektrofotometrą Agilent 8453 UV-Vis (Agilent Technologies Inc.. Santa Clara, JAV). Mėginiai skiesti dviem buferiniais tirpalais: kalio chlorido buferiu 0,025M (pH 1,0) ir natrio acetato buferiniu 0,4M (pH 4,5) tirpalu. Absorbcija matuota iškart po praskiedimo prie 516 nm ir 700 nm bangų ilgių spektrofotometru. Absorbcijos matavimai atlikti kambario temperatūroje, kaip etaloninį mėginį naudojant išgrynintą vandenį. Monomerinė antocianinų pigmentinė koncentracija apskaičiuota pagal lygtį: C(mg/l)= l DF MW A 1000 čia: A - absorbcija;
MW - etalono molekulinė masė (pagal Dpd-3glu 465,2 [56]) ; DF - praskiedimo faktorius;
ε - molinis sugeriamumas (pagal Dpd-3-glu 795 m2/mol [56]); l - trajektorijos ilgis (kiuvetės plotis 1 cm).
A=(A516 - A700)pH 1.0 - (A516 - A700)pH 4.5
čia: A516 - absorcija prie 516 nm bangos ilgio buferiniuose tirpaluoe;
A700 - absorcija prie 700 nm bangos ilgio buferiniuose tirpaluose.
Kiekvienas mėginys analizuotas po tris kartus ir vestas vidurkis, turintis paklaidą.
2.1.4.4. Antioksidacinio aktyvumo nustatymas DPPH metodu
Laisvųjų radikalų neutralizacija mėlynių ekstraktui atlikta ekstrakto preparatų tirpalus veikiant 2,2-difneilo-2-pikrylhidrazyl (DPPH) reagentu pagal Brand-Williams ir kitų mokslininkų aprašytą procedūrą. Antioksidacinis aktyvumas įvertintas matuojant, kiek procentų stabilaus DPPH radikalo neutralizuoja tiriamojoje medţiagoje esantys ir antioksidaciniu aktyvumu pasiţymintys junginiai. Siekiant įvertinti antioksidantų veiklą, kiekvienas mėginys skiestas santykiu 1:20 v/v su 96 proc. etanoliu. Antioksidantinis tirpalas metanolyje (0,1 ml) sumaišytas su 2,9 ml 0,1 mM DPPH [20]. Spektrofotometru išmatuotas mėginių absorbcijos maţėjimas 515 nm bangos ilgyje kol pasiekta absorbcijos pusiausvyra (apytiksliai po 30 min.). Etaloninis - 96 proc. etanolis. Antioksidacinis tirpalų aktyvumas apskaičiuotas pagal formulę, išreikštas inaktyvuoto DPPH procentais:
DPPH(proc)= 100
Ab
Ab Aa
čia: Ab - tuščiojo bandinio absorbcija (t=0 min.);
Aa - bandinio su tiriamuoju tirpalu absorbcija (po 30 min.).
Kiekvienas mėginys analizuotas po tris kartus ir vestas vidurkis, turintis paklaidą.
2.1.4.5. Statistinis duomenų vertinimas
Statistiniam duomenų vertinimui naudota ,,MS Excel" (Microsoft, JAV) ir ,,Statistica7“ programos (StatSoft, JAV).
Antioksidacinio aktyvumo priklausomybės dinamikai nuo fenolinių junginių ar antocianinų kiekio sudaryta tiesinė regresija. Sumodeliuota regresijos funkcija (4 pav).
Y = t(x, x1, x2……xn) Yi = β0+β1X1i+β2X2i+…βkXki+εi
Antioksidacinis aktyvumas = f(fenoliniai junginiai, Antocianinai) Antioksidacinis aktyvumas = β0+β1*fenoliniai junginiai + β2*Antocianinai + βkXki+εi 4 pav. Regresijos fukcija
čia: Y- antioksidacinis aktyvumas yra priklausomas narys, nes norėta ištirti jo dinamiškumą;
X- nepriklausomi kintamieji - fenoliniai junginiai, antocianinai - kuriais aiškinta antioksidacinio aktyvumo dinamika.
