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PARTE SPERIMENTALE
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MATERIALI E METODI
I punti di fusione dei composti sintetizzati sono stati determinati utilizzando lo strumento KOFLE.
La struttura di tutti i composti è stata verificata per mezzo della spettrometria 1H-‐ NMR e gli spettri di risonanza magnetica nucleare protonica sono stati eseguiti con uno spettrometro Varian Gemini 200 operante a 200 MHz e riferiti al segnale residuo del solvente. I chemical shift δ sono espressi in ppm e le costanti di accoppiamento J sono espresse in Hz.
Le evaporazioni sono eseguite sotto vuoto in evaporatore rotante.
Le TLC analitiche sono state eseguite usando lastrine di gel di silice 60 F254 (MERCK) contenenti un indicatore fluorescente; le varie macchie sono state evidenziate per mezzo di lampada UV (254 nm).
Per le cromatografie su colonna è stato usato gel di silice 60 (0.040-‐0.063 mm) (MERCK).
Le procedure assistite dal microonde sono state effettuate con un CEM Discover® LabMate™ Microwave.
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METIL-‐6-‐METIL-‐2-‐OXO-‐1,2-‐DIIDROPIRIDINA-‐3-‐CARBOSSILATO (1)
Ad una soluzione di acido 2-‐idrossi-‐6-‐metilpiridina-‐3-‐carbossilico (1 g, 6,53 mmol) in CH3OH sono stati aggiunti 6,5 mL di H2SO4 concentrato. La miscela ottenuta è stata scaldata a reflusso, a 80 ° C per 24 h. Alternativamente la miscela viene riscaldata a microonde (CEM) a 90 °C per 60 minuti (potenza 200 W, pressione 100 psi, senza agitazione). Dopo raffreddamento, il solvente è stato rimosso mediante evaporazione sotto pressione ridotta. La miscela rimanente è stata neutralizzata con una soluzione satura di NaHCO3 (pH 7-‐8) ed estratta con CH2Cl2. La fase organica è stata essiccata su MgSO4, filtrata ed evaporata fino ad ottenimento di 0,610 g di solido bianco (1) che è stato utilizzato per la reazione successiva senza ulteriore purificazione.
Resa: 56 % p.f: 125-‐127 °C 1H-‐NMR: (DMSO-‐d6) δ (ppm): 7.96 (d, 1H, H4, J = 7.5 Hz), 6.08 (d, 1H, H5, J = 7.5 Hz), 3.68 (s, 3H, OCH3), 2.01 (s, 3H, CH3).
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N-‐CICLOEPTIL-‐6-‐METIL-‐2-‐OXO-‐1,2-‐DIIDROPIRIDINA-‐3-‐
CARBOSSIAMMIDE (2)
Una miscela di 1,0 g dell’estere metilico 1 (5.98 mmol) e 2.5 mL di cicloeptilammina (19,56 mmol) è stata scaldata a 150 °C in un bagno ad olio per 48 h. Dopo raffreddamento, la reazione è stata posta in ghiaccio e trattata con HCl al 10% (fino a pH acido). Il solido ottenuto è stato filtrato e triturato con etere di-‐iso-‐propilico per fornire 1,29 g del composto 2 come solido giallo.
Resa: 86 % p.f.: 173-‐175 °C
1H-‐NMR: (DMSO-‐d6) δ (ppm): 11.33 (bs, 1H, protone scambiabile), 9.82 (bd, 1H, NH), 8.24 (d, 1H, H4, J = 7.3 Hz), 6.33 (d, 1H, H5, J = 7.3 Hz), 4.11-‐3.84 (m, 1H, NCH), 2.32 (s, 3H, CH3), 2.01-‐1.18 (m, 12H, cicloeptile).
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N-‐CICLOEPTIL-‐5-‐BROMO-‐6-‐METIL-‐2-‐OXO-‐1,2-‐DIIDROPIRIDINA-‐3-‐
CARBOSSIAMMIDE (3)
Ad una soluzione del composto 2 (350 mg, 1,41 mmol) in 2,4 mL di CHCl3, mantenuta sotto agitazione magnetica, a temperatura ambiente, è stata aggiunta, goccia a goccia, una soluzione di Br2 (70 μL) in CHCl3 (1,4 mL). La miscela di reazione è stata lasciata sotto agitazione, a temperatura ambiente, overnight.
Il contenuto del pallone viene quindi trasferito in un imbuto separatore, lavato con una soluzione satura di Na2S2O3 ed estratto ripetutamente con CH2Cl2. La fase organica è stata poi lavata con brine, essiccata su MgSO4 ed, infine, evaporata fino ad ottenere 388 mg di solido giallo che è stato triturato con etere isopropilico per fornire il composto 3 puro.
Resa: 83 % p.f: 227-‐230 °C 1H-‐NMR: (DMSO-‐d6) δ (ppm): 9.63 (bd, 1H, NH), 8.22 (s, 1H, H4), 4.01-‐3.81 (m, 1H, NCH), 2.34 (s, 3H, CH3), 2.04-‐1.01 (m, 12H, cicloeptile).