Skaičiavimo regresijos modelis (5 pav.):
5 pav. Dauginės regresijos informacija
Dependent. – priklausomas kintamasis;
Multiple R – daugybinis koreliacijos koeficientas, rodantis ryšį tarp dviejų x'ų ir vieno y'o. Jis nurodo priklausomybės stiprumą tarp kintamųjų. Kuo koreliacijos koeficientas arčiau -1 ar 1, tuo stipresnis
koreliacinis ryšys sieja nagrinėjamus kintamuosius. Analizuojamuoju atveju R=0,5, taigi ryšys tarp kintamųjų yra vidutinis;
R2 – determinacijos koeficientas. Remiantis statistikos metodologija, kuo r2 yra arčiau vieneto, tuo regresijos kreivė labiau atitinka eksperimentinius duomenis. 5 paveiksle matosi, jog determinacijos koeficientas lygus R2=0,25, t.y. apytiksliai ~25,24% variacijos yra paaiškinama nepriklausomais kintamaisiais x. Skaičius nutolęs nuo vieneto, bet galime daryti prielaidą, jog taip yra dėl to, jog analizuojamuoju atveju imtis lygi 7, dėl to duomenų sklaida aplink kreivę nėra tokia tanki;
Adjusted R2 – pakoreguotas determinacijos koeficientas. Jo reikšmė patikslinta atsiţvelgiant į tai, kad skaičiuojant regresiją naudotas ne vienas, o keli x'ai. Be to, kai R2
būna arti nulio, pakoreguotas R2 gali būti neigiamas skaičius – koregavimas tinka tik dideliems determinacijos koeficientams;
No. of cases – imties dydis. Šiuo atveju skaičiuojant regresiją buvo panaudoti septynių preparatų duomenys;
Intercept – laisvasis narys (b0)=13,59;
Std. Error – laisvojo nario standartinė paklaida =15,33;
t(4) – laisvojo nario normuotas nuokrypis, kuris paklūsta Stjudento skirstiniui su 4 laisvės laipsniais; p – reikšmingumo lygmuo. Remiantis statistikos teorija, P reikšmė parodo, ar koreliacija statistiškai reikšminga. Koreliacijos statistiniam reikšmingumui įvertinti gauta p reikšmė daţniausiai palyginama su reikšme α=0,05 (reikšmingumo lygmuo). Koreliacija statistiškai reikšminga, jei SPSS apskaičiuota p reikšmė maţesnė uţ 0,05. Reikšmingumo lygmenį galima pasirinkti ir didesnį ar maţesnį, tai priklauso nuo tyrimo tikslų.1
3. REZULTATAI IR JŲ APTARIMAS
3.1. Preparatų sudėčių ir technologijų teorinė analizė
3.1.1. Lietuvoje registruotų mėlynių uogų preparatų pasiūlos analizė
Tyrimas atliktas analizuojant Lietuvos vaistinių asortimentą iki 2013 m. birţelio mėn., atsiţvelgiant į regėjimui skirtų augalinių maisto papildų sudėtis. Ieškota preparatų, kurių pagrindinė sudėtinė dalis ar viena iš sudedamųjų dalių yra mėlynių (Vaccinium myrtillus L.) uogos. Nustatyta 47 Lietuvoje registruoti mėlynių uogų preparatai (1 priedas).
Papildomai naudotos priemonės tyrimui: UAB ,,Limedika" sukurta programa ,,MedInfo“ ir šaltinis: prieiga per internetą <http://www.vaistai.lt/index.php?option=com_frontpage&menutype=vaistai menu¤t=941&Itemid=941>.
3.1.2. Mėlynių (Vaccinium myrtillus L.) vaisių ţaliavos formos pasiskirstymas
Lietuvoje registruotų preparatų sudėtyse
Atlikus Lietuvoje registruotų mėlynių uogų preparatų ţaliavos analizę, nustatyta, jog daţniausiai pramonėje gaminami maisto papildai, kurių sudėtyje yra randamas mėlynių uogų ekstraktas. Būtent ši ţaliavos forma sudaro 85 proc. visų analizuotų preparatų, 9 proc. atitinka preparatai su mėlynių uogų milteliais, 2 proc. randama ir mėlynių uogų miltelių, ir šių uogų vaisių. Sumoje 4 proc. savo sudėtyje turi mėlynių vaisių, tačiau jų forma kapsulėje ar tabletėje nenurodyta (6 pav.). Tokia informacijos stoka gali klaidinti vartotoją, turintį lūkesčių dėl šio maisto papildo naudos organizmui. Preparatas ,,Optivision", dengtos tabletės (UAB ,,Biosola“, Prancūzija), atstovaujantis pastarajam procentui, kitose analizėse, susijusiose su mėlynių uogų ekstraktu, nebus įtrauktas, nes jame esančios mėlynės uogos ţaliavos forma nėra aiškiai nurodyta.
Būtent mėlynių uogų ekstraktas įeina į daugumos nagrinėjamų preparatų sudėtį, nes tai yra patogi ţaliavos forma kapsuliavimui ir tabletavimui. Kadangi antocianinai tirpūs vandenyje fenoliai [37], ekstrakto milteliai yra kompaktiška forma tabletavimui ir kapsuliavimui, ypač, kai preparatas yra sudėtinis.
Paprastai mėlynių uogų veikliosios medţiagos daugiausiai yra susikaupusios vaisiaus luobelėje [10], iš ekstaktuotos formos fenoliniai junginiai lengviau atsipalaiduoja ir taip greičiau yra pasisavinami, lyginant su dţiovinto vaisiaus milteliais.
3.1.3. Tablečių ir kapsulių pasiskirstymas tiriamuosiuose preparatuose
Atlikus tiriamųjų preparatų teorinę analizę, paaiškėjo, jog didesnė dalis nagrinėjamų maisto papildų rinkai pateikiama tabletuota forma (7 pav.). Pasiskirstymas procentaliai nedaug, tačiau lenkia kapsuliuotą formą. Atitinkamai tai sudaro 53 proc. ir 47 proc.
Atsiţvelgiant į tai, kad:
kapsulėje patalpinamas didesnis kiekis komponentų lyginant su tabletėmis, nes ji yra didesnė. Į jas dedama maţiau pagalbinių medţiagų, kas sutaupo vietą veikliosioms medţiagoms;
fenolinių junginių, tarp jų ir antocianinų, aktyviausia absorbcija vyksta ţarnyne [39,61], todėl kapsulės apvalkalas – viena tinkamiausių apsaugų nuo skrandţio rūgščiosios terpės;
sąlytyje su vandeniu kapsulės paviršius įgauna didesnį slidumą lyginant su tabletuotomis formomis be apvalkalo, todėl kapsulė tampa lengviau nuryjama. Atsiranda maţesnė tikimybė, jog preparatas prilips prie viškinamojo trakto sienelių.
Toks preparato formos pasiskirstymas neatitinka vaisto formos privalumo kriterijų ir verčia dvejoti preparato pranašumu lyginant su kapsuliuotomis formomis.
7 pav. Tablečių ir kapsulių procentinis pasiskirstymas preparatuose, kuriuose randama mėlynės vaisiaus ţaliava
3.1.4. Preparatų tabletės/kapsulės rekomenduojami suvartojamumo kartai paroje
Remiantis 8 paveiksle pateikta diagrama, populiariausia tiriamųjų preparatų tablečių/kapsulių rekomenduojama paros norma vartotojui yra 2 tabletės/kapsulės per parą. Tuo vadovaujasi 52 proc. iš visų 47 preparatų gamintojų.
Pati patogiausias norma - 1 tabletė/kapsulė per dieną - rekomenduojama gerti 36 proc. tiriamųjų preparatų, 3 tabletės/kapsulės - 4 proc. prepartų, 4 tabetės/kapsulės - 6 proc.
Maisto papildas ,,Herbomix Gero”, tabletės ( „Fitoapteka Čistiakova“, Ukraina) sudaro 2 proc. visų preparatų, kurio gamintojas rekomenduoja suvartoti net 6 tabletes per parą. Tuo tarpu penkių tablečių/kapsulių per parą nerekomenduoja gerti nė vieno preparato gamintojas.