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N-‐CICLOEPTIL-‐1-‐(ETILMORFOLINA)-‐5-‐BROMO-‐6-‐METIL-‐2-‐OXO-‐1,2-‐
DIIDROPIRIDINA-‐3-‐CARBOSSIAMMIDE (E1) e N-‐CICLOEPTIL-‐2-‐
(ETILMORFOLINETOSSI)-‐PIRIDINA-‐5-‐BROMO-‐6-‐METIL-‐3-‐
CARBOSSIAMMIDE (4)
Ad una soluzione del composto 3 (290 mg, 0,88 mmol) in DMF anidra (3,9 mL) vengono aggiunti 801 mg di Cs2CO3 (5,01 mmol) e la miscela ottenuta è mantenuta sotto agitazione magnetica, a temperatura ambiente, per 1 h. Successivamente, vengono aggiunti 330 mg (2,14 mmol) di 4-‐(2-‐cloroetil)-‐morfolina cloridrato e la miscela di reazione viene scaldata a 50 °C in un bagno ad olio, per 48 h.
Dopo raffreddamento, la reazione viene trattata con ghiaccio (10 ml) e, successivamente, diluita con CH2Cl2. La miscela ottenuta viene trasferita in un imbuto separatore e diluita con H2O distillata. La fase organica viene separata, essiccata su MgSO4 anidro, filtrata ed evaporata. Il grezzo ottenuto è stato purificato mediante cromatografia su colonna di gel di silice (flash) usando come eluente, inizialmente una miscela n-‐esano/acetato d’etile 7:3 e, successivamente, soltanto acetato di etile. Le opportune frazioni, riunite ed evaporate, forniscono 150 mg del composto E1 N-‐ sostituito e 120 mg del composto 4 O-‐sostituito.
E1 Resa: 30 % p.f: 125 °C 1H-‐NMR: (CDCl3) δ (ppm): 9.61 (bd, 1H, NH), 8.58, (s, 1H, H4), 4.37-‐4.01 (m, 3H, CH2/NCH), 3.80-‐3.55 (m, 4H, morfolina), 2.75-‐2.41 (m, 4H, CH2/morfolina), 2.18 (s, 3H, CH3), 2.01-‐1.18 (m, 12H, cicloeptile). 4 Resa: 38 % p.f: 160 °C 1H-‐NMR: (CDCl3) δ (ppm): 8.54, (s, 1H, H4), 8.00 (bd, 1H, NH), 4.61-‐4.48 (m, 2H, CH2), 4.28-‐4.09 (m, 1H, NCH), 3.81-‐2.69 (m, 4H, morfolina), 2.84-‐2.75 (m, 2H, CH2), 2.65-‐ 2.43 (m, 7H, CH3/morfolina), 2.15-‐1.18 (m, 12H, cicloeptile).
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N-‐CICLOEPTIL-‐1-‐(4-‐FLUOROBENZIL)-‐5-‐BROMO-‐6-‐METIL-‐2-‐OXO-‐1,2-‐
DIIDROPIRIDINA-‐3-‐CARBOSSIAMMIDE (E2) e N-‐CICLOEPTIL-‐2-‐(4-‐
FLUOROBENZILOSSI)-‐PIRIDINA-‐5-‐BROMO-‐6-‐METIL-‐3-‐
CARBOSSIAMMIDE (5)
414,8 mg di Cs2CO3 (2,14 mmol) sono stati aggiunti ad una soluzione del composto 3 (350 mg, 1,06 mmol) in DMF anidra (6,5 mL) e la miscela risultante è stata mantenuta sotto agitazione magnetica, a temperatura ambiente, per 1 h. Successivamente, sono stati aggiunti 100 μL di 4-‐fluorobenzilcloruro (0.91 mmol) e la miscela di reazione è stata scaldata a 50 °C in un bagno ad olio, per 48 h.
Dopo raffreddamento, la reazione è stata trattata con ghiaccio (10 mL) e successivamente diluita con CH2Cl2. La miscela ottenuta è stata trasferita in un imbuto separatore e diluita con H2O distillata. La fase organica viene separata, essiccata su MgSO4 anidro, filtrata ed evaporata. Il grezzo ottenuto è stato purificato mediante cromatografia su colonna di gel di silice (flash), usando come eluente una miscela n-‐esano/acetato di etile 7:3. Le opportune frazioni, riunite ed evaporate, hanno fornito 230 mg del composto E2 N-‐sostituito e 210 mg del composto 4 O-‐ sostituito. E2 Resa: 50 % p.f: 95° C 1H-‐NMR: (CDCl3) δ (ppm): 8.55 (s, 1H, H4), 7.80 (bd, 1H, NH), 7.55-‐7.38 (m, 2H, p-‐ fluorofenile), 7.17-‐7.02 (m, 2H, p-‐fluorofenile), 5.41 (s, 2H, NCH2), 4.21-‐4.01 (m, 1H, NCH), 2.59 (s, 3H, CH3), 1.98-‐1.18 (m, 12H, cicloeptile). 4 Resa: 45,6 % p.f: 135 °C 1H-‐NMR: (CDCl3) δ (ppm): 9.59 (bd, 1H, NH), 8.65 (s, 1H, H4), 7.21-‐6.95 (m, 4H, p-‐ fluorofenile), 5.43 (s, 2H, OCH2), 4.27-‐4.17 (m, 1H, NCH), 2.52 (s, 3H, CH3), 2.15-‐1.19 (m, 12H, cicloeptile).