Remiantis gamintojų technologijos praktika (1 priedas), daroma prielaida, jog rekomenduojamą mėlynių uogų ekstrakto paros dozę (apie 480 mg) galima sutalpinti į 2 kapsules. 4-6
tabletės per dieną – nepatogi dozė vartotojui, kuri sumaţinama, kaip jau minėta, preparato formą keičiant į kapsuliuotą, naudojant maţiau pagalbinių medţiagų, kurių reikia tabletuotai formai. Taip pat norint pagaminti kokybišką preparatą, reikėtų atkreipti dėmesį į ţaliavos standartizaciją. Vartotojui, norinčiam nusipirkti kokybišką mėlynių uogų preparatą, rekomenduočiau rinktis 25 proc. standartizacijos, vienkomponentį, kapsuliuotą mėlynių uogų ekstrakto preparatą, kurio dviejose kapsulėse, kaip rodo gamintojų praktika, sutalpinama visa rekomenduojama šios ţaliavos paros dozė.
8 pav. Preparatų, kuriame randama mėlynės vaisiaus ţaliava, tabletės/kapsulės leistini suvartojamumo kartai paroje
3.1.5. Kompleksinių ir vienkomponenčių preparatų pasiskirstymas tiriamųjų
Lietuvoje registruotų mėlynių uogų preparatų tarpe
91 proc. visų tiriamųjų sudaro kompleksiniai preparatai ir tik 9 proc. – vienkomponenčiai (9 pav.). Visų vienkomponenčių preparatų sudėtyje esanti veikliosios medţiagos ţaliavos forma – mėlynių uogų ekstraktas. Nustatyta, kad visi šie vienkomponenčiai preparatai yra kapsuliuotos formos.
Pastebėta, kad vienkomponenčių preparatų sudėtyje yra lyginamai didţiausi mėlynių uogų ekstrakto kiekiai atsiţvelgiant į kompleksinių preparatų šio ekstrakto kiekius. Vartotojui, kuris didţiausią dėmesį akcentuoja būtent mėlynių uogų poveikiui sveiktai, pravartu būtų rinktis ne kompleksinį, o vienkomponentį mėlynių uogų ekstrakto preparatą.
9 pav. Kompleksinių ir vienkomponenčių preparatų pasiskirstymas tiriamųjų preparatų tarpe
3.1.6. Mėlynių (Vaccinium myrtillus L.) uogų ekstrakto kiekis tiriamuosiuose
preparatuose
Remiantis diagramoje pateiktais procentiniais duomenimis (6 pav.), populiariausia mėlynės uogos ţaliavos forma Lietuvoje registruotuose preparatuose - ekstraktas. Jis randamas 41-ame preparate iš visų 47 (10 pav.). Literatūros šaltiniuose teigiama, kad 25 proc. standartizuoto mėlynių (Vaccinium myrtillus L.) uogų ekstrakto rekomenduojama paros norma nuo 40 mg/dieną iki 480 mg/dieną [25].
Atlikus sudėčių analizę, nustatyta, kad 78 proc. šių preparatų siekia ar viršija ţemiausią nustatytą RPD. Tokia statistika rodo gamintojo daţniausiai atkreipiamą dėmesį į mėlynių uogų ekstrakto
efektyvumo sąlygas. Kadangi mėlynių (Vaccinium myrtillus L.) vaisiai turi stiprias antioksidacines savybes, atlieka svarbų vaidmenį oftalmologinių sutrikimų prevencijoje [7,46], natūralu, jog tinkama dozė - vienas svarbiausių kriterijų kuriant preparatą regėjimo sutrikimų profilaktikai, ligos eigos pristabdymui.
10 pav. Mėlynių uogų ekstrakto kiekis Lietuvoje registruotų mėlynių uogų preparatų vienoje RPD2
17 proc. šių preparatų viršija RPD, iš jų 57 proc. minėtą dozę pranoksta dvigubai ir daugiau. Toks normos standartų nesilaikymas turėtų didinti veikliųjų medţiagų (natūralių fenolinių junginių) kiekį, tuo pačiu stiprinti antioksidacinį aktyvumą, tačiau atsiranda didesnė tikimybė šalutiniam preparato poveikiui. Remiantis moksliniais šaltiniais, perdozavus gali atsirasti skrandţio veiklos sutrikimai, apsinuodijimas hidrochinonu, kraujavimas ar hipoglikemija [28]. Pastebėta, kad būtent taip nustatytos RPD standartus lenkia vienkomponenčiai preparatai, kurių vienintelė veiklioji medţiaga - mėlynių uogų ekstraktas.
Likusieji preparatai, kuriuose mėlynių uogų ekstrakto yra labai maţai, dozė nesiekia netgi pačios maţiausios rekomenduojamos, sudaro 32 proc. Šiuose maisto papilduose aptikta nuo 3 iki 36 mg minėto ekstrakto. Tai dar nereiškia, kad toks vartojamas preparatas neturės jokio terapinio efekto organizmo funkcijos stiprinimui. Šiais atvejais ekstraktas yra kompleksinių preparatų sudedamoji dalis,
o maisto papildo poveikis organizmui apsprendţiamas ne atskirai vieno komponento, bet grupės tarpusavyje sąveikaujančių biologiškai aktyvių medţiagų.
Ši ekstrakto kiekio analizė nėra tiksli, nes rekomenduojama paros dozė privalo būti būtent 25 proc. standartizuoto ekstrakto, taip norint gauti reikiamą fenolinių junginių kiekį. Labai daţnas gamintojas nepateikia vartotojui tikslios standartizavimo procento informacijos, todėl viršytos paros dozės gali turėti lyginamai maţą standartizaciją tuo pačiu ir silpną veikimą organizmui, bei atvirkščiai.
Toks informacijos trūkumas klaidina vartotoją dėl tinkamo preparato pasirinkimo ir laukiamo jo rezultato.
3.1.7. Vaistinės akišveitės (Euphrasia rostkoviana L.) ţolės ekstrakto kiekio
pasiskirstymas kompleksinių preparatų su mėlynių uogų ekstraktu paros dozėje
Tolesnei analizei iš 41 preparato su mėlynių uogų ekstraktu buvo atrinkti 37 kompleksiniai preparatai, kuriuose randama daugiau nei viena veiklioji medţiaga.
Atlikus tyrimą, paaiškėjo, jog po mėlynių uogų ekstrakto daţniausiai pasikartojantis augalinis sudėties komponentas - vaistinių akišveičių ( Euphrasia rostokoviana L.) ekstraktas, turintis dezinfekuojančių, uţdegimą maţinančių savybių. Atlikti tyrimai su gyvūnais parodė, jog Vaistinės akišveitės ištraukos kompresai išgydo konjugtyvitą [65].
Vaistinių akišveičių ekstraktai randamai 24 proc. viso mėlynių uogų ekstrakto preparatų asortimente (11 pav.). Didţiausias jo kiekis (500 mg), remiantis ant pakuotės pateikta informacija, rastas ,,Vega OptiCare", kapsulės (,,Vega Natur", D.Britanija) maisto papildo preparate. Tai 4,17 karto daugiau, nei jame yra mėlynių uogų ekstrakto, kuris remiantis eksperimentiniais tyrimais turi šiek tiek didesnį antioksidacinį aktyvumą uţ akišveitę. Panašų šių augalinių ţaliavų kiekių santykio skirtumą vaistinės akišveitės naudai turi dar du preparatai: ,,Formulė akims ir regėjimui", kapsulės (,,"SIA"Aptiekas produkcija", Latvija), ,,Formulė akims su cinku ir liuteinu”, kapulės(,,"SIA"Aptiekas produkcija", Latvija).