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N-‐CICLOEPTIL-‐5-‐FENIL-‐6-‐METIL-‐2-‐OXO-‐1,2-‐DIIDROPIRIDINA-‐3-‐
CARBOSSIAMMIDE (6)
Una miscela di trifenilfosfina (119,8 mg, 0,45 mmol) e palladio acetato (61,5 mg, 9 mmol) in diossano (1,8 mL) è stata agitata a temperatura ambiente, sotto flusso d’azoto, per 10 minuti. Successivamente, sono stati aggiunti, sempre sotto flusso d’azoto, 300 mg del composto 3 (0,91 mmol), 2,2 mL di CH3OH, 1,8 mL di una soluzione 2 M di Na2CO3 (1,8 mL) e 222,7 mg di acido fenilboronico (1,82 mmol). La miscela è stata scaldata al microonde (CEM) a 110 °C per 1 h (potenza 200 W, pressione 100 psi, sotto agitazione). La miscela di reazione è stata ripartita in H2O e CH2Cl2 e la fase acquosa è stata poi estratta con CH2Cl2 (x3). Le frazioni organiche riunite sono state essiccate su MgSO4 anidro, filtrate ed evaporate. Il grezzo ottenuto è stato purificato mediante cromatografia su colonna di gel di silice (flash) usando come miscela eluente n-‐esano/acetato di etile 7:3. Le opportune frazioni, riunite ed evaporate, hanno fornito 200 mg del composto 6 come solido giallo.
Resa: 67% p.f: > 230 °C 1H-‐NMR: (CDCl3) δ (ppm): 9.72 (bd, 1H, NH), 8.57 (s, 1H, H4), 7.34-‐7.22 (m, 5H, fenile), 4.35-‐4.15 (m, 1H, NCH), 2.47 (s, 3H, CH3), 2.15-‐1.21 (m, 12H, cicloeptile).
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N-‐CICLOEPTIL-‐1-‐(ETILMORFOLINA)-‐5-‐FENIL-‐6-‐METIL-‐2-‐OXO-‐1,2-‐
DIIDROPIRIDINA-‐3-‐CARBOSSIAMMIDE (E3) e N-‐CICLOEPTIL-‐2-‐
(ETILMORFOLINETOSSI)-‐PIRIDINA-‐5-‐FENIL-‐6-‐METIL -‐3-‐
CARBOSSIAMMIDE (7)
Ad una soluzione del composto 6 (150 mg, 0,46 mmol) in DMF anidra (2,8 mL) sono stati aggiunti 177,7 mg di Cs2CO3 (0,54 mmol) e la miscela risultante è stata mantenuta sotto agitazione magnetica, a temperatura ambiente, per 1 h. Successivamente, è stato aggiunto il 4-‐fluorobenzilcloruro (50 μL, 0.39 mmol) e la miscela ottenuta è stata scaldata a 50 °C in un bagno ad olio, per 48 h.
Dopo raffreddamento, la reazione è stata trattata con ghiaccio (10 mL) e, successivamente, diluita con CH2Cl2. La miscela ottenuta è stata trasferita in un imbuto separatore e diluita con H2O distillata. La fase organica viene separata, essiccata con MgSO4 anidro, filtrata ed evaporata. Il grezzo ottenuto è stato purificato mediante cromatografia su colonna di gel di silice (flash), usando come miscela eluente n-‐esano/acetato di etile 7:3. Le opportune frazioni, riunite ed evaporate, hanno fornito 50 mg del composto E3 N-‐sostituito e 60 mg del composto 7 O-‐ sostituito. E3 Resa: 24,9 % p.f: 190-‐195 °C 1H-‐NMR: (CDCl3) δ (ppm): 9.80 (bd, 1H, NH), 8.53 (s, 1H, H4), 7.51-‐7.29 (m, 4H, Ar), 7.27-‐6.98 (m, 5H, Ar), 5.48 (s, 2H, NCH2), 4.33-‐4.07 (m, 1H, NCH), 2.32 (s, 3H, CH3), 2.17-‐1.11 (m, 12H, cicloeptile). 7 Resa: 29,8 % p.f: 133-‐135 °C 1H-‐NMR: (CDCl3) δ (ppm): 8.39 (s, 1H, H4), 7.91 (bd, 1H, NH), 7.56-‐7.21 (m, 7H, Ar), 7.54-‐7.05 (m, 2H, Ar), 5.51 (s, 2H, OCH2), 4.13-‐4.01 (m, 1H, NCH), 2.49 (s, 3H, CH3), 2.01-‐1.21 (m, 12H, cicloeptile)