Keturi iš devynių aptariamų preparatų sudėtyje vaistinių akišveičių (Euphrasia rostokoviana L.) ţolės ekstraktai kiekiu lyderiauja, lyginant su mėlynių (Vaccinium myrtillus L.) uogų ekstraktu. Gali būti, jog būtent juose šis augalas, o ne mėlynės vaisių ekstraktas traktuojamas kaip pagrindinis augalinis antioksidantas arba toks kiekių santykis pasirinktas dėl pagrįstai silpnesnio akišveitės antioksidacinio aktyvumo. Taip pat įtakos gali turėti skirtinga ţaliavų standartizacija nulemianti veikliųjų junginių kiekį.
11 pav. Vaistinių akišveičių ţolės ekstrakto kiekis kompleksiniuose preparatuose, kuriuose randama mėlynių uogų ekstraktas3
3.1.8. Vitaminų A, C, E kiekio pasiskirstymas kompleksinių preparatų su mėlynių
(Vaccinium myrtillus L.) uogų ekstraktu rekomenduojamoje paros dozėje
Vidutiniškai 73 proc. kompleksinių mėlynių uogų ekstrakto maisto papildų sudėtį papildo vitaminai. Kaip jau minėta, populiariausi ir daţniausiai sutinkami visuose procentaliai atrinktuose preparatuose yra A (retinolis), C (askorbo rūgštis) ir E (α-takoferolis) vitaminai.
Vadovaujantis diagramoje (12 pav.) pateiktais preliminariais duomenimis, matyti, jog daţniausiai pasikartojantis vitaminas tiriamuosiuose preparatuose – askorbo rūgštis (vit. C). Jis randamas 24 preparatų sudėties aprašymuose ant pakuotės iš visų 37 aptariamųjų. Tuo tarpu α-takoferolis (vit. E) įeina į 21 preparato, o retinolis (vit. A) – 16 preparatų sudėtis.
3
12 pav. Vitaminų A, C, E kiekių santykis preparatuose, kuriuose aptinkamas mėlynių uogų (Vaccinium myrtillus L.) ekstraktas34
3.1.8.1. Vitamino A kiekio pasiskirstymas kompleksinių preparatų RPD
Vitamino A (retinolio) trūkumas maţina akies junginės taurines ląsteles, sukelia mucino maţėjimą ašarų plėvelėje, vyksta gleivinės epitelio metaplazija, keratinizacija. Sisteminis vitamino A lygis įtakoja ašarų koncentraciją [33]. Remiantis Europos komisijos direktyvu 2008/100/EB, pagal Lietuvos higienos normos HN 119:2002 ,,Maisto produktų ţenklinimą“, vitamino A rekomenduojama paros suvartojimo norma yra 0,8 mg [11] . Ūmus toksiškumas yra maţiau pavojingas lyginant su lėtiniu, tačiau tikslių paros suvartojimo dozių paskaičiavimų nėra, nes tai priklauso nuo daugelio faktorių. Ypač vaikai yra jautrūs vitaminui A [55].
16-oje iš 37 kompleksinių mėlynių uogų ekstrakto preparatų savo sudėtyje turi vitaminą A. Pakankamai didelis vitamino A kiekis, viršijantis 0,8 mg/parą dozę [40] aptinkamas net 50 proc. visų tyrinėtų maisto papildų, kuriuose jis yra kaip vienas iš komponentų (13 pav.). Atsiţvelgiant į tai, kad šio vitamino hipervitaminozė, lėtinis ar ekstrinis toksiškumas yra ganėtinai pavojingi sveikatai, šis procentas yra pakankamai didelis.
3
13 pav. Retinolio kiekis kompleksiniuose preparatuose, kuriuose aptinkamas mėlynių uogų ekstraktas35
Vitamino dozių rezultatai pateikiami dviejose diagramose (9 pav.), nes vyraujančios dozės intervalas [0,3 ≥ 1200 mg/parą] yra labai platus. Kadangi eiliniam vartotojui vitamino A apytiksliai nustatyta 0,9 mg RPD, 1200 mg yra pakankamai didelis ir galimai toksinis kiekis.
Lietuvos vaistinių rinkai tiekiami preparatai ,,Vitaminai Vision A", tabletės (,,Litfarma“, Lietuva), ,,Vitaminai Vision su luteinu", tabletės (,,Litfarma“, Lietuva) nustatytą vidutinę RPD viršija 1333,33 karto, o Latvijos ,,"SIA"Aptiekas produkcija" gaminama ,,Formulė akims ir regėjimui” produkcija viršija 1000 karto. Būtent dėl šių preparatų vartojimo didţiausią dėmesį turėtų atkreipti senyvo amţiaus ţmonės, nes dėl daugelio spėjamų, bet iki galo oficialiai nepatvirtintų prieţasčių, jie turi didesnę riziką per ilgesnį vartojimo laiką perdozuoti šį vitaminą [55].
3.1.8.2. Vitamino C kiekio pasiskirstymas kompleksinių preparatų RPD
Vitaminas C reikalingas kraujagyslių elastingumui palaikyti, regai stiprinti, o trūkumas gali lemti amţinės geltonosios dėmės degeneraciją. Įvairūs moksliniai šaltiniai teigia, jog vitamino C RPD svyruoja maţdaug nuo 75 mg/dieną iki 120 mg/dieną [7], pagal Lietuvos higienos normą HN 119:2002 – 80 mg.
23 preparatai iš 37 nagrinėjamų savo sudėtyje kaip papildomą antioksidantą prie mėlynėse randamų fenolinių junginių turi vitaminą C (14 pav.). Tai sudaro 62,16 proc. minėtų 23 preparatų dalies. Toks procentas rodo jo svarbą ir pirmenybės prioritetą tarp vitamininių komponentų oftalmologiniuose maisto papilduose.
3
14 pav. Vitamino C kiekio pasiskirstymas preparatuose, kuriuose randama mėlynių uogų ekstraktas36
10 paveiksle pateiktoje diagramoje matomais duomenimis, 45,5 proc. aptariamų maisto papildų savo sudėtyje viršija nustatytą RPD dozę. Kadangi askorbo rūgštis - tirpus vandenyje vitaminas, perdozavimo atvejų pasitaiko labai retai, perteklius pasišalina su skysčiais iš organizmo [30]. Todėl ir 10 kartų didesnis kiekis uţ rekomenduojamą, esantis ,,Vitaminai vision A", tabletės (,,Litfarma“, Lietuva) ir ,,Vitaminai vision su luteinu", tabletės (,,Litfarma“, Lietuva) preparatuose, nekelia didelio pavojaus vartotojo sveikatai.
3.1.8.3. Vitamino E kiekio pasiskirstymas pasiskirstymas kompleksinių preparatų RPD
Taip pat pastebėta, kad daţnas vitaminas, papildantis mėlynių uogų preparatų sudėtį – vitaminas E (α-takoferolis). Jis atlieka stipraus antioksidanto vaidmenį, yra svarbus membranos stabilizavimui. Literatūros šaltiniai teigia, jog buvo įrodyta, kad jis apsaugo akies paviršių nuo pokyčių dėl vitamino A trūkumo [32]. Įvairiuose sudėtiniuose maisto papilduose vitaminas E yra pateikiamas iki 268 mg/dieną, vienkomponenčiuose preparatuose - iki 670 mg/dieną [31]. Pagal Lietuvos higienos normą HN 119:2002, vitamino E per parą reikėtų suvartoti 12 mg.
Šis vitaminas yra 56,8 proc. visų 37 analizuojamų kompleksinių preparatų (15 pav.). Nė vienas iš jų neviršija paprastai maisto papilduose randamų vit. E dozių, tačiau remiantis higienos normomis, matomi kitokie rezultatai.
15 pav. Vitamino E kiekio pasiskirstymas kompleksiniuose preparatuose, kuriuose randama mėlynių uogų ekstraktas37
Iš 21 analizuojamo kompleksinio preparato, kurio sudėtyje yra vitaminas E, 61,9 proc. atitinka maisto papildai, kuriuose viršijama higienos normų nustatyta šio vitamino 12 mg RPD.
11 paveiksle pateiktoje diagramoje didţiausi vitamino E kiekiai matomi ,,Bio-Vision", tabletės (,,Pharma Nord", Danija) ir ,,Lutax AMD Plus“, kapsulės (,,Santen", Suomija) preparatuose. Juos numanomai rekomenduotina vartoti pacientams, kurie jaučia vitamino E trūkumą, bei skundţiasi prastėjančiu regėjimu. Šiame produkte pakankamai didelis vitamino kiekis lyderiauja lyginant su augaliniais mėlynių uogų ekstrakto antocianinais, čia jis nustatytą vit. E RPD viršija beveik 17 kartų.
3.1.9. Seleno kiekio pasiskirstymas kompleksinių preparatų su mėlynių (Vaccinium
myrtillus L.) uogų ekstraktu rekomenduojamoje paros dozėje
Selenas yra natūralus periodinis elementas - nemetalas, kuris yra labai svarbus ţmonių sveikatai, tačiau jo perteklius organizmui ţalingas. Seleno biochemija svarbi, atsiţvelgiant į numanomas svarbias su amţiumi susijusias ligas. Tai būtinas mikroelementas. Tyrimai su ţiurkėmis parodė, kad
3
lėtinis seleno trūkumas gali sukelti kataraktos atsiradimą, o šio elemento perteklius gali iššaukti prooksidantines sąlygas šios ligos formavimuisi [35,48]. Atlikinėjami tyrimai kaip seleno vaidmuo organizme veikia geltonosios dėmės regeneraciją, pigmentinį retinitą, ar kurią kitą akių ligą. Šiuo metu nėra nei teorinio, nei empirinio pagrindo tikėti teigiamu poveikiu seleno papildų, suvartojamų 55
g/parą, nauda su regėjimu susijusioms ligoms [35].
Remiantis literatūros šaltiniais, seleno siauras diapazonas tarp reikiamos ir toksiškos paros dozės, esant trūkumui reikėtų gauti su maistu ar papildais < 40μg/parą, ţalinga dozė gali prasidėti > 400μg/parą, tačiau priklauso nuo individualaus organizmo, RPD nėra tiksliai nustatyta [36].
45,9 proc. aptariamų maisto papildų sudėtyje randamas elementas - selenas. Dozės, nurodytos ant pakuotės, labai kontrastingos (16 pav.).
0 ≥ 100 g seleno rasta 53 proc. preparatų, 100 ≥ 200 g - 29 proc., labai didelė ir galimai toksiška daugumai organizmų 60 000 ≥ 100 000 gdozė - 18 proc. preparatų.
Maţiausias randamas seleno kiekis (25 g) yra preparate ,,Strix kids", tabletės (,,Ferrosan A/S Sydmarken 5,2860 Soborg“, Danija).
Didţiausias - ,,Vitaminai Vision A", tabletės (,,Litfarma“, Lietuva), ,,Vitaminai Vision su luteinu", tabletės (,,Litfarma“, Lietuva). Pastaruosiuose teoriškai aptinkama net 110 mg seleno. Jie turi 250 kartų daugiau seleno, nei rekomenduojama. ,,Formulė akims ir regėjimui“, kapsulės (,,"SIA"Aptiekas produkcija", Latvija) viršija ţalingos dozės rekomendaciją 150 kartų. Sunku pasakyti, ar šie preparatai dėl šio komponento dozės standartų neatitikimo klaidina vartotoją bei ar gali būti ţalingi sveikatai.
3.1.10. Liuteino kiekio pasiskirstymas kompleksinių preparatų su mėlynių
(Vaccinium myrtillus L.) uogų ekstraktu paros dozėje
Liuteinas yra ksantofilas (karotenoidas, kurio sudėtyje yra vienas ar daugiau poliarinių funkcinių grupių), kuris selektyviai kaupiasi tinklainėje ir yra ypač storame nevaskuliariniame regione arba dėmėje, kurioje jis yra pagrindinis komponentas, veikiantis kaip antioksidantas, mėlynos šviesos filtras, tokiu būdu apsaugodamas geltonosios dėmės tinklainę ir tinklainės pigmento epitelį nuo šviesos inicijuojamo ląstelių oksidavimo [43], kas yra akių ligų sukėlimo faktorius.
17 pav. Liuteino kiekio pasiskirstymas preparatuose, kuriuose randamas mėlynių uogų ekstraktas38
3
